356 魏素菊, 等. 内分泌及化疗对 ER + [KEY WORDS] Breast neoplasms; Estrogen receptor alpha; Estradiol; Tamoxifen; Cell, MCF-7 [TUMOR, 2012, 32 (05): ] 乳腺癌内
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1 肿瘤 2012 年 5 月第 32 卷第 5 期 TUMOR Vol. 32, May 临床研究 Clinical Research DOI: /j.issn Copyright 2012 by TUMOR 内分泌及化疗对 ER + 乳腺癌 CD44 + CD24 -/low 细胞亚群的实验与临床研究 魏素菊, 王俊艳, 洪雷, 刘义冰, 李海飞河北医科大学第四医院肿瘤内科, 石家庄 [ 摘要 ] 目的 : 探讨内分泌治疗及化疗对雌激素受体 (estrogen receptor,er) 阳性的乳腺癌 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的影响 方法 : 用 3 个浓度的雌二醇 (estradiol,e 2 ) 和 E 2 + 他莫西芬 (tamoxifen,tam) 处理乳腺癌 MCF-7 细胞, 用工作浓度的化疗药物 ( 多西他赛 紫杉醇 表柔比星和 5- 氟尿嘧啶 ) 处理 MCF-7 细胞,FCM 法检测各组细胞中 CD44 + CD24 - /low 的细胞比例, 并检测 ER + 的转移性乳腺癌 (metastatic breast cancer,mbc) 患者化疗前 后外周静脉血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 的细胞比例 结果 : 不同浓度 E 2 培养 MCF-7 细胞 10 和 20 d 后,CD44 + CD24 - /low 细胞比例均高于对照组,E 2 + TAM 组低于相应浓度 E 2 组 各化疗药物作用 MCF-7 细胞 24 h 后,CD44 + CD24 - /low 细胞比例均上升 ; 而继续培养至 20 d 后,CD44 + CD24 - /low 细胞比例降低 部分缓解和疾病稳定的 MBC 患者, 化疗后外周血 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞比例降低 ; 而疾病进展者化疗后外周血 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞比例上升 结论 :E 2 促进 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的生长, TAM 可抑制 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的生长 ;MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群对多西他赛 紫杉醇 表柔比星和 5- 氟尿嘧啶均有抵抗能力 ; 化疗有效患者外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞比例降低 [ 关键词 ] 乳腺肿瘤 ; 雌激素受体 α; 雌二醇 ; 他莫昔芬 ; 细胞,MCF-7 [ 中图分类号 ] R737.9 [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] (2012) Experimental and clinical research on endocrine therapy and chemotherapy for a subset of CD44 + CD24 -/low cells of estrogen receptor-positive breast cancer WEI Su-ju, WANG Jun-yan, HONG Lei, LIU Yi-bing, LI Hai-fei Department of Medical Oncology, Fourth Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang , China [ABSTRACT] Objective: To investigate the influence of endocrine therapy and chemotherapy on a subset of CD44 + CD24 -/low cells of estrogen receptor (ER)-positive breast cancer. Methods: Breast cancer MCF-7 cells were treated with estradiol (E 2 ) of three concentrations, E 2 plus tamoxifen (TAM), and docetaxel, paclitaxel (PTX), epirubicin (EPI) and 5-fluorouracil (5-Fu) of working concentration, respectively. The proportion of CD44 + CD24 -/low cells in each drug-treated group and the proportion of CD45 - CD44 + CD24 -/low cells in peripheral blood of patients with ER + metastatic breast cancer (MBC) before and after