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1 Vol.11 No 年 6 月 June 2018 离子液体溶解法制备高强度血管用胶原膜材料彭梦霞, 赖 * 莉, 张慧杰, 陈敬华 ( 江南大学药学院, 江苏无锡 ) 摘要 : 采用离子液体溶解法制备高强度血管用膜材料以离子液体 (1- 丁基 -3- 甲基咪唑氯盐 ) 溶解胶原蛋白, 并进行肝素化修饰得到高强度血管用胶原膜材料材料力学性能测试结果表明, 膜材料具有良好的弹性和抗拉强度扫描电子显微镜 (scanning electron microscope,sem) 观察结果显示膜材料表面为多孔网状结构细胞活性实验表明, 材料具有明显的促细胞增殖作用血液相容性测试结果表明, 随着肝素含量的增加, 肝素化胶原膜材料活化部分凝血活酶时间 (activated partial thromboplastin time,aptt) 显著延长, 血小板粘附量降低, 说明肝素极大地提高了膜材料的血液相容性综上所述, 离子液体溶解法制备的肝素化胶原膜材料在组织工程领域具有广阔的应用前景关键词 : 生物医学工程学 ; 离子液体 ; 胶原 ; 肝素 ; 高强度 ; 膜中图分类号 :R 文献标识码 :A 文章编号 : (2018) Preparation of high strength collagen film for blood vessels by ionic luquid dissolving method PENG Mengxia, LAI Li, ZHANG Huijie, CHEN Jinghua (School of Pharmaceutical Sciences, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu , China) Abstract: Vascular membrane materials with high strength were prepared through ionic liquid dissolving method. Ionic liquid (1-butyl-3-methylimidazolium chloride) was used to dissolve collagen, heparin modification was used to obtain high strength collagen film for blood vessels. The material mechanics performance test result showed that the as-prepared heparin-collagen film had excellent elasticity and tensile strength. Scanning electron microscope (SEM) observations suggested that the prepared film surface had a porous structure. Cell viability assay indicated that the film significantly facilitated the cell proliferation. Blood compatibility test showed that, with the increase of heparin content, activated partial thromboplastin time (APTT) of heparin membrane materials significantly increased while the number of platelet adhered on the film decreased. It indicated that heparin effectively improved the blood compatibility of the film. In summary, heparin-collagen film prepared by ionic liquid dissolving method had strong potential in the field of tissue engineering. Key words: biomedical engineering; ionic liquid; collagen; heparin; high strength; film 0 引言近年来, 心血管疾病已成为导致死亡的主要原因之一, 目前主要通过支架移植或心脏搭桥术治疗 [1~2] 然而, 在小口径人造血管移植过程中, 通常因内膜增生和血栓而以失败告终 [3~4] 通过对材料进行肝素化修饰能够有效提高材料的血液相容性并且能够抑制血管支架内径的凝血过程 [5~7] 同时, 为有效地对人造血管材料进行仿生化, 通常采用天然的生物材料制备血管支架 [8~9] 基金项目 : 国家自然科学基金 ( ); 江苏省自然科学基金 (BK ) 作者简介 : 彭梦霞 (1992 ), 女, 硕士研究生, 主要研究方向 : 天然药物与生物医用材料通信联系人 : 陈敬华, 教授, 主要研究方向 : 生物大分子与生物医用材料. chenjinghua@jiangnan.edu.cn

