植物保护农药

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霈康
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1 中国农学通报 01,1():79-8 Chinese Agricultural Science Bulletin 8 种生物农药对温郁金叶枯病病原菌的室内毒力测定 1, 陈旭玉, 钟锦玲, 贺春萍, 黄娴, 冯锦东 1 1, 甘炳春 ( 1 中国医学科学院 & 北京协和医学院, 药用植物研究所海南分所 ( 海南省南药资源保护与开发重点实验室 ), 海南万宁 71; 中国医学科学院 & 北京协和医学院, 药用植物研究所, 北京 19; 岭南师范学院, 广东湛江 08; 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 ( 农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室 ), 海口 71101; 海南碧凯医药研究所, 海口 7016) 摘要 : 为了筛选出有效防治温郁金弯孢霉叶枯病的药剂, 采用菌丝生长速率法测定 8 种生物农药对温郁金弯孢霉叶枯病病原菌 (Curvularia clavata) 的抑菌效果 8 种生物农药对温郁金叶枯病病原菌抑菌效果好的为 0.% 氨基寡糖素 AS % 中生菌 WP 荧光假单胞杆菌 WP 和枯草芽孢杆菌 WP 毒力最强为荧光假单胞杆菌 WP,EC 值为 0.9 mg/l; 其次为哈茨木霉菌 WP 枯草芽孢杆菌 WP 0.% 氨基寡糖素 AS 和 % 中生菌素 WP,EC 分别为 mg/l 荧光假单胞杆菌 0.% 氨基寡糖素 AS 枯草芽孢杆菌和 % 中生菌素 WP 均可有效抑制温郁金叶枯病病原菌的生长, 可进一步用于田间试验关键词 : 温郁金 ; 弯孢霉叶枯病 ; 病原菌 ; 生物农药 ; 毒力测定中图分类号 :S8. 文献标志码 :A 论文编号 :casb1118 Toxicity Measurement of Eight Biological Pesticides on Curvularia clavata from Curcuma Wen yujin in Laboratory Chen Xuyu 1,, Zhong Jinlin, He Chunping, Huang Xian, Feng Jindong 1, Gan Bingchun 1 ( 1 Hainan Branch Institute of Medicinal Plant (Hainan Provincial Key Laboratory of Resources Conservation and Development of Southern Medicine), Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Wanning Hainan 71; Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, No. 11, Malianwa North Road, Haidian District, Beijing 19; Lingnan Normal University, Zhanjiang Guangdong 08; Environment and Plant Protection Institute (Ministry of Agriculture Key Laboratory of Integrated Pest Management on Tropical Crops, CATAS), Haikou 71101; Hainan Bikai Pharmaceutical Research Institute Co. LTD, Haikou 7016) Abstract: This study aims to select biological pesticide that can effectively control Curvularia clavata on Curcuma Wen yujin Chen et C.Ling. The antimicrobial effects of eight kinds of biological pesticide on C. clavata were tested by mycelium growth rate method. 0.