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1 第 127 回近畿部会 (2015 年 6 月 26 日開催 : 岐阜市 ) 1P β G APJ apelin transforming growth factor-β1tgf-β1 TGF-β1 apelin APJ b.end3 Apelin APJ mrna real-time RT-PCR APJ Smad3 b.end3 TGF-β1 apelin APJ mrna TGF-β ng/ml3 24 TGF-β1 b.end3 APJ TGF-β110 ng/ml Smad3 Smad3 SIS310 μmtgf-β110 ng/ml 24 apelin APJ 10 μm SIS3 TGF-β1 Smad3 apelin APJ TGF-β1 apelin APJ II VSMC Glucagon-like peptide-1 GLP-1receptor agonist Exendin-4 2 GLP-1 receptor agonist RASMC II Exendin-4 primary culture GLP-1 receptor PCR WST-8 wound healing assay ERK1 / 2 JNK Western blot RASMC GLP-1 receptor PCR II RASMC Exendin-4 Exendin-4 II ERK1 / 2 JNK U0126ERK1 / 2 SP600125JNK Exendin-4 II RASMC Exendin-4 II ERK1 / 2 JNK RASMC GLP-1 receptor agonist

2 2P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) Ca 2+ Ca 2+ Ca 2+ Ca 2+ cyt MitofusinMfn1 2ER/SR Mfn 2 Ca 2+ Ca 2+ Mfn SR Ca 2+ Mfn1 2 real-time PCR Mfn1 2 A10 Mfn1 2 Mfn1 2 A10 Mfn2 R400Q Ca 2+ cyt Fluo-4Ca 2+ mito Rhod-2R400Q Ca 2+ Mfn SR Ca 2+ Na + /Ca 2+ exchangerncx 118 NCX2 NCX NCX WTNCX1 NCX1 HET NCX2 NCX2 HET MgSO 4 2 g/kg, p.o. serotonin 3 mg/kg, i.p. MgSO 4 1 NCX1 HET 6 NCX2 HET 4 WT 3 serotonin 15 NCX1 HET WT NCX2 HET WT NCX NCX1 NCX2

3 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 3P Transient receptor potential C TRPC G 88 TRPC6 TRPC TRPC3 WT TRPC3 DN EFS DN EFS10 Hz 60 EFS WT Atropine EFS 15 WT Atropine substance PSP NK1 NK2 NK1 WT DN NK2 DN WT carbachol SP DN WT NK1 TRPC3 α L glucagon like peptide GLP-2 G-protein-coupled receptor GPR40 GPR120 L GLP-2 L GLP-2 GPR40 GPR120 GPR40 GPR120 primary L GLUTag L GLP-2 GPR40 GPR120 dual agonists LA GW9508 GPR40 antagonist GW1100 GPR120 GPR120 sirna L GPR120 GPR40 GPR120 TNF-α GPR120 GLP-2 proglucagon L TNF-α GPR40 mrna GPR120 mrna LA GW9508 TNF-α L GLP-2 TNF-α GLP-2 GW1100 GW9508 GLP-2 GPR120 sirna TNF-α GW9508 GLP-2 TNF-α GW9508 GLP-2 L GPR40GPR120 TNF-α GLP-2

4 4P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) HGF HGF HGF HGF 2 HGF HGF MRC-9ΔUA-GlcNS ΔUA-GlcNAc6S ΔUA-GlcNS6S HGF N- 6-O- 2 HGF 2-O- ΔUA2S-GlcNSΔUA2S-GlcNAc6S ΔUA2S-GlcNS6SN- 6-O-HGF 2-O- HGF 2 HGF ΔUA-GlcNS HGF ΔUA-GlcNS 2 N- 6-O- 2-O- HGF 2 HGF 1 2 3, ,5 1, dipeptidyl peptidase-4 DPP-4 DPP-4 Glucagon like peptide-1glp-1 GLP-1 DPP-4 GLP-1 DPP-4 Fischer 344 MIMI DPP-4 Linagliptin Lina; 50 mg/kg/day4 tail cuff ED-1 mrna RT-PCR Lina GLP-1 Lina Lina E/eMI Lina MI mrna Lina Lina MI mrna Lina MI cleaved caspase-3 Lina Lina GLP-1

