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冥靡杜
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1 第 39 卷第 2 期渔业科学进展 Vol.39, No 年 4 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Apr., 2018 DOI: /j.issn C., 2018, 39(2): Wang ZJ, Ye BM, Chang Q, Chen SQ, Liu CL, Hu JC, Wang ZJ. Effects of vitamin C on early development of spotted halibut (Verasper variegatus). Progress in Fishery Sciences, 2018, 39(2): * 维生素 C 对圆斑星鲽早期发育的影响王贞杰 1,2 叶保民 3 常青 1 陈四清 11 刘长琳 1 胡建成 1 王志军 4 (1. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛 ; 2. 上海海洋大学水产与生命学院上海 ;3. 辽宁省海洋与渔业厅沈阳 ; 4. 山东科合海洋高技术有限公司威海 ) 摘要本研究旨在探究维生素 C(V C ) 对圆斑星鲽 (Verasper variegatus) 早期发育中孵化率出膜率和成活率的影响, 对其消化酶和脂蛋白脂酶 (Lipoprotein lipase, LPL) 及肝脂酶 (Hepatic Lipase, HL) 的影响实验用圆斑星鲽为人工受精卵, 分为 5 组, 孵化水体 V C 浓度分别为和 35 mg/l, 分别在成熟卵受精卵原肠中期晶体出现期内源营养期 (2 日龄 ) 混合营养期(6 日龄 ) 及外源营养期 (9 日龄 ) 取样记录圆斑星鲽的出膜时间出膜率和成活率, 测定对照组和生长指标优越组的消化酶活性和 2 种酯酶的活性结果显示,25 mg/l 的 V C 能显著提高圆斑星鲽的出膜率和成活率, 并缩短出膜时间 (P<0.05) V C 能促进圆斑星鲽早期发育过程中蛋白质的沉积外源营养期后, 胃蛋白酶活性显著提高 (P<0.05), 淀粉酶活性在混合营养期显著提高 (P<0.05), 脂肪酶和胰蛋白酶活性在内源营养期就显著提高 (P<0.05) 25 mg/l V C 溶液浸泡使圆斑星鲽胚胎发育过程中的 LPL 和 HL 比活力显著升高 (P<0.05) 合子中的 LPL 和 HL 基因可能在原肠期开始表达, 合成脂质水解酶分解脂质, 为胚胎发育供能研究表明, 圆斑星鲽成熟卵受精后脂肪酶和胰蛋白酶酶优先发挥作用, 分解卵黄中的碳水化合物为胚胎发育迅速提供能量 25 mg/l 的 V C 能显著提高消化酶活性, 并促进蛋白质的沉积, 有利于孵化成活的 V C 浓度可以显著促进圆斑星鲽早期发育的脂质代谢关键词圆斑星鲽 ; 早期发育 ; 维生素 C; 消化酶 ; 脂酶中图分类号 S965 文献标识码 A 文章编号 (2018) 维生素 C(Vitamin C) 俗称抗坏血酸, 是动物生长生产及维持正常的生理机能所必需的微量营养素, 具有广泛的生理和免疫调节作用, 对动物快速生长起促进作用 ( 颉志刚等, 2003) 目前, 针对鱼类生长补充维生素的方法有 2 种, 对于胚胎期和卵黄囊期的仔稚鱼补充维生素等营养物质的途径为水体浸泡 ( 季延滨等, 2007); 对于已经开口摄食的鱼类, 可以在饲料中添加 Vc 目前, 关于 Vc 对鱼类的生长和生理影响的研究报道均在成鱼 ( 谢全森等, 2008), 而研究在孵化水体添加 Vc 对胚胎和卵黄囊仔鱼的影响的报道较少已有研究表明, 适宜的 Vc 为受精卵提供营养补偿, 对鱼类的早期发育有促进作用, 可以显著提高受精卵孵化率和仔稚鱼的成活率 ( 李俊霞, 2007) 季延斌等 (2007) 研究表明, 刚出膜的六须鲶 (Silurus glanis) 仔鱼 * 山东省自主创新成果转化专项 (2013ZHZX2A0803) 和鳌山科技创新计划 (2015ASKJ02-03) 共同资助 [This work was supported by Shandong Special Independent Innovation Achievements (2013ZHZX2A0803), and Aoshan Science and Technology Innovation Plan (2015ASKJ02-03)]. 王贞杰, @qq.com 1 通讯作者 : 陈四清, 研究员, chensq@ysfri.ac.cn 收稿日期 : , 收修改稿日期 :

