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2016 年 6 月第 26 卷第 6 期中国比较医学杂志 CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE June, 2016 Vol. 26 No. 6 研究报告两种不同的酒精摄入方式诱导的小鼠酒精性肝损伤模型比较 1 肖娟,2, 张瑞芬 2, 黄菲 2, 刘磊 2, 邓媛元 2, 马永轩 2, 刘冬 3, 张名位 2 1, 孙远明 (1. 华南农业大学食品学院, 广州 510642; 2. 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 / 农业部功能食品重点实验室 / 广东省农产品加工重点实验室, 广州 510610; 3. 深圳职业技术学院, 深圳 518055) 摘要目的筛选一种简便稳定可靠的酒精性肝损伤模型方法通过酒精灌胃或给予 Lierber DeCarli 酒精液体饲料 8 周来建立酒精性肝损伤小鼠模型实验期间记录小鼠精神状态摄食量和体重变化,HE 染色进行病理学分析, 分析血清谷丙转氨酶 (ALT) 谷草转氨酶 ( AST) γ 谷氨酰转移酶 ( γ GT) 碱性磷酸酶 ( AKP) 活性, 血清和肝脏总胆固醇 (TC) 甘油三酯 (TG) 含量等肝损伤指标结果造模 8 周后, 两种方式均导致小鼠肝脏脂质聚集等组织病理学变化, 血清 ALT AST AKP 活性血清和肝脏 TG 含量均显著提高, 提示出现明显肝损伤酒精灌胃导致小鼠精神状态差, 并显著减轻体重, 而酒精液体饲料对小鼠精神状态和体重影响小酒精液体饲料模型肝脏指数和血清 TC 水平显著增加, 而且血清 ALT AST 活性血清和肝脏 TG 含量及肝脏脂质聚集等组织病理学变化幅度大于酒精灌胃模型, 提示前者的肝损伤程度比后者严重结论 Lieber DeCarli 酒精液体饲料模型优于酒精灌胃模型 Lieber DeCarli 酒精液体饲料模型相对酒精灌胃模型更适合用于酒精性肝损伤分子机制的研究和防治药物的筛选关键词酒精性肝损伤 ;Lierber DeCarli 酒精液体饲料 ; 灌胃 ; 模型, 动物 ; 中图分类号 R 33 文献标识码 A 文章编号 1671 7856(2016)06 0011 07 doi: 10 3969. j. issn. 1671-7856 2016 06 003 Comparison of two mouse models of alcoholic liver disease induced by oral ethanol gavage or Lierber DeCarli ethanol liquid diet XIAO Juan 1, 2, ZHANG Rui fen 2, HUANG Fei 2, LIU Lei 2, DENG Yuan yuan 2, MA Yong xuan 2, LIU Dong 3, ZHANG Ming wei 2, SUN Yuan ming 1 (1. College of Food Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China; 2. Sericultural & Agri Food Research Institute, Guangdong Academy of Agricultural Sciences / Key Laboratory of Functional Foods, Ministry of Agriculture / Guangdong Key Laboratory of Agricultural Products Processing, Guangzhou 510610; 3. Shenzhen Polytechnic, Shenzhen 518055) Abstract Objective To select a simple, stable and reliable mouse model of alcoholic liver disease. Methods The mouse models of alcoholic liver disease were induced by oral gavage ethanol or