5 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 5P JPER/SR Ca 2+ SR JP JP2 1cav1 JP2 HEK293 cav1 Ca 2+ K + BK JP2 JP2 BK HEK293 BK BK HEK293 FRET JP2 cav1 BK SR α HSP20 HCC HCC TNF-α HCC HuH7 TNF-α HSP20 HSP20 HuH7 TNF-α IKK-α IKK-β HSP20 HSP20 HuH7 TNF-α IκB NF-κB HCC HSP20 IKK-α HSP20 HCC IKK-α TNF-α IκB/NF-κB HCC

6 6P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) NASH GPR120/FFA4 NASH GPR120/FFA4 GPR120/FFA4 KO 5 C57BL/6JWT GPR120/FFA4 KO CDAHFD Kcal % DHA 0.1 ml 3 AST ALT CDAHFD 6 WT AST ALT GPR120/FFA4 KO WT F4/80 α α-sma 46% DHA AST ALT CDAHFD DHA Activating transcription factor 3 ATF3 in vivo in vitro ATF3 ATF3 ATF3 ATF3 in vitro IL-1β TNF-α NF-κB ATF3 ATF3 IL-6 ATF3 IL-1β Iκ-B p65 IL-6 NF-κB ATF3 NF-κB ATF3 NF-κB IL-6

7 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 7P Interferon-related developmental regulator 1 Ifrd1 in vivo in vitro Ifrd1 Ifrd1 Ifrd1 Ifrd1 Ifrd1 Ifrd1 in vitro Ifrd1 Alkaline phosphatase Alizarin red Ifrd1 Ifrd1 NF-κB p65 β catenin HDAC NF-κB Smad/Runx2/Osterix β-catenin Osteoprotegerin Ifrd1 HDAC NF-κB β-catenin 1, ips ips ips (MyoD/Tet-ON) 7 microrna microrna( mir-shiga ) (day1) mir-shiga day2 mir-shiga ips mir-shiga ips myogenin mir-shiga mir-shiga

8 8P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 5'-AMP AMPK ATP ATP AMPK ATP P19 N2A MTT PCR PIP mm 50%20 mm MTT PI N2A 2 α 2 α human telomerase reverse transcriptase : htert htert MCF-7 htert RT-PCR MCF-7 TIG-3 htert crystal violet assay LDH leakage assay tunicamycin thapsigarginbrefeldin Adithiothreitol MCF-7 htert htert LDH leakage TIG-3 htert htert

9 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 9P AKI AKI Zimmerman et al. KI 2011 Gallagher et al. KI 2014 RIPC RIPC recovery period Sham 24 BUN RIPC RIPC RIPC endoplasmic reticulum-associated degradation, ERAD ERAD 44 3 RNF RNF183 RNF183 RNF183 1 RNF183 RNF183 HEK293 HK-2 RNF183 Sec16A COP RNF183 COP RNF183 CRISPR/Cas9