2 第 2 期王贞杰等 : 维生素 C 对圆斑星鲽早期发育的影响 97 浸泡在添加 40 mg/l 的 Vc 孵化水体中, 可以使仔鱼开口摄食的时间提前 8 h, 其成活率也由自然孵化条件下的 5%~20% 提高至 70%; 薛凌展 (2008) 研究也表明, 水体中添加 0.09 g/l 的 Vc 可使栉孔扇贝 (Chlamys farreri) 的孵化率显著提高可见, 胚胎及仔鱼可以吸收孵化水体中的 Vc,Vc 可为鱼类胚胎生长发育提供营养需求, 促进早期发育熊铧龙等 (2014) 研究表明, 30 mg/l 的 Vc 可显著提高晋安银鲫 (Carassius auratus) 的孵化率成活率及卵黄囊仔稚鱼的生长速度圆斑星鲽 (Verasper variegatus) 主要分布在我国的黄渤海, 韩国和日本的北部沿海圆斑星鲽肉质细嫩味道鲜美, 耐低温, 具有较强抗病力, 生长速度快, 是重要的经济养殖鱼种由于人工饲育下的圆斑星鲽排卵周期不稳定, 受精率比其他鱼种较低, 对于提高孵化阶段的孵化率和卵黄囊期的成活率有待提高本研究将 Vc 添加到圆斑星鲽的孵化水体中, 旨在探究 Vc 对圆斑星鲽早期发育的影响, 为提高该鱼的孵化率成活率和营养消化能力提供理论依据 1 材料与方法 1.1 实验材料实验于 2016 年 5 月在山东科合海洋高技术有限公司进行选用全长为 30~50 cm 体重为 1.2~3.0 kg 的 4 龄圆斑星鲽亲鱼挑选可挤出乳白色精液的雄性亲鱼, 用吸管取其精液, 用 0.9% 生理盐水稀释 ; 挑选腹部膨大肛门突出的雌性亲鱼, 挤出成熟卵挤出的卵立即滴入数滴稀释精液, 轻轻搅拌, 使精卵均匀混合,2~3 min 后洗净, 将受精卵置于 2 L 烧杯中孵化孵化水温为 (11.5±0.5), 出膜后水温升高至 (14.5±0.5) 每 8 h 全部换同一温度的新水实验 Vc 质量浓度为和 35 mg/l, 每组分别设 3 个重复水体中受精卵的平均密度为 1000 粒 /L, 开口后投喂轮虫受精卵发育过程使用显微镜 4 倍下进行连续观察, 并记录发育的时间和时期实验的取样点标准为 50% 的仔鱼发育至某个时期实验仔鱼的内源营养期为 1~5 日龄仔鱼, 混合营养期为 5~8 日龄仔鱼, 外源营养期为 9 日龄仔鱼因此, 在成熟卵受精卵原肠中期晶体出现期内源营养期 (2 日龄 ) 混合营养期 (6 日龄 ) 及外源营养期 (9 日龄 ) 7 个时期分别取样将样品置于 1.5 ml 的 Eppendoff 管中, 于 80 冰箱保存 1.2 样品制备选取最优仔稚鱼出膜时间出膜率和成活率的 V C 浓度 25 mg/l 组和对照组的样品进行指标测定取不同胚胎时期的样品加入 10 倍体积 (W/V) 预冷双蒸水, 冰浴匀浆,4000 r/min 4 离心 20 min 后取上清液, 置于 4 冰箱中保存备用,24 h 内测定完毕 1.3 酶活测定酶液蛋白浓度采用考马斯亮蓝法测定脂蛋白脂酶 (LPL) 肝脂酶(HL) 胃蛋白酶胰蛋白酶脂肪酶和淀粉酶活性均采用南京建成生物技术有限公司试剂盒测定总脂酶活性 (GE)= 脂蛋白脂酶活性 + 肝脂酶活性 1.4 体重和全长的测定方法用电子天平称量体重, 每次称量 100 尾, 取平均值显微镜下通过目微尺测定全长, 每次测量 50 尾, 取平均值体重和全长均测定 3 次 1.5 数据分析实验结果以平均值 ± 标准差 (Mean±SD) 表示, 用 SPSS 17.0 软件进行单因子方差分析 (One-way ANOVA),P<0.05 为差异显著, 采用 Duncan 氏多重比较检验 2 结果 2.1 Vc 对圆斑星鲽出膜时间孵化率和仔鱼成活率的影响随着孵化水体中 V C 浓度的增加, 圆斑星鲽仔鱼的出膜时间缩短, 孵化率和成活率得到提高 ( 表 1) Vc 