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1 2015 9, 22(5): Journal of Fishery Sciences of China 研究论文 DOI: /SP.J LC-PUFA 1, 2 1, 谢帝芝, 徐树德 3 1, 2, 陈芳, 王树启 1, 游翠红 1 1, 李远友 1., ; 2., ; 3., 摘要 : (Siganus canaliculatus) (long-chain polyunsaturated fatty acids, LC-PUFA), (FO) (, VO), 3 ( ) 8, Na + /K + -ATPase (NKA),, VO FO (P>0.05); FO n-3 LC-PUFA VO (P<0.05), VO n-6 LC-PUFA FO (P<0.05); VO NKA mrna FO (P<0.05), VO FO, (P<0.05), LC-PUFA NKA mrna (P<0.05), (P>0.05), 10,, n-3 LC-PUFA ;, n-6 LC-PUFA NKA : ; ; ; Na + /K + -ATPase; ; LC-PUFA 中图分类号 : S963 文献标志码 : A 文章编号 : (2015) Na + /K + -ATPase (NKA),, [1], NKA,, NKA mrna [2 7],, (arachidonic acid, ARA) [8], ARA (Sparus aurata) 鮨 (Centropristis striata)nka [9 10] NKA, LC-PUFA,, [11] Nano [12] LC-PUFA Caco-2,,, LC-PUFA,, (Salmo salar) [13] (Siganus canaliculatus) [14] (Pagrus major) [15] 收稿日期 : ; 修订日期 : 基金项目 : ( ); ( ); ( , ). 作者简介 : (1986 ),,,,. xiedizhi@qq.com 通信作者 :,,. yyli@stu.edu.cn

2 5 : LC-PUFA 951 LC-PUFA, LC-PUFA, LC-PUFA,, LC-PUFA [14] LC-PUFA, NKA,, ,, NKA, LC-PUFA,, g ( 32) 1, 3 :, , 3 2, 20,, (FO) (, VO), 350 g/kg 80 g/kg,, ( ),, , 24 h, 0.01% (2-phenoxyethanol),, ( 0.9 m, 1 m), 20, 6, 3, 1, 1/2, ; 2 (8:30, 16:30), ;, ; (22±3),, 3 3, ; 4 ( 12 ) 6, 80 C, [14, 16] 1.3, 0.01% (butylated hydroxytoluene, BHT) : 30 mg 500 μl ; Waterman (Waterman, ) ;, 25 ml/min 20 ml ;, 30 ml, (ca. 48%, Acros Organics, USA) GC-17A ( : VF-23 ms, 30 m 0.25 mm 0.25 μm) Sigma, Li [14, 16] 1.4 NKA NKA

3 ingredient Tab. 1 表 1 实验饲料配方及营养成分 Ingredients and composition of experimental diets FO dietary group % dry matter basis VO soy protein concentrate dextrin α- α-starch cellulose mineral mix vitamin mix choline chloride dicalcium phosphate C vitamin C L- L-lysine DL- DL-methionine betaine Cr 2 O fish oil canola oil perilla oil proximate composition dry matter crude protein crude lipid ash content : 1. : 100 g, 30 g, 8 g, 1 g, 30 g, 2 g, 1 g, 500 mg, 40 mg. 2. : A IU, D IU, E 60 g, K 3 6 g, B g, B 2 16 g, B 6 12 g, B mg, 88 g, 36 g, 2 g, 100 mg, 100 g, 200 g.. Note: 1. One kilogram of mineral mix containing the following: K 100 g, Mg 30 g, Fe 8 g, Mo 1 g, Zn 30 g, Mn 2 g, Co 1 g, I 500 mg, Se 40 mg. 2. One kilogram of vitamin mix containing the following: A IU, D IU, E 60 g, K 3 6 g, B g, B 2 16 g, B 6 12 g, B mg, nicotinic acid 88 g, calcium pantothenate 36 g, folic acid 2 g, biotin 100 mg, inositol 100 g, C-monophopholipid 200 g. Supplied by Chengyi Co., Ltd., China. 1.5 RNA PCR Trizol (Invitrogen, ) RNA RNA gdna cdna β-actin, PCR (Real- time PCR) NKA (C T ) [17] 3 NKA (GeneBank : EU107280) β-actin (EU ), 2 Real-time PCR : ddh 2 O 6 μl, SYBR Green Supermix 10 μl, (10 μmol/l) 1 μl, cdna(10 ng/μl) 2 μl : 94 5min; s, s, s, 45 ; 95 5 s, 65 1 min, s ± ( x ±SE), SPSS 17.0 (ANOVA), 0.05

