200,30(2) 万 谦 等 : 乳 酸 菌 天 然 质 粒 提 取 方 法 的 优 化 95 保 藏 中 心 ;S S2 S3 S4 分 别 为 本 实 验 室 从 酸 菜 中 筛 选 得 到 的 乳 酸 菌 ( 经 6srDNA 鉴 定 为 植 物 乳 杆 菌 ).2 试 剂 标 准 核 酸
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- 核干 鲁
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1 中 国 生 物 工 程 杂 志 ChinaBiotechnology,200,30(2):94 99 乳 酸 菌 天 然 质 粒 提 取 方 法 的 优 化 万 谦 曹,2 健 吴 兴 泉 李 艳 芳 李 凤 娟 ( 河 南 工 业 大 学 生 物 工 程 学 院 郑 州 中 原 工 学 院 郑 州 ) 宋 鹏 摘 要 将 前 人 报 道 的 乳 酸 菌 质 粒 提 取 方 法 与 大 肠 杆 菌 质 粒 提 取 方 法 相 结 合, 对 常 用 试 剂 盒 质 粒 提 取 方 法 进 行 改 进, 建 立 了 一 种 快 速 安 全 高 效 的 乳 酸 菌 质 粒 提 取 方 法 提 取 过 程 中, 溶 菌 酶 最 佳 浓 度 为 20mg/ml, 最 佳 处 理 时 间 为 30min, 同 时 避 免 了 毒 性 物 质 溴 化 乙 锭 的 使 用 多 次 实 验 结 果 表 明, 采 用 改 进 后 的 方 法 可 明 显 提 高 乳 酸 菌 天 然 质 粒 的 提 取 效 果 且 重 复 性 好, 为 下 一 步 乳 酸 菌 的 分 子 改 良 奠 定 了 基 础 关 键 词 乳 酸 菌 天 然 质 粒 提 取 方 法 优 化 中 图 分 类 号 Q89 乳 酸 菌 (lacticacidbacteria,lab) 大 多 是 益 生 菌, 是 目 前 研 究 较 多 的 一 类 工 程 菌 株 随 着 研 究 的 深 入, 人 们 发 现 乳 酸 菌 许 多 重 要 代 谢 功 能 的 不 稳 定 性 和 易 缺 失 现 象 都 直 接 或 间 接 地 与 其 携 带 的 质 粒 有 关 [], 从 而 激 发 了 人 们 对 乳 酸 菌 染 色 体 外 遗 传 物 质 质 粒 的 研 究 近 十 多 年 来, 随 着 乳 酸 菌 内 源 质 粒 基 因 序 列 的 测 定 电 穿 孔 技 术 的 建 立, 以 及 乳 酸 菌 中 表 达 信 号 的 分 离 和 克 隆, 已 建 立 和 发 展 了 一 系 列 具 有 不 同 用 途 的 乳 酸 菌 载 体 和 受 体 系 统 [2 3] 食 品 工 业 中 广 泛 使 用 的 乳 酸 菌 酵 母 等 一 般 被 认 为 是 安 全 的 (generalyregardedas safe,gras) [4], 因 而, 研 究 与 开 发 乳 酸 菌 食 品 级 载 体 受 体 系 统, 探 索 重 要 基 因 在 乳 酸 菌 中 的 克 隆 表 达 已 成 为 乳 酸 菌 分 子 生 物 学 研 究 的 重 要 内 容 之 一, 对 于 食 品 与 发 酵 工 业 都 将 起 到 重 要 的 推 动 作 用 食 品 级 基 因 表 达 载 体 和 受 体 系 统 的 研 究 已 成 为 近 年 来 该 领 域 研 究 的 前 沿 和 热 点 [5 7] 可 用 于 乳 酸 菌 质 粒 表 达 的 宿 主 菌 主 要 有 粪 肠 球 菌 (Enterococus faecali) 植 物 乳 杆 菌 (Lactobacilus plantarun) 乳 酸 乳 球 菌 (Lactococuslactis) 嗜 酸 乳 杆 菌 (Lactococusacidophilus) 等 [8] 在 实 验 中, 要 验 证 表 达 载 体 是 否 已 转 入 宿 主 菌, 需 要 一 个 快 捷 的 方 法, 加 之 乳 酸 菌 质 粒 具 有 不 亲 和 性 [9], 因 此, 将 质 粒 转 入 乳 酸 菌 中 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : 河 南 省 高 校 杰 出 科 研 人 才 创 新 工 程 资 助 项 目 (2006KYCX008) 通 讯 作 者, 电 子 信 箱 :biotech@haut.edu.cn 时, 需 要 有 一 个 简 便 的 方 法 来 判 断 菌 体 中 是 否 已 含 有 质 粒 乳 酸 菌 为 革 兰 氏 阳 性 菌, 细 胞 壁 比 较 厚, 肽 聚 糖 含 量 较 高, 交 联 程 度 大, 细 胞 裂 解 有 一 定 困 难 且 质 粒 大 小 差 异 较 大, 大 质 粒 在 提 取 过 程 中 易 断 裂, 拷 贝 数 低, 所 以 一 般 的 质 粒 提 取 方 法 不 是 很 有 效 [0] 983 [] 年,Anderson 等 提 出 了 一 种 适 用 于 提 取 乳 酸 乳 球 菌 大 小 质 粒 的 方 法, 通 过 采 用 合 适 的 生 长 和 裂 解 条 件, 并 将 碱 变 性 和 热 变 性 结 合 使 用, 取 得 了 较 好 的 效 果 993 年,Daniel [2] 提 出 了 提 取 乳 酸 菌 质 粒 的 一 般 方 法, 并 发 现 乳 杆 菌 在 质 粒 组 成 上 差 异 较 大, 许 多 菌 株 无 质 粒 或 很 少 有 质 粒 本 文 研 究 的 目 的, 是 通 过 将 已 报 道 的 Daniel 等 建 立 的 乳 酸 菌 质 粒 提 取 方 法 与 大 肠 杆 菌 质 粒 提 取 方 法 相 结 合, 并 进 一 步 改 进 常 用 试 剂 盒 提 取 质 粒 的 方 法, 建 立 一 种 快 速 有 效 的 乳 酸 菌 质 粒 提 取 方 法, 为 下 一 步 乳 酸 菌 质 粒 的 分 子 研 究 以 及 食 品 级 表 达 载 体 的 构 建 奠 定 基 础 材 料 与 方 法. 菌 株 嗜 酸 乳 杆 菌 (Lactobacilusacidophilus)CGMCC.854 植 物 乳 杆 菌 (Lactobacilusplantarun)CGMCC.555 费 氏 丙 酸 杆 菌 谢 氏 亚 种 (Propionibacterium shermani)cgmcc.223, 均 购 自 中 国 普 通 微 生 物 菌 种 保 藏 管 理 中 心 ; 乳 酸 乳 球 菌 乳 亚 种 (Lactococuslactis Subspeciescream)CICC606, 购 自 中 国 工 业 微 生 物 菌 种
2 200,30(2) 万 谦 等 : 乳 酸 菌 天 然 质 粒 提 取 方 法 的 优 化 95 保 藏 中 心 ;S S2 S3 S4 分 别 为 本 实 验 室 从 酸 菜 中 筛 选 得 到 的 乳 酸 菌 ( 经 6srDNA 鉴 定 为 植 物 乳 杆 菌 ).2 试 剂 标 准 核 酸 分 子 量 000kbladder( 上 海 莱 枫 公 司 ); 标 准 核 酸 分 子 量 λ HindⅢ 限 制 性 内 切 酶 EcoRⅠ Sal Ⅰ( 大 连 TaKaRa 公 司 ); 溶 菌 酶 ( 美 国 Amresco 公 司 ); RNase( 美 国 Genview 公 司 ); 其 他 主 要 试 剂 均 为 国 产 或 进 口 分 析 纯.3 培 养 基 脱 脂 乳 培 养 基 (00ml): 脱 脂 奶 粉 2.0g, 加 水 定 容 到 00ml, 混 匀 后 分 装,5 灭 菌 30min MRS 培 养 基 : 酪 蛋 白 胨 0.0g, 牛 肉 提 取 物 0.0g, 酵 母 提 取 物 5.0g, 葡 萄 糖 5.0g, 乙 酸 钠 5.0g, 柠 檬 酸 二 铵 2.0g,Tween 80.0g,K 2 HPO 4 2.0g,MgSO 4 7H 2 O 0.2g,MnSO 4 H 2 O 0.05g, 加 水 定 容 到 000ml, 调 ph6.8,2 灭 菌 20min 改 良 M7 培 养 基 [3] : 胰 蛋 白 胨 5.0g, 鱼 蛋 白 胨 5.0g, 牛 肉 膏 5.0g, 酵 母 浸 膏 2.5g, 抗 坏 血 酸 0.5g, 硫 酸 镁 0.25g, 甘 油 0.0g, 磷 酸 二 氢 钾 5.0g, 乳 糖 3.0g, 加 水 定 容 到 000ml, 调 ph6.9,2 灭 菌 20min GM7 培 养 基 :M7+0.5% 葡 萄 糖.4 质 粒 提 取 方 法 方 法 一 :O Sulivan 等 建 立 的 方 法 具 体 如 下 : 取 培 养 过 夜 菌 5~0ml, 离 心 沉 淀, 用 200μl 含 有 30mg/ml 溶 菌 酶 的 25% 蔗 糖 溶 液 重 悬 菌 体,37 放 置 5min; 加 入 400μl 碱 性 SDS(3% SDS+2mol/LNaOH), 立 即 混 匀, 室 温 放 置 7min; 加 入 300μl 冰 冷 的 3mol/L 乙 酸 钠 (ph4.8), 立 刻 混 匀,4 离 心 5min; 将 上 清 移 至 新 离 心 管 中, 并 加 入 650μl 异 丙 醇, 混 匀,4 离 心 5min; 去 上 清, 用 320μl 蒸 馏 水 重 悬 沉 淀, 加 入 200μl7.5mol/L 的 醋 酸 铵 ( 含 有 0.5mg/ml 溴 化 乙 锭 ), 再 加 入 350μl 氯 仿 / 三 氯 甲 烷, 混 匀, 离 心 5min; 将 上 清 移 至 新 的 离 心 管 中, 加 入 ml 无 水 乙 醇 ( 20 保 存 ), 混 匀,4 离 心 5min; 去 除 上 清, 用 70% 乙 醇 洗 涤 沉 淀, 倒 掉 全 部 液 体, 用 40μlTE( 含 0.mg/mlRNase) 重 悬 沉 淀 [0] 方 法 二 : 乳 酸 菌 的 收 集 和 裂 解 按 O Sulivan 等 建 立 的 方 法 进 行, 质 粒 的 抽 提 和 回 收 按 照 大 肠 杆 菌 质 粒 提 [4] 取 方 法 进 行 具 体 