Microsoft Word - å‘‚å–›æ³Łæfl¯å”�ä½fiæ£•æµ‰è¯Łå›‡çł™ 说柔书
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- 妇 蔺
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1 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 说 明 书 ( 版 本 PF18) 货 号 LM009 储 存 条 件 产 品 为 冻 干 品, 随 干 冰 或 冰 袋 运 输, 收 到 产 品 后, 溶 解 之 前, 请 放 -80 冰 箱 低 温 保 存 该 条 件 下, 至 少 可 以 保 存 1 年 当 冻 干 品 溶 解 后, 在 冰 上 操 作, 按 每 管 50 μl 分 装 到 1.5 ml 离 心 管 中, 在 -80 冰 箱 低 温 保 存 该 条 件 下, 可 以 保 存 1 年 左 右 产 品 用 途 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 专 门 用 于 检 测 体 外 培 养 的 哺 乳 动 物 细 胞 是 否 被 支 原 体 污 染 产 品 简 介 哺 乳 动 物 细 胞 的 培 养, 支 原 体 (Mycoplasma) 污 染 是 个 世 界 性 的 问 题 支 原 体 污 染 几 乎 可 以 改 变 细 胞 的 所 有 参 数, 导 致 实 验 结 果 的 不 准 确 甚 至 完 全 错 误 ( 支 原 体 污 染 对 细 胞 的 详 细 危 害, 请 参 考 本 公 司 的 网 站 : 从 2013 年 开 始, Nature 期 刊 已 正 式 要 求 投 稿 的 文 章, 如 涉 及 细 胞 培 养 都 要 进 行 支 原 体 检 测 相 信 会 有 越 来 越 多 的 高 水 平 期 刊 将 做 出 同 样 的 支 原 体 检 测 要 求 培 养 法 是 相 对 可 靠 的 支 原 体 检 测 技 术, 但 是 该 方 法 非 常 耗 时 的, 需 要 数 周, 不 适 合 作 为 细 胞 培 养 液 中 支 原 体 污 染 的 快 速 检 测 此 外, 通 过 固 体 培 养 法 无 法 检 测 污 染 细 胞 的 一 种 最 常 见 的 支 原 体, 即 猪 鼻 支 原 体 (M.Hyorhinis) 这 是 因 为 猪 鼻 支 原 体 无 法 在 支 原 体 固 体 培 养 基 上 形 成 可 见 的 菌 落 而 猪 鼻 支 原 体 约 占 所 有 支 原 体 污 染 的 20-50% 有 的 实 验 室 使 用 荧 光 染 色 法 检 测 支 原 体, 但 是 该 方 法 灵 敏 度 太 低, 当 检 测 成 阳 性 时, 细 胞 经 常 已 经 严 重 污 染 目 前, 细 胞 培 养 液 中 支 原 体 污 染 的 检 测 通 常 使 用 的 是 PCR 法 但 是 PCR 法 也 有 明 显 的 缺 点 :(1) 整 个 过 程 大 约 需 要 3 个 小 时 ;(2) 由 于 细 胞 培 养 数 天 后, 培 养 液 中 经 常 含 有 严 重 抑 制 PCR 扩 增 的 代 谢 物, 所 以 样 品 的 前 处 理 一 般 是 PCR 法 不 可 或 缺 的 环 节 ;(3)PCR 产 物 的 电 泳, 需 要 用 到 EB 等 潜 在 的 致 癌 物 质 本 公 司 已 经 开 发 出 了 专 用 于 体 外 细 胞 培 养 的 一 步 法 恒 温 支 原 体 检 测 试 剂 盒, 与 PCR 法 支 原 体 检 测 相 比, 其 具 有 许 多 优 点 : 耗 时 短 灵 敏 度 高 操 作 简 单 不 会 被 细 胞 代 谢 产 物 抑 制 结 果 无 需 电 泳 肉 眼 可 直 接 判 断 等 尽 管 如 此, 一 步 法 恒 温 支 原 体 检 测 试 剂 盒 可 能 也 有 个 小 缺 点 : 因 为 一 步 法 恒 温 支 原 体 检 测 试 剂 盒 需 要 至 少 同 时 使 用 4 条 引 物 才 能 完 成 扩 增, 其 引 物 设 计 相 对 困 难 虽 然 经 我 们 测 试, 该 试 剂 盒 至 少 可 认 识 其 说 明 书 中 列 举 的 13 种 支 原 体, 而 这 13 种 支 原 体 大 约 占 污 染 细 胞 的 支 原 体 种 类 的 99% 左 右 但 是, 不 排 除 一 步 法 恒 温 支 原 体 检 测 试 剂 盒 无 法 识 别 个 别 在 体 外 细 胞 培 养 中 出 现 概 率 极 低 的 支 原 体 为 此, 我 们 特 意 开 发 了 具 有 广 谱 识 别 能 力 的 PCR 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 作 为 补 充 此 外, 作 为 支 原 体 检 测 领 域 的 共 识 : 单 独 使 用 目 前 市 面 上 的 任 何 一 种 支 原 体 检 测 试 剂 盒, 都 无 法 做 到 100% 正 确, 既 不 会 漏 检 ( 假 阴 性 ), 也 不 会 多 检 ( 假 阳 性 ) 严 格 的 支 原 体 检 测, 至 少 需 要 使 用 两 种, 最 好 使 用 三 种 不 同 原 理 的 支 原 体 检 测 方 法 同 时 进 行 检 测, 才 能 使 检 测 结 果 接 近 100% 正 确 为 了 进 一 步 满 足 支 原 体 快 速 检 测 市 场 的 需 求, 我 们 特 意 开 发 了 第 三 种 支 原 体 检 测 试 剂 盒, 即 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 如 果 您 想 得 到 100% 正 确 的 支 原 体 检 测 结 果 ( 比 如, 开 展 细 胞 治 疗 的 客 户, 进 行 干 细 胞 培 养 的 客 户, 生 产 血 清 胰 酶 培 养 液 的 客 户, 出 售 各 种 原 代 培 养 细 胞 系 和 肿 瘤 细 胞 系 的 客 户 等 ), 任 选 本 公 司 生 产 的 一 步 法 恒 温 支 原 体 检 测 试 剂 盒 PCR 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 和 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 中 的 两 种 进 行 检 测, 将 会 得 到 比 较 满 意 的 结 果, 检 测 的 正 确 率 应 该 在 99.9% 以 上 如 果 同 时 使 用 这 三 种 试 剂 盒 进 行 检 测, 检 测 的 正 确 率 应 该 在 99.99% 以 上 如 果 将 所 有 待 测 样 品 统 一 接 种 到 支 原 体 液 体 培 养 基, 然 后 在 37 培 养 箱 中 培 养 3 天 后, 再 用 本 公 司 三 种 支 原 体 检 测 试 剂 盒 同 时 进 行 检 测, 则 可 以 确 保 您 的 检 测 结 果 100% 正 确! 通 过 将 待 测 样 品 接 种 到 支 原 体 液 体 培 养 基 培 养 3 天 的 目 的 是 : 防 止 一 些 支 原 体 含 量 极 其 微 量 的 待 测 样 品 ( 比 如 : 细 胞 培 养 用 的 血 清 胰 酶 抗 生 素 培 养 液 和 极 个 别 的 细 胞 培 养 上 清 ), 如 果 不 经 过 大 量 繁 殖, 有 可 能 漏 检
2 产 品 原 理 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 通 过 检 测 支 原 体 含 有 的 特 异 性 ATP 合 成 相 关 酶 的 活 性 以 达 到 检 测 体 外 培 养 的 哺 乳 动 物 细 胞 是 否 被 支 原 体 污 染 的 目 的 在 支 原 体 裂 解 后, 该 支 原 体 特 异 性 的 酶, 在 底 物 存 在 下, 具 有 将 ADP 转 化 成 ATP 的 功 能 由 于 荧 光 素 酶 (Luciferase) 催 化 底 物 荧 光 素 (Luciferin) 产 生 光 的 反 应 需 要 ATP 的 参 与, 支 原 体 特 异 性 酶 催 化 产 生 的 ATP 含 量, 可 以 通 过 该 反 应 转 化 成 生 物 发 光 (Bioluminescence) 信 号, 该 信 号 可 以 使 用 专 门 的 发 光 检 测 仪 (Luminometer) 或 具 有 发 光 检 测 功 能 的 多 功 能 酶 标 仪 进 行 检 测, 发 光 的 强 度 与 ATP 的 含 量 成 正 比 具 体 的 反 应 如 下 : 通 过 比 较 细 胞 培 养 上 清 和 未 用 于 细 胞 培 养 而 成 分 完 全 相 同 的 培 养 液 二 者 的 支 原 体 特 异 性 酶 的 含 量, 即 可 知 道 培 养 的 细 胞 是 否 被 支 原 体 污 染 产 品 优 点 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 