4 5 : LC-PUFA ,, (P>0.05),, VO FO, (P<0.05), (P>0.05),, (P>0.05), 10 (P<0.05, 3) 表 2 关键酶基因实时定量 PCR 引物 Tab. 2 Primers for real-time PCR determination of the key enzyme genes expression transcript primer (5 3 ) sequence (5 3 ) GenBank accession no. NKA NKA S TGGTTCCCGCCATCTCTCT NKA A TCAGCAGGTCCATCGGGTAG EU β-actin BS CTTCCTTCCTCGGTATGGAGTC BA AGGTGGAGCAATGATCTTGATC EU Tab. 3 表 3 不同处理组黄斑蓝子鱼生长性能和常规生化指标 Growth performance and proximate composition of Siganus canaliculatus at different treatments treatment n=3; x ±SE; % %wet weight basis growth performance VO FO VO FO VO FO /g initial body weight, IBW 17.59± ± ± ± ± ±0.16 /g final body weight, FBW 34.37±0.58 b 37.98±2.24 b 43.94±0.85 a 46.99±0.90 a 42.79±2.38 a 46.28±0.92 a /% weight gain rate 95.38±8.51 c ±13.21 bc ±7.09 ab ±2.73 a ±4.40 ab ±2.89 a / (% d 1 ) special growth rate 1.16±0.04 c 1.33±0.11b c 1.54±0.13 ab 1.65±0.02 a 1.52±0.05 ab 1.69±0.02 a feed conversion ratio 1.74± ± ± ± ± ±0.07 proximate composition moisture 71.13±0.43 a 71.34±0.59 a 69.14±0.81 b 67.51±0.41 b 65.64±0.41 b 67.18±0.85 b crude protein 17.50±0.44 b 17.92±0.45 ab 17.95±0.42 ab 19.44±0.18 a 19.11±0.76 ab 20.16±0.59 a crude lipid 9.38±0.33 b 9.16±0.33 b 11.08±0.78 a 10.89±0.12 a 12.10±0.69 a 11.52±0.22 a ash 3.18±0.16 a 3.01±0.16 ab 2.46±0.28 b 2.30±0.39 b 2.85±0.11 b 2.51±0.09 b : (P<0.05). (%)=100 ( )/ ; (% d 1 )=100 [ln( ) ln( )]/ ; = (g, )/ (g, ). Note: Values within the same row with different letters are significantly different (P<0.05). Weight gain rate (%) =100 (FBW IBW)/IBW. Special growth rate (% d 1 )=100 [ln(fbw) ln(ibw)]/days. Feed conversion ratio= dry feed consumed (g)/wet weight gain (g) , FO VO, (saturated fatty acids, SFA) (monounsaturated fatty acids, MUFA) C 18 PUFA LC-PUFA,, 10 n-3 LC-PUFA n-6 LC-PUFA VO, n-6 LC-PUFA FO (P<0.05) 2.3 NKA 1,, VO NKA FO (P<0.05) FO LC-PUFA (EPA DHA) NKA, VO FO, 10 NKA (P<0.05), NKA (P>0.05)