如 下 : 取 培 养 过 夜 菌 5~0ml, 离 心 沉 淀 用 200μl 含 有 30mg/ml 溶 菌 酶 的 25% 蔗 糖 溶 液 重 悬 菌 体,37 放 置 5min; 加 入 400μl 碱 性 SDS (3% SDS+2mol/LNaOH), 立 刻 混 匀, 室 温 放 置 7min; 加 入 300μl 冰 冷 的 3mol/L 的 乙 酸 钠 (ph4.8) 立 刻 混 匀,4 离 心 5min; 将 上 清 移 至 新 离 心 管 中, 加 入 650μl 异 丙 醇, 混 匀,4 离 心 5min; 弃 上 清, 用 70% 乙 醇 洗 涤 2 次 ; 加 入 含 RNase200mg/ml 的 TE,65 作 用 30min; 加 入 等 体 积 的 酚 氯 仿 异 丙 醇 (25 24 ), 反 复 颠 倒 混 合, 抽 提, 离 心 5min; 反 复 抽 提 至 两 相 界 面 无 蛋 白 出 现, 再 用 等 体 积 氯 仿 异 戊 醇 (24 ), 抽 提 一 次 ; 取 上 清, 加 2 倍 体 积 预 冷 的 无 水 乙 醇 ( 20 保 藏 ) 以 及 十 分 之 一 体 积 的 3mol/L 乙 酸 钠 (ph5.2), 混 匀 后, 20 放 置 30min, 离 心 5min; 弃 上 清, 用 预 冷 的 70% 乙 醇 沉 淀 2 次, 晾 干 ; 用 适 量 TE 溶 解 沉 淀 方 法 三 : 改 良 质 粒 小 提 试 剂 盒 的 提 取 方 法 ( 北 京 TIANGEN 质 粒 提 取 试 剂 盒 ) 在 菌 体 裂 解 前 用 溶 菌 酶 处 理, 再 进 行 乳 酸 菌 天 然 质 粒 的 提 取 具 体 如 下 : 取 培 养 过 夜 菌 5~0ml, 离 心 沉 淀 ; 用 含 有 30mg/ml 溶 菌 酶 的 P 溶 液 重 悬 菌 体,37 放 置 30min; 加 入 250μl 溶 液 P2, 迅 速 混 匀 后, 加 入 350μl 溶 液 P3, 混 匀, 离 心 0min; 加 入 600μl 洗 脱 液 Pw, 离 心 min; 再 次 加 入 600μl 洗 脱 液 Pw, 离 心 min; 加 入 TE, 离 心 2min.5 乳 酸 菌 质 粒 电 泳 分 析 将 乳 酸 菌 培 养 过 夜 后, 离 心 收 集 沉 淀, 提 取 质 粒, 溶 解 到 等 体 积 的 TE 中, 进 行 电 泳 分 析 电 泳 条 件 如 下 :.0% 琼 脂 糖 凝 胶,3~4V/cm 电 泳, 染 色 30min, 脱 色 0min, 检 测 结 果.6 乳 酸 菌 质 粒 酶 切 分 析 用 EcoRⅠ SalⅠ 分 别 对 采 用 3 种 方 法 提 取 的 S S2 S3 S4 天 然 质 粒 进 行 酶 切, 之 后 按.5 节 中 的 方 法 进 行 电 泳 分 析.7 溶 菌 酶 浓 度 对 质 粒 的 影 响 将 植 物 乳 杆 菌 S S3 培 养 过 夜 后, 分 别 收 集 等 体 积 的 培 养 物 ( 一 般 为 5ml)3 管, 离 心, 分 别 用 溶 菌 酶 浓 度 为 0mg/ml 20mg/ml 和 30mg/ml 的 裂 解 液 处 理 两 种 菌, 处 理 时 间 为 30min 之 后, 按 照 方 法 三 提 取 质 粒, 最 后 将 质 粒 溶 解 到 等 体 积 的 TE 中, 取 相 同 体 积 进 行 电 泳 分 析.8 溶 菌 酶 处 理 时 间 对 质 粒 提 取 的 影 响 将 植 物 乳 杆 菌 S S3 培 养 过 夜 后, 分 别 收 集 等 体 积 的 培 养 物 ( 一 般 为 5ml)3 管, 离 心, 用 溶 菌 酶 浓 度 为 20mg/ml 的 裂 解 液 处 理 这 2 种 菌, 处 理 时 间 分 别 为 5min,30min,60min 之 后, 按 照 方 法 三 提 取 质 粒, 最 后 将 质 粒 溶 解 到 等 体 积 的 TE 中, 取 相 同 体 积 进 行 电 泳 分 析
3 96 中 国 生 物 工 程 杂 志 ChinaBiotechnology Vol.30No 结 果 与 分 析 2. 乳 酸 菌 天 然 质 粒 的 提 取 将 按 照 方 法 一 方 法 二 和 方 法 三 提 取 的 天 然 质 粒 进 行 电 泳 分 析, 结 果 如 图 图 2 和 图 3 电 泳 结 果 表 明, 嗜 酸 乳 杆 菌 CGMCC.854 费 氏 丙 酸 杆 菌 谢 氏 亚 种 CGMCC.223 乳 酸 乳 球 菌 乳 亚 种 CICC606 中 均 没 有 天 然 质 粒 的 存 在 ; 植 物 乳 杆 菌 CGMCC.555, 以 及 本 实 验 室 从 酸 菜 中 分 离 得 到 的 4 株 乳 酸 菌 S S2 S3 S4 中 均 有 天 然 质 粒 存 在 从 图 可 以 看 到, 从 植 物 乳 杆 菌 CGMCC.555 中 提 取 质 粒 时, 得 到 位 于 0000bp 和 500bp 左 右 的 2 条 条 带 ; 从 S S2 S4 中 提 取 时, 均 得 到 位 于 0000bp 3000bp 和 2000bp 左 右 的 3 条 条 带 ; 从 S3 中 提 取 时, 得 到 位 于 0000bp 和 5000bp 左 右 的 2 条 条 带 从 图 2 中 可 以 看 到, 从 植 物 乳 杆 菌 CGMCC.555 中 提 取 质 粒 时, 得 到 大 小 为 0000bp 和 500bp 左 右 的 2 条 条 带 ; 从 S S2 S4 中 提 取 时, 均 得 到 位 于 0000bp 和 2000bp 左 右 的 2 条 条 带 ; 从 S3 中 提 取 时, 得 到 位 于 0000bp 和 5000bp 左 右 的 2 条 条 带 图 3 得 到 的 结 果 与 图 2 相 同 对 比 分 析 3 张 电 泳 图 谱, 结 果 发 现, 在 相 同 的 电 泳 条 件 下,3 种 质 粒 结 构 的 迁 移 率 一 般 具 有 如 下 规 律 : 闭 合 环 状 超 螺 旋 结 构 > 线 形 结 构 > 开 环 结 构 图 中 S S2 S4 在 3000bp 左 右 处 的 条 带, 认 为 是 2000bp 左 右 质 粒 的 开 环 结 构 酶 切 试 验 也 证 实,3000bp 左 右 处 的 条 带 为 质 粒 开 环 结 构 2.2 三 种 不 同 乳 酸 菌 质 粒 提 取 方 法 的 比 较 将 植 物 乳 杆 菌 CGMCC.555, 以 及 本 实 验 室 从 酸 菜 中 分 离 得 到 的 4 株 乳 酸 菌 S S2 S3 S4 分 别 用 3 种 方 法 进 行 天 然 质 粒 的 提 取, 将 所 提 取 的 质 粒 溶 解 到 等 体 积 的 TE 中, 取 相 同 体 积 进 行 电 泳 分 析, 结 果 如 图 4 电 泳 结 果 表 明, 采 用 3 种 方 法 均 能 得 到 质 粒 其 中, 植 物 乳 杆 菌 CGMCC.555 的 质 粒 电 泳 条 带 分 别 位 于 0000bp 和 500bp 左 右,S S2 S4 的 质 粒 电 泳 条 带 位 于 0000bp 和 2000bp 左 右,S3 的 质 粒 电 泳 条 带 位 于 0000bp 和 5000bp 左 右 不 过, 从 图 4 中 也 可 以 看 出, 与 方 法 一 和 方 法 二 相 比, 方 法 三 得 到 的 质 粒 条 带 更 为 清 晰 明 亮, 提 取 效 果 更 好 2.3 乳 酸 菌 质 粒 酶 切 分 析 为 了 对 采 用 3 种 方 法 所 提 质 粒 作 进 一 步 的 比 较, 分 别 用 EcoRⅠ 和 SalⅠ 对 采 用 3 种 方 法 提 取 S S2 图 采 用 方 法 一 提 取 乳 酸 菌 质 粒 Fig. Extractionofplasmidbyusingmethodone 6557bp,436bp,2322bp,2027bp,564bp,25bp);:Plasmid isolatedfrom Lactobacilusacidophilus.854;2:Plasmidisolated frompropionibacterium shermani.223;3:plasmidisolatedfrom LactococuslactisSubspeciescream 606;4:Plasmidisolatedfrom Lactobacilusplantarun.555;5:Plasmid isolated from S;6: PlasmidisolatedfromS2;7,8:PlasmidisolatedfromS3;9:Plasmid isolatedfroms4 图 2 采 用 方 法 二 提 取 乳 酸 菌 质 粒 Fig.2 Extractionofplasmidbyusingmethodtwo 6557bp,436bp,2322bp,2027bp,564bp,25bp);:Plasmid isolatedfroms;2:plasmidisolatedfroms2;3:plasmidisolatedfrom S3;4:PlasmidisolatedfromS4;5:PlasmidisolatedfromLactobacilus plantarun.555 S3 S4 的 天 然 质 粒 进 行 酶 切, 结 果 如 图 5 图 6 和 图 7 从 图 中 可 以 看 出, 采 用 3 种 方 法 提 取 的 质 粒 经 酶 切 后, 电 泳 图 谱 一 致, 具 体 如 下 : 采 用 3 种 方 法 从 S S2 S4 中 提 取 的 质 粒 经 EcoRⅠ 酶 切 后, 均 得 到 一 条 位 于 0000bp 和 一 条 位 于 2500bp 处 的 电 泳 条 带 与 酶 切 前 相 比, 酶 切 后 的 条 带 位 置 靠 上, 说 明 S S2 S4 的 质 粒 在 菌 体 中 均 以 超 螺 旋 的 形 式 存 在, 经 酶 切 后 转 变 成 为 线 型 结 构 ; 而 采 用 3 种 方 法 从 S S2 S4 中 提 取 的 质 粒 经 SalⅠ 酶 切 后, 均 分 别 得 到 位 于 5000bp 0000bp 4000bp 3500bp 2500bp 和 500bp 处 的 6 条 条 带 采 用 3 种 方 法 从 S3 提 取 的 质 粒 经 EcoRⅠ 酶 切 后, 均 得 到 位 于 20000bp 8000bp 6000bp 4000bp 处 的 4 条 电 泳 条
