中国畜牧兽医! " # 一株羊源致病性屎肠球菌的分离鉴定及耐药性分析 刘永安 李学瑞 周建华 马丽娜 刘永生 中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 农业部草食动物疫病重点开放实验室 兰州 摘 要 试验从甘肃肃南县某羊场死亡羊中分离出疑似某球菌菌株 为进一步确定该致病菌株及其

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1 中国畜牧兽医! " # 一株羊源致病性屎肠球菌的分离鉴定及耐药性分析 刘永安 李学瑞 周建华 马丽娜 刘永生 中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 农业部草食动物疫病重点开放实验室 兰州 摘 要 试验从甘肃肃南县某羊场死亡羊中分离出疑似某球菌菌株 为进一步确定该致病菌株及其耐药性情况 进行了病原菌分离 革兰氏染色 生化试验 1$+/0+ 扩增鉴定 小鼠致病力试验 药敏试验 毒力基因和耐药基因扩增试验研究 结果发现 该菌革兰氏染色阳性 高盐 蜜二糖 蔗糖等生化反应阳性. 马尿酸盐 阿拉伯糖等生化反应阴性 1$+/0 基因 + 扩增后 进行 *01 比对 结果与 "' 中的屎肠球菌 1$+/0 基因序列同源性为 2 小鼠致病力试验发现 该菌株具有很强的致病性 该菌株对 内酰胺类抗生素苯唑西林 青霉素 喹诺酮类抗生素诺氟沙星 环丙沙星 左氟沙星 以及四环素等高度耐药 对红霉素 万古霉素 克林霉素等抗生素敏感 毒力基因 ## 和耐药基因 $!"!#??+ 扩增均为阳性 结果表明 该菌为屎肠球菌!#### 具有较强的致病性和耐药性 可能与毒力基因和耐药基因的高阳性率有关 关键词 屎肠球菌 分离鉴定 耐药性 毒力因子 耐药基因中图分类号 文献标识码 0 文章编号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收稿日期 基金项目 国家自然科学基金 3 作者简介 刘永安 男 山东济宁人 硕士生 研究方向 动物传染病病原学与流行病学 #'3# 通信作者 李学瑞 男 副研究员 硕士生导师 研究方向 动物传染病病原学与流行病学 #',"$,'') 刘永生 男 研究员 博士生导师 研究方向 兽医微生物及其分子生物学 #',%8)"8'')

2 期 刘永安等 一株羊源致病性屎肠球菌的分离鉴定及耐药性分析,"-.%!!####)'&'"&7'&$,8$"))&'"!$,""7'&$ $"))&'"8"" 屎肠球菌!#####/ 本属于链球菌属 4 群 后归入肠球菌属 世纪 年代以来 逐渐成为人和动物重要的条件性致 病菌 近几年研究表明 肠球菌已是医院流行的主要病原体 美国医院感染监视系统 /<11 已将其列为医院感染的第二大病原菌 检出率仅次于大肠杆菌 有资料统计 在引起尿路感染的致病菌中 肠球菌感染居第 位 腹腔 盆腔感染中肠球菌居第 位 败血症中肠球菌居第 位 病死率 2 2 在肠球菌所致感染中屎肠球菌的比例约占 32 在动物方面 屎肠球菌感染并导致动物发病死亡的病例日益增多 同时还易造成人畜 共患 其重要性日益增强 研究结果显示 多重耐药特征在肠球菌中已普 遍存在 并且相当严重 '"" 等和张芬芬等 研究发现 由于 # 对 内酰胺类 氟喹诺酮类和氨基糖苷类抗生素具有固有耐药性 因而该菌的病死率更易增高 1''$ 等研究发现粪肠球 菌存在着毒力岛基因结构 *"'!) 