具 有 如 下 显 著 的 优 点 : 1 检 测 时 间 短 整 个 检 测 过 程 只 需 30 分 钟 左 右 2 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 检 测 的 是 活 支 原 体, 只 有 样 品 中 存 在 活 的 支 原 体, 才 会 生 产 阳 性 结 果, 可 以 区 分 支 原 体 的 死 活 而 一 步 法 恒 温 支 原 体 检 测 试 剂 盒 和 PCR 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 都 是 检 测 支 原 体 的 DNA, 不 论 支 原 体 的 死 活, 样 品 中 只 要 有 支 原 体 DNA 的 存 在, 就 会 生 产 阳 性 结 果, 所 以 无 法 区 分 支 原 体 的 死 活 细 胞 培 养 中, 最 关 心 的 是 细 胞 培 养 液 上 清 或 者 血 清 胰 酶 等 成 分 中, 是 否 有 活 的 支 原 体 而 如 果 仅 有 死 的 支 原 体 或 者 一 些 残 存 的 支 原 体 DNA, 是 无 关 紧 要 的 3 不 存 在 假 阳 性 由 于 一 步 法 恒 温 支 原 体 检 测 试 剂 盒 和 PCR 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 都 需 要 对 支 原 体 DNA 进 行 大 量 的 扩 增, 检 测 过 程 中, 只 要 有 微 量 的 支 原 体 DNA 或 者 扩 增 产 物 的 污 染, 就 会 出 现 假 阳 性 而 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 只 检 测 活 的 支 原 体, 不 存 在 扩 增 产 物 污 染 样 品 的 问 题 4 不 存 在 因 反 应 被 抑 制 导 致 的 假 阴 性 由 于 细 胞 培 养 数 天 后, 培 养 液 中 经 常 含 有 严 重 抑 制 PCR 扩 增 的 代 谢 物, 所 以 使 用 PCR 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 经 常 会 出 现 假 阴 性 的 问 题 该 问 题 在 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 不 存 在 5 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 对 支 原 体 的 识 别 率 极 高, 近 20 种 细 胞 培 养 中 出 现 过 的 支 原 体 全 部 含 有 该 酶, 所 以 这 些 支 原 体 全 部 可 以 被 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 识 别 目 前 为 止,100 多 种 已 知 的 支 原 体 中, 只 发 现 这 一 种 支 原 体 不 含 有 该 酶, 而 这 种 支 原 体 在 细 胞 培 养 中 出 现 的 概 率 几 乎 为 零, 所 以 该 方 法 支 原 体 的 识 别 率 应 该 在 99.99% 以 上 试 剂 盒 组 成 1 支 原 体 检 测 溶 液 :5.5 ml 2 试 剂 A( 已 冻 干 ):2.5 ml(50 次 检 测 ) 3 试 剂 B( 已 冻 干 ): 2.5 ml(50 次 检 测 ) 检 测 过 程 1 检 测 试 剂 的 准 备 收 到 的 产 品 为 冻 干 品, 溶 解 前, 请 放 -80 冰 箱 低 温 保 存 第 一 次 使 用 前, 在 冰 上 操 作, 分 别 用 2.5 ml 支 原 体 检 测 溶 液 溶 解 试 剂 A 和 试 剂 B, 按 每 管 50 μl 分 别 分 装 到 50 个 1.5 ml 离 心 管 中, 在 -80 冰 箱 低 温 保 存 使 用 时, 根 据 待 检 测 的 样 品 数 量 和 阴 性 对 照 数 量, 从 -80 冰 箱 取 出 相 应 数 量 的 试 剂 A 和 试 剂 B, 放 室 温 5 分 钟 左 右 ( 注 意 : 不 能 加 热 ), 等 其 熔 解 后 放 冰 上 待 用
3 注 意 : 试 剂 A 和 试 剂 B 只 能 在 每 次 检 测 之 前 从 -80 冰 箱 取 出 的, 熔 解 后 在 室 温 放 置 的 时 间 尽 可 能 的 短, 不 能 超 过 20 分 钟 熔 解 后, 放 冰 上 的 时 间 也 不 能 超 2 小 时 已 经 融 化 后 的 试 剂 A 和 试 剂 B 不 能 再 次 冻 存 使 用 2 阴 性 对 照 的 设 置 本 试 剂 盒 每 次 检 测 都 必 须 设 置 阴 性 对 照 阴 性 对 照 必 须 使 用 配 制 完 后 放 于 4 冰 箱, 未 用 于 细 胞 培 养 但 成 分 完 全 相 同 的 培 养 液, 包 括 其 中 的 血 清 抗 生 素 等 含 量 也 必 须 完 全 相 同 特 别 是 其 中 的 血 清 含 量 和 批 次, 对 发 光 的 本 底 值 影 响 很 大, 作 为 阴 性 对 照 的 培 养 液, 其 中 添 加 的 血 清, 必 须 与 用 于 细 胞 培 养 的 血 清 批 次 相 同 且 含 量 完 全 相 同 例 如 : 如 果 用 于 细 胞 培 养 的 培 养 液 为 含 有 10% 的 胎 牛 血 清 的 高 糖 DMEM, 那 么 阴 性 对 照 也 应 该 使 用 含 有 相 同 批 次 的 10% 的 胎 牛 血 清 的 高 糖 DMEM 如 果 用 于 细 胞 培 养 的 培 养 液 为 无 血 清 培 养 液, 那 么 阴 性 对 照 也 应 该 使 用 无 血 清 但 成 分 相 同 的 培 养 液 3 待 测 样 品 的 准 备 为 了 准 确 判 断 细 胞 是 否 有 支 原 体 的 污 染, 待 测 的 细 胞 培 养 液 样 品 最 好 来 源 于 至 少 培 养 3 天 且 汇 合 度 在 70-90% 左 右 的 细 胞 培 养 液 上 清 ( 贴 壁 细 胞 ) 悬 浮 培 养 的 细 胞 也 需 要 在 换 液 传 代 后, 至 少 让 细 胞 生 长 3 天 再 取 培 养 液 进 行 检 测 具 体 操 作 如 下 ( 请 严 格 按 照 相 应 的 体 积 进 行 操 作 ): (1) 取 180 μl 上 述 待 测 样 品, 在 普 通 台 式 离 心 机 上 200 g( 大 约 1500 rpm) 低 速 离 心 5 分 钟, 准 确 吸 取 离 心 后 的 上 清 120 μl 到 一 个 新 的 1.5 ml 离 心 管 内, 丢 弃 含 细 胞 沉 淀 的 原 有 离 心 管 注 意 : 本 步 骤 为 样 品 检 测 之 前 必 不 可 少 的 步 骤, 低 速 离 心 是 为 了 去 除 哺 乳 动 物 细 胞, 以 排 除 其 对 支 原 体 检 测 的 干 扰 所 以 离 心 力 要 严 格 控 制 在 200 g 左 右, 该 离 心 力 下, 哺 乳 动 物 细 胞 将 被 沉 淀 下 来 而 支 原 体 不 会 如 果 错 误 使 用 更 高 的 离 心 力 将 可 能 导 致 支 原 体 也 被 离 心 下 来, 可 能 导 致 假 阴 性 而 如 果 错 误 使 用 更 低 的 离 心 力 将 可 能 导 致 哺 乳 动 物 细 胞 不 能 被 离 心 沉 淀 下 来, 从 而 导 致 支 原 体 检 测 时, 哺 乳 动 物 细 胞 内 的 ATP 也 被 释 放 到 溶 液 中, 可 能 导 致 假 阳 性 (2) 将 含 有 120 μl 上 清 的 新 的 1.5 ml 离 心 管, 在 普 通 台 式 离 心 机 上 g ( 大 约 rpm) 高 速 离 心 3 分 钟, 小 心 吸 走 108 μl 离 心 后 的 上 清 并 丢 弃 ( 注 意 : 切 勿 让 吸 头 碰 到 离 心 管 底 部, 因 为 底 部 为 可 能 含 有 支 原 体 的 沉 淀 留 下 大 约 12 μl 培 养 液 的 目 的 也 是 为 了 防 止 吸 头 碰 到 离 心 管 底 部 而 将 可 能 含 有 支 原 体 的 沉 淀 吸 走 ) 往 离 心 管 内, 加 入 108 μl 作 为 阴 性 对 照 的 培 养 液, 并 上 下 吹 吸 10 次, 将 可 能 含 有 支 原 体 的 沉 淀 吹 打 均 匀 至 此, 该 样 品 方 可 用 于 后 续 的 支 原 体 检 测 注 意 : 本 步 骤 也 是 样 品 检 测 之 前 必 不 可 少 的 步 骤, 高 速 离 心 是 为 了 将 支 原 体 沉 淀 下 来, 而 将 培 养 液 替 换 成 阴 性 对 照 的 培 养 液 是 为 了 排 除 一 些 细 胞 代 谢 产 物 对 后 续 检 测 的 可 能 干 扰 4 待 测 样 品 的 保 存 收 集 并 经 过 低 速 离 心 去 除 细 胞 和 经 过 高 速 离 心 替 换 成 阴 性 对 照 培 养 液 的 待 测 样 品, 如 果 不 是 