4 200,30(2) 万 谦 等 : 乳 酸 菌 天 然 质 粒 提 取 方 法 的 优 化 97 图 3 采 用 方 法 三 提 取 乳 酸 菌 质 粒 Fig.3 Extractionofplasmidbymethodthree 6557bp,436bp,2322bp,2027bp,564bp,25bp);:Plasmid isolatedfromlactobacilusplantarun.555;2:plasmidisolatedfrom S;3:PlasmidisolatedfromS2;4:PlasmidisolatedfromS3; 5:PlasmidisolatedfromS4 图 5 方 法 一 提 取 质 粒 酶 切 分 析 Fig.5 Restrictionmapofplasmidsextracted bymethodone 6557bp,436bp,2322bp,2027bp,564bp,25bp);,2,3,4:EcoR Ⅰ restrictionmapofplasmidsisolatedfroms,s2,s3,s4bymethod one;5,6,7,8:salⅠrestrictionmapofplasmidsisolatedfroms, S2,S3,S4bymethodone 图 4 3 种 方 法 提 取 乳 酸 菌 质 粒 效 果 比 较 Fig.4 Thecomparationofthreemethodsfor plasmidextraction M:DNA Marker000 kbladder(from top todown0000bp, 8000bp,6000bp,5000bp,4000bp,3000bp,2000bp,000bp);,2, 3:Plasmidisolatedfrom Lactobacilusplantarun.555 bythree methods;4,5,6:plasmidisolatedfromsbythreemethods;7,8,9: Plasmidisolatedfrom S2 bythreemethods;0,,2:plasmid isolatedfroms3bythreemethods;3,4,5:plasmidisolatedfrom S4bythreemethods 带 ; 而 经 SalⅠ 酶 切 后, 均 得 到 位 于 5000bp 和 3000bp 左 右 的 2 条 条 带 以 上 结 果 表 明, 采 用 方 法 三 提 取 的 质 粒 与 采 用 其 它 2 种 方 法 一 致 2.4 溶 菌 酶 浓 度 对 质 粒 的 影 响 用 溶 菌 酶 浓 度 为 0mg/ml,20mg/ml,30mg/ml 的 裂 解 液 分 别 处 理 植 物 乳 杆 菌 CGMCC.555, 以 及 S S3 30min 后, 采 用 方 法 三 提 取 质 粒, 电 泳 结 果 见 图 8 结 果 显 示, 采 用 0mg/ml 的 溶 菌 酶 浓 度 处 理 30min, 质 粒 提 取 量 明 显 少 于 另 外 两 种 溶 菌 酶 浓 度 处 理 的 结 果, 且 背 景 条 带 发 亮, 干 扰 很 大 采 用 20mg/ml 和 30mg/ml 的 溶 菌 酶 浓 度, 均 可 彻 底 裂 解 菌 体, 二 者 所 提 取 的 质 粒 没 有 明 显 差 异 综 合 以 上 分 析, 采 用 20mg/ml 的 溶 菌 图 6 方 法 二 提 取 质 粒 酶 切 分 析 Fig.6 Restrictionmapofplasmidsextracted bymethodtwo 6557bp,436bp,2322bp,2027bp,564bp,25bp);,2,3,4:EcoR Ⅰ restrictionmapofplasmidsisolatedfroms,s2,s3,s4bymethod two;5,6,7,8:salⅠrestrictionmapofplasmidsisolatedfroms,s2, S3,S4bymethodtwo 酶 浓 度 效 果 最 佳 2.5 溶 菌 酶 处 理 时 间 对 质 粒 提 取 的 影 响 使 用 溶 菌 酶 浓 度 为 20mg/ml 的 裂 解 液, 分 别 处 理 植 物 乳 杆 菌 CGMCC.555 和 S5min,30min,60min 后, 采 用 方 法 三 提 取 质 粒, 电 泳 结 果 见 图 9 结 果 表 明, 处 理 时 间 为 5min 时, 两 种 菌 体 破 壁 不 完 全 ; 处 理 30min 和 60min 均 能 得 到 较 好 的 效 果 因 此, 选 取 30min 作 为 最 佳 处 理 时 间 3 讨 论 乳 酸 菌 为 革 兰 氏 阳 性 菌, 细 胞 壁 比 较 厚, 且 内 源 性 质 粒 大 小 不 一, 拷 贝 数 不 稳 定 采 用 普 通 的 碱 裂 解 方 法, 不 能 将 乳 酸 菌 的 质 粒 提 出, 或 提 出 效 果 不 佳 在 已 发 表 的 乳 酸 菌 质 粒 提 取 的 方 法 中, 常 用 的 有 Anderson
5 98 中 国 生 物 工 程 杂 志 ChinaBiotechnology Vol.30No.2200 图 7 方 法 三 提 取 质 粒 酶 切 分 析 Fig.7 Restrictionmapofplasmidsextracted bymethodthree 6557bp,436bp,2322bp,2027bp,564bp,25bp);,2,3,4:EcoR Ⅰ restrictionmapofplasmidsisolatedfroms,s2,s3,s4bymethod three;5,6,7,8:salⅠrestrictionmapofplasmidsisolatedfroms, S2,S3,S4bymethodthree 图 9 溶 菌 酶 处 理 时 间 对 质 粒 提 取 的 影 响 Fig.9 Theinfluenceoflysozymeindiferenttreat timetotheextractionofplasmid M:DNAMarkerλ HindⅢ (from toptodown2330bp,946bp, 6557bp,436bp,2322bp,2027bp,564bp,25bp);M2:DNAMarker 000kb ladder(from topto down 0000bp,8000bp,6000bp, 5000bp,4000bp,3000bp,2000bp,000bp);,2,3:The5,30, 60min treatmentof20mg/mllysozyme separately to extractive plasmidoflactobacilusplantarun.555bymethodthree;4,5,6: The5,30,60mintreatmentof20mg/mllysozymeseparatelyto extractiveplasmidofsbymethodthree;7,8,9:the5,30,60min treatmentof20mg/mllysozymeseparatelytoextractiveplasmidofs3 bymethodthree 图 8 不 同 溶 菌 酶 浓 度 对 乳 酸 菌 质 粒 提 取 的 影 响 Fig.8 Theinfluenceoflysozymeindiferent concentrationtotheextractionofplasmid M:DNAMarkerλ HindⅢ (from toptodown2330bp,946bp, 6557bp,436bp,2322bp,2027bp,564bp,25bp);M2:DNAMarker 000kbladder(from toptodown0000bp,8000bp,6000bp, 5000bp,4000bp,3000bp,2000bp,000bp);,2,3:The30min treatmentof mg/mllysozymerespectivelytoextractive plasmidoflactobacilusplantarun.555bymethodthree;4,5,6: The30mintreatmentof0,20,30mg/mllysozymerespectivelyto extractiveplasmid ofs bymethod three;7,8,9:the30min treatmentof0,20,30mg/mllysozymerespectivelytoextractive plasmidofs3bymethodthree 和 O Sulivan 建 立 的 方 法 Anderson 方 法 使 用 试 剂 种 类 多, 步 骤 繁 杂, 不 利 于 快 速 提 取 乳 酸 菌 质 粒 O Sulivan 建 立 的 方 法 步 骤 减 少, 但 致 癌 物 质 溴 化 乙 锭 (EB) 的 使 用 存 在 对 人 体 的 危 害 本 文 将 O Sulivan 所 建 立 方 法 中 的 收 集 和 裂 解 步 骤, 与 大 肠 杆 菌 质 粒 的 抽 提 和 纯 化 方 法 相 结 合 提 取 质 粒, 避 免 了 EB 的 使 用 及 其 对 人 体 的 伤 害, 且 通 过 实 验 证 明, 其 提 取 效 果 与 O Sulivan 建 立 的 方 法 效 果 相 同 同 时, 本 文 还 在 Anderson 使 用 溶 菌 酶 破 壁 处 理 菌 体 提 取 质 粒 方 法 的 基 础 上, 进 一 步 对 质 粒 小 提 试 剂 盒 的 提 取 方 法 进 行 了 改 良, 在 菌 体 裂 解 前 先 用 溶 菌 酶 进 行 处 理, 再 进 行 乳 酸 菌 天 然 质 粒 的 提 取 在 保 证 溶 菌 酶 处 理 效 果 且 不 浪 费 的 前 提 下, 通 过 实 验 确 定 了 溶 菌 酶 最 佳 处 理 浓 度 为 20mg/ml, 最 佳 处 理 时 间 为 30min 采 用 改 进 后 的 试 剂 盒 方 法, 不 仅 提 取 速 度 快, 步 骤 简 便, 所 提 质 粒 的 质 量 也 明 显 优 于 前 两 种 方 法 经 过 多 次 重 复 实 验 均 获 得 了 一 致 的 提 取 效 果, 实 验 重 现 性 好, 适 用 于 实 验 室 乳 酸 菌 质 粒 的 快 速 提 取 为 下 一 步 乳 酸 菌 食 品 级 表 达 载 体 的 构 建 打 下 了 良 好 的 基 础 参 考 文 献 [] 郭 兴 华. 