浓度在 30 mg/l 时, 仔鱼出膜时间最短, 比对照组缩短了 5.5 h;vc 浓度在 20 mg/l 时, 孵化率显著高于其他各组 (P<0.05);Vc 浓度在 25~30 mg/l 时, 成活率显著高于其他各组 (P<0.05); 当 Vc 浓度大于 30 mg/l 时, 高浓度 Vc 对圆斑星鲽胚胎及仔鱼孵化率和成活率表现出抑制 2.2 Vc 对圆斑星鲽仔稚鱼全长和体重的影响 Vc 对圆斑星鲽仔稚鱼全长的影响显著 ( 表 2) 同一发育时期, 随 Vc 浓度增加仔稚鱼全长增加,Vc 浓度高于 30 mg/l 时, 全长增长速度表现出抑制 Vc 浓度在 25 mg/l 时, 仔稚鱼各时期全长最长, 并显著高于对照组 (P<0.05) 随着 Vc 浓度增加, 不同发育时期的全长增长幅度比对照组显著增大 (P<0.05), 外源营养期的仔稚鱼在 25 mg/l 时, 全长增长幅度最大 Vc 浓度高于 30 mg/l 时, 增长幅度与对照组无显著

3 98 渔业科学进展第 39 卷表 1 V C 对圆斑星鲽出膜时间孵化率和成活率的影响 Tab.1 The effect of vitamin C on the hatching time, hatching ratio and survival rate of V. variegatus larvae (n=3) Vc 浓度 Vc concentration (mg/l) 项目 Items 出膜时间 Hatching time (h) ±1.52 a ±1.00 c ±1.00 b ±0.57 b ±1.73 a 孵化率 Hatching rate (%) 34.03±2.43 a 46.63±1.04 b 44.36±0.81 bc 43.93±1.43 c 29.80±0.55 d 成活率 Survival rate (%) 71.30±1.05 a 70.93±0.55 a 81.95±1.22 b 81.96±2.15 b 67.83±1.26 c 注 : 同行上标不同字母表示差异显著 (P<0.05), 相同字母表示差异不显著 (P>0.05); 下同 Note: Values within the same line with different letters are significantly different (P<0.05), while the same letters indicate no significant difference (P>0.05); the same in the following 差异 (P>0.05) 由表 3 可知, 随着 Vc 浓度的增加, 体重呈上升趋势当 Vc 浓度高于 30 mg/l 时, 体重增加受到抑制对于外源营养期的仔稚鱼, 体重在 Vc 浓度 25 mg/l 时最大并显著高于对照组 (P<0.05) 2.3 Vc 对圆斑星鲽早期发育过程中总蛋白的影响浸泡水体 Vc 浓度为 30 mg/l 时 ( 表 4), 在圆斑星鲽仔稚鱼早期发育过程中, 对照组的总蛋白含量呈下降趋势, 成熟卵总蛋白量为 (0.775±0.012) mg/ml, 发育到外源营养期时, 总蛋白含量下降至 (0.131±0.011) mg/ml Vc 组总蛋白含量也呈下降趋势, 但下降幅度显著低于对照组发育到外源营养期时, 总蛋白含量下降至 (0.225± 0.005) mg/ml, 显著高于对照组 (P<0.05) 2.4 Vc 对圆斑星鲽早期发育过程中消化酶的影响浸泡水体 Vc 浓度在 30 mg/l 时圆斑星鲽早期发育过程中消化酶活性的变化见表 5 从表 5 可以看出胃蛋白酶活性在外源营养期出现,Vc 组显著高于对照组 (P<0.05) 淀粉酶活性在混合营养期出现, 并呈显著上升趋势, 混合营养期和外源营养期间差异显著 (P<0.05) 在混合营养期和外源营养期,Vc 组均显著高于对照组 (P<0.05)( 表 6),Vc 可显著提高淀粉酶活性在发育的各个时期, 脂肪酶活性均呈显著上升趋势,Vc 组脂肪酶活性均显著高于对照组 (P<0.05) 胰蛋白酶在内源营养期有较高活性, 混合营养期活性下降, 外源营养期有所升高在混合营养期, 胰蛋白酶活性 Vc 组和对照组差异不显著 (P>0.05); 在混合营养期和外源营养期,Vc 