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乳移侯
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1 第 27 卷第 26 期中国现代医学杂志 Vol. 27 No 年 11 月 China Journal of Modern Medicine Nov. 217 DOI: /j.issn 文章编号 : (217) 循环型 microrna-26a 及其靶基因与系统性红斑狼疮的相关性研究崔丹瑜, 朱丁季, 任昊, 林静丽, 赖伟男, 黄琴, 赵进军, 杨敏 ( 南方医科大学附属南方医院风湿免疫科, 广东广州 51515) 摘要 : 目的探讨循环型 microrna-26a(mir-26a) 及靶基因在系统性红斑狼疮 (SLE) 的表达, 以及在 SLE 发生发展中可能发挥的作用方法选取 36 例 SLE 和 1 例健康体检者血液标本, 实时荧光定量聚合酶链反应检测血清 mir-26a 外周血单个核细胞(PBMC) 中 PTEN 的表达, 统计分析 mir-26a PTEN 与 SLE 临床资料的相关性, 利用双荧光素酶报告系统验证是否为 mir-26a 的靶基因结果 SLE 患者血清 mir-26a mrna 的表达高于健康人群 ( <.5),PBMC 中 PTEN mrna 的表达低于健康人群 ( <.5) SLE 患者 mir-26a PTEN 的表达水平与 C3 抗 ds-dna 红细胞沉降率狼疮活动指数相关 mir-26a 转染 BaF3 细胞后,PTEN 表达下调,PI3K 表达上调, 转染组荧光素酶活性下降 ( <.5) 结论 SLE 患者血清中过表达的 mir-26a 可能通过下调靶基因, 上调 PI3K/AKT 信号通路, 参与 SLE 的发生发展关键词 : 系统性红斑狼疮 ; 循环型 microrna-26a;pten;pi3k/akt 中图分类号 :R593.2 文献标识码 :A Association of circulating mir-26a and its target gene with systemic lupus erythematosus Dan-yu Cui, Ding-ji Zhu, Hao Ren, Jing-li Lin, Wei-nan Lai, Qin Huang, Jin-jun Zhao, Min Yang (Department of Rheumatology and Immunology, the Affiliated South Hospital of Southern Medical University, Guangzhou, Guangdong 51515, China) Abstract: Objective To explore the expressions of circulating mir-26a and its target gene in systemic lupus erythematosus (SLE) and their possible roles in the occurrence and development of SLE. Methods The expressions of circulating mir-26a and in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were detected by qrt-pcr after blood samples were collected from 36 cases of SLE and 1 healthy people. The correlations between mir-26a, and clinical data of SLE were statistically analyzed. Dual luciferase reporter system was used to test whether was the target gene of mir-26a. Results The expression of mir-26a mrna in the serum of the SLE patients was higher than that in the healthy people ( <.5), and the expression of mrna in the PBMCs of the SLE patients was lower than that in the PBMCs of the healthy people ( <.5). The expression levels of mir-26a and in the patients with SLE were correlated with C3, anti-dsdna, ESR and SLEDAI. After mir-26a was transfected to BaF3 cells, the expression of was down-regulated, and the expression of PI3K was up-regulated, and the luciferase activity of the transfected group was decreased ( <.5). Conclusions The over-expression of circulating mir-26a may participate in the occurrence and development of SLE through down-regulation of its target gene and up-regulation of PI3K/AKT signaling pathway. Keywords: systemic lupus erythematosus; circulating mir-26a; ; PI3K/AKT 收稿日期 : [ 通信作者 ] 杨敏, minyanggz@yahoo.com;Tel:

