1 : UL AD169 Towne 23 0~5 Toledo [1~3] Toledo 74% 19 ORF DNA 3 UL / b AD DNA UL / b HCMV [4] 24 HCMV HCMV HCMV UL /
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- 栓艺 舒
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1 14 1 Vol14 No Life Science Research Feb UL133 1, 2, 1, 1, 1, 1,3* :, Toledo, AD (ORF) 19 HCMV, HCMV UL ORF Toledo Merlin, 23 UL133, UL133, Toledo Merlin 3 : G1 G2 G3 G2 G3 UL133 : ; ; ; ; UL133 : R : A : (2010) Polymorphism of Human Cytomegalovirus UL133 Gene in Low-passage Clinical Isolates FU Xing-xing 1 LI Li-ping 2 HUANG Chao-yang 1 LI Xiao-man 1 FANG Fang 1 CHEN Ze 1 3* 1 College of Life SciencesHunan Normal UniversityChangsha HunanChina2 Hunan Children s Hospital Changsha HunanChina3 Shanghai Institute of Biological ProductsShanghai China AbstractAfter a series of passages of human cytomegalovirus HCMVin laboratory the virulence of the virus will be changed Compared with the low-passage clinical straintoledothe high-passage AD169 strain lacks 19 open reading framesorf These 19 genes have been considered to be a set of genes most likely related to the HCMV pathogenicity The UL133 gene is among the 19 lost genes The polymorphism of the UL133 gene in 23 clinical isolates from infants was analyzedusing the Toledo and the Merlin strains as controls The results showed that the clinical isolatesincluding the Toledo and the Merlin strains could be divided into three groups G1G2 and G3according to sequence variability of the UL133 gene The isolates of either G2 or G3 could lead to congenital infection in human No significant relationship between UL133 genotypes and clinical outcome of infants was found in this study Key wordshuman cytomegaloviruspathogenicitygenotypinggenetic polymorphismul133 : : : TP Life Science Research ~015 : * Tel chenze2005@263net
2 1 : UL AD169 Towne 23 0~5 Toledo [1~3] Toledo 74% 19 ORF DNA 3 UL / b AD DNA UL / b HCMV [4] 24 HCMV HCMV HCMV UL / b [ 5 ~14] -80 UL PCR Toledo Merlin UL133 DNA 3 UL133 pfu 1 11 HEL Gene and primer UL133 F UL133 R Table 1 Primer sequence5-3 ATGGCGTTTGTGGGAGAA AGGAGATGTGCGCCAAGT UL133 PCR 1 PCR Omega 1 PCR Primers and the condition of the PCR Length of the product / bp 850 Condition of the PCR 94 /5min [94 /30s 54 /45s 72 /2min] /8min 14 DNA XX 1 PCR Invitrogen 1 Jinsite PCR 22 UL133 clustal X MEGA41 23 HCMV UL133 UL33 SMART UL133 UL133 ExPASy Prosite 771 ~777 bp 2 21 UL133 Toledo 938% ~967% Toledo Merlin UL133 Toledo ~ HCMV 3 CAA8 118~ CS 8 LD 3 2 HY 3 YY 2 YZ 2 Toledo Merlin 23 CD 2 SY 1 HYY 1 3 G1 G2 G3 G1
3 Toledo Merlin 716% 984%981% G / 23478% UL133 G2 UL133 N % 946%953% 12 G3 12/ ORF C % Toledo 956%946% 938%977% 3 W N S E 1 HCMV Fig1 The separation of the HCMV Clinical strains at various areas in Hunan province 2 UL133 UL133 HCMV CD=, XX=, CS=, LD=, HY=, YZ=, YY=, SY=, HYY= Fig2 The phylogenetic analysis of UL133 amino acid sequence The unrooted phylogenetic tree indicates the evolutionary relationship between clinical strains Different numbers represent different virus strains CD=ChangdeXX=XiangxiCS=ChangshaLD=LoudiHY=HenyangYZ=YongzhouYY=Yiyang SY=ShaoyangHYY=Yueyang
4 1 : UL133 Toledo Merlin CK2 CK2 PKC YY-1 HY-2 CS-2 LD-2 SY-1 CS-3 YY-2 CS-6 LD-3 CD-1 CS-8 XX-1 LD-1 CD-2 HYY-1 YZ-1 YZ-2 HY-3 CS-7 CS-4 CS-5 HY-1 MYR GLY MYR PKC PKC Toledo Merlin YY-1 HY-2 CS-2 LD-2 SY-1 CS-3 YY-2 CS-6 LD-3 CD-1 CK2 CS-8 XX-1 LD-1 CD-2 HYY-1 YZ-1 YZ-2 HY-3 CS-7 CS-4 CS-5 HY-1 Toledo Merlin YY-1 HY-2 CS-2 LD-2 SY-1 CS-3 YY-2 CS-6 LD-3 CD-1 MYR CS-8 XX-1 LD-1 CD-2 HYY-1 YZ-1 YZ-2 HY-3 CS-7 CS-4 CS-5 HY-1 3 UL133 (CK2: ; MYR: N- () ; PKC: C ; GLY: N- ) Fig3 Sequence alignment of UL133 amino acid sequences from clinical strains Acronyms represent the post-translational modification sites CK2casein kinasephosphorylation sitemyrn-14 acylation sitespkcprotein kinase C phosphorylation siteglyn-sugar glycosylation sites