组均显著高于对照组 (P<0.05) 2.5 Vc 对圆斑星鲽早期发育过程中 2 种酯酶的影响圆斑星鲽发育的各个时期,LPL 活性 Vc 组均高于对照组成熟卵受精卵和混合营养期 2 组差异不显著 (P>0.05), 原肠中期晶体期和外源营养期 Vc 组显著高于对照组 (P<0.05) 圆斑星鲽胚胎发育和卵黄囊仔稚鱼 HL 活性均呈上升趋势, 且 Vc 组显著高于对照组 (P<0.05)( 表 6) 表 2 Vc 对圆斑星鲽仔稚鱼全长的影响 Tab.2 The effects of vitamin C on the full-length of Verasper variegatus larvae (n=3, mm) 时期 Stages Vc 浓度 Vc concentration (mg/l) 内源营养期 Endogenous nutrition stage 4.91±0.06 a 4.98±0.02 b 5.14±0.03 c 5.13±0.02 c 4.92±0.03 ab 混合营养期 Mixed nutrition stage 6.15±0.03 a 6.21±0.03 b 6.31±0.02 c 6.29±0.02 c 6.13±0.04 a 外源营养期 Exogenous nutrition stage 6.25±0.02 a 6.33±0.02 b 6.46±0.04 c 6.45±0.02 c 6.26±0.02 a 表 3 Vc 对圆斑星鲽仔稚鱼体重的影响 Tab.3 The effects of vitamin C on the body weight of V. variegatus larvae (n=3, mg) 时期 Stages Vc 浓度 Vc Concentration (mg/l) 内源营养期 Endogenous nutrition stage 1.66±0.02 a 1.74±0.02 a 1.98±0.08 b 2.07±0.02 b 1.68±0.01 a 混合营养期 Mixed nutrition stage 2.62±0.01 a 2.78±0.02 b 2.95±0.01 c 2.95±0.02 c 2.60±0.03 a 外源营养期 Exogenous nutrition stage 3.36±0.04 a 3.42±0.02 b 3.66±0.04 c 3.64±0.02 c 3.31±0.02 a

4 第 2 期王贞杰等 : 维生素 C 对圆斑星鲽早期发育的影响 99 表 4 圆斑星鲽早期发育过程中总蛋白含量变化 Tab.4 The total protein content of V. variegatus during early development (mg/ml) 时期 Stages 对照组 Control Vc 组 Vc group 成熟卵 Mature eggs 0.775± ±0.012 受精卵 Fertilized eggs 0.743± ±0.004 原肠中期 Mid-gastrula stage 0.659± ±0.001 晶体出现期 Crystal appearing stage 0.492± ±0.006 混合营养期 Mixed nutrition stage 0.193± ±0.003 外源营养期 Exogenous nutrition stage 0.130± ±0.005 内源营养期 Endogenous nutrition stage 混合营养期 Mixed nutrition stage 外源营养期 Exogenous nutrition stage 表 5 圆斑星鲽早期发育过程中消化酶活性变化 Tab.5 The digestive enzyme activities of V. variegatus during early development (U/mg prot) 项目 Items 胃蛋白酶 Pepsin 淀粉酶 Amylase 脂肪酶 Lipase 胰蛋白酶 Trypsin 对照组 Control 0.201±0.147 Aa 1.564±0.045 Aa V C 组 Vc group 0.299±0.086 Ab 1.953±0.020 Ab 对照组 Control 1.041±0.014 Aa 