Lierber DeCarli ethanol liquid diet for 8 weeks. The food intake and body weight were recorded. Pathological changes were examined using HE staining. Liver [ 基金项目 ] 国家自然科学基金青年科学基金项目 (NSFC 31501478); 广东省自然科学基金博士启动项目 (2014A030310328); 深圳市科技计划基础研究项目 (JCYJ20140901162541286); 广东省省级科技计划项目 (2016B070701012) [ 作者简介 ] 肖娟 (1985 - ), 女, 博士后, 研究方向 : 植物活性物质与功能食品 [ 通讯作者 ] 孙远明 (1958 - ), 男, 教授, 博士生导师, 研究方向 : 食品安全检测

12 中国比较医学杂志 2016 年 6 月第 26 卷第 6 期 Chin J Comp Med, June 2016,Vol. 26. No. 6 injury was assessed by the activities of serum ALT, AST, AKP and γ GT, and serum and hepatic TC and TG. Results After modeling, both models showed significantly increased activities of serum ALT, AST, AKP, and contents of serum and hepatic TG (P < 0 05), indicating the successful development of alcoholic steatohepatitis. However, oral ethanol gavage led to body weight loss and weak mental state. Ethanol liquid diet less affected the body weight and mental state. Ethanol liquid diet enhanced liver to body weight ratio and serum TC, but oral gavage of ethanol did not. The changes of serum ALT, AST, serum and hepatic TG, and hepatic steatosis in the ethanol liquid diet models were more severe than those in the oral gavage ethanol models, suggesting that Lierber DeCarli ethanol liquid diet led to more serious liver injury than oral gavage ethanol. Conclusions Lierber DeCarli ethanol liquid diet model is better than oral gavage ethanol model, and is more suitable for studies on mechanisms and evaluation of hepato protective drugs for alcoholic liver disease. Key words Alcoholic liver disease; Lierber DeCarli ethanol liquid diet; Alcohol; Oral gavage; Mouse model 流行病学研究表明, 全球酒精性肝病发病率逐年升高, 该病已成为肝脏疾病中仅次于病毒性肝炎的第二大病因 [1], 其致死率已经远超过乳腺癌肠癌和前列腺癌等癌症疾病 [2,3] 为此, 酒精性肝损伤成为近年来国内外学者研究的焦点之一 [4] 目前对酒精性肝损伤的研究主要集中于探讨其致病机理预防措施以及防治药物的筛选等 [5,6] 稳定可靠的酒精性肝损伤动物模型是研究其致病机理和防治措施的基础和必备条件国内外常用的酒精性肝损伤模型主要有 3 种, 