2 2018 年 6 月中国科技论文在线精品论文 1136 胶原是细胞外基质的主要成分, 广泛存在于结缔组织由于其优异的生物相容性生物可降解性及低免疫原活性, 胶原被广泛地应用于生物材料领域 [10~11] 目前, 主要以弱酸及部分中性盐为溶剂溶解胶原蛋白, 但其对胶原的溶解能力较差, 使得制备出的胶原支架材料机械强度较低, 难以满足支架材料所需的力学性能, 从而极大地限制了胶原的应用离子液体是近年来发现的一种新型溶剂, 由于其优异的溶解性和稳定性, 被广泛应用于生物医学领域 [12~15] 其中基于咪唑盐的离子液体, 特别是 1- 丁基 -3- 甲基咪唑氯盐 ([Bmim]Cl) 被广泛应用于溶解各种蛋白, 研究结果表明离子液体对蛋白质能起到良好的稳定作用 [16] [17] 2006 年,REMSING 等发现可直接采用 [Bmim]Cl 溶解纤维素随后, 研究者成功利用离子液体溶解纤维素木质素淀粉壳聚糖和丝蛋白等 [18~19] 研究表明, 离子液体在溶解高分子的过程中能够保持良好的分子结构, 并且能够实现材料的 [20] 再生, 是一种优良的溶剂 ZHANG 等研究了 [Amim]Cl [Bmim]Cl [Bmim]Br [Bmim]BF 4 等几种离子液体对胶原溶解性的相关条件, 结果表明含氯的离子液体对胶原的溶解性最好, 并且随着温度的升高, 对胶原的溶解能力增强目前, 离子液体对胶原的研究只停留在胶原的溶解再生阶段, 鲜有研究报道通过离子液体溶解胶原蛋白并制备出胶原支架, 同时胶原蛋白的成膜性较差因此, 通过离子液体溶解法制备出高强度胶原膜材料并对其进行肝素化修饰, 有望制备出理想的小口径血管膜材料本文采用离子液体 [Bmin]Cl 对 I 型胶原蛋白进行溶解, 将肝素和胶原通过共价键的形式连接, 制备出肝素化胶原膜材料通过电子万能材料试验机对材料的机械性能进行表征, 同时测定材料的细胞相容性和血液相容性, 以期制备出高强度血管用胶原膜材料 1 材料与方法 1.1 原料与仪器胶原由无锡贝迪生物工程有限公司提供 ; 离子液体 (97%) 1- 乙基 -(3- 二甲基氨基丙基 ) 碳二亚胺盐酸盐 (EDC) N- 羟基丁二酰亚胺 (N-hydroxysuccinimide,NHS) 购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司 ; 肝素二乙酰荧光素购自生工生物工程有限公司 ; 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒 CCK-8 购自碧云天生物技术 ; 乙醇甲苯胺蓝戊二醛购自国药集团 ( 上海 ) 化学试剂有限公司 5804 R 离心机, 德国 Eppendorf 公司 ; 微机控制电子万能材料试验机, 济南恒思盛大仪器有限公司 ; TENSORⅡ 傅里叶变换红外光谱 (Fourier transform infrared spectroscopy,ftir) 仪, 德国布鲁克公司 ; S-4800 型扫描电子显微镜, 日本日立仪器有限公司 ;CA 7000 全自动凝血分析仪, 希森美康医用电子有限公司 ;DMIL 倒置荧光显微镜, 德国徕卡公司 1.2 方法离子液体对胶原蛋白的溶解与膜材料的制备称取离子液体 (1- 丁基 -3- 甲基咪唑氯盐 ) 于去离子水中配制成一定浓度, 加入酸溶性胶原, 分别配制成胶原蛋白 - 离子液体浓度为 5%-7%( 质量 / 体积, 下同 ),10%-10%,15%-15%,37 水浴条件下搅拌使其充分溶解, 随后 r/min 离心 5 min, 倒入模具中成膜, 用 5 mmol/l EDC 交联, 再转移到 50% 乙醇中充分置换, 除去材料内的离子液体后备用肝素化胶原膜材料的制备称取 70 mg 离子液体于 1 ml 去离子水中溶解, 加入酸溶性胶原 50 mg 于配制好的离子液体溶液中, 37 水浴条件下充分搅拌待胶原溶解后分别称取 10.0,6.6,5.0 mg 肝素粉末于 2 ml 聚丙烯 (EP) 管

3 Vol.11 No.11 June 2018 彭梦霞等 : 离子液体溶解法制备高强度血管用胶原膜材料 1137 内, 加入 1 ml 5 mmol/l EDC/NHS(EDC:NHS=1:0.6, 物质的量比 ) 溶液, 对肝素活化 30 min, 取 100 μl 上述肝素溶液缓慢滴加至充分溶解的胶原溶液中, 使胶原和肝素的质量比为 50:1,75:1,100:1, 分别记为 B50,B75,B100. 