0.605±0.044 Ba 0.603±0.083 Ba V C 组 Vc group 1.392±0.020 Ab 0.691±0.032 Bb 0.711±0.075 Ba 对照组 Control 0.463±0.034 a 1.374±0.033 Ba 0.684±0.011 Ca 0.671±0.058 Ca V C 组 Vc group 0.623±0.001 b 1.468±0.006 Bb 0.770±0.041 Cb 1.003±0.111 Cb 注 : 同组同列数据肩标不同大写字母表示差异显著 (P<0.05), 相同或无大写字母表示差异不显著 (P>0.05); 同一发育时期同列数据肩标不同小写字母表示组间同一发育时期间有显著差异 (P<0.05), 相同小写字母表示无显著差异 (P>0.05), 下同 Note: Values in the same row with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.05),and with the same or no capital letter superscripts mean no significant difference (P>0.05); Values in the same column with different small letter superscripts in the same row mean significant difference between groups of same period (P>0.05), the same small letter superscripts mean no significant difference between groups of same period (P>0.05), the same in the following Tab.6 成熟卵 Mature eggs 受精卵 Fertilized eggs 原肠中期 Mid-gastrula stage 晶体出现期 Crystal appear stage 混合营养期 Mixed nutrition stage 表 6 圆斑星鲽早期发育过程中脂蛋白脂酶 (LPL) 和肝脂酶 (HL) 活性变化 The specific activity and total activity of lipoprotein lipase and hepatic lipase of V. variegatus during early development (U/mg prot) 项目 Items 脂蛋白脂酶 Lipoprotein lipase 肝脂酶 Hepatic lipase 外源营养期 Exogenous nutrition stage 对照组 Control 0.283±0.003 Aa 0.297±0.003 Aa Vc 组 Vc group 0.294±0.014 Aa 0.296±0.006 Aa 对照组 Control 0.306±0.002 Aa 0.299±0.006 Aa Vc 组 Vc group 0.314±0.004 Aa 0.305±0.002 Aa 对照组 Control 0.403±0.024 Ba 0.605±0.008 Ba Vc 组 Vc group 0.513±0.016 Bb 0.676±0.027 Bb 对照组 Control 0.441±0.013 Ca 0.662±0.019 Ca Vc 组 Vc group 0.673±0.036 Cb 0.709±0.019 Cb 对照组 Control 0.283±0.003 Aa 0.697±0.003 Da Vc 组 Vc group 0.294±0.014 Aa 0.726±0.006 Db 对照组 Control 0.507±0.025 Da 0.782±0.008 Ea Vc 组 Vc group 0.674±0.012 Db 0.813±0.007 Eb 3 讨论 3.1 Vc 对圆斑星鲽早期胚胎发育的影响本研究显示, 不同浓度 Vc 均可以缩短圆斑星鲽的出膜时间在 Vc 浓度为 25~30 mg/l 时, 出膜时间比对照组提前 10 h, 表明 Vc 浸泡对圆斑星鲽的胚胎发育有促进作用 Vc 是鱼类的必需营养元素, 为机体细胞提供营养, 有研究报道, 一定量的 Vc 不仅可