酒精灌胃模型 Lieber DeCarli 酒精液体饲料模型和 Tsukamato French 模型 [7] Tsukamato French 模型对实验技术和实验动物的要求严格费用昂贵, 故难以推广使用 [8] 酒精灌胃模型 Lieber DeCarli 酒精液体饲料模型均能较好的复制出酒精性脂肪肝, 但两种模型的动物精神状态肝损伤程度等是否有差异尚不清楚 [7] 本文主要以小鼠的精神状态体重和肝损伤程度等为指标来比较酒精灌胃和 Lieber DeCarli 酒精液体饲料诱导的酒精性肝损伤小鼠模型的差异, 以筛选稳定可靠的动物模型, 为酒精性肝损伤的基础研究, 特别是植物活性成分对其改善作用的评价提供稳定可靠的动物模型 1 材料和方法 1 1 实验动物 SPF 级雄性 C57BL / 6 小鼠 60 只, 体重 18 ~ 22 g (8 周龄 ) 来源于中山大学 ( 大学城 ) 实验动物中心 SCXK( 粤 )2011-0029 动物饲养于中山大学实验动物中心 SYXK( 粤 )2012-0081 屏障环境动物房 ( 室温 22 ± 1, 相对湿度为 55% ~ 60%,12 h 光照 / 12 h 黑暗 ) 动物组织取材中, 按实验动物使用的 3Rs 原则给予人道的关怀小鼠适应性喂养 1 周后, 按体质量随机分为正常对照组 (normal control) 酒精灌胃组 ( oral ethanol gavage) 对照液体饲料组 (control liquid diet ) 和酒精液体饲料组 ( ethanol liquid diet), 每组 15 只正常对照组和酒精灌胃组小鼠 5 只 / 笼, 以全价营养颗粒饲料饲养, 自由进食及饮水 ; 对照液体饲料和酒精液体饲料组小鼠 3 只 / 笼, 分别给予对照液体饲料和酒精液体饲料, 饲料现配现用, 每天记录摄食量, 酒精液体饲料组小鼠自由进食, 对照液体饲料组小鼠饲料给予量为前 1 d 酒精液体饲料组的平均摄食量 1 2 试剂与仪器 Lieber DeCarli 高脂肪型酒精液体饲料 ( 含 4% (w / v) 酒精 ; 饲料热量组成为蛋白质热量 18% 酒精热量 28% 其他碳水化合物热量 19% 脂肪热量 35% )( 代码 :TP 4030B) 及其对照液体饲料 ( 不含酒精 ; 饲料热量组成为蛋白质热量 18% 碳水化合物热量 47%, 脂肪热量 35% )( 代码 :TP 4030BC) 购于南通特洛菲饲料科技有限公司 ALT AST γ GT AKP TC 和 TG 试剂盒均购于南京建成生物工程研究所高速 / 冷冻离心机 ( Thermo, 美国 ), - 80 低温冰箱 ( Thermo, 美国 ), 低速离心机 ( Thermo, 美国 ), 酶标仪 ( Tecan, 瑞士 ), 差相荧光倒置显微镜 (Leica, 德国 ) 1 3 实验方法 1 3 1 酒精肝损伤小鼠模型建立 : 酒精灌胃诱导酒精肝损伤小鼠模型建立 : 酒精灌胃组的酒精适应期为 1 周, 酒精灌胃剂量由 0 5 g / (kg 体重 ) 逐步增加到 6 g / (kg 体重 ); 其造模期为 8 周,1 ~ 4 周剂量为 6 g / ( kg 体重 ), 5 ~ 8 周剂量为 5 g / ( kg 体重 ) [9-11] 正常对照组灌胃等量的蒸馏水酒精或蒸馏水灌胃量为 0 1 ml / 10(g 体重 ) Lieber DeCarli 酒精液体饲料酒精肝损伤小鼠模型建立 : 酒精液体饲料组先经过液体饲料适应期 (3 d) 后, 再根据小鼠酒精性脂肪肝模型的建立方法

中国比较医学杂志 2016 年 6 月第 26 卷第 6 期 Chin J Comp Med, June 2016,Vol. 26. No. 6 13 ( 经典法 ) 说明书进行酒精适应期 (4 d, 第 1 ~ 4 d 酒精液体饲料与对照液体饲料混合的比例分别为 1: 4 2:3 3:2 和 4:1), 然后进入造模期, 以酒精液体饲 [12 - 料喂养造模 8 周 14] 1 3 2 取材 : 小鼠禁食 12 h 后, 乙醚麻醉小鼠, 摘眼球取血, 处死小鼠, 肝脏用冰生理盐水漂洗滤纸吸干水后, 切取 1 cm 3 肝脏固定于 4% 多聚甲醛, 用于 HE 染色 ; 剩余肝脏迅速分装后 - 80 冻存血液 4 放置 1 ~ 1 5 h 后 4 4 000 r / min 离心 15 min 