2 中国现代医学杂志第 27 卷系统性红斑狼疮 (systemic lupus erythematosus, SLE) 是一种累及多个器官系统的慢性自身免疫性疾病, 目前认为 SLE 与环境遗传背景感染雌激 [1-3] 素等触发的自身免疫反应有关 MicroRNAs 是一种由 2~22 个核苷酸组成的单链非编码 RNA, 通过与靶基因 mrna 的 3 -UTR 结合, 调控基因的表达研究发现,microRNA 与 SLE 的发病机制密切相 [4-5] 关研究发现, 循环型 microrna-26a(mir-26a) [6-8] 与多种自身免疫疾病密切相关, 但对循环型 mir- 26a 在 SLE 中的表达及作用机制研究较少抑癌基因是双特异蛋白磷酸酶家族成员, 近年来大量研究证实的缺失突变在肿瘤发生发展过 [9] 程中起决定性作用有研究表明, 的激活或 [1] 缺失与多种自身免疫疾病的发生有关本研究通过实时荧光定量聚合酶链反应 (quantitative real-time polymerase chain reaction,qrt-pcr) 检测 SLE 患者血清 mir-26a 和外周血单个核细胞 (peripheral blood mononuclear cell,pbmc) 中 PTEN 的表达, 分析两者与临床资料的相关性, 并利用双荧光素酶报告系统验证是 mir-26a 的靶基因 1 资料与方法 1.1 研究对象选取 214 年 6 月 -215 年 6 月南方医科大学附属南方医院收治的 36 例 SLE 患者的血清, 所有患者符合 1997 年美国风湿病学会修订的 SLE 分类标准 36 例 SLE 患者平均年龄 (35.2±6.47) 岁, 其中, 男性 2 例, 女性 34 例采用狼疮活动指数 (systemic lupus erythematosus disease activity Index,SLEDAI) 评分标准评估疾病活动度, 平均 (12±4) 分选取同期 1 例健康体检者作为对照组, 其中男性 2 例, 女性 8 例 ; 平均年龄 (38.4±6.81) 岁, 两组年龄 ( =1.369, =.1781) 性别 (χ 2 =2.57, =.1515) 比较差异无统计学意义 1.2 主要材料试剂与仪器细胞小鼠原 B 细胞株 BaF3, 购自上海赛百慷生物技术公司 DMEM 高糖培养基胎牛血清购自美国 HyClone 公司,Trizol 试剂 ( 美国 Invitrogen 公司 ), 逆转录试剂盒 qrt-pcr 试剂盒购自日本 TaKaRa 公司,Lipofectamine 2 ( 美国 Invitrogen 公司 ), 双荧光素酶检测试剂盒 ( 美国 GeneCopoeia 公司 ), RNeasy Micro Kit 微量 RNA 提取试剂盒 ( 德国 QI- AGEN 公司 ), 兔抗鼠 PTEN 抗体兔抗鼠 PI3K 抗体购自美国 Santa Cruz 公司,pMD18-T 载体 ( 日本 TaKaRa 公司 ),mir-26a PTEN PI3K β-actin 引物序列由上海吉玛公司合成 ( 见表 1) 表 1 PCR 引物序列基因引物序列长度 /bp -26 正向 :5'-GGATCCGCAGAAACTCCAGAGA-3' 1958 反向 :5'-TTGGAGGAAAGACGATTTCCGT-3' 正向 :5'-TCCACAAACAGAACAAGATG-3' 78 反向 :5'-CTGGTCCTGGTATGAAGAAT-3' 正向 :5'-TGCCTCCACGACCATCATCA-3' 38 反向 :5'-TTCACACACTGGCATGCCGA-3' 正向 :5'-AGCCTCGCCTTTGCCGA-3' 174 反向 :5'-CTGGTGCCTGGGGCG-3' 1.3 方法 qrt-pcr 检测血清 mir-26a mrna 的表达收集 EDTA 抗凝的外周血 2ml,4 3 r/min 离心 2 min, 收集上清液, 按照 RNeasy Micro Kit 微量 RNA 提取试剂盒说明书提取血清 RNA 取 5 μl 血清总 RNA, 以 mir-26a 引物为模板, 应用逆转录试剂盒将其逆转录为 cdna, 反应条件 :42 预变性 1min,95 变性 5min, 以 cdna 为模板, 进行 qrt- PCR; 以 cel-mir-39 为内参照进行扩增, 反应条件 : 95 预变性 1 min,95 变性 15 s,55 退火 3 s, 72 继续延伸 3 s, 共 4 个循环通过 qrt-pcr 仪 ABI Step One Plus 检测, 实验重复 3 次, 根据公式 Folds=2 - Ct 计算各检测 mir-26a 的相对表达量, Ct=(C tmir-26a -C tcel-mir-39 ) 实验组 -(Ct mir-26a -Ct cel-mir-39 ) 对照组 qrt-pcr 检测 PBMC 中 PTEN mrna 的表达取 EDTA 抗凝的外周血 5ml, 室温条件下 15 r/min 离心 1 min, 弃上清液, 加入 2 倍体积的 PBS 缓冲液, 将混合液缓慢加入到含 3ml 淋巴分离液的 EP 管中, 室温 25 r/min 离心 2 min, 弃上清液,3 ml PBS 缓冲液洗涤沉淀, 再次室温 25 r/min 离心 2 min, 弃上清液使用 RNA fast 2 总 RNA 极速抽提试剂盒提取 PBMC 总 RNA, 取 5 μl 总 RNA, 应用逆转录试剂盒将 PTEN mrna 逆转录为 cdna, 以 cdna 为模板,β-actin 为内参照进行扩增, 通过 qrt-pcr 仪软件程序分析检测数据结果, 实验重复 3 次 mir-26a 转染与双荧光素酶报告系统检测将 BaF3 细胞置于 DMEM 高糖培养基 +1% 胎牛血清中,37 5% 二氧化碳 CO 2 条件下培养, 将细胞分 46

