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1 测定生物样品中的浴盐 ( 吡咯戊酮类似物 ) 应用简报 法医学 作者 Joe Crifasi 圣路易斯大学法医毒理学实验室美国密苏里州圣路易斯 Ron Honnold 安捷伦科技有限公司美国加利福尼亚州圣克拉拉 Robert Kubas 安捷伦科技有限公司美国伊利诺伊州伍德戴尔 摘要 使用电子轰击 - 串联质谱在 Agilent 四极杆离子阱上开发了一种方法, 可对生物样品中的吡咯戊酮类似物进行鉴定和定量 在 5-1 µg/ml 的工作范围内显示了对吡咯戊酮类似物的方法线性 前言 -( 吡咯烷 -1- 基 ) 苯基 -1- 戊酮 (PVP) 亚甲基二氧吡咯戊酮 (MDPV) 和萘基吡咯戊酮 (Naphyrone) 是作为浴盐销售的策划药物 这些药物是吡咯戊酮的类似物 它们由于被当作诸如可卡因和 MDMA 等药物的合法替代品而被滥用 这些化合物的使用已被注意到能够导致心动过速 高血压 刺激 极度恐慌发作和兴奋性精神错乱 本应用简报描述了对全血血清 玻璃体液 尿液或组织匀浆标本的分析方法 分析中需要样品的最少量为 3 ml 使用液液萃取法将 -( 吡咯烷 -1- 基 ) 苯基 -1- 戊酮 (PVP) 吡咯戊酮 MDPV 和 Naphyrone 以及内标罗哌卡因从碱化样品萃取到有机溶剂中 使用乙酸乙酯复溶萃取物, 然后进样到四极杆离子阱气相色谱 - 串联质谱中进行分析

2 实验部分 标准品和试剂 试剂 1- 氯丁烷 (Nanograde) 乙酸乙酯 浓氨水 (NH OH) 碳酸钠/ 碳酸氢钠缓冲液 ph = 9.8( 将 1 g 碳酸钠与 5 g 碳酸氢钠混合于 1 ml 去离子水中, 调节 ph 至 9.8) 在室温下的稳定期为 1 年 浓盐酸 甲醇 (HPLC 级 ).1% 盐酸的甲醇溶液 ( 将.1 ml 浓盐酸稀释于 1 ml 甲醇中 在室温下的稳定期为 1 年 ) MDPV Naphyrone 和吡咯戊酮储备标准品 (1 mg/ml 的甲醇溶液 ) 购自 Cerilliant( 储存于冰箱中直至过期 ) PVP 储备标准品购自 Cayman Chemical(1 mg 瓶装 ), 将所容物转移至 1 ml 烧瓶中, 用甲醇定容 在冰箱中的稳定期为 年 罗哌卡因储备标准品购自 Sigma (R83), 使用甲醇将 11.9 mg 标准品稀释至 1 ml 在冰箱中的稳定期为 年 MDPV QC 储备标准品购自 Cayman Chemical,5 µl 乙酸甲酯中含 5 mg 标准品 ( 在甲醇中稀释至 5 ml) 储存于冰箱中可稳定 1 年 Naphyrone QC 储备标准品 (1 mg/ml 的甲醇溶液 ) 购自 Cerilliant 储存于冰箱中直至过期 吡咯戊酮 QC 储备标准品购自 Cayman Chemical(1 µl 甲醇中含 5 mg 标准品 ), 将所容物转移至 5 ml 烧瓶中, 用甲醇定容 在冰箱中的稳定期为 年 PVP QC 储备标准品购自 Cayman Chemical,1 mg 瓶装 ( 将所容物转移至 1 ml 烧瓶中, 用甲醇定容 在冰箱中的稳定期为 年 ) 对照和校准标准品阴性对照 来自美国红十字会的不含药物的全血或收集的空白尿液 基质必须在使用前进行检验并判定不含药物 当储存于 - ºC 时, 稳定期为 1 年 低对照 (15 ng/ml) 根据需要在血液或尿液中现配, 将 5 µl QC 中间标准品加至 3 ml 空白血液或尿液中可得 高对照 (5 ng/ml) 根据需要在血液或尿液中现配, 将 1 µl QC 中间标准品加至 3 ml 空白血液或尿液中可得 样品制备使用如下工作标准品和不含药物的血液或尿液制作校准曲线 : 5 ng/ml 1 µl 标准品和 3 ml 血液 / 尿液 1 ng/ml µl 标准品和 3 ml 血液 / 尿液 5 ng/ml 5 µl 标准品和 3 ml 血液 / 尿液 5 ng/ml 1 µl 标准品和 3 ml 血液 / 尿液 1 ng/ml µl 标准品和 3 ml 血液 / 尿液用移液管将 3 ml 样品 阴性和阳性对照移取到带标记的 1 1 mm 培养管内, 加入 5 µl 工作内标物和 ml ph 9.8 的碳酸盐缓冲液, 向各管内加入两滴 NH OH, 轻轻涡旋至均匀 向各管内加入 7. ml 1- 氯丁烷, 加盖, 然后旋转所有管至少 1 min 在 3, RPM 下将所有管离心 1 min 将有机层( 顶层 ) 移至干净的带标记 1 1 mm 培养管内 加入两滴.1% 的盐酸甲醇溶液, 在 37 ºC 下用氮气蒸发至干燥 将用 µl 乙酸乙酯复溶干燥的萃取物转移至具有内插管的自动进样器样品瓶, 加盖, 然后转到气相色谱 - 串联质谱中进行分析 工作标准品 MDPV Naphyrone 吡咯戊酮 PVP 校准中间标准品 15 µg/ml ( 将 15 µl 各储备标准品加入 1 ml 烧瓶中, 分别用甲醇定容至 1 ml) MDPV Naphyrone 吡咯戊酮 PVP QC 中间标准品 15 µg/ml ( 将 15 µl 各储备标准品加入 1 ml 烧瓶中, 分别用甲醇定容至 1 ml) 工作内标物罗哌卡因 15 µg/ml( 将 15 µl 储备液加入 1 ml 烧瓶中, 分别用甲醇定容至 1 ml) 在 -8 ºC 下储存 稳定期为 1 年