等在屎肠球菌中也发现了一个毒力岛类似结构 含有 个与细菌抗生素抗性 毒力和调节有关的开放阅读框 + 因此 肠球菌的致病性 耐药性与毒力岛的存在 毒力基因和耐药基因密切相关 3 年 月 甘肃肃南县大河乡西岔村某羊场发生死亡疫情 半个月内死亡成年母羊 只 病程 临床表现为发烧 厌食 口流清涎 病理剖检情况为 肾脏土黄色 质软 脾脏表面有针尖大小出血点 肺脏充血 肿大 心脏表面有出血点 本课题组前期的试验表明该菌为 1 型 属于屎肠球菌 复合群 该复合群是医院分离的屎肠球菌 的主要集中区 因此很可能在人和动物之间存在共感染关系 研究发现 从家禽中分离出的屎肠球菌株存在两种类型 而这两种类型均曾从人体内分 离得到 说明均可感染人类 本试验通过病原菌分离 革兰氏染色 生化试验 1$+/0+ 鉴定 确定此次感染的病原菌 并通过致病力试验和药敏试验 毒力基因和耐药基因 + 扩增检测 进一步 分析了该致病菌的致病性和耐药性 以期为屎肠球菌流行病学研究及临床用药提供参考 材料与方法 / 试验动物 3 只体重 8 的试验用昆明小白鼠购自兰州兽医研究所实验动物中心 / 主要试剂 0%$"(4/0 "&$'&=& 购自爱思进生物技术 杭州 有限公司 磁珠法基因 4/0 抽提试剂盒购自生工生物工程 上海 股份有限公司 (4 载体 $"#$* 酶 $*,) 4*4/0 '$"$ 质粒抽提试剂盒均购自 '='+' 公司 革兰氏染色液购自上海索莱宝生物科技有限公司 药敏纸片购自杭州滨和微生物试剂有限公司 微量生化反应管购自广东环凯微生物科技有限公司 $')3 感受态细胞购自北京全式金生物技术有限公司 / 病原菌的分离采集死亡羊的心脏 肝脏 脾脏 肺脏 肾脏等脏器 无菌碾磨 接种于哥伦比亚绵羊血琼脂平板中 > 培养 观察菌落形态 挑取单菌落进行革兰氏染色镜检 对可疑菌落进行纯培养 / 生化鉴定按照产品说明书 对分离菌株进行阿拉伯糖 甘油 硫化氢 高盐等生化指标的测定 即将纯化后的菌液用 1 缓冲液稀释至 3 麦氏比浊度 然后在各生化管中分别加入 * 稀释后的菌液 > 培养 /! 毒力因子和耐药基因的扩增与分析 3 引物设计与合成 根据 "' 中登录的细菌 1$+/0 序列 设计 对通用引物 以及毒力因子 %0)'8"%0")('# 和耐药 "&#"70'&''?'(? "$# 基因引物 引物序列见表 引物均由生工生物工程 上海 股份有限公司合成

3 中 国 畜 牧 兽 医 卷 表 引物序列 '+*")!0"!""#" 基因 引物序列 退火温度 产物长度 "") $#"$)","")3?? 0"'8&"#("$'&,$"> $,&"8& ( 1$+/ # # $!" $" #?? !/ /0 提取 取过夜培养的菌株于 #* 离心管离心 按照磁珠法基因 4/0 抽提试剂盒说明书提取细菌 4/0B > 保存备用 + 扩增 测序与序列分析 + 反应体系 3*$"#$* 酶 $*,) 3* 上 下游引物 #* 各 * 模板 3*- 3*+ 反应程序 > 预变性 3 # > 变性 # 退火 退火温度见表 3 #1$+/0 引物 > 延伸 # ) 其他引物 > 延伸 #3 个循环 > 延伸 #+ 产物经 2 琼脂糖凝胶电泳检测 回收 1$+/0 目的片段 连接 (4 载体 转化 $')3 感受态细胞 挑取阳性克隆 提取质粒后送苏州金唯智生物科技有限公司测序 将测序结果与 "' 中已发布的序列进行 *01 同源性比对分析 / 小鼠致病性试验将 3 只小白鼠分为试验组 只 和对照组 3 只 挑取分离纯化后的单菌落 接种于 - 培养液中 > 摇床过夜培养 用 3#*1 稀释至 A ;#* 腹腔注射试验组小鼠 #* 只 对照组腹腔注射 3#*1 #* 只 每 观察记录一次小鼠发病情况 死亡小鼠立即解剖 观察组织病变情况 无菌采集肺脏 肾脏等病料做病原分离鉴定 / 药敏试验 选取苯唑西林 四环素 青霉素 万古霉素 红霉素 氯霉素 左氟沙星等临床常用的 种抗阳性球菌药物药敏片 贴附于已均匀涂抹有菌液的平板培养基中 3 > 培养 测量抑菌环直径 判断药物敏感情况 结 果 / 病原菌分离血平板培养基中可见圆形光滑菌落 挑选单菌落进行革兰氏染色后 发现该菌落为革兰氏阳性球菌 成双或短链状排列 将其命名为