第 26 期崔丹瑜, 等 : 循环型 microrna-26a 及其靶基因与系统性红斑狼疮的相关性研究为转染组 (mir-26a mimics) 阴性对照组 (Mimics control) 和只加转染试剂的空白对照组将 BaF3 细胞接种于 6 孔板内, 待细胞密度约为 5% 时, 取 mir- 26a mimics 和 Mimics control 各 1 pmol, 分别与

3 第 26 期崔丹瑜, 等 : 循环型 microrna-26a 及其靶基因与系统性红斑狼疮的相关性研究为转染组 (mir-26a mimics) 阴性对照组 (Mimics control) 和只加转染试剂的空白对照组将 BaF3 细胞接种于 6 孔板内, 待细胞密度约为 5% 时, 取 mir- 26a mimics 和 Mimics control 各 1 pmol, 分别与 Lipofectamine 5μl 充分混匀, 室温孵育 3 min, 将转染混合物加入 6 孔板中, 培养箱中培养 24 h, 提取细胞内总 RNA, 以 β-actin 为内参照,qRT-PCR 检测细胞内 mir-26a PTEN 及 PI3K mrna 的表达 1Western blot 检测 : 取转染 48 h 后的 3 组细胞, RIPA 裂解细胞, 提取细胞总蛋白,SDS-PAGE 电泳分离转膜后, 加入兔抗鼠 PTEN 抗体 (1 3) 兔抗鼠 PI3K 抗体 (1 4),4 过夜, 加 HRP 标记的羊抗兔 IgG(1 4), 显色剂显色, 应用 Gene Tools 软件分析 PTEN PI3K 蛋白的表达 ;2 双荧光素酶报告系统检测 : 设计基因双向引物序列, 并在两端加上 Ⅰ 和 Ⅰ 酶切位点, 正向引物 :5'-TCTA GACAGTGCTAAAATTC-3', 反向引物 :5'-GCGGCCG CTATATATCAATG-3'; 扩增基因的 3'-UTR, 对 pmd18-t 载体和扩增序列进行 Ⅰ 和 Ⅰ 双酶切,T4 DNA 连接酶切后的 pmd18-t 和 PTEN DNA 片段, 转化并提取质粒, 取质粒 15 ng 与 mir-26a mimics Mimics control 各 3pmol 混合后加入 25 μl opti-mem 培养基中, 将混合物与含 1 μl Lipofectamine 的 25 μl opti-mem 充分混匀, 室温孵育 3 min, 加入含 BaF3 细胞的 6 孔板内, 培养箱中孵育 24 h, 按照美国 Gene Copoeia 公司双荧光素酶检测方法进行检测 1.4 统计学方法数据分析采用 SPSS 18. 统计软件, 计量资料以均数 ± 标准差 (x±s) 表示, 两组间比较用两独立样本检验,3 组间比较用单因素方差分析, 在方差分析有意义的基础上, 两两比较用 SNK- 检验, 相关分析用 Spearman 法, <.5 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 SLE 患者血清 mir-26a PBMC 中 PTEN mrna 的表达 36 例 SLE 患者血清 mir-26a mrna 的相对表达量为 (2.69±.47), 对照组为 (1.34±.29), 经检验, 差异有统计学意义 ( =8.598, =.),SLE 患者血清 mir-26a mrna 的相对表达量高于对照组 SLE 患者 PBMC 中 PTEN mrna 的相对表达量为 (.75±.14), 对照组为 (1.82±.39), 经检验, 差异有统计学意义 ( =13.85, =.),SLE 患者 PBMC 中 PTEN mrna 的相对表达量低于对照组见图 SLE 患者 mir-26a PTEN 表达与临床资料的关系分析 SLE 患者 mir-26a PTEN 的表达与年龄性别病情进展脏器受累等指标的关系结果显示, 女性 SLEDAI 评分高脏器受累 SLE 患者的血清 mir-26a 的表达水平高于男性 SLEDAI 评分低无脏器受累患者 SLEDAI 评分高脏器受累 SLE 患者 PBMC 中 PTEN 的表达水平低于 SLEDAI 评分低无脏器受累 SLE 患者 ( 见表 2) Spearman 法分析 mir- 26a PTEN 与 SLE 临床检测指标 C3 抗 ds-dna 红细胞沉降率 (erythrocyte sedimentation rate,esr) SLEDAI 的相关性, 结果显示,miR-26a 与 C3 抗 ds- DNA ESR SLEDAI 呈正相关 ( = 和.662, =..2. 和.)( 见图 2 ) PTEN 与 C3 抗 ds-dna ESR SLEDAI 呈负相关 ( = -.585,-.469,-.588 和 -.521, =..4. 和.1)( 见图 3 ) 线性回归分析结果显示, SLE 组对照组 SLE 组对照组 A B 图 1 A: 血清 mir-26a mrna;b:pbmc 中 PTEN mrna SLE 患者和健康人群血清 mir-26a PBMC 中 PTEN mrna 的表达 (x±s) 47