后, 取上清液立刻用于指标测定 1 3 3 指标测定 : 1 3 3 1 血清 ALT AST γ GT AKP 活性, TC 和 TG 含量 : 血清 ALT AST 采用赖氏法,γ GT AKP 采用比色法,TC 和 TG 采用甘油激酶磷酸甘油氧化酶过氧化物酶比色法, 操作严格按试剂盒说明书进行 1 3 3 2 肝脏 TC 和 TG 含量 : 取 200 mg 湿肝脏, 加入 9 倍体积的氯仿甲醇 (2 1) 溶液 [15], 制备匀浆, 离心后取 10 μl 上清液检测, 采用甘油激酶磷酸甘油氧化酶过氧化物酶比色法, 按试剂盒说明书进行操作 1 3 3 3 HE 染色观察肝组织病理学形态 : 按常规方法制作石蜡切片并进行 HE 染色, 光镜下观察肝脏形态变化 1 4 统计学方法数据以平均值 ± 标准偏差表示, 采用 SPSS 16 0 软件, 进行 t 检验 (P < 0 05) 2 结果与分析 2 1 精神状态及死亡率实验过程中正常对照组及对照液体饲料组小鼠精神状态好, 食欲佳, 皮毛有光泽酒精灌胃组小鼠酒醉现象严重应激反应严重精神萎靡活动减少反应迟钝皮毛无光泽, 在造模期第 4 周死亡 3 只酒精液体饲料组小鼠也有酒醉现象, 但比酒精灌胃组小鼠要轻微, 无应激反应, 精神状态和反应均较正常, 动物未出现死亡 2 2 体重正常对照组小鼠体重持续增长图 1( A), 酒精灌胃组小鼠体重缓慢增长, 从造模期第 4 周开始, 正常对照组小鼠体重显著高于酒精灌胃组小鼠 ( P < 0 05) 对照液体饲料组和酒精液体饲料组体重缓慢增长后趋于平衡图 1(B), 在造模期第 2 周至造模期第 6 周, 对照液体饲料组体重显著高于酒精液体饲料组 ( P < 0 05), 在造模期第 7 周至造模期第 8 周, 对照液体饲料组小鼠与酒精液体饲料组小鼠体重差异无显著性 ( P > 0 05) 结果表明, 酒精灌胃显著减轻小鼠体重, 而酒精液体饲料对小鼠体重影响小 2 3 摄食量整个饲养过程中, 正常对照组与酒精灌胃组小鼠摄食量差异无显著性 ( 图 2); 对照液体饲料组和酒精液体饲料组小鼠摄食量差异无显著性, 表明酒精灌胃和酒精液体饲料对小鼠摄食量无显著影响 2 4 肝脏组织病理学形态变化从图 3 中可见, 正常对照组小鼠肝小叶结构清晰, 肝细胞索由中央静脉向四周呈放射状排列 ; 酒精灌胃组小鼠部分肝细胞出现脂肪变性, 大部分脂肪空泡小, 少数脂肪空泡大对照液体饲料组小鼠肝小叶结构清晰, 肝细胞索由中央静脉向四周呈放射状排列, 少量肝细胞出现脂肪变性, 脂肪空泡细小 ; 而酒精液体饲料组小鼠大量肝细胞出现脂肪变性, 脂肪空泡大, 其余的大部分肝细胞变性肿胀, 胞浆内充满小的脂肪空泡, 高倍镜下可观察到肝细胞细胞核浓缩和核溶解, 以及炎性细胞浸润与酒精灌胃组相比, 酒精液体饲料组小鼠肝脏脂质聚集程度明显增加 2 5 肝脏指数与正常对照组相比, 酒精灌胃组小鼠肝脏指数差异无显著性 ( 表 1) 与对照液体饲料组相比, 酒精液体饲料组小鼠肝脏指数显著提高 27 62% (P < 0 05)( 表 2), 提示酒精液体饲料组小鼠肝脏出现肿胀脂质聚集等变化, 该结果与肝脏组织病理学形态变化结果相互印证 2 6 小鼠血清 ALT AST γ GT AKP 活性与正常对照组相比, 酒精灌胃组小鼠血清 ALT AST AKP 活性均显著提高 (P < 0 05), 提高幅度分别为 28 09% 110 32% 43 60% ( 表 1), 提示肝脏出现损伤与对照液体饲料组相比, 酒精液体饲料组小鼠血清 ALT AST 和 AKP 活力均显著提高 (P < 0 05 ), 提高幅度分别为 86 41% 187 75% 34 78% ( 表 2), 提示肝脏出现损伤对比肝功能特征指标血清 ALT AST 活性的变化程度, 可发现酒精液体饲料组的变化幅度大于酒精灌胃组, 提示酒精液体饲料诱导的肝脏损伤可能比酒精灌胃诱导的肝脏损伤更严重