4 期 刘永安等 一株羊源致病性屎肠球菌的分离鉴定及耐药性分析 / 生化鉴定对分离菌株 进行生化鉴定 结果显示 奥普托欣 胆汁七叶苷 环糊精 麦芽糖 精氨酸 / 乙酰 4 葡萄糖胺 高盐 蔗糖 蕈糖 尿素 蜜二糖 鼠 李糖 甘露醇指标均为阳性 0 甲基 4 葡萄糖苷 马尿酸盐 菊糖 山梨醇./ 阿拉伯糖 杆菌肽 七叶苷 乳糖 棉子糖指标均为阴性 表 分离菌株与屎肠球菌的生化特性基本一致 表 分离株生化鉴定试验结果 '+*"'("+%("0*"#&%#!"*%&%*"!# 生化指标 结果 生化指标 结果 "#'"") +"),&) "#'"") +"),&) 奥普托欣 (& 6 阿拉伯糖 0$')" B 胆汁七叶苷 ""), 6 蔗糖 1,$)" 6 环糊精 %"&$ 6 蕈糖 $"')" 6 0 甲基 4 葡萄糖苷 %#"&%48,)" B 尿素 ;$"' 6 菊糖 <, B 马尿酸盐 -((,$'&" B 麦芽糖 '&)" 6 杆菌肽 '&$' B 山梨醇 1$& B 七叶苷 ), B 精氨酸 0$8" 6 蜜二糖 ")" 6. B 鼠李糖 +'#)" 6 / 乙酰 4 葡萄糖胺 /'"&%48,)'#" 6 乳糖 *'& B / B 棉子糖 ))%()" B 高盐 32 /' 6 甘露醇 '& 6 6 阳性 B 阴性 6)&!"B/"8'&!" /! 扩增与序列分析 以提取的 菌株总 4/0 作为模板 以 1$+/0 引物进行 + 扩增 得到一条约 3 ( 的明亮条带 阴性对照没有条带 图 与预期扩增片段大小相符 对 1$+/0 扩增片段进行连接转化 最后测序 /< 网站 *01 在线进行序列同源性比对分析 结果显示 该分离株与 "' 中的屎肠球菌 1$+/0 序列相似性为 2 因此可以判定该分离株为屎肠球菌 / 阴性对照 4*4/0 '$"$+ 产物 //"8'&!"&$4*4/0 '$"$+($,& 图 菌株 )! 基因的 ) 扩增 4$5)01*&%#%&!$"#"%&)!# / 致病力试验结果 腹腔注射 只小鼠 结果显示 后有 只 小鼠死亡 只精神萎靡 食欲不振 后小鼠死亡总量为 3 只 只精神萎靡 立即剖解死亡小鼠

5 中 国 畜 牧 兽 医 卷 后发现肝脏 肺脏均有肿大 且均能分离到接种菌 对照组 3 只小鼠均正常 / 药敏试验结果由表 可知 该分离株对 内酰胺类抗生素苯唑西林 青霉素 磺胺类抗生素复方新诺明 多肽类抗生素多黏菌素 喹诺酮类抗生素诺氟沙星 环 对大环内酯类抗生素红霉素 克拉霉素 多肽类抗生素万古霉素 林克酰胺类抗生素克林霉素 喹诺酮类抗生素氯霉素 四环素类抗生素朱诺环素 氨基糖苷类抗生素大观霉素 合成类抗生素呋喃妥因等敏感 因此临床用药时可优先选择大环内酯类 林克酰胺类 酰胺醇类 氨基糖苷类 合成类等抗生素 丙沙星 左氟沙星 四环素类抗生素四环素等耐药 表 药物敏感性试验结果 '+*"'("!"*%&#+% "#6"" 药物类型 药物名称 抑菌环直径 敏感程度 4$,8&%(") 4$,8'#") 0&'&"$'$"'#"&"$## 1")&!