中国现代医学杂志第 27 卷表 2 SLE 患者临床资料与 mir-26a PTEN 表达的关系临床资料例数 mir-26a / 值值 PTEN / 值值性别男 2 1.63±.88.78±.

8696 SLEDAI 评分 ~4 分 7 1.67±.26 1.43±.37 5~9 分 11 2.34±.39 1.4±.35 25.589. 1~14 分 13 3.5±.44.55±.14 33.297.

心脏 6 2.93±.55.56±.11 PTEN 与 mir-26a 呈负相关 (b=42.271, =.1), 以 PTEN 为因变量,miR-26a 为自变量, 两者符合 Y (PTEN)=-.

3 mir-26a 转染后 PTEN PI3K 的表达 mir-26a mimics 转染 BaF3 后, 细胞中 mir-26a mrna 表达增加, 与阴性对照组和空白对照组比较, 差异有统计学意义 (

4 中国现代医学杂志第 27 卷表 2 SLE 患者临床资料与 mir-26a PTEN 表达的关系临床资料例数 mir-26a / 值值 PTEN / 值值性别男 ±.88.78± 女 ±.45.73± 年龄 <4 岁 ±.39.74± 岁 ±.51.77± SLEDAI 评分 ~4 分 ± ±.37 5~9 分 ± ± ~14 分 ±.44.55± 分 ±.61.32±.8 脏器受累无 ± ±.34 肾脏 ±.44.35± 神经系统 ±.47.64± 心脏 ±.55.56±.11 PTEN 与 mir-26a 呈负相关 (b=42.271, =.1), 以 PTEN 为因变量,miR-26a 为自变量, 两者符合 Y (PTEN)=-.448 X(miR-26a)+2.93( =-6.52, =.)( 见图 4 ) 2.3 mir-26a 转染后 PTEN PI3K 的表达 mir-26a mimics 转染 BaF3 后, 细胞中 mir-26a mrna 表达增加, 与阴性对照组和空白对照组比较, 差异有统计学意义 ( =159.38, =.); 两两比 C3 抗 ds-dna ESR SLEDAI 图 2 mir-26a 与 C3 抗 ds-dna ESR SLEDAI 的相关性分析 48

第 26 期崔丹瑜, 等 : 循环型 microrna-26a 及其靶基因与系统性红斑狼疮的相关性研究 4. 4. 3. 3. 2. 2. 1.