当 天 立 即 检 测, 请 放 于 -80 冰 箱 保 存, 不 得 放 于 室 温 4 或 -20 冰 箱 样 品 在 -80 可 以 保 存 一 年 左 右 注 意 :(1) 为 了 日 后 检 测 方 便, 应 该 同 时 冻 存 一 些 作 为 阴 性 对 照 的 培 养 液 (2) 未 经 过 低 速 离 心 去 除 细 胞 和 未 经 过 高 速 离 心 替 换 成 阴 性 对 照 培 养 液 的 待 测 样 品, 不 得 直 接 放 -80 冰 箱 保 存 5 检 测 之 前, 必 须 将 熔 解 后 的 试 剂 A 试 剂 B 阴 性 对 照 和 待 测 样 品 放 在 室 温 10 分 钟 左 右 ( 注 意 : 不 能 加 热 ), 以 便 其 温 度 与 室 温 相 同, 本 试 剂 盒 的 最 佳 反 应 温 度 为 18-30, 必 须 确 保 室 温 不 低 于 15 6 吸 取 50 μl 阴 性 对 照 或 者 已 经 经 过 低 速 离 心 去 除 细 胞 和 经 过 高 速 离 心 替 换 成 阴 性 对 照 的 培 养 液 的 待 测 样 品, 放 入 白 色 或 者 黑 色 不 透 明 的 96 孔 板 内, 加 入 50 μl 试 剂 A, 室 温 反 应 15 分 钟 7 加 入 50 μl 试 剂 B, 室 温 反 应 3 分 钟 后, 在 具 有 发 光 检 测 功 能 的 多 功 能 酶 标 仪 或 者 单 独 的 发 光 检 测 仪 (Luminometer) 上, 以 仪 器 默 认 的 参 数 ( 注 意 : 不 要 加 载 任 何 的 滤 光 片 ) 进 行 发 光 值 的 检 测,5 分 钟 内, 连 续 测 5 次 阴 性 对 照 和 待 测 样 品 的 发 光 值, 计 算 各 自 的 平 均 值
4 结 果 判 断 计 算 待 测 样 品 的 发 光 平 均 值 与 阴 性 对 照 的 发 光 平 均 值 的 比 值 : 1 如 果 比 值 >1.2, 说 明 待 测 样 品 有 支 原 体 污 染 ( 阳 性 ) 严 重 的 污 染, 该 比 值 可 以 达 到 10 以 上 2 如 果 比 值 在 之 间, 说 明 待 测 样 品 可 疑 有 支 原 体 污 染 ( 可 疑 阳 性 ) 但 该 样 品 需 要 继 续 培 养 小 时 后, 重 新 检 测 如 果 继 续 培 养 小 时 后, 重 新 检 测 的 比 值 仍 然 在 之 间, 应 该 判 为 阴 性 3 如 果 比 值 <1.1, 说 明 待 测 样 品 无 支 原 体 污 染 ( 阴 性 ) 注 意 事 项 1 本 试 剂 盒 灵 敏 度 与 30 cycles 的 PCR 基 本 相 当 2 问 : 如 果 配 制 完 后 放 于 4 冰 箱 未 用 于 细 胞 培 养 且 成 分 完 全 相 同 的 培 养 液 本 身 有 支 原 体 污 染 ( 比 如 加 入 的 血 清 本 身 含 支 原 体 ), 是 否 仍 然 可 以 用 作 阴 性 对 照? 答 : 可 以 因 为 : 即 使 作 为 阴 性 对 照 的 培 养 液 本 身 有 支 原 体 污 染, 其 中 的 含 量 也 是 极 其 微 量 的 而 待 测 样 品 是 经 过 培 养 3 天 以 上 的, 其 支 原 体 在 这 3 天 培 养 过 程 中, 会 大 量 繁 殖, 用 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 检 测 的 发 光 值, 肯 定 比 阴 性 对 照 的 发 光 值 高 得 多 3 本 试 剂 盒 与 Lonza 公 司 的 MycoAlert Plus Mycoplasma Detection Kit 的 原 理 一 样, 可 以 替 代 后 者 用 于 细 胞 培 养 上 清 的 支 原 体 检 测 4 如 发 现 细 胞 被 支 原 体 污 染, 本 公 司 提 供 细 胞 专 用 支 原 体 清 除 和 预 防 试 剂 附 注 如 何 检 测 血 清 是 否 含 有 支 原 体 污 染? 血 清 有 没 有 支 原 体 污 染 这 是 细 胞 培 养 用 户 非 常 关 心 的 问 题 其 检 测 方 法 有 相 当 的 特 殊 性, 现 介 绍 如 下 : 1. 必 须 认 识 到 血 清 不 适 合 直 接 检 测, 在 对 其 进 行 检 测 之 前, 必 须 将 其 中 可 能 含 有 的 支 原 体 进 行 大 量 的 繁 殖 这 是 因 为 :(1) 商 品 化 的 血 清 都 是 经 过 0.1 μm 的 滤 膜 多 次 过 滤 的 而 且 长 期 低 温 保 存 和 运 输, 其 中 即 使 含 有 支 原 体, 其 含 量 也 必 然 是 极 其 微 量 的 ( 比 如 1 ml 就 含 有 几 个 支 原 体 ), 直 接 检 测 一 般 是 检 测 不 出 来 的 ;(2) 如 果 不 对 其 进 行 大 量 繁 殖 而 直 接 用 一 步 法 恒 温 支 原 体 检 测 试 剂 盒 进 行 检 测, 由 于 该 试 剂 盒 灵 敏 度 非 常 高, 很 多 血 清 的 检 测 结 果 会 介 于 阳 性 和 阴 性 之 间 但 是 这 也 只 能 说 明 其 含 有 微 量 的 支 原 体 DNA, 不 能 说 明 其 含 有 活 的 支 原 体 当 然, 如 果 检 测 结 果 与 阳 性 对 照 完 全 一 样, 呈 典 型 的 蓝 绿 色, 说 明 其 支 原 体 DNA 的 含 量 确 实 较 高, 也 间 接 说 明 其 血 清 质 量 较 差, 在 其 生 产 过 程 中, 没 有 控 制 好 支 原 体 的 污 染 如 果 检 测 结 果 与 阴 性 对 照 完 全 一 样, 呈 典 型 的 紫 红 色, 也 间 接 说 明 其 血 清 质 量 较 高 但 是 以 上 几 种 结 果 都 不 能 直 接 说 明 该 血 清 一 定 含 有 活 的 支 原 体 或 者 一 定 不 含 有 活 的 支 原 体 (3) 血 清 往 往 含 有 抑 制 PCR 扩 增 的 成 分, 直 接 用 PCR 法 进 行 检 测 也 是 无 法 准 确 判 断 的 2. 血 清 样 品 中 支 原 体 的 繁 殖 方 法 : 将 1 ml 的 血 清 按 1:10 稀 释 到 支 原 体 液 体 培 养 基 中 注 意 :(1) 血 清 接 种 的 量 不 能 太 小, 一 般 接 种 不 少 于 1 ml, 否 则 可 能 漏 检 ;(2) 不 能 使 用 常 规 的 哺 乳 动 物 细 胞 培 养 液 代 替 支 原 体 液 体 培 养 基 因 为 经 我 们 测 试 : 在 没 有 动 物 细 胞 共 培 养 的 情 况 下, 支 原 体 在 含 10% 血 清 的 动 物 细 胞 培 养 液 如 DMEM 1640 MEM GMEM 中 繁 殖 非 常 缓 慢, 甚 至 完 全 不 繁 殖, 然 后 部 分 放 4 冰 箱, 部 分 放 37 二 氧 化 碳 培 养 箱 或 者 普 通 的 细 菌 培 养 箱 中 培 养 3 天 经 我 们 测 试 3 天 的 培 养 已 经 足 够 而 且 是 最 佳 选 择 3 天 后, 进 行 支 原 体 的 检 测 3. 培 养 3 天 后 的 样 品 中 支 原 体 的 检 测 方 法, 可 以 在 本 公 司 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 一 步 法 恒 温 支 原 体 检 测 试 剂 盒 和 PCR 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 中 任 选 1-3 种 进 行 检 测 由 于, 血 清 是 否 含 有 支 原 体, 事 关 重 大, 我 们 建 议 至 少 使 用 两 种 方 法 进 行 检 测 4. 如 果 条 件 许 可, 我 们 建 议 其 中 一 种 方 法 尽 量 选 择 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒, 因 为 该 方 法 可 以 区 分 支 原 体 的 死 活, 而 且 可 以 进 行 定 量 的 分 析, 可 以 知 道 : 培 养 3 天 后, 支 原 体 繁 殖 了 多 少 倍 使 用 该 方 法, 具 体 操 作