10 10P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) Wei Ling Wiriyasermkul Pattama L-3-18 F-α-methyltyrosine 18 F-FAMT has been developed as a potential amino acid tracer for cancer imaging in positron emission tomography PET. The advantages of 18 F-FAMT compared with conventionally used 18 F-fluorodeoxyglucose 18 F-FDG are its higher cancer-specificity and lower physiological background. Our previous study has shown that FAMT transport is specifically mediated by L-type amino acid transporter 1LAT1 among amino acid transporters, explaining the tumor specific uptake of 18 F-FAMT in PET. LAT1 is a plasma membrane amino acid transporter highly expressed specifically in cancer cells. However, 18 F-FAMT suffers from a high level of accumulation in kidney where LAT1 is not expressed, causing the renal background. In order to understand how 18 F-FAMT is accumulated in kidney, we examined renal organic ion transporters because aromatic amino acids can be the substrates of some organic ion transporters. We synthesized radiolabeled 14 C-FAMT and examined its transport by organic ion transporters of renal proximal tubules in Xenopus oocytes expression system. Among organic ion transporters tested, we found that OAT1, OAT10 and OCTN2 mediated 14 C-FAMT transport, among which OAT10 showed the prominent uptake of 14 C-FAMT. K m for FAMT transport by OAT10 was μm. These results suggest that the high renal background in 18 F-FAMT PET is due to the transport of FAMT by organic ion transporters in renal proximal tubules such as OAT10, OAT1 and OCTN2. β β propranolol PRO PRO PRO 6 C57BL/6J 200 PRO μg/g/day μct TRAP RNA Period1 PCR μct 7 PRO μg/g/day µg/g/day 20 µg/g/day µg/g/day Period PRO Period1 PRO PRO 7

11 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 11P OA 2000 OA HIF-2α NF-κB Cynara scolymus L.COMPOSITAE HIF-2α OUMS-27 TNF-α IL-1β 12 RNA qrt-pcr HIF-2α p65rela p65 IκBα TNF-α IL-1β Sox9 OA Ins1,4,5P3 phospholipase C-related catalytically inactive protein PRIP PRIP Prip-KO Prip-KO Prip-KO Prip-KO Prip-KO uncoupling protein 1UCP1 Prip-KO UCP1 Prip-KO hormone-sensitive lipase HSL perilipin UCP1 PRIP UCP1

12 12P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 5 BMI 1 1 Oka T. et al., BMC Physiology 2010

13 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 13P ,2 1,2 1,2, (PACAP)(PACAP-KO) PACAP-KO PACAP-KO ICR PACAP-KO 4 4 [(1) (2) (3) (4) ] 4 Golgi PACAP-KO PACAP-KO CA1 PACAP-KO CCK CCK 2CCKR2 1 C57BL/6J CCKR2 CCKR2tg 1 7 CA1 LTP CCKR2tg CCKR2tg CA1 LTP CCKR2 CCKR2 1 PNAS, 103,

14 14P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) AChE AD ACh nachr allosterically potentiating ligandapl PD nachr nachr 6-hydroxydopamine6-OHDA 6-OHDA nachr nachr 4 nachr -β- nachr 4 nachr kda SA HT22 1 HT22 1 PRE-084PPBP BD1047NE100 1 SA μm 1 BD IP 3 ATP ATP

15 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 15P sodium-glucose transporter SGLT SGLT 17 ddy 8.75 mm 100 μmsglt 5 μm 5 24 SH-SY5Y perforated patch clamp 35 mm 35 mm ARUGAS-50 SGLT SGLT p-erk ddy PSL von Frey Plantar p-erk 9 PSL p-erk PSL p-erk p-erk

16 16P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) α GDNF GDNF MMP FGFR ERK MMP G GDNF G Wistar C6 GDNF real-time RT-PCR ELISA G GPCR CellKey TM system C6 GDNF Gαi/o Pertussis toxin; PTXGαq YM Gαs NF449 C6 GDNF PTX Gαi/o PTX PTX Gαi/o GDNF TXLCDDP L-OHP p75 NTR MACS forskolin/heregulin myelin basic proteinmbpp75 TXLCDDP L-OHP 48 MBP CDDP L-OHP MitoTracker JC-1 TXL MBP p75 48 CDDP L-OHP MBP TXL MBP TXL

17 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 17P high mobility group box 1 HMGB1 HMGB1 cerulein 50 μg/kg 1 6 von Frey Cerulein HMGB1 HMGB1 HMGB1 toll-like receptor 4TLR4 LPS-RSreceptor for advanced glycosylation endproducts RAGE low-molecular-weight heparin LMWH CXCR4 AMD3100 LMWH AMD3100 minocycline HMGB1 ethyl pyruvate cerulein HMGB1 CXCR4 HMGB1 CXCL12 HMGB1 TLR4RAGE CXCL12/CXCR4 RAGE CXCL12/CXCR4 8 Wistar Low low LL High high HH mg/kg mg/kg 30 HH HH HH