5 表 4 实验饲料与各处理组黄斑蓝子鱼鳃磷脂脂肪酸组成 ( 面积百分比 ) Tab. 4 Main fatty acids composition of phospholipid in experimental diets and gill of Siganus canaliculatus at different treatments (%area) n=3; x ±SE treatment dietary group VO FO VO FO VO FO VO FO C18: 2n ±0.02 a 0.09±0.01 b 0.1±0.01 ab 0.04±0.01 c 0.11±0.03 ab 0.02±0.01 c C18: 3n ±0.02 a 0.16±0.00 ab 0.20±0.04 ab 0.10±0.00 ab 0.18±0.06 ab 0.09±0.02 b C20: 2n6 / ±0.02 a 0.10±0.00 b 0.23±0.02 a 0.09±0.01 b 0.27±0.05 a 0.09±0.01 b C20: 3n6 / ±0.02 a 0.18±0.01 b 0.21±0.01 ab 0.12±0.00 c 0.20±0.01 ab 0.12±0.01 c C20: 4n6 / ± ± ± ± ± ±0.02 C18: 3n ±1.18 a 0.76±0.08 c 8.73±0.41 b 0.59±0.01 c 7.09±0.29 b 0.60±0.09 c C18: 4n3 / ±0.32 a 0.28±0.05 d 1.66±0.04 b 0.20±0.00 d 1.16±0.03 c 0.15±0.02 d C20: 3n3 / ±0.01 b 0.16±0.03 a 0.08±0.01 b 0.08±0.01 b 0.06±0.00 b 0.08±0.01 b C20: 5n3 / ±0.01 b 0.67±0.02 a 0.38±0.03 b 0.48±0.01 ab 0.41±0.01 b 0.50±0.03 ab C22: 5n3 / ± ± ± ± ± ±0.02 C22: 6n3 / ±0.19 c 10.55±0.22 a 6.00±0.28 d 8.25±0.09 b 5.20±0.15 d 7.65±0.02 b SFA ±2.73 c 75.51±0.65 a 64.71±1.48 bc 73.36±5.22 ab 64.20±1.10 bc 77.12±1.54 a MUFA ±0.30 ab 11.17±0.85 b 13.79±0.94 a 10.61±0.62 b 15.66±1.66 a 12.76±0.47 b n-6 C18PUFA ±0.04 a 0.25±0.01 ab 0.30±0.03 a 0.14±0.01 b 0.30±0.09 a 0.11±0.01 b n-3 C18PUFA ±1.50 a 1.04±0.13 d 10.39±0.37 b 0.80±0.02 e 8.25±0.16 c 0.75±0.07 e n-6 LC-PUFA / ±0.01 a 0.89±0.04 c 1.17±0.02 b 0.72±0.05 d 1.16±0.03 b 0.74±0.01 d n-3 LC-PUFA / ±0.23 c 11.71±0.26 a 6.64±0.28 d 8.96±0.21 b 5.92±0.13 d 8.47±0.01 b : (P<0.05). Note: Values within the same row with different letters are significantly different (P<0.05). 1 Na + /K + -ATPase (P<0.05). Fig. 1 Enzyme activity of Na + /K + -ATPase in gills of Siganus canaliculatus at different treatment Different letters show significant differences between different groups (P<0.05). 2.4 NKA mrna 2, NKA mrna, VO NKA 2 Na + /K + -ATPase mrna (P<0.05). Fig. 2 mrna expression of Na + /K + -ATPase relative to β-actin in gills of Siganus canaliculatus at different treatments. Different letters show significant differences between different groups (P<0.05). mrna FO (P<0.05), VO FO, 10 NKA mrna

6 5 : LC-PUFA (P<0.05), NKA mrna 3 NKA, [18],, 10%~20%, [19],, , NKA [20 21],, NKA 10, 10 NKA, NKA (Galaxias maculates), NKA α-1b, NKA α-1a [4, 22] Tang [3] 鳉 (Oryzias latipes) 鳉 (Oryzias dancena) NKA,, NKA α, 20 32, NKA mrna 10, NKA,, NKA [7, 23], NKA,, NKA mrna, n-3 LC-PUFA, [9],, 10 n-3 LC-PUFA 20 32, n-3 LC-PUFA, LC-PUFA [14] [13, 15] (Chirostoma estor), LC-PUFA, LC-PUFA, DHA [24], (Oncoryhnchus masou) PUFA,, PUFA, EPA DHA [25 26],, LC- PUFA, LC-PUFA [27 28],, LC-PUFA, LC-PUFA, [11],, II LC- PUFA [14], LC-PUFA,,, [29] Nano [12] LC-PUFA Caco-2,, LC-PUFA Bell [30],,, DHA EPA,,, LC-PUFA FO n-3 LC- PUFA VO, LC-PUFA (Litopenaeus vannamei) n-3 LC-PUFA [31], EPA DHA [32 34], LC-PUFA

