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1 色谱讲堂 ( 二十三 ) 色谱柱在中国药典二部的应用 广州太玮生物科技有限公司市场 技术部 Marketing@techway-gz.com / (2013 年 10 月 )

2 色谱讲堂 ( 二十三 ) 药物的分类 出于不同目的, 药物的分类方法有很多种! 结合 HPLC 分析的特点, 我们对药物的分类如下 : 酸性药物及其盐类 色谱讲堂( 十六 ) 讨论碱性药物及其盐类 色谱讲堂( 十八 ) 讨论杂环类药物中性药物陆续推出 酸 碱两性药物 本期讨论

3 色谱讲堂 ( 二十三 ) 结构特点 : 结构中同时含有酸性基团和碱性基团 典型药物 喹诺酮类 酸性基团 碱性基团 碱性基团 碱性基团 酸性基团 酸性基团 环丙沙星 诺氟沙星 氧丙沙星

4 色谱讲堂 ( 二十三 ) 常见问题 : 拖尾分离度不够系统适应性试验不符合要求, 保留时间不符合要求色谱柱寿命短 对色谱柱要求较高 : 游离硅羟基活度太大, 峰形不好, 保留时间长游离硅羟基活度太少, 分离度不够推荐使用 TFA 1.2~2.2 色谱柱 注 :TFA 为 USP 色谱柱评价体系重要参数, 详细介绍见 色谱讲堂 12

5 色谱讲堂 ( 二十三 ) 案例 1: 环丙沙星 含量测定方法依据 : 中国药典二部色谱柱 :JADE-PAK ODS 5um mm( 货号 : ) 流动相 :0.025M 磷酸溶液 ( 用三乙胺调节 ph3.0) - 乙腈 (87:13) 流速 :1.0ml/min 波长 :278nm 柱温 : 室温进样量 :20ul 系统适应性试验图谱氧氟沙星 5ug/ml 环丙沙星 0.1mg/ml 要求 : 环丙沙星约 12min 注 : 缺杂质 I

6 色谱讲堂 ( 二十三 ) 案例 1: 环丙沙星 相关物质检查方法依据 : 中国药典二部色谱柱 :JADE-PAK TM ODS 5um mm( 货号 : ) 流动相 :A-0.025M 磷酸溶液 ( 用三乙胺调节 ph3.0)- 乙腈 (87:13) 流速 :1.0ml/min 波长 :278nm 柱温 : 室温进样量 :20ul 供试品图谱 (0.15mg/ml) 时间 (min) A 乙腈

7 案例 2: 诺氟沙星 含量测定方法依据 : 中国药典二部色谱柱 :JADE-PAK ODS 5um mm( 货号 : ) 流动相 :0.025M 磷酸溶液 ( 用三乙胺调节 ph3.0)- 乙腈 (87:13) 流速 :1.2ml/min 波长 :278nm 柱温 : 室温进样量 :20ul 色谱讲堂 ( 二十三 ) 系统适应性试验图谱诺氟沙星 15ug/ml 环丙沙星 3ug/ml 依诺沙星 3ug/ml 要求 : 诺氟沙星约 9min R>2.0

8 色谱讲堂 ( 二十三 ) 讨论 : 环丙沙星和诺氟沙星 1 之前我们已经讨论过, 酸性药物适用酸性条件流动相条件, 碱性药物也更适合于含盐条件的酸性流动相条件, 并且添加三乙胺可以显著改善峰形,( 详见 讲堂 16 和 讲堂 18 ) 因此, 以环丙沙星和诺氟沙星为代表的酸碱两性药物, 选择 25mM 磷酸溶液 ( 用三乙胺调节 ph3.0)- 乙腈 (87:13) 作为流动相, 兼顾酸性基团和碱性基团 2 中国药典二部 2010 版, 对环丙沙星和诺氟沙星的保留时间有明确规定, 实际上对色谱柱有更高的要求 JADE- PAK ODS 5u mm 色谱柱可以满足标准的规定 3 有关物质检查项, 使用梯度程序, 原则上, 主峰必须在梯度程序的第一阶段 等度程序时完全出来

9 案例 3: 氧氟沙星 含量测定方法依据 : 中国药典二部色谱柱 :JADE-PAK ODS 5um mm( 货号 : ) 流动相 : 醋酸铵高氯酸钠溶液 ( 取醋酸铵 4.0g 和高氯酸钠 7.0 g, 加水 1300mL 使溶解, 用磷酸调节 ph2.2)- 乙腈 (85 :15) 流速 :1.0ml/min 波长 :294nm 柱温 : 室温进样量 :10ul 色谱讲堂 ( 二十三 ) 系统适应性试验图谱 注 : 建议采用 JADE-PAK ODS 5um mm( 货号 : ) 色谱柱, 以使保留时间为约 15min, 完全满足药典要求

10 色谱讲堂 ( 二十三 ) 案例 3: 氧氟沙星 讨论 : 1 氧氟沙星流动相中添加高氯酸钠; 高氯酸钠作为离子对试剂, 可以改善碱性化合物的峰形, 并几乎不影响化合物的疏水性 2 以上图谱是有某药检所化学室提供, 实际上, 中国药典 2010 版同样对氧氟沙星的保留时间有要求, 图谱中使用 mm JADE-PAK ODS 色谱柱, 氧氟沙星保留时间约 25min, 按照保留时间与色谱柱长度成正比关系, 我们推荐使用 mm JADE-PAK ODS 色谱柱, 可以预测保留时间完全符合药典要求 :15min