随后搅拌 6 h,5 000 r/min 离心 5 min, 倒入模具中成膜, 用 5 mmol/l EDC 对材料进行交联, 再通过 50% 乙醇溶液置换除去膜材料内的离子液体后备用机械性能测定取胶原湿膜材料, 对材料进行拉升弯曲和折叠并实物拍照再通过电子万能材料试验机测定膜材料的机械性能将材料固定在拉力机的两端, 随后拉力机以 100 mm/min 拉升, 直至材料断裂后停止实验 FTIR 分析取置换前后的纯胶原膜材料和肝素化的胶原膜材料干物质, 于真空干燥箱内干燥 2 d, 通过傅里叶红外光谱仪以 4 cm 1 的分辨率在 4 000~500 cm 1 波数范围内进行测定, 通过 FTIR 图观察材料的二级结构变化材料微观形貌分析取胶原湿膜材料用锡箔纸包裹, 放入液氮中冷冻 10 min, 随后迅速放入冻干机内于 50 条件下冻干, 喷金后通过 SEM 在不同放大倍数条件下观察材料表面的微观形貌肝素释放称取不同胶原干膜样品 10 mg(b50,b75,b100), 加入 2 ml PBS, 置于 r/min 的摇床内, 间隔一定时间取样 200 μl, 再加入 200 μl 新鲜的 PBS, 保持液体总体积为 2 ml. 通过甲苯胺蓝 (TB) 法测定肝素释放量取 3 ml TB 溶液 (0.05%TB, 溶于 0.2%NaCl) 于肝素释放液中, 加入 0.2%NaCl 溶液定容至 5 ml,37 水浴反应 6 h, 随后加入 3 ml 正己烷萃取, 取下层溶液于 631 nm 处测定吸光度值通过 TB 标准曲线计算肝素的释放量血液相容性评价从捐献者获取新鲜血液, 采用 3.8%( 质量分数 ) 的柠檬酸溶液抗凝 r/min 离心 15 min, 得到血小板富集血浆, 备用随后, 取部分全血于 r/min 离心 15 min 得到低血小板含量血浆, 在无菌条件下, 取 600 μl 上清液分别加入含 5 mg 膜材料的 EP 管中, 随后置于摇床内在 r/min 反应 4 h, 采用 CA 7000 全自动凝血分析仪测定浸提液的 APTT. 通过 SEM 观察材料表面的血小板粘附情况取不同肝素含量的胶原膜于 24 孔板中, 取 50 μl 上述血小板富集血浆于材料表面,37 条件下使血浆与材料充分接触 30 min, 用 PBS 轻轻除去材料表面未粘附的血小板随后, 加入 2.5% 戊二醛对材料进行固定, 再分别用体积分数为 30%,50%,70%,90%, 100% 的乙醇梯度脱水, 室温风干后喷金, 通过 SEM 对材料表面的血小板进行形态分析通过测定细胞裂解后释放的乳酸脱氢酶 (lactate dehydrogenase,ldh) 的含量, 对材料表面粘附的血小板进行定量分析本实验通过 LDH 试剂盒测定材料表面粘附的血小板含量取不同肝素含量的膜材料于 24 孔板中, 加入 50 μl 血小板富集血浆于材料表面,37 条件下使血浆与材料充分接触 30 min, 随后用 PBS 轻轻除去材料表面未粘附的血小板, 再用 LDH 试剂盒测定材料表面粘附的血小板含量生物相容性测定取不同胶原膜材料于 96 孔板内, 以未加材料的孔作为空白对照将孔板置于紫外灯下灭菌 1 h, 每孔加 100 μl 内皮细胞培养基 (endothelial cell medium,ecm) 平衡 2 h, 弃去培养基加入 200 μl 细胞悬

2018 年 6 月中国科技论文在线精品论文 1138 液,4 000 个细胞 / 孔, 于培养箱内孵育 96 h, 随后将培养液取出,PBS 清洗两次, 每孔加入 100 μl CCK-8 溶液 (CCK-8:PBS=1:10, 体积比 ), 于细胞培养箱内孵育 3 h, 每孔取 80 μl 溶液于新 96 孔板内, 在 450 nm 处测定其吸光度值通过 SEM

4 2018 年 6 月中国科技论文在线精品论文 1138 液,4 000 个细胞 / 孔, 于培养箱内孵育 96 h, 随后将培养液取出,PBS 清洗两次, 每孔加入 100 μl CCK-8 溶液 (CCK-8:PBS=1:10, 体积比 ), 于细胞培养箱内孵育 3 h, 每孔取 80 μl 溶液于新 96 孔板内, 在 450 nm 处测定其吸光度值通过 SEM 观察细胞在材料表面的粘附情况将材料与细胞共培养 4 d, 用 PBS 除去未粘附的细胞, 随后加入 2.5% 戊二醛固定, 再分别用体积比为 30%,50%,70%,90%,100% 乙醇脱水 10 min, 自然风干, 然后通过 SEM 观察材料表面细胞粘附情况采用二乙酰荧光素对细胞进行染色取 48 孔板, 每孔铺个细胞, 培养 12 h, 取出培养液, 用 PBS 洗一次, 加入 0.5 ml 0.05 mg/ml 的二乙酰荧光素避光染色 30 min, 除去染料, 加入 PBS 洗 3 次, 用倒置荧光显微镜观察细胞在材料表面的生长情况 2 结果与讨论 2.1 机械性能测定尽管胶原广泛地应用于生物医学领域, 但较差的机械性能和较低的溶解度极大地限制了其应用本研究采用离子液体溶解法制备胶原膜材料, 然后通过电子万能材料测试机测试其拉伸性能由图 1 可明显看出, 通过离子液体溶解法制备的胶原膜材料具有极强的弹性弯曲性和韧性由材料的应力 - 应变曲线 ( 如图 2 所示 ) 可以看出, 材料的断裂应力和断裂撕裂能随胶原浓度的升高而增大, 当胶原浓度为 5% 时, 膜材料的断裂应力为 2.67 MPa, 然而, 当浓度为 15% 时, 其断裂应力达到 6.42 MPa, 其断裂应力和断裂撕裂能几乎是浓度为 5% 的胶原膜的 