5 如 下 : 以 放 4 冰 箱 的 含 10% 待 测 血 清 的 支 原 体 液 体 培 养 基 作 为 阴 性 对 照, 用 发 光 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 检 测 培 养 箱 中 培 养 3 天 的 培 养 液, 其 发 光 值 是 否 明 显 增 高, 从 而 判 断 最 初 加 入 的 血 清 是 否 含 支 原 体 5. 当 然, 培 养 3 天 后 的 样 品, 也 可 以 用 一 步 法 恒 温 支 原 体 检 测 试 剂 盒 和 PCR 法 支 原 体 检 测 试 剂 盒 进 行 检 测 用 这 两 种 方 法 进 行 检 测 时, 建 议 同 时 检 测 原 液 1:10 和 1:100 的 稀 释 液, 稀 释 液 用 PBS 这 是 因 为 :(1) 原 液 仍 然 含 有 10% 的 血 清, 其 仍 然 有 可 能 抑 制 PCR 的 扩 增 ;(2) 一 个 样 品 同 时 检 测 三 个 稀 释 度, 对 于 结 果 判 断 的 准 确 性 非 常 有 帮 助 结 果 判 断 如 下 :(1) 如 果 三 个 稀 释 度 的 检 测 结 果 都 为 阴 性, 说 明 血 清 没 有 支 原 体 污 染 ;(2) 三 个 稀 释 度 的 检 测 结 果 只 要 一 个 为 阳 性, 说 明 血 清 有 支 原 体 污 染, 而 且 极 有 可 能 是 污 染 了 活 支 原 体 最 常 见 的 结 果 是 三 个 稀 释 度 都 为 阳 性 或 三 个 稀 释 度 都 为 阴 性 6. 本 公 司 同 时 提 供 经 测 试 对 各 种 支 原 体 均 有 良 好 繁 殖 能 力 的 支 原 体 液 体 培 养 基 ( 干 粉 型 ) 产 品 大 家 购 买 后, 自 己 按 说 明 书 配 成 支 原 体 液 体 培 养 基, 其 中 的 马 血 清 可 以 不 加, 而 用 待 测 的 胎 牛 血 清 代 替 ( 终 浓 度 10% 即 可 ) 其 中 的 青 霉 素 可 以 不 用 添 加 或 者 用 细 胞 培 养 用 的 青 霉 素 和 链 霉 素 (100, 按 1:100 加 入 ) 代 替 1 瓶 支 原 体 液 体 培 养 基 ( 干 粉 型 ) 大 约 可 以 检 测 1000 个 血 清 样 品 7. 如 果 大 家 觉 得 上 述 检 测 非 常 繁 琐, 本 公 司 同 时 供 应 经 上 述 步 骤 严 格 检 测, 证 明 100% 不 含 活 支 原 体 的 精 选 进 口 胎 牛 血 清 其 他 : 如 何 检 测 胰 酶 抗 生 素 未 使 用 的 动 物 细 胞 培 养 液 等 细 胞 培 养 相 关 试 剂 是 否 含 有 支 原 体 污 染? 这 些 样 品 也 不 适 合 直 接 检 测 方 法 与 血 清 的 检 测 方 法 非 常 类 似, 在 对 其 进 行 检 测 之 前, 也 必 须 将 其 中 可 能 含 有 的 支 原 体 进 行 大 量 的 繁 殖 首 选, 必 须 先 检 测 支 原 体 液 体 培 养 基 中 含 有 的 血 清 是 否 被 支 原 体 污 染, 在 保 证 血 清 没 有 支 原 体 污 染 的 前 提 下, 配 制 含 10% 经 证 明 没 有 支 原 体 污 染 的 血 清 的 支 原 体 液 体 培 养 基, 然 后 将 不 少 于 1 ml 的 胰 酶 抗 生 素 或 者 动 物 细 胞 培 养 液 等 按 1:10 稀 释 到 该 培 养 基 中, 然 后 部 分 放 4 冰 箱, 部 分 放 37 二 氧 化 碳 培 养 箱 或 者 普 通 的 细 菌 培 养 箱 中 培 养 3 天,3 天 后 的 进 行 支 原 体 的 检 测, 方 法 同 上
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歷 經 了 秋 冬 春 夏 四 季 分 明 的 金 門 風 情 後, 我 的 播 音 生 涯 也 在 忙 碌 緊 張 歡 笑 及 眼 淚 中 度 過 與 國 防 部 一 年 合 約 期 滿 後, 我 決 定 繼 續 求 學 之 路, 在 返 臺 飛 機 上 巧 遇 當 時 擔 任 馬 山 播 音 站
金 門, 你 永 遠 是 我 心 中 那 個 唯 一 且 不 可 取 代 的 聖 地! 金 門 憶 往 陳 娟 娟 民 國 62 年 7 月 剛 自 桃 園 高 中 畢 業 的 我, 通 過 了 國 防 部 心 戰 總 隊 招 考 外 島 播 音 員 激 烈 的 初 試 與 複 試, 又 經 光 華 廣 播 電 台 一 個 月 軍 事 化 管 理 的 密 集 職 前 訓 練 後, 於 當 年 10
或 者 不 符 合 法 定 形 式 的, 应 当 一 次 书 面 告 知 申 请 人 需 要 补 正 的 全 部 内 容 对 不 符 合 条 件 的, 应 当 书 面 告 知 理 由 车 辆 管 理 所 应 当 将 法 律 行 政 法 规 和 本 规 定 的 有 关 办 理 机 动 车 驾 驶 证
中 华 人 民 共 和 国 公 安 部 令 第 123 号 修 订 后 的 机 动 车 驾 驶 证 申 领 和 使 用 规 定 已 经 2012 年 8 月 21 日 公 安 部 部 长 办 公 会 议 通 过, 现 予 发 布, 自 2013 年 1 月 1 日 起 施 行, 第 五 章 第 四 节 自 发 布 之 日 起 施 行 公 安 部 部 长 孟 建 2012 年 9 月 12 日 机 动
学 习 贯 彻 中 央 尧 省 尧 市 纪 委 全 会 精 神 专 栏 中 国 共 产 党 第 十 八 届 中 央 纪 律 检 查 委 员 会 第 六 次 全 体 会 议 公 报 渊 2016 年 1 月 14 日 中 国 共 产 党 第 十 八 届 中 央 纪 律 检 查 委 员 会 第 六 次
内 部 资 料 注 意 保 存 渊 第 三 期 冤 中 共 六 盘 水 市 委 讲 师 团 编 2016 年 3 月 15 日 学 习 贯 彻 中 央 尧 省 尧 市 纪 委 全 会 精 神 专 辑 音 学 习 贯 彻 中 央 尧 省 尧 市 纪 委 全 会 精 神 专 栏 淫 中 国 共 产 党 第 十 八 届 中 央 纪 律 检 查 委 员 会 第 六 次 全 体 会 议 公 报 渊 2 冤 淫
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临 沂 市 人 民 政 府 办 公 室 文 件 临 政 办 发 2016 12 号 临 沂 市 人 民 政 府 办 公 室 关 于 印 发 临 沂 市 乡 村 教 师 支 持 计 划 (2015-2020 年 ) 实 施 细 则 的 通 知 各 县 区 人 民 政 府, 市 政 府 各 部 门 各 直 属 机 构, 临 沂 高 新 技 术 产 业 开 发 区 管 委 会, 临 沂 经 济 技 术 开
中共山东省委高校工委
关 于 印 发 中 共 山 东 省 委 高 校 工 委 2016 年 工 作 要 点 的 通 知 青 岛 淄 博 威 海 日 照 滨 州 市 委 高 校 工 委, 各 高 等 学 校 党 委 : 现 将 中 共 山 东 省 委 高 校 工 委 2016 年 工 作 要 点 印 发 你 们, 请 认 真 学 习 领 会, 抓 好 贯 彻 落 实 中 共 山 东 省 委 高 校 工 委 2016 年 1
标题
河 北 省 人 民 政 府 冀 政 函 2016 10 号 河 北 省 人 民 政 府 关 于 提 请 审 议 河 北 省 人 口 与 计 划 生 育 条 例 修 正 案 ( 草 案 ) 的 议 案 省 人 大 常 委 会 : 河 北 省 人 口 与 计 划 生 育 条 例 修 正 案 ( 草 案 ) 已 经 2016 年 2 月 23 日 省 政 府 第 76 次 常 务 会 议 通 过, 现 提
目 录 第 一 部 分 国 家 知 识 产 权 局 概 况 一 主 要 职 能 二 部 门 预 算 单 位 构 成 第 二 部 分 国 家 知 识 产 权 局 2016 年 部 门 预 算 表 一 财 政 拨 款 收 支 总 表 二 一 般 公 共 预 算 支 出 表 三 一 般 公 共 预 算 基
国 家 知 识 产 权 局 2016 年 部 门 预 算 目 录 第 一 部 分 国 家 知 识 产 权 局 概 况 一 主 要 职 能 二 部 门 预 算 单 位 构 成 第 二 部 分 国 家 知 识 产 权 局 2016 年 部 门 预 算 表 一 财 政 拨 款 收 支 总 表 二 一 般 公 共 预 算 支 出 表 三 一 般 公 共 预 算 基 本 支 出 表 四 一 般 公 共 预 算
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最 高 人 民 检 察 院 2016 年 部 门 预 算 目 录 第 一 部 分 最 高 人 民 检 察 院 概 况 一 主 要 职 能 二 单 位 构 成 第 二 部 分 最 高 人 民 检 察 院 2016 年 部 门 预 算 表 一 财 政 拨 款 收 支 总 表 二 一 般 公 共 预 算 支 出 表 三 一 般 公 共 预 算 基 本 支 出 表 四 一 般 公 共 预 算 三 公 经 费
科学技术部2013年度部门预算
1 目 录 第 一 部 分 中 国 侨 联 概 况 一 主 要 职 能 二 部 门 预 算 单 位 构 成 第 二 部 分 中 国 侨 联 2016 年 部 门 预 算 表 一 财 政 拨 款 收 支 总 表 二 一 般 公 共 预 算 支 出 表 三 一 般 公 共 预 算 基 本 支 出 表 四 一 般 公 共 预 算 三 公 经 费 支 出 表 五 政 府 性 基 金 预 算 支 出 表 六
一、二○○二年学校工作的简要回顾