chemotherapy were detected by flow cytometry (FCM). Results: The proportions of CD44 + CD24 -/low cells after treatment with different concentrations of E 2 for 10 d and 20 d were higher than those of the untreated MCF-7 cells, while the proportion of CD44 + CD24 -/low cells after treatment with E 2 plus TAM was lower than that of the CD44 + CD24 -/low cells treated with E 2 at the corresponding concentration. The proportions of CD44 + CD24 -/low cells after treatment with different chemotherapeutic drugs for 24 h were increased, while decreased after treatment for 20 d. The proportion of CD45 - CD44 + CD24 -/low cells in peripheral blood was decreased in MBC patients achieving partial remission and stable disease after chemotherapy, while increased in MBC patients achieving progressive disease. Conclusion: E 2 can promote the proliferation of a subset of CD44 + CD24 -/low cells derived from MCF-7 cells, but TAM can inhibit this effect. The CD44 + CD24 -/low cells have resistance to docetaxel, PTX, EPI and 5-Fu. The proportion of CD45 - CD44 + CD24 -/low cells in peripheral blood of patients response to chemotherapy is decreased. Correspondence to: WEI Su-ju( 魏素菊 ) weisuju@126.com Received Accepted
2 356 魏素菊, 等. 内分泌及化疗对 ER + [KEY WORDS] Breast neoplasms; Estrogen receptor alpha; Estradiol; Tamoxifen; Cell, MCF-7 [TUMOR, 2012, 32 (05): ] 乳腺癌内分泌治疗是雌激素受体 (estrogen receptor,er) 阳性的乳腺癌患者不可或缺的治 [1] 疗手段 2003 年 Al-Hajj 等研究确定乳腺癌干细胞的表面标志为 CD44 + CD24 - /low 传统的乳腺癌治疗以肿瘤体积缩小为临床疗效判断的标准 根据肿瘤干细胞假说, 肿瘤干细胞是恶性肿瘤复发及转移的根源, 所以传统治疗方法对肿瘤干细胞的作用应该是研究者关注的焦点 本研究从基础实验和临床检测两个方面探讨内分泌及化疗对 ER + 乳腺癌干细胞相关亚群的影响, 以期为临床用药选择提供参考 1 资料与方法 1.1 材料多西他赛 (docetaxel) 注射液购自江苏恒瑞医药股份有限公司 ; 紫杉醇 (paclitaxel, PTX) 注射液购自江苏扬子江药业有限公司 ; 注射用盐酸表柔比星 (epirubicin,epi) 购自浙江海正药业股份有限公司 ;5- 氟尿嘧啶 (5-fluorouracil,5-Fu) 注射液购自天津金耀集团有限公司 化疗药物均按说明书提供的方法保存, 实验时现配现用, 用 PBS 稀释至所需要的浓度 雌二醇 (estradiol,e 2 ) 购自天津市永大化学试剂有限公司 ; 他莫西芬 (tamoxifen,tam) 购自上海瑞齐生物科技有限公司, 用无水乙醇稀释至所需浓度, 实验时现配现用 ; 优质胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司 ;DMEM 高糖培养液购自美国 Gibco-BRL 公司 ;MTT 购自北京索莱宝科技有限公司 ;PE- 鼠抗人 CD44 单克隆抗体 FITC- 鼠抗人 CD24 单克隆抗体和 Cy5- 鼠抗人 CD45 单克隆抗体购自美国 Biolegend 公司 ;Epics-XL Ⅱ 型流式细胞仪购自美国 Beckman Coulter 公司 1.2 细胞及细胞培养 ER + 人乳腺癌 MCF-7 细胞株由河北医科大学第四医院科研中心惠赠, 用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养液, 置于 37% CO 2 体积分数为 5% 及饱和湿度条件下培养 1.3 临床资料收集 2009 年 10 月 2010 年 10 月河北医科大学第四医院肿瘤内科收治的转移性乳腺癌 (metastatic breast cancer,mbc) 患者 30 例,30 例患者均获得手术后病理学检查确诊, 免疫组织化学检测证实为 ER +, 影像学检查证实有可测量的转移病灶且不适合进行激素治疗 ( 既往激素治疗失败 ), 年龄 32 ~ 61 岁, 