18 18P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 1 ABline 4~ ,000 lux zpr OCT CCR3 CCR3 CC CCR 3 SB Takeda et al., Nature, 2009 in vitro CCR3 661W 1 FBS DMEM 24 2,500 lux Hoechst W CCR3 661W CCR3 661W CCR3 12 CCR3

19 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 19P Nuclear factor-erythroid 2-related factor 2 Nrf2 Nrf2 methyl 1α,2α,21β-2-cyano-21-hydroxy-3,12-dioxo-1,2-epoxyolean-911-en-28-oate RS9 661W RS9 Nrf2 mrna RT-PCR 661W Nrf2 HRMEC Vascular endothelial growth factor VEGF VEGF Nrf2 in vivo RS9 Nrf2 mrna RT-PCR 8 ddy ,000 lux RS9 6 ERG ONL RS9 661W Nrf2 mrna RS9 HRMEC VEGF In vivo RS9 Nrf2 mrna RS9 ERG ONL RS9 in vitro VEGF Nrf2 ROS ROS extracellular-superoxide dismutase EC-SOD HREC caffeic acid phenethyl ester CAPE HREC CAPE EC-SOD HREC HREC CAPE mrna RT-PCR western blot EC-SOD HREC CAPE 24 EC-SOD mrna trichostatin A TSADNA 5-azacytidine Aza TSA EC-SOD mrna CAPE EC-SOD EC-SOD DNA HREC EC-SOD CAPE EC-SOD

20 20P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) P450arom X RXR RXR Wistar 300 μm RXR Bexarotene mrna real-time PCR Oxygen-Glucose Deprivation OGD Lipopolysaccharide LPS Propidium Iodide PI 1 μm Bexarotene β-HSD 17β-HSD-3 mrna P450 17αP450 arom mrna OGD 1 24 CA1CA3 OGD 6, 24 Bexarotene 1 μg/ml LPS LPS 624 Bexarotene RXR RXR RXR Nrf2-ARE Nrf2-ARE ARE 2,3-dihydroxy-46-dimethoxychalcone DDC DDC Nrf2-ARE NADPH quinone oxidoreductase1nqo1 ARE PC12 MTT assay C57BL/6N PC12 ARE 24 In vivo γ-glutamylcysteine synthetaseγ -GCS γ -GCS Nrf2-ARE in vivo

21 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 21P SERM ER ERα ERβ LPS SERM LPS LPS CM SH-SY5Y LPS SERM CM SH-SY5Y ICI 182,780 SERM SERM SERM 21 G K + Kir3.2 Kir3.2 Kir3.2 Kir3.2 3 K + Kir3.2 K + Kir3.2 2,320 Prof Prof Kir3.2 Kir3.2 Prof Prof Kir3.2 Prof Kir Kir1.1 Kir2.3 Kir4.1 Prof Kir3.2 Prof Kir3.2 K + Prof Kir3.2 Prof

22 22P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) magnolol SAMP8 magnolol BDNF magnolol OBX 8 ddy magnolol imipramine, fluoxetine TST BrdU 1 1 BrdU TST OBX magnolol imipramine, fluoxetine BrdU OBX magnolol, fluoxetine magnolol BDNF BDNF TrkB, 4, BML ips colon 26 prostaglandin D2 1 CRTH2 CRTH2 8 9 BALB/c colon cells/ml colon 26 3 CRTH2 colon colon 26 CRTH2 colon 26 CRTH2