&% 内酰胺类苯唑西林 8' B + '&'#) 青霉素 8" B + 大环内酯类 红霉素 38$%&$#% 1 '$") 克拉霉素 8'$&$#% 1 多肽类 万古霉素 8.'#% 1 %("(&") 多黏菌素 8%#% B + 林克酰胺类 克林霉素 38'#% 1 *)'#") 喹诺酮类 氯霉素 8$'#8" 1,") 诺氟沙星 8/$7' B + 环丙沙星 38($7' B + 左氟沙星 38*"!7' B + 四环素类 四环素 8"&$'%" B + "&$'%") 米诺环素 8%" 3 1 磺胺类 复方新诺明 3381 B + 1,7'#") 氨基糖苷类 0#8%)" 合成类 大观霉素 81("&#% 1 呋喃妥因 8,$''& 1 1%&"& B 无抑菌圈 1 敏感 < 中介 + 耐药 B/'&'&"$'$"11")&!&%<<&"$#"'&"++"))&'& / 毒力因子基因和耐药基因的扩增结果 以提取的 菌株总 4/0 作为模板 以各毒力因子基因和耐药基因引物进行 + 扩增 结果见 # 和耐药基因 $!"!/#?/?+ 均有明亮条带 阴性对照没有条带 与预期扩增片段大小相符 图 由图 可知 其毒力因子基因 #

6 期 刘永安等 一株羊源致病性屎肠球菌的分离鉴定及耐药性分析 3 4*4/0 '$"$ 基因 基因 8 基因 # 基因 基因 # 基因 $!" 基因 $" 基因 基因! 基因 #?? 基因 + 基因 / 阴性对照 4*4/0 '$"$8""8"" 8""# 8"" 8""# 8""$!" 8""$" 8"" 8""! 8""#??8""+8""//"8'&!"&$ 图 菌株毒力因子基因和耐药基因的 ) 扩增 4$5)01*&%#%&("6!*"#"&%!$"#"#!"#"$"#"%&) 株检测出 基因 株检测出 基因 讨 论 / 鉴定方法 本试验通过对菌株培养 生化鉴定初步判定该羊源分离株为屎肠球菌 但生化试验结果与陈蓉 等从灰袋鼠中分离的致病性屎肠球菌的生化特征有所差别 如. 阿拉伯糖 杆菌肽 乳糖和棉子糖等显示阴性 尿素显示阳性 与 伯杰氏系统细菌学手册 中屎肠球菌的描述也有差异 如山梨醇 阿拉伯糖显示为阴性 精氨酸显示为阳性 造成此现象的原因可能与菌株的生长环境及来源有关 因而传统的鉴定方法还存在很多弊端 需要与其他鉴定方法结合使用 才能提高鉴定的准确性 生物信息学及各种组学技术的迅速发展使得病原菌的鉴定更加快速准确 以 1$+/0 基因 + 扩增鉴定技术为基础的生物信息学鉴定方法已在细菌鉴定方面得到普遍认可 除此之外还有多位点序列分型 *1 技术 4/06#2 全基因组测序 核酸杂交技术及核酸指纹图谱等技术也被广泛应用 于细菌的遗传分类鉴定 / 屎肠球菌毒力基因与致病性,$ 等研究表明 毒力岛基因的转录和表达是强弱毒株的本质区别 毒力岛基因前的调控因子 "$0 在此过程中发挥重要作用 决定着肠球 菌的致病性 郭秉娇等研究了 株肠球菌的部分毒力因子基因 其中有 株检测出 基因 株检测出 # 基因 株检测出 基因 株检测出 # 基因 株检测出 基因 株检测出 5 基因 3 株检测出 5 基因 株检测出 基因 周娟等在研究了 株牦牛屎肠球菌毒力因子后发现 检测出毒力基因的菌株阳性率为 2 共检测出 种毒力因子基因 和 # 基因 检出率分别为 22 和 2 未检测出 # 和 基因 基因起初是从耐万古霉素的屎肠球菌中发现的 而后在万古霉素敏感株中也发现了 基因 基因编码聚集物质 作为一种黏附素 主要起凝集作用 # 基因编码的黏附素主要在宿主细胞受损时发挥作用 能够介导屎肠球菌黏附胶原蛋白和层黏连蛋白 定植宿主体内 从而引起感染 基因主要编码透明质酸酶 被研究者认为是屎肠球菌潜在的毒力因子 