14 中国比较医学杂志 2016 年 6 月第 26 卷第 6 期 Chin J Comp Med, June 2016,Vol. 26. No. 6 注 :# 表示差异有显著性 (P < 0 05) 图 1 酒精灌胃 (A) 和 Lierber DeCarli 酒精液体饲料 (B) 诱导的酒精性肝损伤小鼠模型体重变化 Note. #: Significantly reduced body weight (P < 0 05). Fig. 1 Changes of body weight of the oral ethanol gavage model ( A) and Lierber DeCarli ethanol liquid diet model (B) 2 7 小鼠血清及肝脏 TG 和 TC 含量与正常对照组相比, 酒精灌胃组小鼠血清 TG 和肝脏 TG 含量均显著提高 ( 表 1 ) ( P < 0 05 ), 提高幅度分别为 23 80% 和 11 40%, 但是, 两组小鼠的血清 TC 和肝脏 TC 含量差异无显著性, 提示灌胃酒精诱导的酒精肝损伤模型表现出一定的肝损伤与对照液体饲料组相比, 酒精液体饲料组小鼠血清 TG TC 和肝脏 TG 含量均显著提高 ( P < 0 05 ), 提高幅度为 32 13% 21 90% 和 14 47% ( 表 2), 提示酒精液体饲料能导致一定程度的肝损伤酒精液体饲料组小鼠血清 TC 显著增加, 而酒精灌胃组该指标无显著变化对比小鼠血清 TG 和肝脏 TG 含量变化程度, 可发现酒精液体饲料组的变化幅度略大于酒精灌胃组提示酒精液体饲料诱导的肝脏损伤可能比酒精灌胃诱导的肝脏损伤更严重该结果与肝脏病理变化相互印证图 2 酒精灌胃 (A) 和 Lierber DeCarli 酒精液体饲料 (B) 诱导的酒精性肝损伤小鼠模型摄食量变化 Fig. 2 Changes of food intake of the oral ethanol gavage model ( A) and Lierber DeCarli ethanol liquid diet model (B) 3 讨论稳定可靠的动物模型是研究 ALD 的分子机制和防治措施的基础酒精灌胃和 Lieber DeCarli 酒精液体饲料诱导的 ALD 模型均为国内外公认的 ALD 模型 [7] 酒精灌胃模型操作简便, 能够控制酒精摄入量, 可维持血中有效酒精浓度, 容易复制酒精性脂肪肝和肝炎, 但动物易产生应激反应, 死亡率高 Lieber DeCarli 酒精液体饲料诱导的 ALD 模型是使动物能主动饮用酒精液体饲料, 可复制出酒精性脂肪肝和肝炎, 其优点是试验者能够通过配对喂养主动控制能量摄入, 保持各组间的能量平衡, 排除营养摄入即摄入能量不均对实验的结果的影响 [11,16] 本实验利用酒精灌胃和 Lieber DeCarli 酒精液体饲料诱导小鼠酒精性肝损伤, 造模 8 周, 肝脏出现明显脂质聚集, 小鼠血清 ALT AST AKP 活性, 血清 TG 和肝脏 TG 含量均显著提高, 这些都符合早期酒 [2, 精性肝损伤的变化特点 3], 表明酒精灌胃组和酒精液体饲料组小鼠均出现明显酒精性脂肪肝但是, 酒精灌胃组小鼠酒醉现象严重精神状态差 ; 酒

１５中国比较医学杂志２０１６年６月第２６卷第６期ＣｈｉｎＪＣｏｍｐＭｅｄＪｕｎｅ２０１６Ｖｏｌ２６Ｎｏ６图３酒精灌胃和ＬｉｅｒｂｅｒＤｅＣａｒｌｉ酒精液体饲料诱导的酒精性肝损伤小鼠模型肝脏组织病理形态变化ＨＥ染色２００标尺１００ μｍＦｉｇ３ＨｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｔｈｅｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅｓｉｎｔｈｅｏｒａｌｅｔｈａｎｏｌｇａｖａｇｅａｎｄＬｉｅｒｂｅｒＤｅＣａｒｌｉｅｔｈａｎｏｌｌｉｑｕｉｄｄｉｅｔｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｓＨＥｓｔａｉｎｉｎｇ２００Ｂａｒ１００ μｍ表１酒精灌胃诱导的酒精性肝损伤小鼠模型肝脏指数血清ＡＬＴＡＳＴ γ ＧＴ和ＡＫＰ活性血清和肝脏中甘油三酯和总胆固醇水平的变化ｘ ± ｓＴａｂ１ＣｈａｎｇｅｓｏｆｔｈｅｌｉｖｅｒｔｏｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｒａｔｉｏｓｅｒｕｍＡＬＴＡＳＴ γ ＧＴａｎｄＡＫＰａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｓｅｒｕｍａｎｄｈｅｐａｔｉｃＴＧａｎｄＴＣｃｏｎｔｅｎｔｓｉｎｔｈｅｏｒａｌｅｔｈａｎｏｌｇａｖａｇｅｍｏｄｅｌｓ指标Ｉｎｄｅｘｓ肝脏指数Ｌｉｖｅｒｔｏｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｒａｔｉｏ谷丙转氨酶ＡＬＴＵＬ谷草转氨酶ＡＳＴＵＬ酒精灌胃组Ｏｒａｌｅｔｈａｎｏｌ３３４ ± ０３３３５９ ± ０３３２９３９ ± ３８２３７６５ ± ９６６２８０９１０７２ ± ２８６２２５５ ± ３８３１１０３２３２４ ± ０７４３６８ ± ０８９ γ 谷氨酰转移酶 γ ＧＴＵＬ碱性磷酸酶ＡＫＰＵＬ５９７９ ± １０３２８５８５ ± １４５１４３６００９４ ± ０１２１１６ ± ０２１２３８０２５８ ± ０３８２７５ ± ０４６１１９８ ± １２６１３３４ ± １４７４９０ ± ０７５５５８ ± ０８８血清甘油三酯ＳｅｒｕｍＴＧｍｍｏｌＬ血清总胆固醇ＳｅｒｕｍＴＣｍｍｏｌＬ肝甘油三酯ＨｅｐａｔｉｃＴＧｍｇｇｌｉｖｅｒ肝总胆固醇ＨｅｐａｔｉｃＴＣｍｇｇｌｉｖｅｒ变化幅度Ｃｈａｎｇｅ正常对照组Ｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌ注表示在００５水平上差异有显著性Ｐ００５ＮｏｔｅｍｅａｎｓａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅＰ００５１１４０

16 中国比较医学杂志 2016 年 6 月第 26 卷第 6 期 Chin J Comp Med, June 2016,Vol. 26. No. 6 精液体饲料组小鼠也有酒醉现象, 但比酒精灌胃组小鼠要轻微, 无应激反应, 精神状态和反应均较正常, 这有可能是因为酒精灌胃所用的酒精浓度高 (50% 酒精 ), 对小鼠的刺激大, 而酒精液体饲料中酒精的浓度仅为 4%, 对小鼠的刺激很微弱, 因此从精神状态上来看酒精液体饲料模型优于酒精灌胃模型本实验中酒精液体饲料诱导的 ALD 模型未出现死亡, 而酒精灌胃的第 4 周小鼠死亡 3 只研究表明酒精灌胃剂量低无法诱导酒精性脂肪肝形成, 而剂量高易导致大量动物死亡 [7] 灌胃 5 g / (kg 体重 ) 或 6 g / (kg 体重 ) 酒精 ( 酒精浓度 40% ~ 52% )8 周成功诱导酒精性脂肪肝形成 [9, 10],Zeng [11] 等研究表明 4 g / kg 体重酒精灌胃 8 周不能导致小鼠肝损伤 ( 脂肪肝 ) 的发生因此, 本实验中酒精灌胃剂量在 1 ~ 4 周为 6 g / (kg 体重 ), 在出现小鼠死亡后, 酒精灌胃剂量调整为 5 g / ( kg 体重 ) 灌胃酒精显著减轻小鼠体重, 由于灌胃酒精对摄食量无显著影响, 那么体重的减少很可能是由于高浓度酒精刺激影响胃肠道的消化吸收功能造成的 [17, 18] ; 而酒精液体饲料对小鼠体重影响小, 很可能是因为进行了配对喂养, 使得酒精液体饲料组与其对照组的能量摄入保持一致, 这体现了 Lieber DeCarli 酒精液体饲料模型的优点对照液体饲料组肝脏 HE 染色结果显示有少量 Tab. 2 脂质聚集, 原因是对照液体饲料是高脂肪型饲料, 食用时间较长的情况下小鼠肝脏会有少量脂质聚集, 因此造模时间一般不超过 8 周 [7] Ge et al. [13] 和 Wang et al. [14] 的研究也发现造模 8 周后,HE 染色和油红 O 染色显示对照液体饲料组小鼠肝脏有轻微脂质聚集比较酒精灌胃组和液体酒精饲料相对各自对照组的变化程度发现 :(1) 液体酒精饲料模型肝脏指数显著增加, 血清 TC 水平显著提高, 而酒精灌胃模型这两个指标无显著变化 (2) 两个模型的血清 ALT AST 活性血清和肝脏 TG 含量均显著变化, 但液体酒精饲料模型的变化幅度大于酒精灌胃模型 (3) 液体酒精饲料模型的肝脏脂质聚集等病理变化比酒精灌胃模型的严重提示 Lieber DeCarli 酒精液体饲料模型优于酒精灌胃模型因此, 从精神状态体重和肝损伤程度等方面来看,Lieber DeCarli 酒精液体饲料模型优于酒精灌胃模型 4 结论 Lieber DeCarli 酒精液体饲料诱导的酒精肝损伤小鼠模型精神状态良好, 肝脏指数显著增加, 血清 TC 水平显著提高, 血清 ALT AST 活性血清和肝脏 TG 含量及肝脏脂质聚集等组织病理学变化幅表 2 Lierber DeCarli 酒精液体饲料诱导的酒精性肝损伤小鼠模型肝脏指数血清 ALT AST γ GT 和 AKP 活性, 