5 UL133 ExPASy Prosite UL133 3 UL133 G1 Merlin Toledo A A 2 C CK2 3 N- MYR 1 C PKC G2 4 G1 G1 SY-1 4 A: ; B: CK2 CS-1 CS-3 YY-2 Fig4 The conservative domain prediction of the UL133 CK2 MYR CS-6 amino acid sequence LD-3 CD-1 CK2 LD- ATransmembrane segmentsblow-complexity segments C Inherent disorder of the region 3 CD-2 GLY MYR PKC G3 G1 CK2 HCMV UL133 ORF HYY-2 PKC SMART 5 Merlin Toledo UL133 4 HCMV UL133 3 TMHMM2 SEG Merlin Toledo UL133 G1 DisEMBL 23 G2 Coils2 478%G3 522% Toledo ~ Merlin UL133 35aa45~67aa 2 86~103aa 121~135aa 3 1~8aa UL133 ORF UL/b 3 159~209aa241~258aa 3 HCMV UL AD169 UL133 UL151 UL131 UL / b UL / UL151 UL151 HCMV UL133 HCMV B B C C UL133 ; C: UL135 ORF 5 UL134 ORF 3 [4] 5 5 UL/b UL133 UL151 5 Toledo UL / b UL133 UL134 UL151 Fig5 The relative position of UL133, UL134 and UL151 gene in UL / b region of the Toledo strain
6 1 : UL UL144 G2 3 LD-1 XX-1 CS-8 3 UL133 al CytomegalovirusCMV UL133 7 N- C- -encoded tumor necrosis factor-alpha and beta- CMV HCMV SY-1 LD-2 chemokine receptors in congenital CMV disease[j] SY-1 LD-2 CK2 Dis CK2 (References): [1] MOCARSKI E S Cytomegalovirus and their replication [C]// FIELDS B NHOWLEY P MKNIPE D M Fields Virology PhiladelphiaLippincott-Raven [2] HO M Epidemiology of cytomegalovirus infections[j] Rev Infect Dis199012S701 [3] MACCORMAC L PGRUNDY J E Two clinical isolates and the Toledo strain of cytomygalovirus contain endothelial cell tropic variants that are not present in the AD169Towneor Davis strains[j] J Med Virol [4] CHA T ATOM EKEMBLE G Wet al Human cytomegalovirus clinical isolates carry at least 19 genes not found in laboratory strains[j] J Virol [5] PIGNATELLI SMONTE PROSSINI Get al Genetic polymorphisms among human cytomegalovirus HCMV wildtype strains[j] Rev Med Virol [6] LURAIN N SK APELL K SHUANG D Det al Human cytom egalovirus UL144 open reading framesequence hytervariability in low-passage clinical isolates[j] J V irol [7] ARAV-BOGER RBATTAGLIA C ALAZZAROTTO Tet -encoded UL144truncated tumor necrosis factor receptorand outcome of congenital CMV infection[j] J Infect Dis [8] ARAV-BOGER RFOSTER C BZONG J Cet al Human cytomegalovirus-encoded alpha -chemokines exhibit high sequence variability in congenitally infected newborns[j] J Infect Dis [9] ARAV-BOGER RWILLOUGHBY R EPASS R Fet al Hayward GS 2002polymorphisms of the cytomegalovirus J Infect [10] TANAKA KNUMAZAKI KTSUTSUM I H Human cytomegalovirus genetic variability in strains isolated from Japanese children during [J] J Med Virol [11] MURAYAM A TTAKEGOSHI MTANUM A Jet al Analysis of human cytom egalovirus UL144 variability in lowpassage clinical isolates in Japan[J] Intervirology [12] PICONE OCOSTA J MCHAIX M Let al Human cytomegalovirus UL144 gene polym orphisms in congenital infections[j] J Clin Microbiol [13] PICONE OCOSTA J MV ILLE Yet al Genetic polymorphism of cytomegalovirus strains responsible of congenital infections[j] Pathol Biol [14] STANTON RWESTMORELAND DFOX J Det al Stability of human cytomegalovirus genotypes in persistently infected renal transplant recipients[j] J Med Virol
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