益 生 菌 基 础 与 应 用. 北 京 : 北 京 科 学 技 术 出 版 社, GuoX H.Foundation and Application ofprobiotics.beijing: BeijingScienceandTechnologyPres,2002. [2] 贾 士 芳, 王 荫 瑜, 郭 兴 华. 乳 酸 菌 电 转 化 条 件 的 研 究. 生 物 工 程 学 报,998,4(4): JiaSF,WangYY,GuoXH.ChineseJournalofBiotechnology, 998,4(4): [3]AlisonGE,KlaenhammerTR.Functionalanalysisofthegene encodingimmunity to lactacin F.lafⅠ and its use as a lactobacilus specificfood grade genetic marker.applenviron
6 200,30(2) 万 谦 等 : 乳 酸 菌 天 然 质 粒 提 取 方 法 的 优 化 99 Microbiol,996,62: [4] 孙 强 正, 徐 建 国. 乳 酸 乳 球 菌 食 品 级 表 达 载 体 的 研 究 进 展. 中 国 微 生 态 学 杂 志,2006,8(3): SunQZ,XuJG.ChineseJournalofMicroecology,2006,8(3): [5] 吕 晓 英. 乳 酸 菌 基 因 克 隆 载 体 系 统 的 研 究 进 展. 现 代 预 防 医 学,2003,30(2): LvXY.ModernPreventiveMedicine,2003,30(2): [6] Mc Kay L L.Functionalpropertiesofplasmidsin lactic streptococci.antonievanleeuwenhoek,983,49(3): [7] 吴 春 梅, 贺 银 凤, 李 少 英. 乳 酸 菌 质 粒 的 研 究 及 其 在 食 品 工 业 中 的 应 用. 内 蒙 古 科 技 与 经 济,2004,8: WuCM,HeYF,LiSY.InnerMongoliaScienceTechnologyand Economy,2004,8: [8]LouiseFeld,ElizaBielak,KarinHammer,etal.Characterizationof asmalerythromycinresistanceplasmidplfefrom thefood isolatelactobacilusplantarum M345.Plasmid,2009,6: [9] 曹 庆 龙. 乳 酸 菌 中 隐 蔽 质 粒 的 研 究 [D]. 哈 尔 滨 : 江 北 农 业 大 学,2007. CaoQL.Researchofcrypticplasmidinlacticacidbacteria[D]. Haerbin:NortheastAgriculturalUniversity,2007. [0] 赵 昆, 刘 思 国, 王 春 来, 等. 牛 抗 菌 肽 Bac7Bac5 融 合 基 因 在 大 肠 杆 菌 中 的 过 表 达. 纯 化 及 抑 菌 活 性. 中 国 生 物 工 程 杂 志, 2007,27(3): ZhaoK,LiuSG,WangCL,etal.ChinaBiotechnology,2007,27 (3): []AndersonDG,MckayLL.Simpleandrapidmethodforisolating large plasmid DNA from lactic streptococci.appl Environ Microbiol,983,46: [2]DanielJO Sulivan.Rapidmini Prepisolationofhigh quality plasmiddnafromlactococusandlactobacilusspp.appliedand EnvironmentalMicrobiology,993,59(8): [3] 曹 文 海, 任 国 谱. 嗜 热 链 球 菌 的 检 验 培 养 基 (M7) 的 改 良. 中 国 乳 业,2006,: CaoW H,RenGP.DairyIndustry,2006,: [4]F.M. 奥 斯 伯,R.E. 金 斯 顿,J.G.. 塞 德 曼, 等. 精 编 分 子 生 物 学 指 南 ( 第 4 版 ). 北 京 : 科 学 出 版 社,2005. F.M.Ausubel,R.E.Kingston,J.G.Seidman,etal.Short ProtocolsinMolecularBiology.fourthed.Beijing:SciencePrsee, OptimizationofPlasmidExtractionMethodfrom LacticAcidBacteria WANQian CAOJian,2 WUXing quan LIYan fang LIFeng juan SONGPeng (ColegeofBioengineering,HenanUniversityofTechnology,Zhengzhou 45000,China) (2ZhongyuanUniversityofTechnology,Zhengzhou ,China) Abstract BycombiningtheextractionmethodofplasmidfromE.coilandthemethodofplasmidfromlactic acidbacteriareportedbeforetoimprovethecommonmethodsusedinplasmidextractionkit,afast,safeandhigh eficientmethodforextractionofplasmiddnafromlacticacidbacteriawasdeveloped.theoptimalconcentration oflysozymewasprovedtobe20mg/ml,theoptimalprocesingtimewas30min,andtheusagetoxicethidium bromidewasavoidedduringthewholeprocesofextraction.experimentalresultsshowedthat,thedeveloped methodshowedanincreasedextractioneficiency,aswelasgoodreproducibility,andthusprovidedagood foundationforthefolowingmolecularimprovementoflacticacidbacteria. Keywords Iacticacidbacteria Extractionofplasmid Methodoptimization
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淮 安 市 财 政 局 淮 安 市 物 价 局 文 件 淮 财 综 2016 8 号 关 于 公 布 淮 安 市 行 政 事 业 性 收 费 项 目 目 录 (2016 年 版 ) 的 通 知 市 各 部 委 办 局, 市 各 直 属 及 驻 淮 单 位, 各 县 ( 区 ) 财 政 局 物 价 局 : 为 规 范 行 政 事 业 性 收 费 执 收 行 为, 根 据 和 省 关 于 建 立 和 实
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保 健 : 顶 尖 专 家 谈 癌 症 2014-03-22 权 健 3813 服 务 中 心 环 境 污 染 不 良 生 活 方 式 与 现 代 社 会 生 活 造 成 的 精 神 压 力 等 等 原 因, 使 得 我 国 癌 情 汹 涌, 人 们 也 日 益 变 得 谈 癌 色 变 最 新 数 据 显 示, 中 国 每 天 8550 人 成 为 癌 症 患 者 ; 中 国 癌 症 患 者 年 轻
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編 號 :A311 組 別 : 國 小 組 科 別 : 自 然 科 類 別 : 生 物 作 品 名 稱 : 愛 吐 沙 的 蛤 蠣 作 者 : 黃 柏 慎 黃 映 慈 易 秋 蓉 指 導 老 師 : 賴 敏 婉 李 愛 雯 作 者 學 校 : 桃 園 縣 平 鎮 市 忠 貞 國 民 小 學 桃 園 縣 平 鎮 市 第 46 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 自 然
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紀 念 藥 師 佛 聖 誕 美 之 食 素 金 剛 乘 弟 子 集 資 捐 印 二 冊 佛 曆 三 三 七 年 歲 次 庚 寅 八 月 廿 五 日 i 1 1 1 2 5 7 10 15 19 19 20 21 22 25 28 29 30 31 32 32 34 36 38 40 41 41 42 44 46 48 49 50 51 51 52 53 54 54 56 58 58 60 60 62