11 盐酸左氧氟沙星光学异构体的检查 色谱讲堂 ( 二十三 ) 方法依据 : 中国药典二部色谱柱 :JADE-PAK ODS 5um mm( 货号 : ) 流动相 : A-B(82:18) A: 硫酸铜 1.0g+D- 苯丙氨酸 1.32g, 加水 1000ml, 用氢氧化钠调节 ph3.5 B: 甲醇流速 :1.0ml/min 波长 :294nm 柱温 :40 进样量 :20ul 样品制备 : 按中国药典方法

12 盐酸左氧氟沙星光学异构体的检查 色谱讲堂 ( 二十三 ) 讨论 : 1 这是手性流动相法拆分手性化合物的代表性案例 大多数药物的手性异构体的检测使用手性固定相色谱柱, 价格昂贵 2 使用过手性流动相的色谱柱, 不建议再用于其他常规方法的检测, 因此, 我们建议, 用于检测盐酸左氧氟沙星光学异构体项目的 JADE-PAK ODS 色谱柱要专柱专用

13 非典型两性化合物 安乃近 色谱讲堂 ( 二十三 ) 安乃近片片有关物质检查方法依据 : 中国药典二部色谱柱 :JADE-PAK ODS 5um mm( 货号 : ) 流动相 : A:B(75:25) A: 磷酸盐缓冲液 ( 取磷酸二氢钠 6.0g, 加水溶解并稀释至 1000ml, 加三乙胺 1ml, 用氢氧化钠调节 ph7.0) B: 甲醇流速 :1.0ml/min 波长 :254nm 柱温 : 室温进样量 :5ul 弱碱性基团 强酸性基团共轭碱

14 非典型两性化合物 安乃近 色谱讲堂 ( 二十三 )

15 非典型两性化合物 安乃近 色谱讲堂 ( 二十三 ) 讨论 : 1 安乃近结构中带有磺酸基, 此类结构更适合在中性缓冲盐条件分析 ; 弱碱性基团, 在中性缓冲盐条件下, 碱性受抑制 ; 标准使用的 ph7.0 的缓冲盐, 可谓一举两得, 是极富心思的设计! 2 细节上, 如果直接使用磷酸氢二钠代替磷酸二氢钠, 应该可以简化流动相的配制, 无需再使用氢氧化钠 3 下一个例子, 叶酸, 也存在类似问题

16 非典型两性化合物 叶酸 色谱讲堂 ( 二十三 ) 方法依据 : 中国药典二部色谱柱 :JADE-PAK ODS 5um mm( 货号 : ) 流动相 : 磷酸盐缓冲液 ( 取磷酸二氢钾 6.8g 与 0.1M 氢氧化钾溶液 70ml, 加水约 800ml 使溶解, 调节 ph6.3, 加甲醇 80ml, 用水稀释至刻度 ) 流速 :1.5ml/min 波长 :254nm 柱温 : 室温进样量 :10ul 样品制备 : 按中国药典方法 碱性基团 酸性基团

17 色谱讲堂 ( 二十三 ) 总结 以喹诺酮类药物为代表的酸 碱两性药物, 其实并未如想象般的给 HPLC 分析带来更多问题 在 讲堂 22, 我们已经讨论过, 不管是酸, 还是碱, 在流动相 ph 选择方面, 都有灵活的选择, 因而, 设计兼顾酸 碱两种基团化合物的流动相, 也不是一件困难的事情 中国药典 的方法, 大多数都是非常合理的设计 检测这类化合物, 色谱柱寿命更短, 这可能与流动相中添加三乙胺有很大关系, 这方面的讨论我们在之前的讲堂中多次提及 JADE-PAK 色谱柱, 可以满足酸 碱两性药物的分析要求, 符合药典标准的规定, 值得您去尝试!

18 促销信息 1 JADE-PAK 系列色谱柱优惠活动 : 购买色谱柱 2 支, 即可免费获赠价值 600 的 HPLC 仪器混合精度测试液 1 套 (2 支点击了解详细介绍 ), 或相等价值的其他实验室用品 每笔订单色谱柱还加送 反相色谱柱性能测试混合标准液 (SL0-300) 1 支 ( 价值 300) 活动截止期限 :2013 年 11 月 30 日 点击浏览 : 更多 JADE-PAK 色谱柱技术和应用资料 (

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20 上门技术讲座预约 主题 : 反相 HPLC 流动相的设计和优化 C18 色谱柱性能评价流动相的有机溶剂流动相的 ph 值流动相的缓冲盐梯度程序离子对试剂柱温的影响流动相设计的案例和建议 预约邮箱 :technical@techway-gz.com ( 标题注明讲座预约 ) 我们会安排资深技术专家, 在适当的时间上门与您交流!

21 欢迎加入 : 色谱技术交流群 : ( 色谱那些事 )

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23 色谱讲堂栏目公司简介 提供服务 : 免费技术咨询 免费分析方法开发 定期 色谱讲堂 上门的技术培训 ( 免费 收费 ) 上门的实操培训( 收费 ) 色谱技术交流群 : ( 色谱那些事 )

24 公司简介 提供的产品 : HPLC/UPLC 色谱柱 GC 色谱柱 薄层板等色谱耗材 ; SPE 前处理小柱 散装 SPE 填料 针头式过滤器和微孔滤膜等样品前处理耗品 ; 标准品和对照品 ; 样品瓶 顶空瓶 氘灯 进样针 密封垫 石墨卡套 衬管等色谱仪器配件 ; 移液器 电子天平 离心机等小型仪器设备 ; 培养基等

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