中位年龄 48 岁 治疗方案主要为多西紫杉醇 + 顺铂 (13 例 ) 紫杉醇 + 顺铂 (7 例 ) 紫杉醇 + 多柔比星 (3 例 ) 多西他赛 + 希罗达 (5 例 ) 多西紫杉醇 + 卡铂 1 例及吉西他滨 + 顺铂 1 例 每例患者分别于第 1 个化疗周期前 1 d 和第 3 个化疗周期前 1 d 抽取空腹静脉血 2 ml, 平均间隔 6 周 ( 前后波动 < 2 d) 在第 3 个化疗周期前 1 d 根据实体瘤疗效评价标准进行疗效评价 另外, 随机抽取 10 例本院无恶性肿瘤家族史和无恶性肿瘤病史的医务工作者及患者家属的外周血作为对照组, 均为女性, 年龄 23 ~ 61 岁, 中位年龄 43 岁 抽取对照组待检者空腹静脉血 2 ml, 第 1 次和第 2 次采血间隔时间为 6 周 抽取的空腹静脉血放入 EDTA 抗凝管中, 混匀后置于 4 冰箱中保存,4 h 内进行实验 本研究所有参与者均签署知情同意书 1.4 FCM 检测 E 2 和 TAM 对 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的影响取对数生长期的 MCF-7 细胞 3 ml( 细胞密度为 个 /ml) 接种于细胞培养瓶中, 将细胞随机分为对照组 E 2 组和 E 2 + TAM 组 对照组中加入与实验组相同浓度的配制药物的溶剂 ;E 2 组分别加入终浓度为 和 10-9 mol/l 的 E 2 ;E 2 + TAM 组分别在上述 3 个 E 2 浓度的基础上加入终浓度为 10-6 mol/l 的 TAM 收集经 10 d 和 20 d 培养的上述 3 组细胞, 分别加入 PE- 鼠抗人 CD44 单克隆抗体 (1 50 稀释 ) 和 FITC- 鼠抗人 CD24 单克隆抗体 (1 5 稀释 ), 同时设同型抗体对照 ( 美国 Biolegend 公司产品 ), 室温下避光反应 30 min; 用 PBS 10 ml 洗涤 1 次, 弃上清液 ; 加 100 μl PBS 重悬细胞, 上流式细胞仪检测 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群 实验过程中, 当各组细胞在光学显微镜下观察细胞密度较高时即进行换液和传代, 之后再加入相应药物 实验重复 3 次 1.5 MTT 法检测各化疗药物对 MCF-7 细胞的增殖抑制作用收集 MCF-7 细胞, 用 DMEM 培养液调节细胞密度为 个 /ml, 接种于 96 孔培养板中 (200 μl/ 孔 ), 细胞培养 24 h, 在光学显微镜下观察细胞贴壁后, 分别加入多西他赛 ( 终质量浓度分别为 和 μg/ml) PTX( 终质量浓度分别为 和 0.25 μg/ml) EPI( 终质量浓度分别为 和 μg/ml) 和 5-Fu( 终质量浓度分别为 和 6.25 μg/ml), 以加培养液作为对照组, 各组设 5 个复孔 各种药
3 魏素菊, 等. 内分泌及化疗对 ER 物处理细胞 24 h 后, 加入 MTT(5 ng/ml)20 μl/ 孔继续培养 4 h, 加入 10% DMSO 150 μl/ 孔, 振荡 10 min; 在全自动酶联免疫检测仪上检测 492 nm 波长处各孔的吸光度 (D) 值, 按以下公式计算细胞增殖抑制率 : 细胞增殖抑制率 =(1 - 实验组平均 D 值 / 对照组 D 值 ) 100% 应用直线回归及曲线拟合分析得出各药物浓度与细胞增殖抑制率关系的方程, 从而得出各药物的半数抑制浓度 (half inhibitory concentration,ic 50 ), 并以此作为后续实验中各药物的工作浓度 实验重复 3 次 1.6 FCM 法检测各化疗药物对 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的影响用含终浓度为 10-8 mol/l E 2 的 DMEM 培养液培养 MCF-7 细胞 10 d, 使 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群比例稳定后, 选用对数生长期细胞进行以下实验 按 1.4 节的方法检测用含 10-8 mol/l E 2 的 DMEM 培养液培养 10 d 和 30 d 的 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的比例 实验分为对照组 ( 加入配制药物的溶剂 ) 和各工作浓度化疗药物作用 24 h 和 20 d 组, 各组设 3 个重复瓶 药物作用 24 h 后, 收集 24 h 组和对照组细胞, 按 1.4 节的方法检测 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的比例 药物处理 20 d 组的细胞给予换液处理以去除药物作用, 继续培养 20 d( 在光学显微镜下观察细胞密度较高时分别进行传代, 每 2 d 换液 1 次, 细胞培养均使用含终浓度为 10-8 mol/l 的 E 2 ), 按 1.4 节的方法检测 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的比例 实验重复 3 次 1.7 FCM 法检测待检者外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞亚群比例的变化分别取已采集的待检者新鲜全血 100 μl, 放入流式细胞仪检测的专用管中, 按 1.4 节的方法检测待检者外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的比例, 加入 PE- 鼠抗人 CD44 单克隆抗体 (1 50 稀释 ) FITC- 鼠抗人 CD24 单克隆抗体 (1 5 稀释 ) 和 Cy5- 