血清和肝脏中甘油三酯和总胆固醇水平的变化 ( x ± s) Changes of the liver to body weight ratio, serum ALT, AST, γ GT and AKP activities, serum and hepatic TG and TC contents in the Lierber DeCarli ethanol liquid diet models 指标 Indexs 肝脏指数 Live to body weight ratio / % 谷丙转氨酶 ALT / U / L 谷草转氨酶 AST / U / L γ 谷氨酰转移酶 γ GT / U / L 碱性磷酸酶 AKP / U / L 血清甘油三酯 Serum TG / mmol / L 血清总胆固醇 Serum TC / mmol / L 肝甘油三酯 Hepatic TG / mg / g liver 肝总胆固醇 Hepatic TC / mg / g liver 注表示在 0 05 水平上差异有显著性 (P < 0 05) Note. means a significant difference (P < 0 05). 对照液体饲料组 Control liquid diet 酒精液体饲料组 Ethanol liquid diet 变化幅度 / % Change / % 3 00 ± 0. 57 3 82 ± 0. 51 + 27 62% 23 35 ± 7. 40 43 54 ± 14. 26 + 86 41% 10 48 ± 1. 20 30 16 ± 5. 10 + 187 75% 3 14 ± 0. 68 3 90 ± 0. 99 67 97 ± 12. 65 91 61 ± 12. 21 + 34 78% 0 92 ± 0. 11 1 22 ± 0. 23 + 32 13% 2 58 ± 0. 28 3 14 ± 0. 30 + 21 90% 14 02 ± 1. 26 16 05 ± 2. 17 + 14 47% 8 06 ± 1. 48 8 46 ± 1. 67

中国比较医学杂志 2016 年 6 月第 26 卷第 6 期 Chin J Comp Med, June 2016,Vol. 26. No. 6 17 度大于酒精灌胃诱导的酒精肝损伤小鼠模型相对酒精灌胃,Lieber DeCarli 酒精液体饲料对动物精神状态影响小易于形成酒精脂肪肝, 因此更适合用于酒精性肝病分子机制的研究和防治药物的筛选参考文献 : [ 1 ] Mann RE, Smart RQ, Govoni R. The epidemiology of alcoholic liver disease[ J]. Alcohol Res Health,2003,27(3): 209-219. [ 2 ] Schwartz JM, Reinus JF. Prevalence and natural history of alcoholic liver disease [ J]. Clin Liver Dis,2012,16 ( 4 ): 659-666. [ 3 ] Arteel G, Marsano L, Mendez BF, et al. Advances in alcoholic liver disease[ J]. Best Pract Res Cl Ga,2003,17(4):625-647. [ 4 ] Beier JI, Arteel GE, McClain CJ. Advances in alcoholic liver disease[ J]. Curr Gastroenterol Rep,2011,13(1):56-64. [ 5 ] 张彦芬, 秘尧, 何奇龙, 等. FH / Wjd 大鼠酒精性肝损伤模型探讨 [J]. 