多项研究在临床分离屎肠球菌中均检测出 基因 本次试验菌株致病力较强 但只检出 种毒力因子基因 原因可能与各毒力因子基因 的相互协同作用有关 研究发现肠球菌分离株中虽然能检测到毒力基因的存在 但也不是所有毒力基因都能有效完全表 达 1"#" 等在粪肠球菌中检测到细胞溶解素基因 但仅有一少部分出现 溶血表型 少数检测出明胶酶基因菌株也未出现明胶溶解表型 表明可能有基因沉默现象 致病性薄弱也可能与基因表达 水平下调或过低以及表达组合有关 而毒力因 子基因的组合受到环境的影响 不同来源粪肠球菌所携带毒力因子的种类不同 且不同地区相同来 源菌株所拥有的毒力因子的种类也不尽相同 / 屎肠球菌耐药基因与耐药性研究结果显示 多重耐药特征在肠球菌中已普

7 中 国 畜 牧 兽 医 卷 遍存在 并且相当严重 在临床分离的肠球菌中屎肠球菌占到 2 以上 由于 # 对 内酰胺类 氟喹诺酮类和氨基糖苷类抗生素固有的耐药 性而使得该菌的病死率更易增高 通过研究细菌耐药性与病原菌生物被膜形成的关系 发现它们之间存在很大的相关性 而不仅仅与抗生素滥用有 关 卢彩景等进一步证实了耐药性与病原菌生物被膜形成的相关关系 细菌对抗生素的耐药性与整合子有一定程度的关系 其可利用质粒 转座子等基因元件为桥梁 进而在同种细菌或不同种细菌之间进行耐药基因的传播 从而导致细菌对抗生素多 重耐药性的产生 李爽等在研究了 株屎肠球菌耐药基因检出率后发现 #?? $"!+ 耐药基因的检出率分别为 2322 和 32 较粪肠球菌高出很多 而!!" 基因的检出率为 2 相对于粪肠球菌较低 耐药基因未被检测到 本试验中对耐药基因进行 + 扩增检测 发现 #??!+!!" 基因均为阳性 没有检测到 $" 和 基因 &"& 是主要对四环素耐药的基因 其作用机制是先编码核糖体保护蛋白 然后结合在核糖体上 把四环素对蛋白合成的抑制作用切断从而产生耐药性 在屎肠球菌中双功能酶基因 #?? 的检出率接近 2 说明 #?? 基因和核苷酸转移酶编码基因! 介导了多数肠球 菌高水平氨基糖苷耐药 细菌对红霉素的耐药主要由 + 和 基因参与调控 + 基因可以编码合成红霉素核糖体甲基化酶 而该酶可使 1$+/0 基因甲基化 最终使细菌对红霉素产生耐药 肠球菌对红霉素的耐药仍以 + 基因的介导为主 未体现 基因介导的主动作用机制 $" 基因通过编码 内酰胺酶从而导致肠球菌对青霉素的耐药性的产生 研究发现 肠球菌耐药性的获得可能与耐药基因水平转移有关 本试验中药敏试验显示 本次分离的屎肠球菌对四环素耐药 耐药基因 + 扩增中其对应的!!" 基因为阳性 与以往的报道一致 而分离株对青霉素耐药 $" 基因却为阴性 原因可能是还有其他基因参与介导肠球菌青霉素耐药 分离株对红霉素和氨基糖苷类抗生素大观霉素敏感 但耐药基因 + 扩增中 +#?? 和! 基因均显示阳性 这也可能是由于相应的耐药基因虽然存在 但却在不同的环境下保持了基因沉默 所致 研究者发现基因沉默与细菌生长环境及各基因的相互协同作用有关 肠球菌 特别是粪肠球菌和屎肠球菌的致病力和耐药性愈发增强 对畜牧业的危害日益增大 应加大对粪肠球菌等的关注及研究 特别是在临床中应合理用药 严禁抗生素滥用 防止耐多药菌株的出现及流行 加大监督防控 在今后的研究中 耐药基因和毒力因子基因的相互作用机制还需要进一步的深入研究 结 论本试验从绵羊体内分离出菌株 运用传统细菌分离鉴定及分子生物学相结合的方法判定该菌为屎肠球菌 并对其进行了耐药性和致病性研究 为该菌的分离鉴定及预防积累了科学资料 参考文献 刘 佳 陈 霞 赵爱兰 等 河南省某地区健康人源及动物源肠球菌种属分布及耐药性差异研究 D 中国畜牧兽医 0$') 0,$$'%"$)"7&"!