1. 5 1 15 2 1 2 3 4 ESR SLEDAI 图 3 PTEN 与 C3 抗 ds-dna ESR SLEDAI

753, 均 =.) 转染后 PI3K mrna 表达增加, 与阴性对照组和空白对照组比较, 差异有统计学意义 ( = 28.

5 第 26 期崔丹瑜, 等 : 循环型 microrna-26a 及其靶基因与系统性红斑狼疮的相关性研究 C3 抗 ds-dna ESR SLEDAI 图 3 PTEN 与 C3 抗 ds-dna ESR SLEDAI 的相关性分析图 4 mir-26a 与 PTEN 的相关性分析较经 SNK- 检验, 转染组 mir-26a mrna 高于阴性对照组和空白对照组 ( = 和 22.76, 均 =.), 表明 mir-26a 已成功转染至细胞内转染后, PTEN mrna 表达减少, 与阴性对照组和空白对照组比较, 差异有统计学意义 ( = , =.); 两两比较经 SNK- 检验, 转染组 PTEN mrna 表达少于阴性对照组和空白对照组 ( = 和 , 均 =.) 转染后 PI3K mrna 表达增加, 与阴性对照组和空白对照组比较, 差异有统计学意义 ( = 28.12, =.); 两两比较经 SNK- 检验, 转染组 PI3K mrna 表达高于阴性对照组和空白对照组 ( = 和 53.9, 均 =.) Western blot 检测转染后 PTEN 蛋白表达减少 ( =8.354, =.36); 两两比较经 SNK- 检验, 转染组 PTEN 蛋白表达少于阴性对照组和空白对照组 ( = 和 , 均 =.) 而 Western blot 检测转染后 PI3K 蛋白表达增加 ( =27.94, =.); 两两比较经 SNK- 检 A mir-26a mrna B PTEN mrna C PI3K mrna 49

中国现代医学杂志第 27 卷.6.4 1..2.5 D PTEN 蛋白 E PI3K 蛋白图 5 mir-26a mimics 转染后 3 组 PTEN PI3K 的表达比较 (x±s) 验, 转染组 PI3K 蛋白表达高于阴性对照组和空白对照组 ( =45.856 和 39.251, 均 =.) 见图 5 6 2.

) 表明 mir-26a 通过靶向的 3 -UTR, 负向调控 PTEN 的表达见图 7 PTEN 1. PI3K.

表达水平高于人, 男女比例为 1 1 [11] SLE 患者体内存在抗 DS- 稳定期无脏器受累的 SLE 患者, 表明血清 mir-26a DNA 等多种自身抗体, 导致细胞和体液免疫功能紊上调可能与 SLE 的发生发展有关为进一步明确乱, 同时累及肾脏皮肤关节等多个器官和组织损血清 mir-26a 与 SLE 疾病活动度的关系, 本研究对伤目前尚不清楚 SLE 具体的发病机制,