% amino- oligosaccharin AS, % Zhongsheng mycin WP, Pseudomonas fluorescens WP and Bacillus subtilis WP had better antimicrobial effects on C. clavata. In addition, the toxicity of P. fluorescens WP was the strongest, with the EC of 0.9 mg/l, followed by 基金项目 : 国家科技重大专项子课题中药材种子种苗和种植 ( 养殖 ) 标准平台 (01ZX090006); 海南省重大专项子课题特色南药黎药中成药药材种植推广及产品的二次开发 (ZDZX01008); 国家基本药物所需中药原料资源调查和监测项目国家基本药物所需中药材种子种苗繁育基地 ( 海南 ) 建设 [ 国中医药科技中药便函 (01)17 18 号 ] 第一作者简介 : 陈旭玉, 女,1981 年出生, 海南临高人, 副研究员, 主要从事药用植物保护通信地址 :7011 海南省药谷路号药用植物研究所海南分所,Tel: , chenxuyu-11@16.com 通讯作者 : 甘炳春, 男,196 年出生, 海南琼海人, 研究员, 本科, 研究方向 : 南药病虫害防治通信地址 :7011 海南省药谷路号药用植物研究所海南分所,Tel: , ganbingchun@16.com 收稿日期 :01-0-1, 修回日期 :

2 80 中国农学通报 Trichoderma harzianum WP, B. subtilis WP, 0.% amino- oligosaccharin AS and % Zhongsheng mycin WP with the EC of 1.0,.7, 6.1, 8. mg/l, respectively. P. fluorescens WP, 0.% amino-oligosaccharin AS, B. subtilis WP and % Zhongsheng mycin WP could effectively inhibit the growth of C. clavata and could be used in filed trials. Key words: Curcuma wenyujin Chen et C.Ling; curvularia leaf blight; pathogen; biological pesticide; toxicity test 0 引言温郁金 (Curcuma Wenyujin Y.H.Chen et C.Ling) 系姜科 (Zingiberaceae) 姜黄属 (Curcuma L.) 植物, 为温州市著名的道地药材, 具有利胆保肝, 清心解郁之功效 [1-], 现代主要用于治疗早期宫颈癌等症 [-] 温郁金是海南省碧凯药业生产的保妇康栓的主要原料, 年均销售超过 1 亿但在海南省种植的温郁金普遍发生病害并且严重, 其中温郁金弯孢霉叶枯病是温郁金重大病害之一, 重病区发病植株及病叶率达到 99%~% [-6], 对温郁金质量和产量造成很大的损失目前, 温郁金研究主要集中在温郁金挥发油化学成分分析及药效 [7-10] 组 [11-1] [1-16] 织培养栽培技术等, 温郁金病害防治文献报道 [17] 较少, 周丕富报道叶斑病和根腐病主要是 70% 甲基 [18] 托布津和 % 多菌灵进行防治杨三豹报道是用 [19] % 退特灵防治根腐病未见叶枯病的报道徐杰等报道日灼病和枯萎病主要是 % 甲基托布津 70% 代森锰锌或 7% 百菌清可湿性粉剂进行喷晒, 但田间试验发现 % 多菌灵 7% 百菌清和 70% 甲基硫菌灵抑菌效果不明显, 可能是病原菌产生耐药性笔者通过室内化学农药筛选, 发现 80% 代森锰锌 WP 和 % 咪 [0] 鲜胺锰盐 WP 对温郁金弯孢霉叶枯病效果较好本研究旨在筛选出较好的生物农药, 为病害的生物防治提供科学依据 1 材料与方法 1.1 材料供试菌株温郁金叶枯病病原菌 (C.clavata) 是由中国医学科学院药用植物研究所海南分所植物保护实验室提供 1.1. 供试培养基 PDA 培养基为马铃薯 00 g, 葡萄糖 0 g, 琼脂 17 g, 蒸馏水 ml 1.1. 供试生物药剂采用生长速率法先进行浓度筛选, 在预试验的基础上确定各药剂的最低质量浓度, 以此为依据配制个质量浓度梯度的含毒 PDA 平板生物药剂种类厂家及供试浓度范围见表 1 表 1 试验供试药剂及使用浓度序号供试生物农药生产厂家使用浓度 /(mg/l) 1 % 中生菌素 WP 深圳诺普信农化股份有限公司 0.% 氨基寡糖素 ( 施特灵 )AS 北海国发海洋生物农药有限公司 % 氨基寡糖素 AS 北京三浦百草绿色植物制剂有限公司蜡质芽孢杆菌 WP/(8 亿孢子 /g) 木霉菌 ( 康吉 )WP/( 亿孢子 /g) 6 哈茨木霉菌 WP/( 亿孢子 /g) 美国拜沃股份有限公司 7 荧光假单胞杆菌 WP/( 亿活芽孢 /g) 8 枯草芽孢杆菌 WP/( 亿孢子 /g) 武汉天惠生物工程有限公司 1. 