7 n-3 LC-PUFA, EPA DHA, ARA [35] [36] (Scylla serrata) [37], ARA, ARA ( ) ARA, ARA,, ARA [35 36],, LC-PUFA, ARA ARA 鮨 (Morone saxatilis) ARA, [38] [39] (Paralichthys dentatus) [40], ARA Atalah [8] EPA DHA, ARA (Dicentrarchus labrax), ARA, DHA EPA NKA Ca 2+ - ATPase, [41 42], LC-PUFA (Oreochromis mossambicus) [43] [31], ARA LC-PUFA,, VO n-6 LC-PUFA FO, LC-PUFA LC-PUFA ARA, [44] ARA [45], NKA mrna Van Anholt [9] ARA NKA, Carrier [10] ARA,, ARA NKA, VO n-6 LC-PUFA FO, NKA FO, n-6 LC-PUFA NKA, LC-PUFA NKA, NKA, n-3 LC-PUFA n-6 LC-PUFA n-3 LC-PUFA, n-6 LC-PUFA NKA, [46], NKA,, LC-PUFA, n-3 LC-PUFA,, ; n-6 LC-PUFA NKA, 参考文献 : [1] Evans D H, Piermarini P M, Choe K P. The multifunctional fish gill: dominant site of gas exchange, osmoregulation, acid-base regulation, and excretion of nitrogenous waste[j]. Physiol Rev, 2005, 85(1): [2] Kang C K, Tsai S C, Lee T H, et al. Differential expression of branchial Na + /K + -ATPase of two medaka species, Oryzias latipes and Oryzias dancena, with different salinity tolerances acclimated to fresh water, brackish water and seawater[j]. Comp Biochem Physiol A, 2008, 151(4): [3] Tang C H, Lai D Y, Lee T H. Effects of salinity acclimation on Na + /K + ATPase responses and FXYD11 expression in the gills and kidneys of the Japanese eel (Anguilla japonica)[j]. Comp Biochem Physiol A, 2012, 163(3 4): [4] Urbina M A, Schulte P M, Bystriansky J S, et al. Differential expression of Na +, K + -ATPase α-1 isoforms during seawater acclimation in the amphidromous galaxiid fish Galaxias maculatus[j]. J Comp Physiol B, 2013, 183(3): [5] Flores A M, Shrimpton J M. Differential physiological and endocrine responses of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss, transferred from fresh water to ion-poor or salt water[j]. Gen

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10 5 : LC-PUFA 959 Research on relationship between LC-PUFA biosynthesis and osmoregulation in Siganus canaliculatus XIE Dizhi 1, 2, XU Shude 1, 3, CHEN Fang 1, 2, WANG Shuqi 1, YOU Cuihong 1, LI Yuanyou 1 1. Guangdong Provincial Key Laboratory of Marine Biotechnology, Marine Biology Institute, Shantou University, Shantou , China; 2. College of Fisheries, Henan Normal University, Xinxiang , China; 3. Guangdong VTR Bio-tech Co., Ltd., Zhuhai , China Abstract: To explore the relationship between osmoregulation and long-chain polyunsaturated fatty acid (LC-PUFA) biosynthesis in rabbitfish (Siganus canaliculatus), an 8-week feeding trial was performed in juvenile rabbitfish with diets that contained fish oil (FO) or a blend of vegetable oils (VO; perilla and canola oils) at three salinities: 10, 20, and 32. The growth performance, fatty acid composition of gill phospholipids, and activity and expression levels of gill Na + /K + ATPase (NKA) under different treatments were analyzed. The results showed that, at the same salinity, there was no effect of dietary lipid source on growth performance (P>0.05), whereas n-3 LC-PUFA content in gill phospholipids in the FO dietary groups was significantly higher than those in VO treatments (P<0.05). In particular, although the contents of n-6 LC-PUFA in VO-fed fish were lower than in FO-fed fish, the opposite was observed for n-6 LC-PUFA contents. Furthermore, the activity and mrna expression levels of gill NKA in VO groups were significantly higher than those in FO groups (P<0.05). Under different salinities, the growth indexes at a salinity of 10 were significantly lower than those at salinities of 20 and 32 in both dietary groups (P<0.05), whereas the LC-PUFA contents, and activity and mrna expression levels of NKA in fish fed VO were significantly higher than that in fish fed VO (P<0.05). In addition, there were no significant differences in either of the higher two salinities treatments (P>0.05). The results indicate that a salinity of 10 may not suitable for rabbitfish culture. Furthermore, FO-derived diets can improve n-3 LC-PUFA content in gill phospholipids, which helps maintain membrane lipid fluidity and osmotic balance. Alternatively, VO-derived diets can regulate osmotic pressure by synthesizing n-6 LC-PUFA to up-regulate NKA expression and activity. Key words: Siganus canaliculatus; salinity; lipid sources; Na + /K + ATPase; osmoregulation; LC-PUFA biosynthesis Corresponding author: Li Yuanyou. yyli@stu.edu.cn

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