北 华 校 字 [2016]13 号 北 华 大 学 2016 年 硕 士 研 究 生 招 生 复 试 录 取 工 作 办 法 为 做 好 我 校 2016 年 硕 士 研 究 生 招 生 复 试 录 取 工 作, 规 范 招 生 工 作 程 序, 加 强 招 生 制 度 建 设, 根 据 教 育 部 关 于 印 发 的
Microsoft Word - 白俄罗斯公司法汉语译文2015年7月15日修改版.docx
白 俄 罗 斯 共 和 国 公 司 法 条 目 第 一 章 总 则 第 1 条 关 于 公 司 的 基 本 规 定 第 2 条 白 俄 罗 斯 共 和 国 关 于 公 司 的 立 法 第 3 条 本 法 的 适 用 范 围 第 4 条 公 司 的 名 称 和 住 所 第 5 条 公 司 的 责 任 第 6 条 公 司 的 代 表 处 和 分 公 司 第 7 条 子 公 司 第 8 条 附 属 公 司
第 一 部 分 中 国 气 象 局 职 责 及 概 况 一 主 要 职 责 ( 一 ) 拟 定 气 象 工 作 的 方 针 政 策 法 律 法 规 发 展 战 略 和 长 远 规 划 ; 制 定 发 布 气 象 工 作 的 规 章 制 度 技 术 标 准 和 规 范 并 监 督 实 施 ; 承 担
中 国 气 象 局 2016 年 部 门 预 算 目 录 第 一 部 分 中 国 气 象 局 职 责 及 概 况 一 主 要 职 责 二 机 构 设 置 第 二 部 分 中 国 气 象 局 2016 年 部 门 预 算 表 一 财 政 拨 款 收 支 总 表 二 一 般 公 共 预 算 支 出 表 三 一 般 公 共 预 算 基 本 支 出 表 四 一 般 公 共 预 算 三 公 经 费 支 出 表
数学与统计学院教师支部“两学一做”学习教育实施计划
数 学 与 统 计 学 院 教 师 支 部 两 学 一 做 学 习 教 育 实 施 计 划 根 据 中 共 中 央 办 公 厅 关 于 在 全 体 党 员 中 开 展 学 党 章 党 规 学 系 列 讲 话, 做 合 格 党 员 学 习 教 育 方 案 的 精 神 和 普 院 党 发 2016 13 号 文 件 关 于 印 发 < 在 全 校 党 员 中 开 展 学 党 章 党 规 学 系 列 讲
无 锡 职 业 技 术 学 院 国 有 资 产 管 理 办 法 第 一 章 总 则 第 一 条 为 加 强 学 校 国 有 资 产 管 理, 合 理 配 置 和 有 效 使 用 国 有 资 产, 确 保 国 有 资 产 安 全 与 完 整, 保 障 和 促 进 学 校 各 项 事 业 发 展, 根
无 锡 职 业 技 术 学 院 文 件 锡 职 院 资 2016 2 号 关 于 印 发 无 锡 职 业 技 术 学 院 国 有 资 产 管 理 办 法 的 通 知 各 部 门 各 院 部 : 现 将 无 锡 职 业 技 术 学 院 国 有 资 产 管 理 办 法 印 发 给 你 们, 请 遵 照 执 行 无 锡 职 业 技 术 学 院 2016 年 3 月 28 日 - 1 - 无 锡 职 业 技
省安委会2015冬防工作方案.doc
山 东 省 人 民 政 府 安 全 生 产 委 员 会 文 件 鲁 安 发 2015 39 号 山 东 省 人 民 政 府 安 全 生 产 委 员 会 关 于 印 发 2015 年 全 省 冬 春 火 灾 防 控 工 作 方 案 的 通 知 各 市 人 民 政 府 县 ( 市 区 ) 人 民 政 府, 省 政 府 各 部 门 各 直 属 机 构, 各 大 企 业, 各 高 等 院 校 : 为 切 实
南 昌 大 学 人 力 资 源 工 作 简 讯 2015 年 第 2 期 ( 总 第 27 期 ) 目 录 1 人 力 资 源 综 合 信 息 2 人 员 调 配 及 机 构 编 制 管 理 信 息 3 劳 资 工 作 信 息 4 师 资 管 理 信 息 5 高 层 次 人 才 及 队 伍 建 设
人 力 资 源 工 作 简 讯 2015 年 第 2 期 ( 总 第 27 期 ) 南 昌 大 学 人 事 处 2015 年 7 月 南 昌 大 学 人 力 资 源 工 作 简 讯 2015 年 第 2 期 ( 总 第 27 期 ) 目 录 1 人 力 资 源 综 合 信 息 2 人 员 调 配 及 机 构 编 制 管 理 信 息 3 劳 资 工 作 信 息 4 师 资 管 理 信 息 5 高 层
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国 家 邮 政 局 部 门 预 算 (2015 年 ) 1 目 录 第 一 部 分 国 家 邮 政 局 概 况 一 主 要 职 能 二 部 门 预 算 单 位 构 成 第 二 部 分 国 家 邮 政 局 2015 年 部 门 预 算 表 一 财 政 拨 款 收 支 总 表 二 一 般 公 共 预 算 支 出 表 三 一 般 公 共 预 算 基 本 支 出 表 四 一 般 公 共 预 算 三 公 经
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浙 江 省 邮 政 管 理 局 部 门 预 算 (2015 年 ) 1 目 录 第 一 部 分 浙 江 省 邮 政 管 理 局 概 况 一 主 要 职 能 二 部 门 预 算 单 位 构 成 第 二 部 分 浙 江 省 邮 政 管 理 局 2015 年 部 门 预 算 表 一 财 政 拨 款 收 支 总 表 二 一 般 公 共 预 算 支 出 表 三 一 般 公 共 预 算 基 本 支 出 表 四
11韶关市人力资源和社会保障局权责清单
社 会 保 障 局 权 责 清 单 ( 2015年 版 ) 韶 关 市 人 民 政 府 前 言 编 制 权 责 清 单 是 国 家 省 市 部 署 的 一 项 重 大 改 革 任 务 2015 年 8 月, 市 委 办 和 市 政 府 办 联 合 印 发 关 于 推 行 市 县 政 府 工 作 部 门 权 责 清 单 制 度 有 关 工 作 的 通 知 对 权 责 清 单 工 作 进 行 了 部 署
三亚市政府投资建设项目代建制管理工作介绍
三 亚 市 发 展 和 改 革 委 员 会 2015 年 9 月 一 代 建 制 的 定 义 二 代 建 范 围 规 定 三 代 建 单 位 入 库 资 格 及 要 求 四 代 建 单 位 的 职 责 七 代 建 单 位 管 理 费 拨 付 和 计 算 五 代 建 项 目 组 织 实 施 程 序 六 资 金 管 理 与 监 督 八 项 目 前 期 费 用 及 工 程 款 拨 付 九 代 建 项 目
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生 物 地 质 与 环 境 地 质 国 家 重 点 实 验 室 2015 年 硕 士 研 究 生 招 生 复 试 录 取 工 作 方 案 为 了 保 证 我 室 本 年 度 硕 士 研 究 生 复 试 录 取 工 作 顺 利 进 行, 根 据 教 育 部 关 于 印 发 的 通 知 ( 教 学 2014 13 号 ) 和
目 录 一 部 门 职 责... 1 二 预 算 编 报 范 围... 3 三 2013 年 部 门 预 算 报 表 及 情 况 说 明... 5 收 支 预 算 总 表 及 情 况 说 明... 5 收 入 预 算 表 及 情 况 说 明... 7 支 出 预 算 表 及 情 况 说 明... 1
教 育 部 2013 年 部 门 预 算 二 〇 一 三 年 四 月 十 八 日 目 录 一 部 门 职 责... 1 二 预 算 编 报 范 围... 3 三 2013 年 部 门 预 算 报 表 及 情 况 说 明... 5 收 支 预 算 总 表 及 情 况 说 明... 5 收 入 预 算 表 及 情 况 说 明... 7 支 出 预 算 表 及 情 况 说 明... 11 财 政 拨 款
标题
前 言 规 章 制 度 是 指 一 个 集 体 为 了 一 个 共 同 的 目 标, 要 求 成 员 共 同 遵 守 的 规 则, 法 规, 也 是 这 个 集 体 按 一 定 程 序 办 事 的 规 章, 具 有 一 定 的 约 束 力 和 强 制 性 建 立 建 全 规 章 制 度 能 保 证 各 项 工 作 有 秩 序 有 成 效 地 进 行, 使 工 作 科 学 化 规 范 化, 提 高 工
目 录 一 重 要 提 示... 3 二 公 司 主 要 财 务 数 据 和 股 东 变 化... 3 三 重 要 事 项... 6 四 附 录... 11 2 / 22
梅 花 生 物 科 技 集 团 股 份 有 限 公 司 600873 2014 年 第 三 季 度 报 告 目 录 一 重 要 提 示... 3 二 公 司 主 要 财 务 数 据 和 股 东 变 化... 3 三 重 要 事 项... 6 四 附 录... 11 2 / 22 一 重 要 提 示 1.1 公 司 董 事 会 监 事 会 及 董 事 监 事 高 级 管 理 人 员 保 证 季 度 报
目 录 引 言... 3 第 一 部 分 电 价 水 平 基 本 情 况...4 一 上 网 电 价...4 二 输 配 电 价...6 三 销 售 电 价...9 四 政 府 性 基 金 和 附 加...12 第 二 部 分 电 价 政 策 执 行 情 况...13 一 电 价 水 平 调 整 情