鼠抗人 CD45 单克隆抗体 (1 5 稀释 ) 1.8 统计学方法应用 SPSS 13.0 统计软件进行数据分析 计量数据以 ± s 表示, 各组间均数比较采用两因素方差分析, 方差齐时用最小显著差法, 方差不齐时采用非参数统计中 Kruskal Wallis 法 (H 检验 ), 两两比较采用 LSD 法 P < 0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 E 2 和 TAM 对 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的影响细胞培养 10 d 和 20 d 后, 对 照组 CD44 + CD24 - /low 细胞比例分别为 (0.59± 0.39)% 和 (0.62±0.43)%, 二者间差异无统计学意义 (P > 0.05) 10-8 mol/l E 2 处理细胞 10 d 和 20 d 时,CD44 + CD24 - /low 细胞亚群比例间的差异无统计学意义 (P > 0.05) 和 10-9 mol/l 的 E 2 处理 MCF-7 细胞 10 d 和 20 d 后,CD44 + CD24 - /low 细胞亚群比例均高于对照组 (P < 0.05) 和 10-9 mol/l 的 E 2 联合 10-6 mol/l 的 TAM 处理细胞 10 d 和 20 d 后,CD44 + CD24 - /low 细胞亚群比例均低于相应浓度的 E 2 处理组 (P < 0.05)( 表 1 和图 1) 表 1 不同浓度 E 2 及 E 2 + TAM 作用 10 d 和 20 d 后 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的比例 Ta b l e 1 T h e p r o p o r t i o n s o f C D C D / l o w cells derived from MCF-7 cells treated with different concentrations of E2 and TAM for 10 and 20 d [n = 3,( ± s)/%] Group 10 d 20 d Control 0.59± ±0.43 E 2 a ±0.31 * 8.46±0.49 * ±0.66 * 9.66±0.50 * ±0.21 * 7.60±0.64 * E 2 a + TAM a ±0.59 * 5.73±0.70 * ±0.33 * 7.73±0.64 * ±0.44 * 5.96±0.49 * Control: MCF-7 cells; E 2 : Estradiol; TAM: Tamoxifen; * P<0.05, vs control group; P<0.05, vs E 2 group. a : c B /(mol L - 1 ) 2.2 各化疗药物抑制 MCF-7 细胞的增殖 MTT 检测结果显示, 在一定浓度范围内, 多西他赛 5-Fu PTX 和 EPI 对 MCF-7 细胞的增殖均有抑制作用, 且呈剂量 - 效应依赖关系 ( 表 2) 2.3 各化疗药物作用后 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的比例改变含 E 2 的 DMEM 培养液培养细胞 10 d 和 30 d 后,MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞比例分别为 (9.52±0.58)% 和 (9.39±0.62)% 多西他赛 PTX 5-Fu 和 EPI 处理 MCF-7 细胞 24 h 后,MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群比例 [(12.21±1.10)% (23.42±2.76)% (54.25±1.91)% 和 (41.37± 1.57)%] 均高于对照组 [(9.52±0.58)%](P < 0.05) 其中,5-Fu 使 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的比例升高最明显, 多西他赛使 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群比例的变化最小 细胞培养 20 d 后, 多西他赛和 PTX 组中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的比例 [(8.68±0.90)% 和 (8.08±0.82)%] 虽然低于对照组 [(9.39±0.62)%], 但差异无统计学意义 (P > 0.05);5-Fu 和 EPI
4 358 魏素菊, 等. 内分泌及化疗对 ER + 组中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的比例 [(15.30± 1.06)% 和 (14.39±1.45)%] 均高于对照组, 差异有统计学意义 (P < 0.05)( 图 2) Fig. 1 The changes of proportions of CD44 + CD24 - /low cells derived from MCF-7 cells after treatment with estradiol (E 2 ) and E 2 plus tamoxifen (TAM) respectively for 10 d were examined by flow cytometry (FCM). A: Untreated MCF-7 cells as the control; B: Treated with 10-7 mol/l E 2 ; C: Treated with 10-8 mol/l E 2 ; D: Treated with 10-9 mol/l E 2 ; E: Treated with 10-7 mol/l E 2 plus TAM; F: Treated with 10-8 mol/l E 2 plus TAM; G: Treated with 10-9 mol/l E 2 plus TAM. 