3 倍同时, 膜材料的断裂拉伸率随胶原浓度的升高而增大, 在浓度为 5% 时, 其断裂拉伸率为 255%, 而浓度达到 15% 时, 其断裂拉伸率为 285%, 比时长度几乎为原长度的 3 倍, 且在撤去外力的作用后, 仍能够恢复到原来的长度结果表明, 采用离子液体溶解法能够极大地提高胶原的溶解度, 并且有效提高膜材料的机械性能其优异的机械性能使胶原有望应用于血管组织工程领域图 1 胶原膜材料实物图 Fig. 1 Physical figure of collagen film Fig. 2 图 2 不同浓度胶原膜材料应力 - 应变曲线 Stress-strain curves of collagen film at different concentrations 2.2 FTIR 测定胶原在离子液体中的二级结构变化主要通过 FTIR 表征图 3a 为置换前后膜材料的 FTIR 图其中 cm 1 和 cm 1 处的吸收峰为离子液体 [Bmim]Cl 的特征峰, 由 cm 1 处的吸收峰可明显看出, 置换后该处的特征吸收峰消失, 表明通过置换法能够有效除去材料内的离子液体 [21] 图 3b 为纯胶

5 Vol.11 No.11 June 2018 彭梦霞等离子液体溶解法制备高强度血管用胶原膜材料 1139 原膜材料和肝素化胶原膜材料的 FTIR 图胶原特有的三螺旋结构在图中可由特征酰胺带表示出来在波数 cm 1 之间表示酰胺 A 带主要由 NH 基团伸缩振动引起而实验中的酰胺 A 带在 cm 1 附近表示 NH 基团在肽链中参与了氢键的形成 cm 1 之间出现的峰代表酰胺 B 带由==C H 酰胺 I 带 cm 1 处的峰主要与肽基中 C==O 的伸缩振动有关 cm 1 和==NH3+的非对称伸缩振动引起处左右的吸收峰代表胶原酰胺 II 带吸收峰其主要由分子内 N H 弯曲振动和 C N 伸缩振动引起 cm 1 处左右的峰代表胶原的酰胺 III 带而由肝素化胶原膜材料的 FTIR 图看出胶原 cm 1 处的吸收峰向低波数移动至 cm 1 处其谱图上 cm 1 和 cm 1 处的吸收峰为肝素糖单元上 SO3 的特征吸收峰由此吸收峰可判定材料内肝素的存在图 3 纯胶原膜材料置换前后 a 以及纯胶原膜材料和肝素化胶原膜材料 b 的 FTIR 图 Fig. 3 FTIR spectra of pure collagen film before and after replacement (a), and pure collagen film and heparin-collagen film (b) 2.3 材料微观形貌膜材料表面微观形貌主要通过 SEM 图来观察[22] 使用液氮脆冷并立即冻干能够有效保持材料的微观形貌由图 4 可以看出膜材料表面为多孔的网状结构随着肝素含量的升高材料孔径并未发生注 5%col 为纯胶原膜下同 Fig. 4 图 4 纯胶原膜和肝素化胶原膜材料的 SEM 图 SEM images of the pure collagen film and heparin-collagen film

6 2018 年 6 月中国科技论文在线精品论文 1140 明显的变化, 通过对其进行孔径分析得出平均孔径为 (7±1) μm. 材料均一的微孔结构有望在后期细胞实验中有效促进细胞的粘附和增殖 [23] 2.4 肝素释放图 5 为肝素化胶原膜材料内的肝素在 PBS 中的相对释放量随时间的变化由图 5 可以明显看出, 肝素在前 2 d 内迅速释放, 且在随后的几天内缓慢释放并趋于平缓, 经过 7 d 的释放, 肝素在不同膜材料中的含量仍然保持在 60% 左右这可能是由于在 EDC 的活化作用下, 肝素通过共价键的形式与胶原连接并且部分肝素通过电荷的相互作用嵌入凝胶基质中嵌入胶原中的肝素在 2 d 内以较快的速度从材料内释放, 随后由于材料的部分降解, 肝素从材料内缓慢释放, 并趋于平缓在释放完成后, 仍有几乎 60% 的肝素未从材料内释放, 主要是由于肝素通过共价键与胶原紧密连接, 导致肝素无法从材料内释放 [8] 2.5 血液相容性测试图 5 不同肝素化胶原膜材料的肝素相对释放量 Fig. 5 Relative release of heparin from different types of heparin-collagen films APTT 测定不同胶原膜材料的 APTT 如表 1 所示, 随着表 1 不同类型胶原膜的 APTT 测定 (s) 材料中肝素含量的升高, 材料的 APTT 增大纯 Tab. 1 APTT assay of the different types of collagen films (s) 5%col B100 B75 B50 胶原膜的 APTT 为 (41.0±0.8) s, 当材料经肝素修 41.0± ± ± ±0.9 饰后, 其 APTT 明显延长当膜材料内肝素含量为 1% 时, 其 APTT 为 (48.2±1.2) s, 当材料内肝素含量达到 2% 时, 其 APTT 延长至 (63.8±0.9) s, 约为纯胶原膜材料的 1.5 倍, 极大地提高了材料的抗凝活性研究表明, 