2008 年 度 电 价 执 行 情 况 监 管 报 告 国 家 电 力 监 管 委 员 会 二 九 年 十 月 目 录 引 言... 3 第 一 部 分 电 价 水 平 基 本 情 况...4 一 上 网 电 价...4 二 输 配 电 价...6 三 销 售 电 价...9 四 政 府 性 基 金 和 附 加...12 第 二 部 分 电 价 政 策 执 行 情 况...13 一 电 价 水 平
西安邮电学院本科教学工作简报
西 安 邮 电 学 院 本 科 教 学 工 作 简 报 (2011 年 第 一 期 ) 西 安 邮 电 学 院 教 务 处 2011 年 7 月 本 期 要 目 教 学 新 闻 王 曙 燕 教 授 荣 获 陕 西 省 教 学 名 师 称 号 2010 2011 年 中 央 财 政 专 项 资 金 项 目 使 用 及 申 报 情 况 人 民 邮 电 出 版 社 西 安 邮 电 学 院 教 材 出 版
密 级：
中 国 保 监 会 部 门 预 算 (2016 年 ) 二 O 一 六 年 四 月 目 录 第 一 部 分 部 门 概 况 一 主 要 职 责 二 预 算 编 报 范 围 三 部 门 预 算 单 位 构 成 第 二 部 分 2016 年 部 门 预 算 表 格 一 财 政 拨 款 收 支 总 表 二 一 般 公 共 预 算 支 出 表 三 一 般 公 共 预 算 基 本 支 出 表 四 一 般 公
市六届人大--次
市 六 届 人 大 七 次 会 议 文 件 (20 20) 附 件 清 远 市 2015 年 预 算 执 行 情 况 和 2016 年 预 算 草 案 附 件 目 录 一 一 般 公 共 预 算 1-80 ( 一 )2015 年 清 远 市 本 级 一 般 公 共 预 算 执 行 情 况 和 2016 年 预 算 草 案 1-10 ( 二 )201 2015 年 一 般 公 共 预 算 执 行 情
目 录 前 言 第 一 章 近 年 来 合 同 行 政 监 管 及 相 关 工 作 改 革 创 新 情 况 第 二 章 2014 年 合 同 行 政 监 管 及 相 关 工 作 情 况 第 一 节 合 同 格 式 条 款 监 管 一 银 行 业 电 信 业 合 同 格 式 条 款 专 项 整 治 二
合 同 行 政 监 管 及 相 关 工 作 年 度 报 告 (2014 年 ) 国 家 工 商 行 政 管 理 总 局 市 场 规 范 管 理 司 目 录 前 言 第 一 章 近 年 来 合 同 行 政 监 管 及 相 关 工 作 改 革 创 新 情 况 第 二 章 2014 年 合 同 行 政 监 管 及 相 关 工 作 情 况 第 一 节 合 同 格 式 条 款 监 管 一 银 行 业 电 信
中国文联部门预算
中 国 文 联 部 门 预 算 (2016 年 ) 二 〇 一 六 年 四 月 目 录 第 一 部 分 : 中 国 文 学 艺 术 界 联 合 会 基 本 情 况 一 主 要 职 责 二 部 门 预 算 单 位 构 成 第 二 部 分 :2016 年 部 门 预 算 表 格 一 财 政 拨 款 收 支 总 表 二 一 般 公 共 预 算 支 出 表 三 一 般 公 共 预 算 基 本 支 出 表 四
( 十 ) 其 他 会 计 工 作 第 四 条 单 位 不 得 任 用 ( 聘 用 ) 不 具 备 会 计 从 业 资 格 的 人 员 从 事 会 计 工 作 不 具 备 会 计 从 业 资 格 的 人 员, 不 得 从 事 会 计 工 作, 不 得 参 加 会 计 专 业 技 术 资 格 考 试
会 计 从 业 资 格 管 理 办 法 (2012 年 12 月 6 日 中 华 人 民 共 和 国 财 政 部 令 第 73 号 公 布 根 据 2016 年 5 月 11 日 财 政 部 关 于 修 改 < 会 计 从 业 资 格 管 理 办 法 > 的 决 定 修 改 ) 第 一 章 总 则 第 一 条 为 了 加 强 会 计 从 业 资 格 管 理, 规 范 会 计 人 员 行 为, 根 据
附 件 : 顺 德 区 2015 年 高 中 阶 段 学 校 招 生 考 试 工 作 意 见 根 据 佛 山 市 顺 德 区 教 育 事 业 发 展 十 二 五 规 划 2015 年 顺 德 区 教 育 工 作 意 见 的 文 件 精 神 和 上 级 教 育 主 管 部 门 工 作 要 求, 结 合
主 动 公 开 佛 山 市 顺 德 区 教 育 局 文 件 顺 教 2015 23 号 顺 德 区 教 育 局 关 于 印 发 顺 德 区 2015 年 高 中 阶 段 学 校 招 生 考 试 工 作 意 见 的 通 知 各 镇 ( 街 道 ) 教 育 局 区 属 学 校 : 现 将 顺 德 区 2015 年 高 中 阶 段 学 校 招 生 考 试 工 作 意 见 印 发 给 你 们, 请 认 真
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机 构 编 制 委 员 会 办 公 室 编 2016 年 2 月 29 日 类 别 数 量 合 计 拟 调 整 后 保 留 拟 调 整 小 计 取 消 下 放 转 移 提 请 或 调 整 事 项 行 政 许 可 9 9 1 行 政 处 罚 951 951 行 政 强 制 37 37 行 政 征 收 4 4 行 政 给 付 0 0 行 政 检 查 47 47 行 政 确 认 1 1 行 政 裁 决 1
Microsoft Word - Future CEDAW C CHN 7-8.doc
序 言 1. 根 据 消 除 对 妇 女 一 切 形 式 歧 视 公 约 ( 简 称 公 约 ) 第 十 八 条 第 一 款 规 定, 中 华 人 民 共 和 国 向 联 合 国 秘 书 长 提 交 执 行 公 约 第 7 8 次 合 并 报 告 本 报 告 的 撰 写 遵 循 了 消 除 对 妇 女 歧 视 委 员 会 ( 简 称 消 歧 委 员 会 ) 关 于 缔 约 国 定 期 报 告 的 指
本 科 生 手 册 中 南 大 学 学 生 工 作 委 员 会 秘 书 处 编 印 二 〇 一 四 年 八 月 社 会 主 义 核 心 价 值 观 富 强 民 主 文 明 和 谐 自 由 平 等 公 正 法 治 爱 国 敬 业 诚 信 友 善 校 徽 : 校 训 : 校 风 : 知 行 合 一 经 世 致 用 向 善 求 真 唯 美 有 容 目 录 一 法 律 法 规 与 上 级 制 度 1 中
国家发展改革委法治机关建设规划（2013-2018年）
国 家 发 展 改 革 委 法 治 机 关 建 设 规 划 (2013-2018 年 ) 为 深 入 贯 彻 落 实 党 的 十 八 大 和 十 八 届 三 中 全 会 精 神, 巩 固 我 委 群 众 路 线 教 育 实 践 活 动 和 转 变 职 能 转 变 作 风 大 调 研 大 讨 论 大 转 变 学 习 推 进 活 动 ( 以 下 简 称 两 转 三 大 学 习 推 进 活 动 ) 成 果,
烟台经济技术开发区政府采购竞争性磋商文件
目 录 第 一 部 分 邀 请 函... 3 第 二 部 分 采 购 内 容 及 相 关 要 求... 7 第 三 部 分 供 应 商 须 知... 10 第 四 部 分 合 同 文 本... 21 第 五 部 分 响 应 文 件 格 式... 28 第 一 部 分 邀 请 函 经 龙 口 市 人 民 政 府 采 购 管 理 办 公 室 批 准, 山 东 信 一 项 目 管 理 有 限 公 司 受
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津 招 委 高 发 2016 8 号 市 招 委 关 于 印 发 2016 年 天 津 市 普 通 高 等 学 校 招 生 考 试 工 作 规 定 的 通 知 各 普 通 高 等 学 校 区 县 招 生 委 员 会 各 有 关 单 位 : 2016 年 天 津 市 普 通 高 校 招 生 考 试 工 作, 要 深 入 贯 彻 党 的 十 八 届 三 中 四 中 五 中 全 会 精 神, 全 面 落
2014 年 12 月 16 日 广 西 春 茂 投 资 股 份 有 限 公 司 ( 原 名 广 西 汽 牛 农 业 机 械 股 份 有 限 公 司, 以 下 简 称 春 茂 股 份 挂 牌 公 司 公 司 ) 召 开 2014 年 第 五 次 临 时 股 东 大 会, 通 过 向 特 定 对 象
国 海 证 券 股 份 有 限 公 司 关 于 广 西 春 茂 投 资 股 份 有 限 公 司 重 大 资 产 重 组 之 2015 年 持 续 督 导 报 告 独 立 财 务 顾 问 : 签 署 日 期 : 二 〇 一 六 年 五 月 2014 年 12 月 16 日 广 西 春 茂 投 资 股 份 有 限 公 司 ( 原 名 广 西 汽 牛 农 业 机 械 股 份 有 限 公 司, 以 下 简
四、实施步骤