5 100 渔业科学进展第 39 卷以保护卵子避免氧化损伤, 还能对早期发育中的卵内物质和能量代谢起到调控作用, 进而促进胚胎发育 (Terova et al, 2008) 另外, 不同浓度 Vc 也可对圆斑星鲽的孵化率和仔鱼的成活率造成不同的影响, 在 V C 为 25 mg/l 时, 孵化率出膜率和成活率最高, 孵化率和成活率比对照组分别高 29.4% 和 14.8%, 仔鱼的全长和体重增重量最显著, 熊铧龙等 (2014) 研究发现,30 mg/l 的 Vc 可显著提高晋安银鲫的孵化率成活率及卵黄囊仔稚鱼的生长速度, 与本实验结果相吻合不同的物种对同一营养物质的利用率和机制也不同 V C 对圆斑星鲽早期发育的影响至今还未见报道, 本研究为 V C 在圆斑星鲽孵化上的运用提供了理论依据 Vc 除了作为营养物质为机体提供营养, 还是鱼体内的抗氧化剂, 具有清除有害自由基的作用, 使胚胎免受氧化损伤, 保护卵膜 (Brown et al, 2001; Menezes et al, 2006) 体外实验表明,Vc 具有提高机体免疫力的作用 ( 李桂峰等, 2005) 水体中的 Vc 进入机体, 提高胚胎及仔鱼的免疫力, 减少病害的发生, 从而提高圆斑星鲽仔鱼的出膜率和成活率当 Vc 浓度高于 30 mg/l 时, 圆斑星鲽仔鱼的出膜时间孵化率和成活率均受到抑制, 原因可能是 Vc 水溶液呈酸性, 当 Vc 浓度过高时, 水体的 ph 降低, 不适宜胚胎的正常发育因此, 低于 30 mg/l 的 Vc 浸泡可促进圆斑星鲽的早期发育 Vc 组仔鱼的全长和体重显著高于对照组, 其原因一方面是 Vc 作为营养物质促进了其生长发育, 另一方面 Vc 起抗氧化作用, 使机体损伤率降低, 发育过程中的正常代谢得到保障 3.2 Vc 对圆斑星鲽早期发育过程中总蛋白的影响在圆斑星鲽胚胎期和卵黄囊期, 卵黄物质分解代谢, 为胚胎提供能量, 同时, 也为机体组织器官的形成提供原料在圆斑星鲽胚胎及早期发育过程中, 总蛋白含量整体呈下降趋势受精后至原肠中期下降的幅度较小, 因为受精卵发育至原肠中期胚胎主要进行细胞分裂和迁移, 不需要消耗大量能量从晶体期至出膜期, 细胞大量增殖分化, 胚胎组织逐渐形成, 出膜时脱落的卵膜带走部分蛋白质 (Selman et al, 2000), 因此, 晶体期至出膜期总蛋白含量下降幅度增大出膜后仔鱼体内尚未摄入食物, 会大量分解蛋白质以维持正常生命活动, 所以总蛋白含量持续下降混合营养期, 仔鱼虽然开口摄食, 但摄食量很少, 总蛋白含量仍下降本研究用 25 mg/l 的 Vc 浸泡圆斑星鲽胚胎及卵黄囊仔鱼表明, 总蛋白含量呈下降趋势且下降幅度显著小于对照组, 表明 Vc 对机体发育起到积极的促进作用王文辉等 (2006) 在饲料中添加 Vc 饲喂黄颡鱼 (Pelteobagrus fulvidraco), 发现 Vc 可提高黄颡鱼血浆总蛋白含量本研究对圆斑星鲽胚胎及卵黄囊仔鱼进行 Vc 浸泡, 在混合营养期和外源营养期,25 mg /L 的 Vc 使圆斑星鲽仔鱼蛋白含量分别高于对照组 61.14% 和 68.14%, 说明对于开口摄食的仔鱼 Vc 能促进其摄食, 加速蛋白质的沉积, 但机体具体的工作机制还有待进一步研究 3.3 Vc 对圆斑星鲽早期发育过程中消化酶的影响仔稚鱼消化酶活性变化有两个重要时期, 一是未开口向开口摄食的转变, 二是开口后混合营养期向外源营养期的转变 (Cousin et al, 1987) 在圆斑星鲽胚胎发育过程中, 在内源营养期和混合营养期均没有检测到胃蛋白酶活性, 在外源营养期开始检测到微弱胃蛋白酶活性初孵仔鱼中胰蛋白酶活性最高, 混合营养期降低鱼类在孵化 6 d 后胃区才稍膨大发育 ( 王思锋等, 2006), 胃蛋白酶属于酸性蛋白酶, 在仔鱼发育期形成较晚, 而碱性蛋白酶如胰蛋白酶在仔鱼发育早期阶段就具有较高的活性因此, 在仔鱼发育早期, 胰蛋白酶可以补偿酸性蛋白酶缺乏的影响, 这一结论已在无胃鱼类和金头鲷 (Sparus aurata) (Moyano et al, 1996) 中验证在开口摄食前, 圆斑星鲽碱性蛋白酶如胰蛋白酶的活性较高, 这与对半滑舌鳎 (Cynoglossus semilaevis) 仔鱼的结果一致 ( 常青等, 2005) 在仔鱼的胃腺未形成时, 对摄入食物的消化吸收主要依赖胰蛋白酶类, 因此, 在仔鱼早期发育过程中, 胰蛋白酶对营养物质的消化吸收起到重要作用 (Suzuki et al, 2002) 在混合营养期出现淀粉酶活性并在外源营养期升高, 表明圆斑星鲽的仔鱼在由混合性营养向外源性营养转变时, 已具备消化多糖类食物的能力在胚胎发育过程中, 卵黄中的营养物质被分解用于维持代谢和提供能量, 首先分解代谢的是蛋白质, 其次是脂质 (Gunasekerar et al, 1999) 在圆斑星鲽初孵仔鱼中, 检测到脂肪酶活性呈上升状态, 说明从内源营养期仔鱼生长发育加快, 需要分解大量脂质维持生命活动初孵仔鱼开口摄食前机体处于饥饿状态, 此时, 脂质被大量分解提供能量以维持其基础代谢对于混合营养期和外源营养期的卵黄囊仔鱼, 脂肪酶活性仍呈上升趋势, 说明仔鱼出膜后发育代谢所需能源主要由脂类提供, 这与在单斑重牙鲷 (Diplodus sargus kotschyi) (Cejasa et al, 2004) 仔鱼发育过程一致胚胎发育是生命过程中最脆弱的环节, 发育质量好坏决定个体能否存活生理代谢旺盛的胚胎期易产

6 第 2 期王贞杰等 : 维生素 C 对圆斑星鲽早期发育的影响 101 生大量氧化自由基, 造成胚胎氧化损伤 Vc 可有效清除自由基使胚胎免受氧化损伤, 尤其是保护卵膜完整, 提高卵的质量 (Bromage et al, 1992) 在鲈鱼 (Lateolabrax japonicas) 和鲷鱼 (Pagrosomus major) 的成熟卵中 Vc 积累较多后, 能有效促进鱼的早期发育 (Terova et al, 1998) 当 Vc 在受精卵中积累到一定量时, 就可以对卵内物质与能量代谢起调控作用六须鲶鱼 (Silurus glanis) 卵黄囊仔鱼进行水体添加 Vc 浸泡,Vc 可有效促进卵黄物质被机体分解吸收, 使仔鱼开口时间提前 ( 季延滨等, 2007), 说明 Vc 在六须鲶鱼胚胎发育期进入卵黄囊仔鱼机体, 诱导激活参与代谢卵黄物质的消化酶加速分解卵黄物质, 同时, 对鱼类其他调节酶的合成与分泌起调节作用使机体达到新的代谢模式, 从而适应变化的营养环境 ( 王文辉等, 2006) 本研究采用 25 mg/l 的 Vc 对圆斑星鲽卵黄囊仔鱼进行浸泡, 结果显示, 同一发育时期的蛋白酶脂肪酶及淀粉酶活性相比对照组均显著提高, 说明在卵黄囊仔鱼期 Vc 能有效提高消化酶活性促进卵黄物质的分解, 从而为圆斑星鲽早期发育提供能源 3.4 圆斑星鲽早期发育过程中 LPL 和 HL 活性变化特点脂质不仅是鱼类的能量来源, 也是必需的营养物质对于仔稚鱼, 脂肪的代谢直接关系到其能否存活 (Keembiyehetty et al, 1998) LPL 和 HL( 合称总脂酶 ) 均是参与脂质降解的关键酶,LPL 是甘油三酯水解的限速酶,HL 是血液循环内源性甘油三酯代谢的关键酶姚俊杰 (2006) 对罗氏沼虾 (Macrobrachium rosenbergii) 的研究表明, 胚胎发育过程中原肠期机体调控机制由母型调控转变为合子型调控, 同时, 这一时期自身的 mrna 也开始合成本研究显示, 在圆斑星鲽的成熟卵可以检测到脂酶活力, 说明脂酶合成源于母体, 成熟卵中的脂酶为最初胚胎发育提供了营养物质保障在胚胎发育过程中,LPL 活性呈上升趋势, 在原肠期其活性显著提高, 说明原肠期合子基因开始表达合成水解酶这与内源营养期器官形成分化仔鱼破膜孵出细胞增殖组织构建大量耗能有关 (Selman et al, 2000) 这一现象与淡水鱼类相一致(Cejas et al, 2004) 在混合营养期,LPL 活性下降原因可能与混合营养期的仔鱼摄食及消化器官发育均不完善, 摄食和消化能力较弱有关 ( 姚俊杰等, 2013; 蒋左玉等, 2015), 此时,LPL 缺乏底物, 饥饿状态的仔鱼使 LPL mrna 下调, 导致 LPL 活力降低这与朱俊华等 (2014) 对瓯江彩鲤 (Cyprinus carpio var. color) 的研究相一致外源营养期后, 摄食及消化能力加强, 说明食物可诱导 LPL mrna 表达, 使 LPL 活性升高 