3 气相质谱离子阱分析 色谱柱 DB-5MS 或同等 5 m mm,.33 µm 色谱柱 进样体积.5 µl 进样模式 不分流 进样口温度 5 C 载气 氦气 柱流速 1.3 ml/min 柱箱程序 7 ºC; 保持 1 min 以 5 ºC/min 的速率升至 31 ºC; 保持. min 四极杆离子阱质谱条件 调谐 自动调谐 采集 EI-MS/MS 5 da 溶剂延迟 7. min 质谱温度 离子阱 1 C, 多管 5 C, 传输线 31 C 化合物 保留时间 (min) 母离子 定量离子 确认离子 激发电压 灯丝 倍增器 靶标 PVP /97.5 V 5 µa +5 V 3, 吡咯戊酮 /97.5 V 5 µa +5 V 3, MDPV /97.5 V 5 µa +5 V 3, 罗哌卡因内标 /5.5 V 5 µa +5 V 3, Naphyrone /97.5 V 5 µa +5 V 3, 结果与讨论 下列标准用于确定吡咯戊酮类似物是否存在以及其含量 色谱分析结果可被接受 ( 峰分辨率 峰对称性 不存在交叉污染 ) 存在可用来定量和定性的选择性离子 来自测试标本的假定吡咯戊酮类似物的保留时间大约在最近一次校准保留时间的 ± % 以内 使用类似物和内标物定量离子的面积进行定量分析 通过比较未知物和对照物的相对响应, 并比较各校准物浓度的相对响应而产生的校准曲线来实现定量 阳性对照必须处于其靶标范围内, 阴性对照中不能有吡咯戊酮类似物存在 必须观察到适当的 m/z 离子 测试标本和阳性对照必须在吡咯戊酮 MDPV PVP Naphyrone 和罗哌卡因内标各自的保留时间处表现出由 1 m/z 的电离所产生的 m/z 离子 使用双离子比例法进行鉴定 对于吡咯戊酮 PVP MDPV 和 Naphyrone, 将 m/z 离子峰 1 和 97 的丰度除以基础离子峰 8 的丰度 计算得出的离子比例处于校准确定的靶标值的 % 以内 线性 5 1, ng/ml 检测限 (LOD) ng/ml 定量限 (LOQ) 5 ng/ml 干扰物未发现 3