遂 安 教 函 2016 96 号 遂 宁 市 安 居 区 教 育 局 关 于 印 发 迎 接 四 川 省 县 域 义 务 教 育 均 衡 发 展 督 导 评 估 工 作 方 案 的 通 知 各 教 育 督 导 组, 各 中 小 学, 局 属 事 业 单 位, 机 关 各 股 室 : 为 了 顺 利 通 过 四 川 省 县 域 义 务 教 育 均 衡 发 展 督 导 评 估, 经 局 党 组 局 务
Microsoft Word - 面向合格投资者公开发行公司债券上市预审核反馈意见公告（截至2015年10月8日）
面 向 合 格 投 资 者 公 开 发 行 公 司 债 券 上 市 预 审 核 反 馈 意 见 公 告 ( 截 至 2015 年 10 月 8 日 ) 日 前, 上 海 证 券 交 易 所 召 开 了 公 司 债 券 预 审 核 反 馈 会 会 议 讨 论 了 公 司 债 券 预 审 核 中 关 注 的 主 要 问 题, 形 成 了 书 面 反 馈 意 见 现 将 反 馈 意 见 公 告 如 下 :
律 师 执 业 必 须 以 事 实 为 根 据, 以 法 律 为 准 绳 律 师 执 业 应 当 接 受 国 家 社 会 和 当 事 人 的 监 督 律 师 依 法 执 业 受 法 律 保 护, 任 何 组 织 和 个 人 不 得 侵 害 律 师 的 合 法 权 益 第 四 条 司 法 行 政 部
中 华 人 民 共 和 国 律 师 法 (2012 修 正 ) (1996 年 5 月 15 日 第 八 届 全 国 人 民 代 表 大 会 常 务 委 员 会 第 十 九 次 会 议 通 过 根 据 2001 年 12 月 29 日 第 九 届 全 国 人 民 代 表 大 会 常 务 委 员 会 第 二 十 五 次 会 议 关 于 修 改 中 华 人 民 共 和 国 律 师 法 的 决 定 第 一
(Microsoft Word - \270t\270g\254\354\305\252\270g\274\372\300y\255p\271\2722012-2013.docx)
學 校 名 稱 : 學 生 姓 名 : 李 建 衡 級 別 : 五 信 (2012-2013) 詩 篇 一 一 九 篇 (9 至 16 節 ) 教 導 年 輕 人 要 全 心 全 意 遵 從 神 的 話 語 和 不 要 偏 離 神 的 命 令 這 幾 節 詩 歌 教 導 我 要 喜 愛 神 的 法 度 和 律 例, 還 要 思 索 神 的 品 格 和 緊 記 祂 的 話 語 詩 篇 一 一 九 篇
自 觉 实 践 科 学 发 展 观, 扎 实 推 进 管 理 服 务 工 作 四 川 大 学 档 案 馆 ( 校 史 办 公 室 )2007 年 上 半 年 工 作 总 结 2007 年 上 半 年, 四 川 大 学 档 案 馆 ( 校 史 办 公 室 ) 在 学 校 党 委 行 政 领 导 和 上
四 川 大 学 档 案 管 理 与 校 史 工 作 简 报 2007 年 2 期 ( 总 第 2 期 ) 本 期 要 目 四 川 大 学 档 案 馆 ( 校 史 办 公 室 )2007 年 上 半 年 工 作 总 结 四 川 大 学 各 单 位 档 案 工 作 分 管 领 导 和 兼 职 档 案 管 理 员 名 单 2007 年 四 川 大 学 兼 职 档 案 管 理 员 业 务 培 训 会 议 圆
2014
目 录 第 一 部 分 国 家 知 识 产 权 局 基 本 情 况 一 主 要 职 能 二 部 门 决 算 单 位 构 成 第 二 部 分 国 家 知 识 产 权 局 2014 年 部 门 决 算 表 一 收 入 支 出 决 算 总 表 二 收 入 决 算 表 三 支 出 决 算 表 四 财 政 拨 款 收 入 支 出 决 算 总 表 五 一 般 公 共 预 算 财 政 拨 款 支 出 决 算 表
招 商 证 券 股 份 有 限 公 司 2014 年 度 审 计 报 告 索 引 页 码 审 计 报 告 公 司 财 务 报 告 合 并 及 母 公 司 资 产 负 债 表 1-2 合 并 及 母 公 司 利 润 表 3 合 并 及 母 公 司 现 金 流 量 表 4 合 并 股 东 权 益 变 动 表 5-6 母 公 司 股 东 权 益 变 动 表 7-8 财 务 报 表 附 注 9-121 一
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苏 科 2003 56 号 关 于 印 发 苏 州 科 技 学 院 2003 年 高 等 学 校 教 师 资 格 认 定 工 作 实 施 意 见 的 通 知 院 属 各 单 位 : 现 将 苏 州 科 技 学 院 2003 年 高 等 学 校 教 师 资 格 认 定 工 作 实 施 意 见 印 发 给 你 们, 请 遵 照 执 行 苏 州 科 技 学 院 ( 苏 州 科 技 大 学 筹 ) 二 00
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第一部分 界定和测量歧视
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一 前 言 2 作 為 我 國 儒 家 經 典 及 十 三 經 之 一, 孟 子 流 傳 千 年 不 輟, 足 以 證 明 其 對 中 華 文 化 的 重 要 性 與 影 響 力, 除 了 道 德 文 化 意 識 的 開 發, 也 弘 揚 仁 政 王 道 的 政 治 觀, 大 多 數 人 都 肯 定
當 經 典 遇 上 經 典 - 孟 子 與 火 鳳 燎 原 之 非 人 也 * 江 穰 峰 提 要 作 為 我 國 儒 家 經 典 及 十 三 經 之 一, 孟 子 流 傳 千 年 不 輟, 深 化 了 孔 子 思 想, 而 自 古 以 來, 許 多 學 者 嘗 試 對 孟 子 一 書 給 予 正 確 的 本 意 詮 釋 抑 或 提 出 符 合 當 代 的 新 說, 諸 家 注 疏 輩 出, 孟 子
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西 北 政 法 大 学 十 二 五 事 业 改 革 和 发 展 规 划 (2011 年 1 月 21 日 西 北 政 法 大 学 第 三 届 第 五 次 教 职 工 代 表 大 会 表 决 通 过 ) 十 二 五 时 期, 是 我 校 改 革 和 发 展 的 攻 坚 时 期, 也 是 实 现 把 我 校 建 成 全 国 一 流 教 学 研 究 型 政 法 大 学 目 标 的 关 键 时 期 根 据
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2004[2218] 2003 12 31 2003 2003 12 31 2003 2003 2003 2003 2002 2003 2002 2003 2003 12 31 1 2 1 1 12 31 3 4 5 6 8 % 1 5 1 2 15 2 3 25 3 5 35 5 100 9 10 11 13 14 15 16 17 18 2 50% 50% 200310 < > 200310
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第 一 编 国 家 法 律 法 规 - 1 -
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学 生 手 册 二 〇 一 四 年 八 月 目 1 录 第 一 部 分 国 家 省 相 关 法 律 法 规...1 1. 中 华 人 民 共 和 国 教 育 法...2 2. 中 华 人 民 共 和 国 高 等 教 育 法...13 3. 中 华 人 民 共 和 国 学 位 条 例...24 4. 中 华 人 民 共 和 国 学 位 条 例 暂 行 实 施 办 法... 27 5. 普 通 高 等
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設 計 師 : 吳 玉 蘋 上 半 身 ( 上 衣 ) 整 件 上 衣 以 紅 色 白 色 為 主, 前 後 中 心 和 腰 邊 兩 側 以 剪 接 方 式 呈 現, 前 後 中 心 和 袖 子 採 用 紅 花 色 旗 袍 布, 腰 邊 兩 側 為 白 色, 使 整 體 感 覺 看 起 來 有 律 動 感, 在 領 口 方 面 採 用 五 角 領, 使 整 件 上 衣 看 起 來 不 致 於 單 調,
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（一）收入支出预算总表及情况说明
北 京 林 业 大 学 2016 年 度 部 门 预 算 2016 年 5 月 为 进 一 步 规 范 2016 年 预 算 公 开 工 作, 根 据 党 的 十 八 届 三 中 全 会 中 共 中 央 关 于 全 面 深 化 改 革 若 干 重 大 问 题 的 决 定 ( 以 下 简 称 决 定 ) 中 华 人 民 共 和 国 政 府 信 息 公 开 条 例 ( 以 下 简 称 信 息 公 开 条
五 增 加 一 条 作 为 第 三 十 五 条, 内 容 为 : 按 照 消 防 技 术 标 准 不 需 要 设 置 火 灾 自 动 报 警 系 统 的 养 老 院 福 利 院 寄 宿 制 学 校 幼 儿 园 学 生 校 外 托 管 机 构 小 旅 店 小 型 娱 乐 场 所 以 及 生 产 存 储