图 1 FCM 检测 E 2 和 E 2 + TAM 作用 10 d 对 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞比例的影响 表 2 多西他赛 5-Fu PTX 和 EPI 抑制 MCF-7 细胞的增殖 Table 2 Docetaxel, 5-fluorouracil (5-Fu), paclitaxel (PTX) and epirubicin (EPI) inhibit the proliferation of MCF-7 cells [n = 3,( ± s)/%] Drug ρ B /(μg ml - 1 ) Inhibitory rate Regression equation IC 50 Docetaxel Y=34.275%+4.897X ± ± ± ± ±1.63 PTX Y=43.691%+9.929lnX ± ± ± ± ± Fu Y=22.271%+0.50X ± ± ± ± ±5.54 EPI Y=26.669% X ± ± ± ± ±2.59 IC 50 : Half inhibitory concentration; X: Drug concentration; Y: Inhibition rate. 2.4 化疗对 ER + 的 MBC 患者外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞亚群比例变化的影响 FCM 检测结果显示, 对照组即从 10 例健康志愿者抽取的 2 次外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞比例分别为 (1.80±0.10)% 和 (1.75±0.16)% Fig. 2 The proportions of CD44 + CD24 - /low cells derived from MCF-7 cells were detected by flow cytometry (FCM) after treatment with docetaxel, paclitaxel (PTX), 5-fluorouracil (5-Fu) and epirubicin (EPI) for 24 h. 图 2 FCM 法检测多西他赛 PTX 5-Fu 和 EPI 作用 MCF-7 细胞 24 h 后 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的比例
5 魏素菊, 等. 内分泌及化疗对 ER 例 ER + 的 MBC 患者化疗前外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞比例 [(6.49±1.77)%] 明显高于对照组 (P < 0.05) 化疗后,30 例患者中, 疾病稳定者 15 例 ( 肿瘤均有不同程度的缩小 ), 部分缓解者 10 例, 疾病进展者 5 例 化疗有效 ( 疾病稳定 + 部分缓解 ) 的患者化疗后外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞比例 [(3.66±1.36)%] 低于化疗前 [(6.73±1.41)%](P < 0.05); 化疗无效 ( 疾病进展 ) 者外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞比例均有不同程度上升, 分别从 5.23% 3.12% 6.68% 4.78% 和 5.46% 上升至 16.96% 7.41% 9.52% 14.80% 和 10.69%( 图 3) Fig. 3 The proportions of CD45 - CD44 + CD24 - /low cells in peripheral blood of patients with estrogen receptor (ER)-positive metastatic breast cancer before and after chemotherapy. A: The proportion of CD45 - CD44 + CD24 - /low cells in peripheral blood of healthy volunteers was 2.34%; B and C: The proportions of CD45 - CD44 + CD24 - /low cells in peripheral blood of patients achieving partial remission before and after chemotherapy were 8.04% and 3.30%, respectively; D and E: The proportions of CD45 - CD44 + CD24 - /low cells in peripheral blood of patients achieving progressive disease before and after chemotherapy were 5.23% and 16.96%, respectively. 