第 一 部 分 投 标 邀 请 一. 项 目 名 称 : 北 京 大 学 附 属 中 学 副 食 品 商 店 协 议 供 货 商 招 标 项 目 二. 项 目 内 容 : 北 京 大 学 附 属 中 学 采 购 中 心 现 就 学 校 副 食 品 商 店 的 供 货 协 议 商 进 行 招 标, 中
北 京 大 学 附 属 中 学 副 食 品 商 店 协 议 供 货 商 招 标 项 目 招 标 文 件 招 标 人 : 北 京 大 学 附 属 中 学 二 〇 一 五 年 十 一 月 第 一 部 分 投 标 邀 请 一. 项 目 名 称 : 北 京 大 学 附 属 中 学 副 食 品 商 店 协 议 供 货 商 招 标 项 目 二. 项 目 内 容 : 北 京 大 学 附 属 中 学 采 购 中 心
1984 1295 43 500 700 2 3 65 50 10 1 3 5 5 10 1757 150 100 1950 100 60 1953 1968 118 05 142 45 1976 601 2 523 8 1968 4 20 1983 513 6 56 96 36
16 11 6 9 1920 900 31 350 60 3 5 36 150 50 60 2000 1000 1974 8200 1978 25000 1983 2097 7 35 1984 1295 43 500 700 2 3 65 50 10 1 3 5 5 10 1757 150 100 1950 100 60 1953 1968 118 05 142 45 1976 601 2 523
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2005-11
2005-11 看 不 见 的 星 球 告 诉 我 一 些 迷 人 的 星 球 吧, 我 不 喜 欢 残 酷 和 恶 心 的 场 面 你 说 好 吧, 我 笑 着 点 点 头, 当 然, 没 问 题 希 希 拉 加 希 希 拉 加 是 一 个 迷 人 的 星 球, 鲜 花 和 湖 泊 让 所 有 旅 人 过 目 不 忘 在 希 希 拉 加, 你 见 不 到 一 寸 裸 露 的 土 壤, 每 一 块
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宏 泰 人 壽 住 院 醫 療 保 險 附 約 除 外 責 任 本 次 送 審 條 文 前 次 送 審 條 文 說 明 第 十 一 條 : 被 保 險 人 因 下 列 原 因 所 致 之 疾 病 或 傷 害 而 住 院 診 療 者, 本 公 司 不 負 給 付 該 被 保 險 人 各 項 保 險 金 的 責 任 一 被 保 險 人 之 故 意 行 為 ( 包 括 自 殺 及 自 殺 未 遂 ) 二
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目 录 惠 州 监 督 信 息 匀 哉 陨 在 匀 韵 哉 陨 晕 云 韵 砸 酝 粤 栽 陨 韵 晕 韵 云 匀 耘 粤 蕴 栽 匀 陨 晕 杂 孕 耘 悦 栽 陨 晕 本 刊 专 稿 我 所 召 开 野 三 打 冶 工 作 推 进 会 专 题 专 栏 渊 1 冤 圆 园 员 2 年 第 2 期 渊 总 第 猿 7 期 冤 三 打 两 建 惠 州 卫 监 人 在 行 动 渊 2 冤 野 三 德 冶
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附 件
邮 政 行 业 统 计 报 表 制 度 ( 快 递 业 务 部 分 ) 2014 年 中 华 人 民 共 和 国 国 家 邮 政 局 制 定 中 华 人 民 共 和 国 国 家 统 计 局 批 准 2013 年 9 月 本 报 表 制 度 根 据 中 华 人 民 共 和 国 统 计 法 中 华 人 民 共 和 国 邮 政 法 和 邮 政 行 业 统 计 管 理 办 法 的 有 关 规 定 制 定 中
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2016 1 A B 1 3 4 7 13 33 51 C D 1 2 1 2 3 4 6 5 3 4 5 1 2 3 4 6 1 7 1 1.1 1 8 2 1.2 9 1 1.3 10 1.4 1.5 2011-2030 11 1 1.6 12 2 13 2 2.1 14 3 15 16 2 4 17 2 5 18 19 2 1 2 3 4 1 2 3 20 6 21 2 7 22 23 24
C 佟 某 委 托 中 介 为 其 征 婚 D 海 盈 房 地 产 公 司 委 托 律 师 事 务 所 代 其 办 理 登 记 事 项 8 根 据 民 法 通 则, 施 工 单 位 的 项 目 经 理 属 于 施 工 单 位 的 ( ) A 委 托 代 理 人 B 法 定 代 理 人 C 指 定 代
2014 年 一 级 建 造 师 法 律 法 规 考 前 演 练 题 温 馨 提 示 : 下 列 选 择 题 有 可 能 为 单 项 或 者 多 项 选 择 题. ( 参 考 答 案 讲 解 时 提 供 ) 1 建 筑 业 企 业 资 质 管 理 规 定 属 于 ( ) A 行 政 法 规 B 一 般 法 律 C 司 法 解 释 D 部 门 规 章 2 法 律 之 间 对 同 一 事 项 新 的 一
5 1 文 书 原 件 优 先 的 原 则 和 例 外 兼 评 最 高 人 民 法 院 关 于 民 事 诉 讼 证 据 的 若 干 规 定 第 69 条 / 纪 格 非 论 点 与 思 考 5 3 优 先 受 偿 权 是 什 么 权? 浅 谈 建 筑 工 程 优 先 受 偿 权 的 性 质 及 价
每 月 吹 风 4 律 师 的 社 会 理 想 是 什 么? / 顾 培 东 焦 点 与 视 线 5 没 有 反 对 的 声 音, 合 唱 怎 能 和 谐 访 陕 西 省 高 级 人 民 法 院 副 院 长 王 松 敏 / 千 古 洲 文 心 7 现 代 法 官 不 能 是 简 单 的 法 律 人 北 京 市 西 城 区 人 民 法 院 赵 庆 丽 法 官 的 便 民 情 怀 / 高 凌 燕 1 3
早 期 療 育 教 保 人 員 應 具 備 下 列 資 格 之 一 : 一 專 科 以 上 學 校 醫 護 職 能 治 療 物 理 治 療 教 育 特 殊 教 育 早 期 療 育 幼 兒 教 育 幼 兒 保 育 社 會 社 會 福 利 社 會 工 作 心 理 輔 導 兒 童 及 少 年 福 利 或
名 稱 : 兒 童 及 少 年 福 利 機 構 專 業 人 員 資 格 及 訓 練 辦 法 修 正 日 期 : 民 國 103 年 01 月 17 日 法 規 類 別 : 行 政 > 衛 生 福 利 部 > 社 會 及 家 庭 目 第 1 條 本 辦 法 依 兒 童 及 少 年 福 利 與 權 益 保 障 法 ( 以 下 簡 稱 本 法 ) 第 七 十 八 條 規 定 訂 定 之 第 2 條 本 法
陕 西 省 城 市 社 区 社 会 管 理 创 新 现 状 困 境 及 建 议 一 陕 西 省 城 市 社 区 管 理 现 状 分 析 ( 一 ) 社 区 社 会 管 理 创 新 的 重 要 举 措 1. 高 度 重 视 社 区 的 社 会 管 理, 积 极 探 索 总 结 经 验 自 2000 年
. 21 田 丽 丽 摘 要 : 社 区 是 社 会 管 理 的 基 石, 加 强 和 创 新 社 区 社 会 管 理 已 成 为 当 前 社 区 建 设 的 重 要 任 务 之 一 陕 西 省 在 推 进 社 会 管 理 创 新 强 化 社 区 建 设 的 过 程 中, 通 过 多 项 举 措, 在 社 区 管 理 模 式 创 新 方 面 取 得 了 初 步 成 效, 但 是 城 市 社 区 形
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第一章 帽 子 问 题 帽子问题又称帽子颜色问题 是比较经典又非常有趣的逻辑问题之一 一个经典的问题原文如下 有 3 顶红帽子和 2 顶白帽子 现在将其中 3 顶给排成一列纵队的 3 个人 每人戴上 1 顶 每个人都只能看到自己前面的人的帽子 而看不到自己和自己后面的人的帽子 同时 3 个人也不知道剩下的 2 顶帽子的颜色 但他们都知道他们 3 个人的帽子是从 3 顶红帽子 2 顶白帽子中取出的 先问站在最后边的人
事 業 單 位 改 組 或 轉 讓, 舊 勞 工 不 願 意 續 任 者, 可 否 請 求 資 遣 費? 工 或 與 勞 工 協 商 同 意 後 簽 訂 新 約, 以 穩 固 勞 雇 關 係 至 於 改 組 或 轉 讓 過 程 中, 被 商 定 留 用 之 勞 工, 如 因 其 勞 動 條 件 有
勞 動 基 準 法 常 見 壹 勞 動 契 約 何 謂 雇 主 違 反 勞 動 契 約 或 勞 工 法 令, 致 有 損 害 勞 工 權 益 之 虞 勞 工 可 否 終 止 契 約, 請 求 資 遣 費? 勞 工 法 令 有 強 制 性 質, 勞 動 契 約 不 得 違 反 勞 工 法 令, 團 體 協 約 或 工 作 規 則, 雇 主 是 否 違 反 勞 動 契 約 或 勞 工 法 令, 應 以
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1 2 小 引 江 湖 百 态, 五 行 八 作, 七 十 二 行, 是 我 国 自 古 以 来 小 生 产 经 济 的 产 物 工 匠 作 坊 商 贾 服 务 行 业 艺 人 江 湖 术 士 帮 会 匪 盗 娼 妓 形 形 色 色, 五 花 八 门 这 种 带 有 宗 法 式 的 行 业, 是 一 个 个 神 秘 的 王 国, 它 们 分 别 有 着 自 己 的 信 奉, 有 着 不 同 的 规
人 員 分 配 完 畢 後, 分 配 訓 練 之 需 本 法 第 三 條 第 一 項 所 稱 分 發 機 關, 指 銓 敘 部 及 行 政 院 人 事 行 政 總 處 本 法 第 三 條 第 一 項 所 稱 定 期 依 序, 指 分 發 機 關 或 申 請 舉 辦 考 試 機 關 於 下 次 該 項