4 PVP 校准 _. R =.9975 _ 方法限 1. & 8., 1. & 1., 1. & ( -1- )-1- (PVP) 1 Ratio = 3.8 (8.%) ng/ml Ratio = 3. (8.8%) (min) (min) 1 (IS) (min) 1. & 8., 1. & 1., 1. & 5. 1 Ratio = 51.1 (17.%) 1. Ratio = 3. (99.9%) (min) 批分析结果 注意异常值及低于校准值的标签

5 吡咯戊酮校准 _. R = _ ng/ml 标准品 1. & 8., 1. & 1., 1. & Ratio =.1 (1.%) 538. ng/ml 1. Ratio = 9.8 (88.%) (min) (min) 1 (IS) (min) 1. & 8., 1. & 98., 1. & 5. 1 Ratio = 51.1 (17.%) 1. Ratio = 3. (99.9%) (min) 批分析结果 注意异常值及低于校准值的标签 5

6 MDPV 校准 _.5 R = _ ng/ml 标准品 1. & 8., 1. & 1.1, 1. & (MDPV) ng/ml Ratio =. (97.9%) 1. Ratio = 31.9 (95.8%) (min) (min) 1 (IS) (min) 1. & 8., 1. & 98., 1. & 5. 1 Ratio = 51.1 (17.%) 1. Ratio = 3. (99.9%) (min) 批分析结果 注意异常值及低于校准值的标签

7 Naphyrone 校准 _. R = _ ng/ml 标准品 ( -1- )-1- (PVP) ng/ml (min) 1 (IS) (min) 1. & 8., 1. & 1., 1. & 9.9 Ratio = 3.8 (8.%) Ratio = 3. (8.8%) (min) 1. & 8., 1. & 1., 1. & 5. 1 Ratio = 51.1 (17.%) 1. Ratio = 3. (99.9%) (min) 批分析结果 注意异常值及低于校准值的标签 7

8 结论 本应用简报展示了一种使用罗哌卡因作为内标物来测定生物样品中吡咯戊酮类似物的灵敏且稳定的选择性方法 对于吡咯戊酮类似物的分析, 气相色谱四极杆离子阱串联质谱的优势不可低估 气相色谱四极杆离子阱串联质谱在减少样品基质干扰 改善信噪比及其兼具高选择性和灵敏性方面, 为吡咯戊酮类似物的分析提供了可信度更高的解决方案 气相色谱四极杆离子阱串联质谱分析具有减少假阳性和假阴性的潜力, 还能在所得的结果中实现更高的可信度 使用上文所列的优化方法, 可将快速 靶向的气相色谱 - 串联质谱方法用于解决当前法医实验室所面临的吡咯戊酮类似物分析难题 联合使用阳性对照与阴性对照可确保在未知生物样品中进行精确定量并排除假阴性 在多种样品基质中均观察到了针对吡咯戊酮类似物低至 ng/ml 的检测限 参考文献 1. Baselt, R.C., Cravey, RH, Disposition of Toxic Dugs and Chemicals in MAN, Seventh Edition, Biomedical Publications, Inc., Chicago, IL... Moffat, A.C., Clarke s Isolation and Identification of Drugs, Third Edition, Volume, The Pharmaceutical Press, London,. 3. Yohannan, J.C., Bonszenko J.S., The Characterization of 3,-Methylenedioxypyrovalerone (MDPV), Microgram Journal, Volume 7, Number 1, March 1.. Brandt, S.D., Sumnall, H.R., Measham, f., Cole, J., Analyses of Second-Generation Legal Highs in the UK: Initial Findings, Drug Testing and Analysis, 1, Volume, pp Saint Louis University Forensic Toxicology-Standard Operation Procedures: Blood Drug Screen by GCNPD. 致谢 感谢圣路易斯大学法医毒理学实验室为本研究提供数据 更多信息 这些数据仅代表典型结果 有关我们的产品和服务的详细信息, 请访问我们的网站 : 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供 展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任 本资料中的信息 说明和指标如有变更, 恕不另行通知 安捷伦科技 ( 中国 ) 有限公司,1 中国印制 1 年 1 月 日 CHCN

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