HL 活性在圆斑星鲽早期发育中呈上升趋势, 在外源营养期活性最高可能与外源营养期仔鱼的器官及血液循环系统趋于完善, 外界摄入的食物为 HL 提供底物有关 ( 梁正其等, 2013) 其具体作用机制还需进一步研究本研究使用 25 mg/l 的 Vc 浸泡圆斑星鲽胚胎, 测得胚胎的 LPL 和 HL 比活力变化趋势与对照组一致, 但其活性均显著高于对照组结果表明, 适宜水平的 Vc 浸泡可以促进鱼体内脂质的代谢可能原因有两个 : 一是 Vc 在脂质代谢中起到了抗氧化作用, 使 V E 和 β- 胡萝卜素水平较高, 从而使脂肪的氧化链被阻断, 避免脂肪酸过氧化细胞膜受损, 使机体免疫功能提高 (Chien et al, 2001) 同时, 机体中高水平的 Vc 可提供自由电子使谷胱甘肽由氧化型转变为还原型, 使酶系统的活性巯基得到保护, 从而超氧化物歧化酶活性提高 (Luo et al, 2003), 使脂质膜避免过氧化二是 Vc 与圆斑星鲽卵黄囊仔鱼体内肉碱合成有关, 间接加速了脂质代谢 ( 颉志刚等, 2003), 进而诱导 LPL 和 HL 的合成分泌, 保证仔鱼对脂质的分解利用顺利进行表明适宜水平的 Vc 可促进脂质代谢 4 结论低于 30 mg/l 的 Vc 浸泡可促进圆斑星鲽的早期发育,25 mg/l 的 Vc 浸泡下, 圆斑星鲽的孵化率出膜率和成活率最高, 仔鱼的全长和体重增加最显著 25 mg/l 的 Vc 能显著提高圆斑星鲽仔鱼胃蛋白酶胰蛋白酶淀粉酶和脂肪酶活性, 并可以促进蛋白质在鱼体内的沉积适宜水平的 Vc 对圆斑星鲽早期机体内脂质的维持和代谢平衡具有重要作用参考文献 Bromage N, Jones J, Randall C, et al. Broodstock management, fecundity egg quality and timing of egg production in rainbow throut (Oncorynchus mykiss). Aquaculture, 1992, 100(1 3): Brown M, Lavens P. Critical review of the concentration, interactions with other nutrients, and transfer of ascorbic acid in algae, crustaceans and fish. BocaRaton: CRC Press, 2001: Cejas JR, Almansa E, Jérez S, et al. Changes in lipid class and fatty acid composition during development in white seabream (Diplodus sargus) eggs and larvae. Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology, 2004, 139(2): Chang Q, Zhang XM, Chen SQ, et al. Variations in digestive

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中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 9 期 2015 年 5 月 1339 非酒精性脂肪性肝病 (nonalcoholic fatty liver disease,nafld) 是一种与胰岛素抵抗遗

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 9 期 2015 年 5 月 1339 非酒精性脂肪性肝病 (nonalcoholic fatty liver disease,nafld) 是一种与胰岛素抵抗遗 1338 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 9 期 2015 年 5 月九味肝泰胶囊对高脂饮食诱导大鼠非酒精性脂肪肝的治疗作用陈菲 1 2,, 艾国 3, 盛柳青 1, 麻佳蕾 1, 黄正明 1. 金华职业技术学院医学院, 浙江金华