试验方法 1..1 药剂配置及平板制备将各供试药剂在无菌操作台上用无菌水配制母液, 后用无菌水稀释配制成个供试浓度梯度的药液用移液枪分别取 1 ml 药液与 9 ml PDA 培养基 ( 灭菌后 PDA 培养基融化的温度在左右 ) 混匀后制成系列含药平板, 加入 1 ml 等体积无菌水做空白对照, 待培养基冷却凝固后备用每个处理设个重复 1.. 生长速率法及测量将病原菌接种于 PDA 平板上培养 7 天后, 用灭菌打孔器打取 mm 直径的菌落边缘菌饼, 接于含药 PDA 平板中央, 置于 8 的生化培养箱中培养培养 7 天后, 待对照组菌落直径长至大于培养皿直径 / 时, 采用十字交叉法测量菌落直径, 计算菌落直径平均值和菌丝生长抑制率 1.. 公式计算将抑制率换算成机率值, 药剂浓度换算成浓度对数, 以设定的药剂浓度的对数为横坐标, 以

3 陈旭玉等 :8 种生物农药对温郁金叶枯病病原菌的室内毒力测定 81 抑制机率值为纵坐标, 应用 Excel 软件求出各药剂毒力回归方程 EC 值和相关系数结果与分析.1 供试药剂对病原菌 (Curvularia clavata) 菌丝生长的影响由表可知,8 种不同生物农药在设定的质量浓度范围内, 病原菌 (C.clavata) 菌丝的生长均受到不同程度的抑制随着药剂浓度增加, 菌落直径随之减小, 病菌抑制增大, 药剂浓度与抑制率成正相关在 8 种药剂中, 在较低的质量浓度下,0.% 氨基寡糖素 ( 施特灵 )AS 表现出较高的抑制率当质量浓度 mg/l 时,0.% 氨基寡糖素 AS 抑菌率为 %, 菌丝生长完全受到限制 ;% 中生菌素次之, 抑菌率为 91.%;% 氨基寡糖素抑菌率最差, 仅为 7.0% 当质量浓度为 mg/l 时, 荧光假单胞杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌率分别为 9.9% 91.6%, 菌丝生长抑制效果较好 ; 蜡质芽孢杆菌次之, 抑菌率为 80.%; 哈茨木霉菌和木霉菌最差, 抑菌率分别为 7.% 7.7% 可见, 当质量浓度 mg/l 时,0.% 氨基寡糖素 AS 和 % 中生菌素抑菌效果好当质量浓度为 mg/l 时, 表 8 种生物农药对病原菌 (C. clavata) 菌丝生长的影响供试生物农药质量浓度 /(mg/l) 浓度对数菌落直径 /mm 抑菌率 /% 空白对照 % 氨基寡糖素 ( 施特灵 ) % 中生菌素 % 氨基寡糖素荧光假单胞杆菌枯草芽孢杆菌蜡质芽孢杆菌

4 8 中国农学通报供试生物农药质量浓度 /(mg/l) 浓度对数菌落直径 /mm 抑菌率 /% 续表木霉菌 ( 康吉 ) 哈茨木霉菌荧光假单胞杆菌和枯草芽孢杆菌抑制效果好, 抑菌率分别为 9.9% 91.6% 因此,0.% 氨基寡糖素 AS % 中生菌荧光假单胞杆菌和枯草芽孢杆菌具有良好的抑菌作用, 可进一步进行大田试验. 供试药剂对病原菌 (Curvularia clavata) 菌丝的室内毒力测定由表可知, 荧光假单胞杆菌 EC 最小, 仅为 0.9 mg/l; 其次是哈茨木霉菌枯草芽孢杆菌 0.% 水剂施特灵氨基寡糖素和 % 中生菌素,EC 值分别为 mg/l; 此外,% 氨基寡糖素 EC 值为 8.89 mg/l, 木霉菌 ( 康吉 )EC 值为 107.1, 蜡质芽孢杆菌的 EC 为 mg/l 因此在供试生物药剂中, 抑菌效果最好的是荧光假单胞杆菌另外, 茨木霉菌枯草芽孢杆菌 0.% 氨基寡糖素 AS 和 % 中生菌素对病原菌 (C.clavata) 均有较好的抑菌效果木霉菌 WP 和蜡质芽孢杆菌对温郁金叶枯病病原菌的毒力表 8 种生物农药对病原菌 (C.clavata) 的室内毒力测定供试生物农药毒力回归方程相关系数 (R ) EC 荧光假单胞杆菌 y=0.6x 哈茨木霉菌 y=0.1981x 枯草芽孢杆菌 y=0.69x % 氨基寡糖素 y=.6x % 中生菌素 y=1.9x % 氨基寡糖素 y=1.00x 木霉菌 ( 康吉 ) y=0.791x 蜡质芽孢杆菌 y=0.81x 较差结论与讨论本研究首次报道温郁金弯孢霉叶枯病的生物药剂筛选试验结果表明, 当质量浓度 mg/l 时,0.% 氨基寡糖素 ( 抑菌率为 %) 和 % 中生菌素 ( 抑菌率为 91.%) 抑菌效果好 ; 当质量浓度为 mg/l 时, 荧光假单胞杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌率分别为 9.9% 91.6%, 菌丝生长抑制效果好另外,8 种生物药剂对温郁金叶枯病病原菌的毒力测定分析, 毒力最好的是荧光假单胞杆菌, 其次为哈茨木霉菌枯草芽孢杆菌 0.% 氨基寡糖素 % 中生菌素其中比较特殊的情况是当质量浓度 mg/l 时,0.% 氨基寡糖素抑菌率为 %, 但毒力不是最强哈茨木霉菌的毒力较强但是抑菌效果不好因此, 根据抑菌率和室内毒力综合分析, 荧光假单胞杆菌 ( mg/l) 枯草芽孢杆菌 ( mg/l) 0.% 氨基寡糖素 ( mg/l) 和 % 中生菌素 ( mg/l) 对温郁金叶枯病病原菌具有很好的效果, 可进一步进行大田试验使用温郁金弯孢霉叶枯病是常年发病病害, 田间常用 % 多菌灵 WP,70% 甲基硫菌灵 WP,80% 代森锰锌 WP 等进行防治, 如长期使用病原菌会产生耐药性导致防治效果不明显本研究的创新点是筛选新的生物