(2014 年 3 月 26 日 河 南 省 第 十 二 届 人 民 代 表 大 会 常 务 委 员 会 第 七 次 会 议 通 过 ) 河 南 省 第 十 二 届 人 民 代 表 大 会 常 务 委 员 会 第 七 次 会 议 决 定, 对 河 南 省 消 防 条 例 作 如 下 修 改 : 一 将 第 十 三 条 第 一 款 第 三 项 修 改 为 : 对 建 筑 消 防 设 施 每 年 至 少
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亏 77- 夕 民 政 部 公 告 第 373 号 民 政 部 政 策 性 文 件 清 理 结 果 公 告 根 据 国 务 院 办 公 厅 关 于 做 好 行 政 法 规 部 门 规 章 和 文 件 清 理 工 作 的 要 求, 民 政 部 对 改 革 开 放 以 来 以 民 政 部 和 民 政 部 办 公 厅 名 义 印 发 的 政 策 性 文 件 进 行 了 全 面 清 理 经 清 理, 决 定
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证券代码：600963 证券简称：岳阳林纸 公告编号：2015-037
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17 省 物 价 委 员 会 关 于 甘 肃 省 档 案 馆 实 行 利 用 档 案 收 费 的 批 复 甘 价 综 1988 95 号 1988 年 5 月 30 日 省 物 价 委 18 省 物 价 委 员 会 广 播 电 视 厅 文 化 厅 关 于 制 定 我 省 电 影 电 视 录 像 带
附 件 : 序 号 文 件 名 称 文 号 发 布 日 期 发 布 部 门 1 省 物 价 委 员 会 文 化 厅 旅 游 局 关 于 调 整 我 省 文 物 参 观 点 门 票 的 通 甘 价 综 1986 14 号 1986 年 2 月 5 日 省 物 价 委 省 文 化 厅 省 旅 游 局 2 省 物 价 委 员 会 关 于 调 整 涉 外 宾 馆 ( 饭 店 ) 客 房 收 费 标 准 的
宜 都 改 革 开 放 30 年 宜 都 年 鉴 编 纂 委 员 会 主 任 院 陈 行 甲 副 主 任 院 张 白 华 宋 化 力 胡 卫 东 委 员 院 陈 微 向 家 金 沈 绪 文 王 德 清 郑 蕾 艳 ( 女 ) 张 红 桥 ( 女 ) 张 鸿 庞 友 春 夏 友 生 史 玉 英 ( 女
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第 六 章 鬼 與 亡 魂 的 故 事 自 從 先 秦 思 想 興 盛 以 來, 中 國 民 族 深 受 到 儒 家 思 想 的 影 響, 對 鬼 神 更 抱 持 著 未 知 生, 焉 知 死 與 敬 鬼 神 而 遠 之 的 態 度, 也 從 子 不 語 : 怪 力 亂 神 顯 示 出 了 不 談 論 鬼 神 之 事, 因 此 可 以 看 出 儒 家 對 於 鬼 神 是 抱 持 著 存 而 不 論
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赣 高 法 2014 178 号 全 省 各 级 人 民 法 院 南 昌 铁 路 运 输 两 级 法 院 : 江 西 省 高 级 人 民 法 院 关 于 适 用 新 型 执 行 措 施 若 干 问 题 的 指 导 意 见 经 我 院 审 判 委 员 会 2014 年 8 月 21 日 第 二 十 一 次 会 议 讨 论 通 过, 现 印 发 给 你 们, 请 结 合 实 际 认 真 遵 照 执 行
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圍 很 廣, 不 能 僅 局 限 於 漢 族 與 少 數 民 族 之 間, 少 數 民 與 少 數 民 族 之 間 同 一 種 族 的 兩 個 不 同 政 權 之 間, 也 有 比 較 豐 富 的 和 親 內 容 和 親 的 多 種 多 樣, 無 論 目 的 為 何, 最 終 都 是 出 於 為 我
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白 招 办 发 [2016]45 号 白 银 市 高 等 学 校 招 生 委 员 会 办 公 室 关 于 转 发 省 招 委 关 于 做 好 2016 年 甘 肃 省 普 通 高 校 招 生 定 向 培 养 士 官 试 点 工 作 的 通 知 的 通 知 各 县 ( 区 ) 招 生 办 公 室 : 现 将 省 招 委 关 于 做 好 2016 年 甘 肃 省 普 通 高 校 招 生 定 向 培 养
目 录 安 徽 公 证 目 录 争 鸣 34 夫 妻 野 忠 实 协 议 冶 公 证 的 可 行 性 分 析 / 卓 礼 刚 39 对 野 侵 害 他 人 合 法 权 益 或 者 违 反 法 律 禁 止 性 规 定 的 方 法 冶 的 一 点 理 解 / 张 孝 稳 41 关 于 申 请 出 具 执
目 录 关 注 03 信息动态 声 音 04 安徽省公证员助理管理指导规范 06 安徽省公证员任职前实习管理办法渊试行冤 08 公证质量事故野零容忍冶活动考核验收办法 二〇一二年 聚 焦 第4期 09 把握公证定位 步提升要要 要零容忍活动第二次督查情况综述 主 管院安徽省司法厅 主 办院安徽省公证协会 委院王翠凤 张 霞 方文来 朱自全 主 11 浅谈公证核实与公证质量评价/陈春林 方贤淮 13
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[] 1962 1982 12
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345 188 956 1960 13 1979 [] 1962 1982 12 1981 2 1948 1964 5 6 1985 2 1992 1 999 [] 1982 [] 285286 161 1972 105 < > 1993 1984 1 286 286 [] 18 18 1986 1984 3 11 346. 1982 40 1987 34 287
目 录 一 项 目 基 本 概 况... 1 ( 一 ) 项 目 建 设 目 标... 1 ( 二 ) 项 目 建 设 内 容... 3 ( 三 ) 项 目 建 设 思 路... 8 ( 四 ) 项 目 经 费 情 况... 8 二 项 目 组 织 实 施 情 况... 10 三 项 目 建 设 任
省 级 示 范 性 高 职 院 校 建 设 金 融 管 理 与 实 务 专 业 及 专 业 群 建 设 项 目 总 结 报 告 四 川 财 经 职 业 学 院 二 一 四 年 十 二 月 1 目 录 一 项 目 基 本 概 况... 1 ( 一 ) 项 目 建 设 目 标... 1 ( 二 ) 项 目 建 设 内 容... 3 ( 三 ) 项 目 建 设 思 路... 8 ( 四 ) 项 目 经 费
目 录 释 义... 2 一 本 次 发 行 的 基 本 情 况... 3 ( 一 ) 本 次 发 行 股 票 的 数 量... 3 ( 二 ) 发 行 价 格... 3 ( 三 ) 现 有 股 东 优 先 认 购 的 情 况... 3 ( 四 ) 其 他 发 行 对 象 情 况 及 认 购 股 份
公 告 编 号 :2016-031 证 券 代 码 :830788 证 券 简 称 : 运 通 四 方 主 办 券 商 : 广 发 证 券 运 通 四 方 汽 配 供 应 链 股 份 有 限 公 司 股 票 发 行 情 况 报 告 书 ( 住 所 : 广 州 市 白 云 区 钟 落 潭 广 从 八 路 771 773 号 ) 主 办 券 商 广 州 市 天 河 区 天 河 北 路 183-187 号
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羅 ( 天 主 教 教 理 卷 一 信 仰 宣 認 第 二 部 分 第 三 章 第 十 一 條 我 信 肉 身 復 活 988. 基 督 徒 信 經 藉 此, 我 們 宣 信 父 子 及 聖 神, 相 信 其 創 世 救 援 和 聖 化 工 程 漸 漸 邁 向 一 個 高 峰, 就 是 宣 告 在 末 日 死 者 肉 身 復 活 和 永 生 989. 我 們 堅 決 地 相 信, 也 堅 決 地 希
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人 身 保 险 公 司 管 理 人 员 法 律 法 规 指 引 手 册 序 人 身 保 险 公 司 的 管 理 人 员 在 日 常 经 营 中 依 法 合 规 地 实 施 管 理 行 为, 不 仅 能 够 有 效 地 防 范 和 化 解 保 险 经 营 风 险, 同 时 也 能 更 好 地 服 务 于 投 保 人 和 被 保 险 人, 保 护 投 保 人 和 被 保 险 人 的 合 法 权 益, 维