膜材料中肝素的含量对其抗凝活性起到了关键性的作用, 并且在抗凝系统中起到了较好的累积作用 [24] 材料表面的血小板粘附情况由图 6a 可以看出, 材料表面吸附的血小板含量随肝素含量的增加而减少, 且纯胶原膜材料表面的血小板形成了很多伪足, 发生了活化, 但肝素化胶原膜材料表面的血小板几乎没有发生活化, 血小板呈球状分散在材料表面, 并没有发现任何伪足和变形结果表明, 肝素的存在能够有效提高材料的血液相容性同时, 通过 LDH 试剂盒对材料表面的血小板进行定量测定 ( 如图 6b 所示 ), 结果表明, 随着肝素含量的升高, 材料表面吸附的血小板数量降低, 当材料内肝素浓度达到 2% 时, 材料表面粘附的血小板数量几乎为纯胶原膜材料的 60%, 极大地降低了血小板在材料表面的粘附, 有效提高了胶原膜材料的抗血栓活性 [6] 2.6 细胞相容性测试图 7 为人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cell,huvec) 和材料共培养 4 d 的生长情况可以看出, 胶原具有较好的促细胞增殖作用, 与空白相比, 胶原膜材料表面的细胞数量几乎为空白的 3 倍, 这主要是由于胶原为细胞外基质的主要结构蛋白, 具有良好的生物相容性, 同时材料表面均一的多孔结构有利于细胞的粘附增殖和迁移且肝素化胶原膜材料对人脐静脉内皮细胞的促增殖作用

platelets adhered on different collagen films surface 较纯胶原膜强已有研究报导肝素与成纤维生长因子的相互作用在细胞外基质可激活细胞内的信号转导途径从而促进血管生成[25]

通过倒置荧光显微镜观察细胞在不同胶原膜材料表面的生长情况可以看出细胞均匀分散在材料表面细胞形态为梭形各细胞之间紧密相连结果表明细胞能够在材料表面进行较好的粘附生长同时由于材料较好图7 人脐静脉内皮细胞在不同胶原膜材料上培养 4

7 Vol.11 No.11 June 2018 Fig. 6 彭梦霞等离子液体溶解法制备高强度血管用胶原膜材料 1141 图 6 不同胶原膜材料表面粘附血小板的 SEM 图 a 和相对含量 n=3 b SEM images (a) and relative numbers (n=3) (b) of platelets adhered on different collagen films surface 较纯胶原膜强已有研究报导肝素与成纤维生长因子的相互作用在细胞外基质可激活细胞内的信号转导途径从而促进血管生成[25] 实验结果表明肝素化胶原膜材料有望应用于血管组织工程领域细胞在材料表面的粘附能力直接影响材料的生物性能通常细胞在材料表面粘附包括附着生长和增生几个过程图 8 为人脐静脉内皮细胞在材料表面生长 4 d 的情况通过倒置荧光显微镜观察细胞在不同胶原膜材料表面的生长情况可以看出细胞均匀分散在材料表面细胞形态为梭形各细胞之间紧密相连结果表明细胞能够在材料表面进行较好的粘附生长同时由于材料较好图7 人脐静脉内皮细胞在不同胶原膜材料上培养 4 d 的细胞活性的生物相容性使胶原膜材料对细胞具有良好的促增殖 Fig. 7 Cell viability of HUVEC cultured with different collagen films for 4 d 作用图8 Fig. 8 人脐静脉内皮细胞在不同胶原膜材料上培养 4 d 的荧光图像 100 Fluorescent images of HUVEC cultured with different collagen films for 4 d ( 100)

8 2018 年 6 月中国科技论文在线精品论文结论本研究利用离子液体溶解法成功制备出高强度胶原膜材料通过对其进行肝素化修饰, 得到具有良好生物相容性和血液相容性的肝素化胶原膜材料 ; 同时, 所制备的膜材料具有较强的弹性和抗拉强度, 将使胶原支架材料在血管组织工程领域具有广阔的应用前景 [ 参考文献 ] (References) [1] ZHANG W J, LIU W, CUI L, et al. Tissue engineering of blood vessel[j]. Journal of Cellular and Molecular Medicine, 2007, 11(5): [2] LACE R, MURRAY-DUNNING C, WILLIAMS R. Biomaterials for ocular reconstruction[j]. Journal of Materials Science, 2015, 50(4): [3] WANG W, HU J, HE C, et al. Heparinized PLLA/PLCL nanofibrous scaffold for potential engineering of small-diameter blood vessel: tunable elasticity and anticoagulation property[j]. Journal of Biomedical Materials Research Part A, 2015, 103(5): [4] 向萍, 李敏. 