##/ #"%!'#%$"))&'"D1!&) "/ #,&)"$$'14"7))"D"&'1"!"$")"()) ',)" %'"9$"))&'&!### ' %"'$8$'7&"$ #,&("&$',#'D!! -#!"" ='8 "-""&'",'$'$'&"$) &) 7!'#%$"))&'&!### # 7$#'&"$&'$%'$")(&'"8,' ",'$'$'&"$)&)7.+ 'D- "##! 阳 苹 孙 珊 张莉萍 等 重庆市 株粪肠球菌和屎肠球菌耐药性监测 D 中国微生态学杂志 杨 青 俞云松 倪语星 等 年中国 -</ 肠球菌属细菌耐药性监测 D 中国感染与化疗杂志 1((,,<0')&')), 4"&'# #"&<&")!"'$",&))"#'&7#,&(" ")7"9$"))&'&!####'!####D-!#! '"" '"".'"",&" "&'0((' &7&+/0&"$8")('"$+7$"&7'& 7!###)("")D- "#

8 期 刘永安等 一株羊源致病性屎肠球菌的分离鉴定及耐药性分析 张芬芬 李学瑞 杨建设 屎肠球菌新序列型 1 菌株的分离鉴定及多重耐药性分析 D 中国畜牧兽医 3 *"'!)-(D1''$/"&'0!"(,&'&!"" &"$'('&8"&%)'"&&"")(!$,"" 8""7!#### ''))'&":&"(" #&%D-+#! 1,-'8-,"&'",'$'$'&"$ 9'& 7!'#%$"))&'&!### )(( ')'&")$"!"$"7$# )(&'9" ('&"&) '#8)"!"$'#"')&&,&)'D/!#"##! 周 娟 金 东 卢 珊 等 青藏高原牦牛携带屎肠球菌及其毒力基因和耐药性检测 D 中国人兽共患病学报 李 爽 张 正 粪肠球菌与屎肠球菌药敏表型和耐药基因的比较 D 临床检验杂志 陈 蓉 章小小 陈 楠 等 一例灰袋鼠致病性屎肠球菌的分离鉴定 D 野生动物学报 邓梅葵 孙 迎 韩雯晴 细菌鉴定方法 D 生物医学进展 3,$1'8'%' 0 14' "&'0 0$'&%("&$')$(&'$"8,'&$""&"/!#### ('&8"&%)' &$,&")& ('&8""))'&$'",'$ #'$('8"),$!!'D #!3 郭秉娇 王熙楚 秦 瑶 等 不同动物来源肠球菌的分离鉴定及毒力因子基因的检测 D 中国兽医科学,-'8**,*"&'<"&7'&' '$'&"$9'&7(,&'&!"!$,""78"")'8"",)&"$)'"$#')%$('4D )"# 1"#"0#"'1 '$&)"&'#('$ '&!")&,%,)8&%(")&$')'''7 )'&")&"'#""#%&'&!&%',$$"" 7&"%("$!###D-"# $"&+<#("$"$&,*"&'1,$!"%7$!$,"""&"$#'&)'#8!#### )'&"7$#7"$"&),$")D-" "# )' 1"$81,$$""7!$,""')) '&"8"") '!#### )&$') )'&" *$'$'9D- " "#.'$#.'$#'"''$"$0"&'0(' '')"#("&)7)&#," 7# 7$#'& &" #')&&) '&"$,#.!!### D!"# 卢彩景 张秀平 陈 陆 等 猪源屎肠球菌致病力与耐药性及生物被膜形成能力的相关性分析 D 中国预防兽医学报 责任编辑 晋大鹏

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