名 稱 : 公 務 人 員 考 試 法 施 行 細 則 修 正 日 期 : 民 國 103 年 08 月 25 日 法 規 類 別 : 考 試 > 考 選 部 > 公 務 人 員 考 試 目 第 1 條 本 細 則 依 公 務 人 員 考 試 法 ( 以 下 簡 稱 本 法 ) 第 二 十 七 條 規 定 訂 定 之 第 2 條 本 法 第 一 條 所 稱 以 考 試 定 其 資 格 之 人 員,
关于印发《实验室骨干教师评聘及管理办法》的通知
关 于 印 发 实 验 室 骨 干 教 师 评 聘 及 管 理 办 法 的 通 知 院 教 发 [2001]051 号 各 系 ( 部 ): 为 了 更 好 地 加 强 实 验 室 建 设, 保 证 实 验 设 备 的 完 好 运 行, 提 高 实 验 室 设 备 的 使 用 效 益, 为 突 出 学 科 特 色 和 教 学 科 研 工 作 的 发 展 提 供 良 好 的 服 务, 并 做 好 实
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作 品 來 源 : 仁 濟 醫 院 王 華 湘 中 學 學 生 指 導 老 師 : 傅 潤 偉 老 師 報 告 目 錄 第 一 章 : 引 言 1.1. 研 究 背 景 及 目 的 ----------------------------------------------------------------P.3-4 1.2. 研 究 對 象 及 原 因 ----------------------------------------------------------------P.5
2 2. ( 4 ) =? 在 電 子 計 算 器 之 最 適 當 操 作 過 程 為 1 256 2256 23 2 5 6 4 2 5 6 2 3. ( 3 ) 乘 除 算 名 數 題 目 應 求 小 數 幾 位 以 下 四 捨 五 入 11 位 23 位 32 位 40 位 2 4. ( 3
104 年 度 11400 商 業 計 算 乙 級 技 術 士 技 能 檢 定 學 科 測 試 試 題 禁 止 攜 帶 任 何 計 算 工 具 本 試 卷 有 選 擇 題 80 題 單 選 選 擇 題 60 題, 每 題 1 分 ; 複 選 選 擇 題 20 題, 每 題 2 分, 測 試 時 間 為 100 分 鐘, 請 在 答 案 卡 上 作 答, 答 錯 不 倒 扣 ; 未 作 答 者, 不
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壹 基 礎 篇 ( 修 辭 學 教 學 ) 教 學 設 計 : 廖 文 毅 老 師 一 譬 喻 法 ( 明 喻 法 暗 喻 法 借 喻 法 ) ( 一 ) 明 喻 法 : 在 詩 裡 面 運 用 -- 甲 像 乙 -- 這 樣 的 比 喻, 就 是 明 喻 法 例 如 : 一 鞭 炮 像 個 留 著 長 髮 的 小 妹 妹 二 風 真 像 位 舞 蹈 家 三 白 雲 像 一 位 魔 術 師 作 品
105年公務員申領或侵占小額款項
公 務 員 詐 領 或 侵 占 小 額 款 項 宣 導 教 材 中 華 民 國 中 華 民 國 105 年 4 月 壹 前 言... 1 貳 案 例 類 型 分 析... 2 一 詐 領 差 旅 費... 2 二 詐 領 加 班 費... 4 三 詐 領 油 料 費... 8 四 詐 領 國 民 旅 遊 卡 休 假 補 助 費... 10 五 詐 領 鐘 點 費... 13 六 侵 占 公 用 財
德 华 安 顾 人 寿 保 险 有 限 公 司 银 行 保 险 业 务 系 列 人 员 管 理 办 法 (2014 版 ) 目 录 第 一 章 第 二 章 第 三 章 第 四 章 第 五 章 第 六 章 第 七 章 第 八 章 总 则 人 力 编 制 及 岗 位 职 责 人 员 管 理 制 度 考
德 华 安 顾 人 寿 保 险 有 限 公 司 银 行 保 险 业 务 系 列 人 员 管 理 办 法 (2014 版 ) 目 录 第 一 章 第 二 章 第 三 章 第 四 章 第 五 章 第 六 章 第 七 章 第 八 章 总 则 人 力 编 制 及 岗 位 职 责 人 员 管 理 制 度 考 核 制 度 薪 资 及 福 利 制 度 活 动 管 理 制 度 客 户 经 理 行 为 守 则 附 则
( 有 限 合 伙 )( 以 下 简 称 杭 州 金 葵 ) 和 杭 州 金 锋 投 资 管 理 合 伙 企 业 ( 有 限 合 伙 )( 以 下 简 称 杭 州 金 锋 )( 以 下 合 称 交 易 对 方 ) 购 买 其 持 有 的 卓 诚 兆 业 100% 股 份 ( 以 下 简 称 本 次
证 券 代 码 :600237 证 券 简 称 : 铜 峰 电 子 编 号 : 临 2016-003 安 徽 铜 峰 电 子 股 份 有 限 公 司 第 七 届 监 事 会 第 三 次 会 议 决 议 公 告 本 公 司 监 事 会 及 全 体 监 事 保 证 本 公 告 内 容 不 存 在 任 何 虚 假 记 载 误 导 性 陈 述 或 者 重 大 遗 漏, 并 对 其 内 容 的 真 实 性 准
海大学字[2004]3号
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中 国 海 洋 大 学 文 件 海 大 人 字 2007 117 号 中 国 海 洋 大 学 岗 位 设 置 管 理 暂 行 办 法 ( 二 七 年 十 二 月 二 十 七 日 ) 为 全 面 落 实 国 家 关 于 事 业 单 位 聘 用 制 改 革 和 收 入 分 配 制 度 改 革 的 要 求, 切 实 做 好 学 校 岗 位 设 置 管 理 工 作, 根 据 人 事 部 事 业 单 位 岗
第 １期 楼彩霞 价值链视角下北京光线传媒股份有限公司商业模式创新研究 １０１ 竞争优势 二 商业模式理论与价值链理论的关系 什么是商业模式 国外学者 Ｄｕｂ ｎ ２００２ 等 认 为 商 业 模 式 是 企 业 为 了 进 行 价 值 创 造 价 值 营销和价值提供所形成的企业结构及其合作伙伴网络
浙 第 ２１卷 第 １期 ２０１４年 ２月 江 传 媒 学 院 学 报 Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆｚｈｅ ｊ ｎｇｕｎ ｖ ｅ ｙ ｆｍｅ ｄ ｎｄｃ ｍｍｕｎ ｃ ｎ Ｖ ｌ ２１ Ｎ １ Ｆｅ ｂ ｕ ｙ ２０１４ 价值链视角下北京光线传媒股份有限公司 商业模式创新研究 楼彩霞 摘 要 现在传媒企业的竞争已经不再依赖于一个产品或几个产品 建立强大的商业模式以应付未来 竞争显得尤为迫切 文章以价值链理论分析方法为基础
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示 例 十 三 審 題 和 立 意 四 年 級 學 習 單 元 審 題 和 立 意 ( 東 華 三 院 王 余 家 潔 紀 念 小 學 ) 一 學 習 目 標 透 過 閱 讀 不 同 類 型 的 文 章, 掌 握 審 題 和 立 意 的 方 法, 增 強 寫 作 及 說 話 的 能 力 ; 培 養 虛 心 謙 遜 關 懷 他 人 的 態 度, 以 及 肯 定 自 我 價 值 二 學 習 重 點 聆
目 錄 大 會 歡 迎 詞 裁 判 長 的 話 選 手 賽 前 準 備 清 單 賽 事 日 程 表 選 手 報 到 比 賽 日 - 大 會 服 務 關 門 時 間 台 東 關 門 時 間 轉 換 區 須 知 台 東 轉 換 區 須 知 自 行 車 檢 錄 轉 換 袋 台 灣 游 泳 公 里 游 泳
目 錄 大 會 歡 迎 詞 裁 判 長 的 話 選 手 賽 前 準 備 清 單 賽 事 日 程 表 選 手 報 到 比 賽 日 - 大 會 服 務 關 門 時 間 台 東 關 門 時 間 轉 換 區 須 知 台 東 轉 換 區 須 知 自 行 車 檢 錄 轉 換 袋 台 灣 游 泳 公 里 游 泳 攻 略 台 灣 自 行 車 公 里 台 灣 路 跑 公 里 台 灣 補 給 站 台 東 游 泳 公 里
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上 海 浦 发 银 行 参 与 高 等 职 业 教 育 人 才 培 养 年 度 报 告 ( ) 一 校 企 合 作 概 况 ( 一 ) 企 业 简 介 上 海 浦 东 发 展 银 行 股 份 有 限 公 司 ( 以 下 简 称 : 浦 发 银 行 ) 是 1992 年 8 月 28 日 经 中 国 人 民 银 行 批 准 设 立 1993 年 1 月 9 日 开 业 1999 年 在 上 海 证 券
童 或 老 人 在 吸 食 果 冻 时 存 在 进 入 气 管 或 支 气 管 的 隐 患 建 议 三 周 岁 以 下 的 儿 童 必 须 在 监 护 人 的 指 导 下 食 用 学 龄 儿 童 和 老 人 用 小 勺 取 食, 细 嚼 慢 咽 此 外, 果 冻 可 以 给 人 以 饱 腹 感, 儿
果 冻 的 消 费 提 示 一 儿 童 和 老 人 应 谨 慎 食 用 果 冻 由 于 幼 儿 身 体 的 自 我 保 护 机 制 发 育 还 不 完 全, 而 老 人 的 身 体 机 能 有 所 下 降, 所 以 三 岁 以 下 儿 果 冻 是 以 水 食 糖 等 为 主 要 原 料, 辅 以 增 稠 剂 ( 卡 拉 胶 等 ) 等 食 品 添 加 剂, 添 加 或 不 添 加 魔 芋 粉 果 蔬
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痤 瘡 的 治 療 概 況 王 雷 山 東 中 醫 大 學 研 究 生 痤 瘡 是 青 春 期 男 女 的 常 見 皮 膚 病 多 因 皮 脂 腺 分 泌 過 旺,; 或 過 食 辛 辣, 煎 炒 燥 熱 及 油 膩 食 品 而 生 輕 者 形 成 粉 刺 紅 色 丘 疹, 重 則 反 復 感 染 造 成 局 部 膿 瘡 炎 症 結 節 或 囊 腫 樣 皮 膚 損 害 [1] 痤 瘡 的 治 療 方