生物材料与人工血管支架 [J]. 生物医学工程学杂志,2010,27(6): XIANG P, LI M. Biomaterials and vascular grafts[j]. Journal of Biomedical Engineering, 2010, 27(6): (in Chinese) [5] MENG S, LIU Z, SHEN L, et al. The effect of a layer-by layer chitosan-heparin coating on the endothelialization and coagulation properties of a coronary stent system[j]. Biomaterials, 2009, 30(12): [6] CHEN J L, LI Q L, CHEN J Y, et al. Improving blood-compatibility of titanium by coating collagen-heparin multilayers[j]. Applied Surface Science, 2009, 255(15): [7] KEUREN J F W, WIELDERS S J H, DRIESSEN A, et al. Covalently-bound heparin makes collagen thromboresistant[j]. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology, 2004, 24(3): [8] LU Q, ZHANG S, HU K, et al. Cytocompatibility and blood compatibility of multifunctional fibroin/collagen/heparin scaffolds[j]. Biomaterials, 2007, 28(14): [9] LU J T, LEE C J, BENT S F, et al. Thin collagen film scaffolds for retinal epithelial cell culture[j]. Biomaterials, 2007, 28(8): [10] CHATTOPADHYAY S, RANES R T. Review collagen-based biomaterials for wound healing[j]. Biopolymers, 2014, 101(8): [11] 赵晋, 李敏. 胶原复合支架在血管组织工程中的应用 [J]. 中国修复重建外壳杂志,2011,25(7): ZHAO J, LI M. Application of collagen composite scaffold in vascular tissue engineering[j]. Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, 2011, 25(7): (in Chinese) [12] MURUCESAN S, MOUSA S, VUAYARAGHAVAN A, et al. Ionic liquid-derived blood-compatible composite membranes for kidney dialysis[j]. Journal of Biomedical Materials Research Part B: Applied Biomaterials, 2006, 79(2): [13] WANG H F, LV H N, FEN J, et al. Novel blend films prepared from solution of collagen and cellulose in 1-allyl-3-methylimidazolium chloride ionic liquid[j]. Advanced Materials Research, 2001, : [14] WANG Y, YAO S, JIA M, et al. Swelling behaviors of natural cellulose in ionic liquid aqueous solutions[j]. Journal of Applied Polymer Science, 2014, 131(9): [15] WEAVER K D, VRIKKIS R M, van VORST M P, et al. Structure and function of proteins in hydrated choline dihydrogen phosphate ionic liquid[j]. Physical Chemistry Chemical Physics, 2012, 14(2): [16] CHEN H Z, WANG N, LIU L Y. Regenerated cellulose membrane prepared with ionic liquid 1-butyl-3-methylimidazolium chlodide as solvent using wheat straw[j]. Journal of Chemical Technology & Biotechnology, 2012, 87(12): [17] REMSING R C, SWATLOSKI R P, ROGERS R D, et al. Mechanism of cellulose dissolution in the ionic liquid