图 3 ER + 的 MBC 患者化疗前后外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的比例 3 讨论 2003 年,Al-Hajj 等 [1] 的研究首次证实乳腺癌 肿瘤干细胞的标志是 Lin - CD44 + CD24 - /low 内分泌治疗是 ER + 乳腺癌患者重要的治疗方法之一 其中,TAM 是首先被应用于 ER + 的乳腺癌患者辅助 内分泌治疗的激素受体拮抗剂 Neve 等 [2] 研究证 实,MCF-7 细胞株雌激素受体阳性 由于 Al-Hajj [1] 等鉴定的 ESA + Lin - CD44 + CD24 - /low 是原代乳腺癌干细胞的表面抗原标志,ESA + Lin - 主要用于去除原代乳腺癌组织中的非肿瘤细胞成分, 故本研究以 CD44 + CD24 - /low 为研究对象 研究发现,10-8 mol/l E 2 和 10-6 mol/l TAM 在体外引起 MCF-7 中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群比例升高的作用最明显 [3] 因此, 本研究中 E 2 选用 和 10-9 mol/l 这 3 个浓度,E 2 + TAM 组则在上述各组 E 2 浓度的基础上添加 10-6 mol/l 的 TAM 本研究结果显示,MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞比例 [(0.59±0.39)%] [4, 与国外文献报道相似 5] 不同浓度的 E 2 分别作用于 MCF-7 细胞 10 d 和 20 d 后,MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞比例均高于对照组 ;E 2 + TAM 组 CD44 + CD24 - /low 细胞比例均低于相应浓度的 E 2 组 说明在一定浓度范围内, 不同浓度的 E 2 均可使 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞比例上升 ; 而在 E 2 浓度相同的情况下,TAM 能够拮抗 E 2 引起的 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low [6] 细胞比例的上升 Guo 等的研究显示, 经过 TAM 处理的 MCF-7 细胞在移植入 NOD/SCID 小鼠体内后, 其致瘤能力大大降低, 且 CD44 + CD24 - /low 细胞数量也降低, 说明 TAM 可能具有抑制 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的能力 本研究结果显示, 工作浓度的多西他赛 PTX 5-Fu 和 EPI 作用于经 E 2 处理的 MCF-7 细胞 24 h 后,CD44 + CD24 - /low 细胞亚群的比例均高于对照组, 以 5-Fu 上升最为明显, 多西他赛作用后的变化最小 笔者认为, 化疗药物作用于 MCF-7 细胞 24 h 内, 由于 CD44 + CD24 - /low 细胞具有化疗抵抗能力以及其他非肿瘤干细胞大部分被杀灭, 导致其比例相对上升 药物作用于 MCF-7 细胞 24 h 后去除药物, 再继续培养
6 360 魏素菊, 等. 内分泌及化疗对 ER + 细胞 20 d 后发现,CD44 + CD24 - /low 细胞比例均低于药物作用 24 h 组 ; 与对照组比较, 多西他赛和 PTX 组的 CD44 + CD24 - /low 细胞比例降低,5-Fu 和 EPI 组的 CD44 + CD24 - /low 细胞比例上升 以上结果说明, 多西他赛和 PTX 虽然短时间内导致 MCF-7 细胞中 CD44 + CD24 - /low 细胞亚群比例明显上升, 而经过长时间复苏后, 该群细胞的比例仍会下降至原始水平, 故 ER + 乳腺癌患者化疗方案的选择应更倾向于多西他赛 [7] 和 PTX Driouch 等的研究发现, 无论是体外实验还是体内试验均证实多柔比星对 4 种乳腺癌细胞株 (MCF10A MCF-7 SKBR3 和 MDA- MB-468) 中的 CD44 + CD24 - /low 细胞均无杀灭能力, 反而能使其比例上升, 与本研究结果相似 CD45 主要位于白细胞表面, 是区分白细胞与非造血组织肿瘤的特异性标志物 本研究应用 Cy5-CD45 单克隆抗体标记待检者外周血标本, 以去除外周血中血源性白细胞的影响 结果显示, 化疗前 ER + 的 MBC 患者外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞比例明显高于对照组 化疗 2 个周期后, 化疗有效患者外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞比例低于化疗前 笔者认为, 健康志愿者外周血中并非完全没有 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞, 只是其含量较低, 故可将该群细胞的比例作为乳腺癌的筛查指标, 而 MBC 患者可通过检测 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞比 [8] 例预测化疗疗效 龚继芳等的研究显示, 乳腺癌患者外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞比例明显高于健康志愿者, 化疗可使外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - ABCG2 - 细胞比例下降, [9] 与本研究结果基本一致 Aulmann 等的研究表明, 化疗能降低外周血中 CD44 + CD24 - 细胞的比例 本研究结果显示, 化疗无效患者外周血中 CD45 - CD44 + CD24 - /low 细胞群的比例上升 由于本研究中疾病进展患者的例数太少, 观察时间较短, 无法得出确切结论, 有待进一步扩大试验样本加以证实 随着人们对肿瘤干细胞生物学特性及其调控机制认识的深入, 肿瘤治疗的模式必将由单纯杀伤肿瘤细胞转向杀灭肿瘤干细胞 [10] 如果能够研制出特异性针对肿瘤干细胞的抗肿瘤药物, 肿瘤治疗必将实现质的飞跃 因此, 随着肿瘤干细胞研究的深入, 需要研究者重新考虑肿瘤治疗的策 略, 并开始转向探讨如何才能清除肿瘤组织中的肿瘤干细胞, 而不仅仅满足于整体肿瘤细胞杀伤率的提高 [ 参考文献 ] [1] AL-HAJJ M, WICHA M S, BENITO-HERNANDEZ A, et al. Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells[j]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2003, 100(7): [2] NEVE R M, CHIN K, FRIDLYAND J, et al. A collection of breast cancer cell lines for the study of functionally distinct cancer subtypes[j]. Cancer Cell, 2006, 10(6): [3] GRITSCH D, MAURER M, ZULEHNER N, et al. Tamoxifen enhances anti-proliferative effect of roscovitine, a selective cyclin-dependent kinase inhibitor, on human ER-positive human breast cancer cells[j]. J Exp Ther Oncol, 2011, 9(1): [4] LÜ X Q, SUO Z, MA C L, et al. Quantity and distribution of CD44 + /CD24 - cells in breast cancer tissue and the cell lines[j]. Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi, 2009, 38(7): [5] SHERIDAN C, KISHIMOTO H, FUCHS R K, et al. CD44 + / CD24 - breast cancer cells exhibit enhanced invasive properties: an early step necessary for metastasis[j]. Breast Cancer Res, 2006, 8(5):R59. [6] GUO J, ZHOU J, YING X, et al. Effects of stealth liposomal daunorubicin plus tamoxifen on the breast cancer and cancer stem cells[j]. J Pharm Pharm Sci, 2010, 13(2): [7] DRIOUCH K, BONIN F, SIN S, et al. Confounding effects in a six-gene signature predicting breast cancer lung metastasis : reply[j]. Cancer Res, 2009, 69(24): [8] 龚继芳, 袁艳华, 宋国红, 等. CD44 + CD24 -/low ABCG2 - 乳腺癌干细胞比例增高与临床治疗相关的探索性研究 [J]. 北京大学学报, 2008, 40(5): [9] AULMANN S, WALDBURGER N, PENZEL R, et al. Reduction of CD44(+)/CD24(-) breast cancer cells by conventional cytotoxic chemotherapy[j]. Hum Pathol, 2010, 41(4): [10] 张洪也, 程勇. 转移肿瘤干细胞在肿瘤转移中作用机制的研究进展 [J]. 肿瘤, 2009, 29(10): [ 本文编辑 ] 张毅
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绎 1. 110032 2. 100029 3. 100045 4. 300193 5. 116023 6. 510120 7. 110004 8. 250011 9. 210029 10. 200032 11. 510405 12. 210008 13. 201102 14. 300074 13 3 1~2 doi: 10.11842/wst.2013.05.039 R725.6 A World
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绎 阴 元元 / 100102 MCAT MCAO 84~333 mg kg -1 167 333 mg kg -1 MCAT 84 167 mg kg -1 MCAT 27% 37% 84~333 mg kg -1 MCAT 21%~ 32% MCAO LDH 10%~ 12% MDA 28%~38% SOD 15%~36% GSH 14%~36% doi: 10.3969/j.issn.1674-3849.2013.01.016
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