23 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 23P METH CC METH C57BL Conditioned Place PreferenceCPP CPP CPP PFCMETH CC chemokine ligand 2CCL2 CCL7 PCR METH D 1 PFC mrna METH D 1 METH D 1 CCL2 CCL7 CC chemokine receptor 2CCR2 METH METH VTA tyrosine hydroxylasepth CCL2 CCL7 VTA pth METH pth CCR2 METH PFC D 1 CCL2 CCL7 METH H 2 S Ca v 3.2 T Ca 2+ butyrate IBS Ca v 3.2 high mobility group box 1 HMGB1 butyrate histone deacetylase HDAC butyrate HMGB1 butyrate IBS T Ca 2+ HMGB1 butyrate 60 μmol/mouse von Frey filament H 2 S Na 2 S butyrate IBS H 2 S cystathione-γ-lyase T Ca 2+ NNC RQ HMGB1 HMGB1 butyrate IBS 1 HMGB1 TLR4 LPS-RS RAGE CXCR4 AMD3100 butyrate IBS H 2 S T Ca 2+ HMGB1 RAGE CXCR4

24 24P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) GPR3 Gs G GPCR GPCR GPR3 GPR3 7 CGNs GPR3 Gβγ Gβγ Gallein GRK-ct GRK2 C G GRK GPR3 3 GPR3 GPR3 PKA MAP PI3 Gβγ GPR3 CGN GPR3 CGN GPR3 GPR3 Gs Gβγ GPR3 GRK

25 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 25P CLP HRG HRG HRG HRG F- HRG F- HRG DIC HRG FibrinogenPlasminogen Modulator protein DIC HRG TF DIC HRG In vivo Wister 8 TF 40 mg/kg/hr 3 hr DIC HRG Western blot Argatroban Recombinant thrombomodulinrtm HRG DIC HRG TF HRG 4 mg/kg 3 hr TF DIC HRG in vitro Thrombin HRG DIC HRG Argatroban rtm HRG PTAPTT mrna ASTALT DIC HRG Thrombin HRG DIC HRG

26 26P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) A 1 A A FXFX Filaggrin FlgUVA AD Nc/Nga FX 0.1% FX 5 IgE FX FX FlgLoricrinLor FX FlgLor β WHEI-3 IL-3 β FX FX HR-1 HR-1 HR-AD 5 HR-1BALB/cC57BL/6ICR ddy HR-AD 12 HR-AD 5 HR-1 HR-AD HR-1 HR-1 Hr Hr hr Hr hr ICR ICR-Hr hr HR-AD HR-1 HR-1 ICR-Hr hr Hr hr HR-AD HR-1 Hr hr Hr D

27 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 27P OVA OVA IgE OE-1 7 OE-1 7A OE-1 BALB/c days 0 2 days % OVA 7 7A 6 μg/mouse OE A Th2 IL-4IL-5 IL-13IL-33IL-17AIL-6 CXCL1 7A plexin C1 OE-1 7A 1/3 H H1R H1R H1R PKCδ PKCδ RBL-2H3 IL-4 A A A

28 28P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 2,000 D DP1 6 BALB/c WT BALB/c DP1 KO JC DP1 KO DP1 D2 (PGD2) PGD2 BALB/c PGD2 BALB/c PGD2 IgE PBS IgE DP1 DP1 PGD2 DP1 PGD2 DP1

29 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 29P CysLTs CysLTs 1 2 CysLT1RCysLT2R CysLT1R CysLT2R KO CysLT2R CysLT2R CysLT2RA CysLT2RA OA OA BALF CysLT2RA BALF BALF CysLT2RA CysLT2R CysLT2R CysLT2R CysLT1R IL-33 Th2 type 2 innate lymphoid cells IL-33 mrna IL-33 M2 in vivo IL-33 IL-33 IL-33 Ovalbumin OVA+AlOH3 BALB/c OVA h homogenate IL-33 IL-33 mrna ELISA real-time PCR IL-33 flow cytometer mg/kg,i.p. homogenate IL-33 IL-33 mrna IL-33 IL-33 mrna 3 IL-33 M2 CD11c + F4/80 + CD11c + MHC class II + IL-33 mrna IL-33 IL-33