9 Vol.11 No.11 June 2018 彭梦霞等 : 离子液体溶解法制备高强度血管用胶原膜材料 n-butyl-3-methylimidazolium chloride: a 13 C and 35/37 Cl NMR relaxation study on model system[j]. Chemical Communications, 2006, 12(12): [18] PU Y, JIANG N, RAGAUSKAS A J. Ionic liquid as a green solvent for lignin[j]. Journal of Wood Chemistry and Technology, 2007, 27(1): [19] BISWAS A, SHOGREN R L, STEVENSON D G, et al. Ionic liquid as solvent for biopolymers: acylation of starch and zein protein[j]. Carbohyrate Polymers, 2006, 66(4): [20] ZHANG L, QIAO C, DING Y Q, et al. Rheological behavior of gelatin/1-allyl-3-methylimidazolium chloride solutions[j]. Journal of Macromolecular Science, Part B, 2012, 51(4): [21] MENG Z, ZHENG X, TANG K, et al. Dissolution and regeneration of collagen fibers using ionic liquid[j]. International Journal of Biological Macromolecules, 2012, 51(4): [22] PARK S N, LEE H J, LEE K H, et al. Biological characterization of EDC-crosslinked collagen-hyaluronic acid matrix in dermal tissue restoration[j]. Biomaterials, 2003, 24(9): [23] 陈雍, 赵朋, 邓超, 等. 载纳米银丝蛋白 / 海藻酸钠海绵的制备及表征 [J]. 食品与生物技术学报,2017,36(2): CHEN Y, ZHAO P, DENG C, et al. Preparation and characterization of nano-silver loaded fibroin/alginate sponge[j]. Journal of Food Science and Biotechnology, 2017, 36(2): (in Chinese) [24] CHEN J, HUANG N, LI Q, et al. The effect of electrostatic heparin/collagen layer-by-layer coating degradation on the biocompatibility[j]. Applied Surface Science, 2016, 362(2): [25] TANIHARA M, SUZUKI Y, YAMAMOTO E, et al. Sustained release of basic fibroblast growth factor and angiogenesis in a novel covalently crosslinked gel of heparin and alginate[j]. Journal of Biomedical Materials Research Part A, 2001, 56(2):

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Microsoft Word _ 5 10 15 20 25 30 离子液体溶解法制备高强度血管用胶原膜材料 # ** 彭梦霞, 赖莉, 张慧杰, 陈敬华 214122 摘要 : 1- -3- - 关键词 : 中图分类号 :R 318.08 Preparation of High Strength Vascular Materials With Ionic Liquid Dissolving Collagen PENG Mengxia,