6 中国现代医学杂志第 27 卷 D PTEN 蛋白 E PI3K 蛋白图 5 mir-26a mimics 转染后 3 组 PTEN PI3K 的表达比较 (x±s) 验, 转染组 PI3K 蛋白表达高于阴性对照组和空白对照组 ( = 和 , 均 =.) 见图双荧光素酶报告系统检测结果 mir-26a mimics 转染 BaF3 后, 荧光素酶活性下降 (.36±.8), 与阴性对照组空白对照组比较, 差异有统计学意义 ( =59.63, =.); 两两比较经 SNK- 检验, 转染组荧光素酶活性低于阴性对照组和空白对照组 ( = 和 , 均 =.) 表明 mir-26a 通过靶向的 3 -UTR, 负向调控 PTEN 的表达见图 7 PTEN 1. PI3K.5 β-actin 图 6 mir-26a mimics 转染后 PTEN PI3K 蛋白的变化图 7 mir-26a mimics 转染后荧光强度的变化 (x±s) 3 讨论血清 mir-26a 表达水平高于健康人群, 而且女性 SLE 患者血清 mir-26a 表达水平高于男性, 活动期和病文献报道我国 SLE 患病率约为 7~1/1 万变累及脏器的 SLE 患者的 mir-26a 表达水平高于人, 男女比例为 1 1 [11] SLE 患者体内存在抗 DS- 稳定期无脏器受累的 SLE 患者, 表明血清 mir-26a DNA 等多种自身抗体, 导致细胞和体液免疫功能紊上调可能与 SLE 的发生发展有关为进一步明确乱, 同时累及肾脏皮肤关节等多个器官和组织损血清 mir-26a 与 SLE 疾病活动度的关系, 本研究对伤目前尚不清楚 SLE 具体的发病机制, 免疫细胞 mir-26a 与 C3 抗 ds-dna ESR SLEDAI 进行相关 DNA 甲基化组蛋白修饰环境等因素被认为是 SLE 性分析, 结果显示 mir-26a 与 C3 抗 ds-dna ESR 主要病因近年来,microRNA 的生物学功能研究引 SLEDAI 存在相关性, 进一步说明血清 mir-26a 的过起广泛关注研究发现,microRNA 参与肿瘤自身免表达与 SLE 的发展相关既往研究发现,miR-26a [12-14] 疫疾病等多种疾病的发生发展国内学者发现在不同疾病的发病过程中扮演迥异的双重角色, 在 mir-155 mir-125a mir-146a, 以及循环型 mir- 抑制疾病促进疾病 2 种角色间的转换, 表明 [15] 189 mir-31 等参与 SLE 发生发展血清血浆 mir-26a 可能通过靶向不同的基因从而参与疾病的尿液等体液中存在一类耐 RNA 酶的细胞外游离型发生或转归 mir-26a 通过靶向 2 6 microrna, 称循环型 microrna, 疾病特异性的循环 -1 等基因参与肝癌 NK/T 细胞淋巴瘤的发病型 mirna 表达谱对疾病的诊断预后评估有着非常过程, 然而, 对 mir-26a 通过何种靶基因参与 SLE [16] 重要的价值 mir-26a(nc_517.4) 是 mir-26 家族成员之发病过程的研究却鲜有报道基因定位于 1q23.3, 是双特异蛋白磷酸 [17] 一, 女性表达量高于男性本研究发现,SLE 患者酶家族成员之一, 磷酸酶区域的突变导致多 5