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
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生 物 科 多 項 選 擇 題 ( 新 高 中 課 程 ) ( 第 二 冊 - 初 版 補 充 資 料 ) 第 二 冊 - 初 版 補 充 資 料 Takka Education Books Co. 德 嘉 教 育 出 版 社 目 錄 1 人 的 營 養... 3 2 人 體 的 氣 體 交 換... 6 3 人 體 內 物 質 的 轉 運... 7 4 生 殖 生 長 和 發 育... 14 5
5 期 周 舒 扬 等 : 黑 龙 江 省 玉 米 弯 孢 菌 叶 斑 病 病 原 鉴 定 及 其 产 细 胞 壁 降 解 酶 和 漆 酶 活 性 分 析 127 菌 分 离 形 态 学 鉴 定 工 作 当 前 黑 龙 江 省 玉 米 主 栽 品 种 缺 乏 抗 病 品 种, 玉 米 弯 孢 菌 叶
玉 米 科 学 2010,18(5):126~130 Journal%of%Maize%Sciences 文 章 编 号 : 1005-0906(2010)05-0126-05 黑 龙 江 省 玉 米 弯 孢 菌 叶 斑 病 病 原 鉴 定 及 其 产 细 胞 壁 降 解 酶 和 漆 酶 活 性 分 析 周 舒 扬 1, 杨 洪 一 1, 赵 敏 1, 梅 丽 艳 2 (1. 东 北 林 业 大 学
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知 识 目 标 : 了 解 药 物 鉴 别 的 意 义 学 习 目 标 理 解 药 物 鉴 别 试 验 的 项 目 掌 握 药 物 鉴 别 试 验 的 常 用 方 法 能 力 目 标 : 能 熟 练 应 用 药 物 鉴 别 的 常 用 方 法 对 药 物 进 行 鉴 别 第 一 节 概 述 药 物 的 鉴 别 试 验 是 根 据 药 物 的 组 成 分 子 结 构 和 理 化 性 质, 采 用 化
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2013 年 第 1 期 总 第 29 期 海 宁 市 史 志 办 公 室 海 宁 市 史 志 学 会 海 宁 州 志 稿 金 石 志 序 叶 海 宁 州 志 稿 曳 渊 李 圭 袁 刘 蔚 仁 袁 朱 宝 瑨 等 编 袁 1922 年 遥 冤 范 金 伐 石 以 传 文 字, 古 人 所 托 以 不 朽, 而 后 入 资 以 考 古 者 也 近 世 之 儒, 咸 重 金 石 之 文, 或 据 以
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貳 選 組 的 考 量 選 組 議 題 對 最 近 高 一 同 學 來 說 是 迫 在 眉 睫, 其 實 有 些 同 學 是 老 神 在 在, 早 就 知 道 要 選 自 然 組 或 社 會 組 ; 但 是 對 少 數 同 學 說 是 困 擾 多 多, 因 為 真 的 難 以 取 捨, 不 知 如 何 是 好 此 問 題 須 考 慮 到 興 趣 能 力 大 學 校 系 工 作 價 值 觀 行 業 趨
或 者 不 符 合 法 定 形 式 的, 应 当 一 次 书 面 告 知 申 请 人 需 要 补 正 的 全 部 内 容 对 不 符 合 条 件 的, 应 当 书 面 告 知 理 由 车 辆 管 理 所 应 当 将 法 律 行 政 法 规 和 本 规 定 的 有 关 办 理 机 动 车 驾 驶 证
中 华 人 民 共 和 国 公 安 部 令 第 123 号 修 订 后 的 机 动 车 驾 驶 证 申 领 和 使 用 规 定 已 经 2012 年 8 月 21 日 公 安 部 部 长 办 公 会 议 通 过, 现 予 发 布, 自 2013 年 1 月 1 日 起 施 行, 第 五 章 第 四 节 自 发 布 之 日 起 施 行 公 安 部 部 长 孟 建 2012 年 9 月 12 日 机 动
國立中山大學學位論文典藏.PDF
國 立 中 山 大 學 中 國 文 學 系 ( 暑 期 專 班 ) 碩 士 在 職 專 班 碩 士 論 文 漢 初 異 姓 諸 侯 王 研 究 研 究 生 : 林 裕 斌 撰 指 導 教 授 : 劉 文 強 教 授 中 華 民 國 97 年 5 月 摘 要 本 篇 論 文 探 究 的 對 象 是 漢 朝 初 年 八 位 異 姓 諸 侯 王, 並 涵 蓋 與 操 縱 他 們 興 盛 殞 落 息 息 相
商 周 三 代 年 代 學 的 研 究 經 過 近 五 年 的 努 力, 完 成 夏 商 周 年 表 本 大 事 概 覽 中 夏 商 周 三 代 的 大 事 紀 年, 即 採 用 夏 商 周 斷 代 工 程 的 考 論 成 果 對 於 無 法 考 證 年 份 的 史 事 或 發 生 在 史 前 時
中 外 歷 史 大 事 概 覽 編 者 說 明 : 1. 傳 說 時 代 與 夏 商 周 年 表 : 人 類 在 未 有 文 字 記 事 之 前, 口 耳 相 傳 的 神 話 傳 說, 是 先 民 對 自 然 變 化 的 體 驗 與 歷 史 經 歷 的 口 述 這 些 傳 說, 或 者 存 有 誇 張 和 穿 鑿, 隨 著 考 古 文 物 的 出 土 與 歷 史 學 家 的 努 力, 汰 偽 存 真,
第 三 条 实 验 室 技 术 安 全 工 作 贯 彻 以 人 为 本 安 全 第 一 预 防 为 主 综 合 治 理 的 方 针 各 单 位 及 教 职 工 学 生 应 树 立 安 全 意 识, 履 行 安 全 义 务 承 担 安 全 责 任 第 四 条 实 验 室 技 术 安 全 工 作 坚 持
校 发 2015 28 号 北 京 科 技 大 学 实 验 室 技 术 安 全 管 理 规 定 第 一 章 总 则 第 一 条 为 加 强 学 校 实 验 室 安 全 管 理, 防 止 实 验 室 安 全 事 故 发 生, 保 障 教 职 工 及 学 生 的 人 身 财 产 安 全, 促 进 学 校 各 项 事 业 健 康 稳 定 发 展, 根 据 国 家 相 关 法 律 法 规, 结 合 学 校
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2015年全国硕士研究生入学考试
2015 年 全 国 硕 士 研 究 生 入 学 考 试 佛 山 科 学 技 术 学 院 自 命 题 考 试 科 目 考 试 大 纲 ( 科 目 名 称 : 农 业 知 识 综 合 二 科 目 代 码 :340 ) 一 考 查 目 标 农 业 知 识 综 合 二 侧 重 于 动 物 生 产 类 综 合 知 识 的 考 查 考 试 内 容 应 主 要 涵 盖 动 物 遗 传 学 动 物 生 理 学 动
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臺 北 縣 立 樟 樹 國 中 96 學 年 度 第 二 學 期 區 域 性 自 然 科 學 領 域 資 賦 優 異 教 育 方 案 實 施 計 劃 一 依 據 : ( 一 ) 特 殊 教 育 法 第 二 十 九 條 ( 二 ) 特 殊 教 育 法 施 行 細 則 第 四 條 第 二 項 ( 三 ) 身 心 障 礙 及 資 賦 優 異 學 生 鑑 定 標 準 二 目 的 : ( 一 ) 推 廣 資
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汇集全球21位医生的经验和智慧，总结出最实用的专业建议，这些都是最值得你牢记的健康提醒
彙 集 全 球 21 位 醫 生 的 經 驗 和 智 慧, 總 結 出 最 實 用 的 專 業 建 議, 這 些 都 是 最 值 得 你 牢 記 的 健 康 提 醒 top1. 不 是 每 個 人 都 適 合 做 近 視 矯 行 手 術, 除 非 你 在 手 術 前 已 經 持 續 穩 定 地 佩 戴 了 一 年 以 上 的 近 視 眼 鏡 或 者 隱 形 眼 鏡 如 果 你 時 摘 時 戴 眼 鏡,
1 行 业 发 展 不 平 衡 我 国 房 地 产 中 介 服 务 业 起 步 较 晚, 专 业 分 工 程 度 和 国 外 发 达 国 家 相 比 还 有 很 大 差 距 房 地 产 中 介 服 务 行 业 的 发 展 水 平 与 房 地 产 开 发 行 业 的 市 场 化 水 平 密 切 相 关
房 地 产 中 介 服 务 : 仍 处 于 成 长 期, 市 场 空 间 巨 大 作 者 : 庞 增 华 房 地 产 中 介 服 务 业 内 的 企 业 包 括 依 法 设 立 并 具 备 房 地 产 中 介 资 格 的 房 地 产 顾 问 策 划 房 地 产 代 理 销 售 房 地 产 评 估 房 地 产 经 纪 等 中 介 服 务 机 构, 是 房 地 产 开 发 价 值 链 中 不 可 或 缺
歷 經 了 秋 冬 春 夏 四 季 分 明 的 金 門 風 情 後, 我 的 播 音 生 涯 也 在 忙 碌 緊 張 歡 笑 及 眼 淚 中 度 過 與 國 防 部 一 年 合 約 期 滿 後, 我 決 定 繼 續 求 學 之 路, 在 返 臺 飛 機 上 巧 遇 當 時 擔 任 馬 山 播 音 站
金 門, 你 永 遠 是 我 心 中 那 個 唯 一 且 不 可 取 代 的 聖 地! 金 門 憶 往 陳 娟 娟 民 國 62 年 7 月 剛 自 桃 園 高 中 畢 業 的 我, 通 過 了 國 防 部 心 戰 總 隊 招 考 外 島 播 音 員 激 烈 的 初 試 與 複 試, 又 經 光 華 廣 播 電 台 一 個 月 軍 事 化 管 理 的 密 集 職 前 訓 練 後, 於 當 年 10
中国化学制药工业协会
中 国 化 学 制 药 工 业 协 会 药 协 便 字 [2014]3 号 关 于 征 求 对 中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 院 发 布 的 口 服 固 体 制 剂 参 比 制 剂 确 立 原 则 ( 草 案 ) 等 意 见 的 通 知 各 会 员 单 位 : 国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 关 于 开 展 仿 制 药 质 量 一 致 性 评 价 工 作 的 通 知 ( 国 食