30 30P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) RJ RJ RJ IgE BALB/c RJ alum ELISA IgE 1 RJ ACA RJ IgE RJ BALB/c RJ ACA RJ IgE ACA RJ RJ IgE IgE RJ IgE RJ IgE RJ GVHD GVHD BDP GVHD BDP GVHD BDP TPN BDP BDP 14 TPN TPN BDP GVHD BDP QOL

31 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 31P BALB/c ovalbumin, OVA 1 2 OVA OVA 5 OVA OVA IgE IgE ph two-pore K + K2P5.1 Ca 2+ Inflammatory Bowel DiseaseIBD CD4 T K2P5.1 K2P5.1 K2P5.1 IBD K2P5.1 K2P5.1 IBD K2P5.1 +/+ K2P5.1 +/ K2P5.1 / 5% DSS 7 DSS IBD IBD HE K2P5.1 +/+ IBD CD4 + CD25 CD4 CD25 K2P5.1 mrna PCR K2P5.1 / K2P5.1 +/+ K2P5.1 +/+ IBD CD4 + CD25 K2P5.1 mrna K2P5.1 T IBD K2P5.1

32 32P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) Th2 4 HR MicroAct D D+M 4 5 D D+M D+M D+M Th2 glupearl 19S glupearl 19S IgE glupearl 19S 9 SEC glupearl 19S 4 peak AB1B2 B3 BALB/c 3 20 μg/20 μl μl IgE glupearl 19S IgE Glupearl 19S glupearl 19S 5 IgE glupearl 19S IgE 9 2 glupearl 19S IgE 8 IgE Glupearl 19S SEC 4 glupearl 19S 6 IgE glupearl 19S

33 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 33P Cx 26 Cx26 Cx26 Std-ddY 1,5,10,50 mm 1 μl/min 5 μl khz ABR khz Glycoprotein non-metastatic melanoma protein B GPNMB 1 GPNMB PI3K/Akt MEK/ERK ALS Superoxide dismutase1sod1 GPNMB GPNMB GPNMB ALS GPNMB MPL GPNMB sirna GPNMB Na +,K + ATPase Na +,K + ATPase Na +,K + ATPase α1 sirna GPNMB SOD1 Na +,K + ATPase GPNMB PI3K/Akt MEK/ERK GPNMB Na +,K + ATPase PI3K/Akt MEK/ERK SOD1 Na +,K + ATPase GPNMB

34 34P 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) α δ α2/δ-1 subunit α2/δ-1 subunit α2/δ-1 subunit Goldstein 16 / bottle choice 15 % α2/δ-1 subunit Western blot α2/δ-1 subunit α2/δ-1 subunit gabapentin gabapentin α2/δ-1 subunit SERT SERT C SERTΔCT ER SERT C ER SERT SERT 4-PBA ER SERT SERT SERT FLAG-SERT COS-7 3 H western blotting SERT 1 SKF-10047pentazocinePRE-084 NE-100haloperidol SKF-10047pentazocineNE-100haloperidol SERT 1 1 SKF-10047haloperidol SERT SERT 1 SERT 1 SERT 1 SERT

35 第 127 回近畿部会 ( 岐阜市 ) 35P PANC-1/GEM Hsp72 Hsp72 Hsp72 Hsp72 Hsp72 PANC-1 PANC-1/GEM Hsp72 sirna 95% mrna A PABP PABP Hsp72 PABP PANC/GEM Jiro Kato Joel Moss Cardiovascular and Pulmonary Branch, NHLIB, NIH Poly ADP-ribose PAR 200 ADP-ribose parthanatos Parthanatos DNA poly ADP-ribose polymerase PARP 1 PAR apoptosis-inducing factor AIF AIF DNA Parthanatos parthanatos PAR ADP-ribosyl-acceptor hydrolase ARH 3 H2O2 DNA parthanatos ARH3 ARH3 -/- MEFs H2O2 PARP1 PAR AIF ARH +/+ MEFs parthanatos ARH3 ARH3 -/- MEFs ARH3 DNA PARP1 PAR PAR parthanatos

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