7 第 26 期崔丹瑜, 等 : 循环型 microrna-26a 及其靶基因与系统性红斑狼疮的相关性研究种疾病的发生 microrna 乙酰化泛素化等调控 PTEN 的表达通过 TARGETSCAN MIRANDA 等 microrna 数据库预测可能是 mir-26a 的靶基因, 本研究通过 mir-26a mimics 双荧光素酶报告系统加以验证, 结果显示,miR-26a mimics 转染 BaF3 后,PTEN mrna 和蛋白表达降低, 荧光素酶活性下降, 表明 mir-26a 通过与 PTEN 的 3 -UTR 序列结合, 在转录后水平负向调控 PTEN 的表达通过线性回归分析 PTEN mir-26a 的相关性, 结果显示, PTEN 与 mir-26a 呈负相关, 进一步证实是 mir-26a 的靶基因, 而 SLE 患者 PBMC 中 PTEN 的表达水平低于健康人群的原因, 可能与血清 mir-26a 在两组人群的表达差异有关 PTEN 是天然的 PI3K/ Akt 信号通路负向调控因子,PTEN 通过磷酸化 PIP3, 下调 PI3K/Akt 参与免疫功能的调节吴湘妮 [21] 等研究发现,miR-7 mir-21 mir-22 表达增加, 导致 PTEN 表达降低, 通过上调 PI3K/Akt 信号通路导致 SLE 患者 B 细胞的高反应性, 而且 PTEN 的下降程度与 SLE 的活动度严重程度相关本研究结果也证实该点,SLE 患者 PBMC 中 PTEN 的表达水平与 C3 抗 ds-dna ESR SLEDAI 有关, 病变累及脏器的 SLE 患者 PTEN 的表达水平低于未累及脏器患者 mir-26amimics 转染 BaF3 后, 通过与 PTEN 的 3 - UTR 序列结合, 抑制 PTEN 的表达, 导致 PI3K/Akt 信号通路失去 PTEN 这个关键的负向调控因子, 因此 PI3K 表达上调, 而上调的 PI3K 通过何种途径对免疫细胞产生影响, 仍有待进一步的研究本研究结果显示,SLE 患者血清 mir-26a 呈高表达状态,miR-26a 表达水平与 SLE 的活动度严重程度存有相关性, 双荧光素酶报告系统结果表明, 是 mir-26a 的靶基因,miR-26a 可能通过与的 3 -UTR 序列结合, 抑制 PTEN 的表达, 从而上调 PI3K/AKT 信号通路参与 SLE 的发生发展参考文献 : [1] RAHMAN A, ISENBERG DA. Systemic lupus erythematosus[j]. New England Journal of Medicine, 28, 358(9): [2] MURPHY G, LISNEVSKAIA L, ISENBERG D. Systemic lupus erythematosus and other autoimmune rheumatic diseases: challenges to treatment[j]. Lancet, 213, 382(9894): [3] LIU A, LA CA. Epigenetic dysregulation in systemic lupus erythematosus[j]. Autoimmunity, 214, 47(4): [4] CERIBELLI A, YAO B, DOMINGUEZ-GUTIERREZ PR, et al. MicroRNAs in systemic rheumatic diseases[j]. Arthritis Research Therapy, 211, 13(4): 1-1. [5] QU B, SHEN N. mirnas in the pathogenesis of systemic lupus erythematosus[j]. Netherlands Journal of Medicine, 215, 16(5): [6] ICHII O, OTSUKA-KANAZAWA S, HORINO T, et al. Decreased mir-26a expression correlates with the progression of podocyte injury in autoimmune glomerulonephritis[j]. PLoS One, 1932, 9(1): DOI: /journal.pone [7] MURATA K, FURU M, YOSHITOMI H, et al. Comprehensive microrna analysis identifies mir-24 and mir-125a-5p as plasma biomarkers for rheumatoid arthritis[j]. PLoS One, 213, 8(7): [8] HONARDOOST MA, KIANI-ESFAHANI A, GHAEDI K, et al. mir-326 and mir-26a, two potential markers for diagnosis of relapse and remission phases in patient with relapsing-remitting multiple sclerosis[j]. Gene, 214, 544(544): [9] LONGACRE M, SNYDER NA, HOUSMAN G, et al. A Comparative analysis of genetic and epigenetic events of breast and o- varian cancer related to tumorigenesis[j]. International Journal of Molecular Sciences, 216, 17(5): 759. [1] BL 譈 ML S, SAHIN E, SAFERDING V, et al. Phosphatase and tensin homolog (PTEN) in antigen-presenting cells controls Th17- mediated autoimmune arthritis [J]. Arthritis Research Therapy, 215, 17(1): [11] ZHANG S, SU J, LI X, et al. Chinese SLE treatment and research group (CSTAR) registry: V gender impact on Chinese patients with systemic lupus erythematosus[j]. Lupus, 215, 24(12): [12] 辛倩.MiR-155 通过调控 S1pr1 参与系统性红斑狼疮发生发展的作用机制研究 [D]. 济南 : 山东大学,215. [13] 刘佳婧, 江峰, 付朝伟, 等.miRNA-146a 基因多态性与长江以南女性汉族人群系统性红斑狼疮 (SLE) 的病例对照研究 [J]. 复旦学报 : 医学版,214,41(6): [14] 范薇, 唐元家, 曲波, 等. 系统性红斑狼疮患者外周血细胞 mir-31 的表达 [J]. 上海交通大学学报 : 医学版,211,31(1): [15] 陈士伟. 循环 mir-189 对系统性红斑狼疮的临床诊断价值和意义 [D]. 上海 : 第二军医大学,211. [16] GRIFFITHS-JONES S, SAINI HK, VAN DS, et al. mirbase: tools for microrna genomics[j]. Nucleic Acids Research, 28, 36(1): [17] JI J, SHI J, BUDHU A, et al. MicroRNA expression, survival, and response to interferon in liver cancer [J]. New England Journal of Medicine, 29, 361(15): ( 童颖丹编辑 ) 51

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环球中医药 2016 年 5 月第 9 卷第 5 期摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2016,Vol 郾 9, No 郾 5 摇 557 两种电针对脊髓损伤 14 天后大鼠运动功能神经元及 MEK2 p 鄄 ERK1 表达的影响论著宋良玉摇吕威摇景泉凯摇莫雨