摘 要 我 們 將 日 常 生 活 上 常 吃 到 的 蔬 菜 水 果, 利 用 與 水 酒 精 作 為 溶 劑, 製 作 出 濃 度 相 同 的 溶 液, 觀 察 透 過 配 合 菜 瓜 布 清 潔 各 種 汙 垢 的 能 力 如 何, 我 們 還 利 用 了 黑 糖 水 與 蔬 果 進 行 一
作 品 名 稱 : 清 潔 汙 垢 - 天 然 ㄟ 尚 好 摘 要 我 們 將 日 常 生 活 上 常 吃 到 的 蔬 菜 水 果, 利 用 與 水 酒 精 作 為 溶 劑, 製 作 出 濃 度 相 同 的 溶 液, 觀 察 透 過 配 合 菜 瓜 布 清 潔 各 種 汙 垢 的 能 力 如 何, 我 們 還 利 用 了 黑 糖 水 與 蔬 果 進 行 一 個 月 的 發 酵, 以 一 個 禮 拜
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Primer3 http://frodowimitedu/cgi-bin/primer3/primer3_wwwcgi Primer5 Oligo665 Primer5 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=38536 Oligo667 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=40898 1 PCR 1
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95(2006) 年 1~6 傳 統 食 品 訓 練 招 生 簡 章 傳 統 食 品 組 2006(95) 年 度 1-6 招 生 班 別 NO 訓 練 班 別 期 別 訓 練 起 迄 日 期 天 數 材 料 輔 助 費 人 數 備 註 502 異 國 米 飯 班 95/01/03~95/01/05 5,000 元 取 消 一 601 手 工 糖 果 班 95/01/09~95/01/13 5 天
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综 合 性 设 计 性 实 验 指 导 手 册 ( 安 徽 医 科 大 学 卫 生 毒 理 学 系 编 写 ) 引 言 毒 理 学 是 一 门 研 究 外 源 因 素 ( 包 括 物 理 因 素 化 学 因 素 和 生 物 因 素 等 ) 对 机 体 的 损 害 作 用 及 其 机 制, 并 进 行 安 全 性 评 价 和 危 险 度 管 理 的 科 学 毒 理 学 既 是 一 门 基 础 学 科,
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第 三 章 黄 酒 酿 造 工 艺 黄 酒 是 我 国 的 民 族 特 产 和 传 统 食 品, 也 是 世 界 上 最 古 老 的 饮 料 酒 之 一, 是 以 谷 物 为 主 要 原 料, 利 用 酒 药 麦 曲 或 米 曲 中 含 有 的 多 种 微 生 物 的 共 同 作 用, 酿 制 而 成 的 发 酵 酒 第 一 节 原 料 和 辅 料 黄 酒 生 产 的 主 要 原 料 是 酿 酒 用
资 产 种 类 市 值 ( 元 ) 占 净 资 产 银 行 活 期 存 款 8,220,340.39 0.77 中 央 银 行 票 据 0.00 0.00 一 年 期 以 内 ( 含 一 年 ) 定 期 0.00 0.00 存 款 / 协 议 存 款 流 动 性 买 入 返 售 金 融 资 产 0.
企 业 年 金 养 老 金 产 品 管 理 情 况 报 告 ( 报 告 期 间 : 2016 年 4 月 1 日 至 6 月 30 日 ) 一 产 品 基 本 概 况 产 品 名 称 : 易 方 达 稳 健 配 置 二 号 混 合 型 养 老 金 产 品 产 品 代 码 :11B002 产 品 起 始 投 资 日 期 : 2014 年 11 月 18 日 投 资 管 理 人 : 易 方 达 基 金
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湖 北 省 卫 生 和 计 划 生 育 委 员 会 鄂 卫 生 计 生 函 2015 225 号 关 于 转 发 国 家 卫 生 计 生 委 妇 幼 司 产 前 诊 断 机 构 开 展 高 通 量 基 因 测 序 产 前 筛 查 与 诊 断 临 床 应 用 试 点 工 作 的 通 知 各 市 州 县 卫 生 计 生 委 ( 局 ), 部 省 属 医 疗 卫 生 单 位 : 为 做 好 我 省 高 通
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清 流 月 刊 中 華 民 國 九 十 九 年 五 月 號 論 述 大 陸 現 況 法 令 天 地 資 通 安 全 科 技 新 知 健 康 生 活 生 態 保 育 文 與 藝 傳 播 溝 通 新 視 野 其 他 飲 酒 文 化 深 深 紮 根 於 民 間, 不 僅 是 物 質 生 活 所 需, 也 是 一 種 精 神 享 受 漫 談 飲 酒 自 有 人 類 就 因 水 果 發 酵 而 知 有 酒 的
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糕 深 莫 測 蘿 蔔 糕 製 作 與 探 究 科 別 : 生 活 與 應 用 科 學 科 組 別 : 國 小 組 關 鍵 詞 : 在 來 米 蘿 蔔 糕 抑 菌 中 藥 1 摘 要 本 實 驗 主 要 探 討 蘿 蔔 糕 的 製 作 方 法 並 改 善 蘿 蔔 糕 口 感 及 延 長 保 存 期 限 在 研 究 一 我 們 找 出 蘿 蔔 絲 水 和 在 來 米 的 最 佳 比 例 是 2:2.5:1
2010年执业药师考试模拟题直接答案版之专业知识一.doc
在 药 品 质 量 标 准 中, 药 品 的 外 观 臭 味 等 内 容 归 属 的 项 目 为 性 状 www.alllw.com 误 差 中 属 于 偶 然 误 差 的 是 温 度 波 动 引 入 的 误 差 中 国 药 品 通 用 名 称 的 英 文 简 称 是 CADN 用 酸 度 计 测 定 溶 液 的 ph 值, 测 定 前 应 用 PH 值 与 供 试 液 较 接 近 的 一 种 标
由 于 受 各 种 因 素 的 制 约, 农 村 一 直 是 普 法 教 育 的 薄 弱 地 区, 一 些 农 民 朋 友 不 知 法 不 懂 法, 不 善 于 用 法 律 武 器 维 护 自 己 的 合 法 权 益 为 了 让 利 益 受 损 的 乡 村 农 民 苦 有 处 诉 难 有 人 帮 冤
丹 阴 当前特别要把人民最期盼 最迫切 最急需解决的民生问题 骨干企业企业家保护备忘录 制度的意见 等指导性文件 旗 作为加强和改进政法工作的切入点 着力点 人民群众最需 帜鲜明地支持改革 保护创业 惩治腐败 维护正义 促进发 要去的地方就是干警最应该去的地方 人民最需要解决的问 展 形成了一整套为经济建设保驾护航的规范性做法 走出了 题就是干警全力去做的事情 胶南检察院检察长栾成章可 一条服务大局的特色创新之路
细 胞 生 物 学 实 验 指 导 细 胞 生 物 教 研 室 目 录 实 验 一 动 物 细 胞 的 基 本 形 态 观 察 和 显 微 测 量 1 实 验 二 线 粒 体 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 4 实 验 三 液 泡 系 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 6 实 验 四 细 胞 生 理 活 动 的 观 察 7 实 验 五 细 胞 组 分 的 化 学 反 应
第十一章 颈部疾病病人的护理
第 十 一 章 颈 部 疾 病 病 人 的 护 理 学 习 目 标 1. 了 解 颈 部 常 见 肿 块 病 人 的 身 体 状 况 及 处 理 原 则 ; 能 提 出 甲 状 腺 肿 瘤 甲 状 腺 功 能 亢 进 病 人 的 护 理 诊 断 并 制 定 出 护 理 措 施 2. 熟 悉 甲 状 腺 肿 瘤 甲 状 腺 功 能 亢 进 病 人 的 身 体 状 况 手 术 适 应 证 3. 掌 握
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发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 说 明 书 ( 版 本 PF18) 货 号 LM009 储 存 条 件 产 品 为 冻 干 品, 随 干 冰 或 冰 袋 运 输, 收 到 产 品 后, 溶 解 之 前, 请 放 -80 冰 箱 低 温 保 存 该 条 件 下, 至 少 可 以 保 存 1 年 当 冻 干 品 溶 解 后, 在 冰 上 操 作, 按 每 管 50 μl 分 装 到 1.5
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总 前 言 农 牧 业 资 源 调 查 和 农 牧 业 区 划 是 实 现 现 代 化 农 业 的 基 础 工 作 根 据 1980 年 青 海 省 农 牧 业 区 划 委 员 会 第 二 次 农 牧 业 区 划 会 议, 关 于 县 级 农 业 自 然 资 源 调 查 和 农 业 区 划 工 作
青 海 县 果 洛 藏 族 自 治 州 久 治 县 畜 牧 业 区 划 果 洛 州 农 牧 业 区 划 办 公 室 果 洛 州 畜 牧 业 区 划 大 队 一 九 八 七 年 十 二 月 1 总 前 言 农 牧 业 资 源 调 查 和 农 牧 业 区 划 是 实 现 现 代 化 农 业 的 基 础 工 作 根 据 1980 年 青 海 省 农 牧 业 区 划 委 员 会 第 二 次 农 牧 业 区