中国实验动物学报,2014,22(5):59-62. [ 6 ] Ding R B, Tian K, Huang L L, et al. Herbal medicines for the prevention of alcoholic liver disease: A review [ J ]. J Ethnopharmacol,2012,144(3):457-465. [ 7 ] Brandon Warner E, Schrum LW, Schmidt CM, et al. Rodent models of alcoholic liver disease: Of mice and men[ J]. Alcohol, 2012,46(8):715-725. [ 8 ] Nanji AA,French SW. Animal models of alcoholic liver disease focus on the intragastric feeding model[ J]. Alcohol Res Health, 2003,27(4):325-330. [ 9 ] Park H Y, Choi H D, Eom H, et al. Enzymatic modification enhances the protective activity of citrus flavonoids against alcohol induced liver disease [ J]. Food Chem,2013,139 ( 1-4):231-240. [10] Ren Y,Deng F,Zhu H,et al. Effect of epigallocatechin 3 gallate on iron overload in mice with alcoholic liver disease[ J]. Mol Biol Rep,2011,38(2):879-886. [11] 曾涛, 姜璐璐, 张翠丽, 等. 两种 Lieber DeCarli 液体饲料诱导的小鼠酒精性肝损伤模型的建立 [ J]. 毒理学杂志,2012,26 (4):258-261. [12] Bull Otterson L,Feng W,Kirpich I,et al. Metagenomic analyses of alcohol induced athogenic alterations in the intestinal microbiome and the effect of Lactobacillus rhamnosus GG treatment[ J]. PLoS One,2013,8(1): e53028. [13] Ge X, Lu Y, Leung T M, et al. Milk osteopontin, a nutritional approach to prevent alcohol induced liver Injury [ J ]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 2013, 304 ( 10 ): G929 - G939. [14] Wang Y, Kirpich I, Liu Y, et al. Lactobacillus rhamnosus GG treatment potentiates intestinal hypoxia inducible factor, promotes intestinal integrity and ameliorates alcohol induced liver injury [ J]. Am J Pathol,2011,179(6):2866-2875. [15] 曾涛, 谢克勤, 张翠丽, 等. 氯仿 / 甲醇匀浆测定肝脏甘油三酯含量 [J]. 卫生研究,2008,37(5): 550-552. [16] 方志红, 崔剑巍, 曹健美, 等. Lieber DeCarli 酒精性肝损伤模型的复制 [J]. 中西医结合学报,2006,4(6):596-600. [17] You M, Fischer M, Deeg MA, et al. Ethanol induces fatty acid synthesis pathways by activation of sterol regulatory element binging protein ( SPEBP) [ J]. J Biol Chem,2002,277 ( 32 ): 29342-29347. [18] Zeng T, Xie KQ. Ethanol and liver: recent advances in the mechanisms of ethanol induced hepatosteatosis [ J ]. Arch Toxicol,2009,83(12):1075-1081. 修回日期 2016-03 - 22