5 陈旭玉等 :8 种生物农药对温郁金叶枯病病原菌的室内毒力测定 8 农药并且室内抑制效果明显, 如荧光假单胞杆菌 ( mg/l) 枯草芽孢杆菌 ( mg/l) 0.% 氨基寡糖素 ( mg/l) 和 % 中生菌素 ( mg/l), 但田间防治试验是否稳定, 仍需下一步试验证实参考文献 [1] 何寻阳, 曹建华, 卢玫桂. 不同土壤环境对温郁金栽培的影响研究 [J]. 中国生态农业学报,00,1(): [] 陈康, 刘德军, 李敏, 等. 温郁金传统种植中存在的问题与分析 [J]. 时珍国医国药,007,18(11): [] 刘德军. 温羲术规范化种植中部分 SOP 的研究 [D]. 成都 : 中医药大学药学院,007. [] 蔡利军, 吕宾, 倪桂宝, 等. 温郁金对人胃癌裸鼠原位移植瘤生长转移的抑制作用及对 COX- 和 VEG 表达的影响 [J]. 中医药学刊, 006,(10):18-18 [] 陈旭玉, 魏建和, 冯锦东, 等. 温郁金弯孢霉叶枯病病原菌 (Curvularia clavata) 生物学特性研究 [J]. 西南农业学报,01,7(): [6] Chen X Y, Feng J D, Su Z, et al. First Report of Curvularia Leaf spot on Wen yujin Caused by Curvularia clavata in China [J].plant disease, 01, 97(1): 18. [7] Yan J Z, Chen G, Tong S Q, et al. Preparative isolation and purification of germacrone and curdione from the essential oil of the rhizomes of Curcuma wenyujin by high- speed counter- current chromatography[j]. Journal of Chromatography A, 00,1070: [8] Tohda C, Nakayama N, HatanakaF, et al. Comparison of Antiinflammatory Activities of Six Curcuma Rhizomes: A Possible Curcuminoid- independent Pathway Mediated by Curcuma phaeocaulis Extract [J]. Evidence- Based Complementary and Alternative Medicine, 006,():-60. [9] 汤淙淙, 秦坤良, 黄可新. 温郁金茎叶化学成分及抗肿瘤活性 [J]. 温州医学院学报, 007, 7(): [10] 金海峰, 吕宾, 陈结, 等. 温郁金二萜类化合物 C 对人结肠癌细胞 SW60 增殖的影响 [J]. 中医药学刊,011,(): [11] 汪洪, 蔡小军, 于晓敏, 等. 温郁金脱毒组织培养技术研究 [J]. 药用生物技术,009,16(6):6-67. [1] 王晓慧, 杨恩秀, 庞实锋, 等. 温郁金愈伤组织培养及快速繁殖 [J]. 北方园艺,008(10):1-16. [1] 吴志刚, 陶正明, 徐杰. 温郁金 GAP 栽培技术标准操作规程 [J]. 浙江农业科学,008,(): [1] 陶正明, 吴志刚, 黄品湖. 温郁金生长规律研究 [J]. 中国中药杂志, 007,(0): [1] 姜程曦, 熊伟, 陶正明, 等. 瑞安陶山温郁金规范化种植基地适宜性研究 [J]. 安徽农业科学,010,8(): [16] 李敏, 刘德军, 李校堃, 等. 温郁金生长动态分析 [J]. 中药材,009, (1):7-10. [17] 周丕富. 乐清市四都乡无公害温郁金栽培技术 [J]. 温州农业科技, 008(): -7. [18] 杨三豹. 温郁金优质高产栽培技术 [J]. 温州农业科技,00():-. [19] 徐杰, 洪高炉, 吴志刚. 温郁金连作中主要病虫害及防治技术 [J]. 现代农业科学, 008,1(1): [0] 黄娴, 陈旭玉. 温郁金弯孢霉叶枯病病原菌的药剂筛选 [J]. 安徽农业科学, 01,(8):-6.

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