图 书 在 版 编 目 (CIP) 数 据 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 / 府 伟 灵 主 编. 一 北 京 z 人 民 军 医 出 版 社 ISBN I 脂 II. 府 m. 临 床 医 学 一 医 学 检 验 町. R44

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1 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 Applied Techniques And Current Advances in Clinical Laboratory Medicine 主 编 府 伟 灵 副 主 编 黄 君 富 黄 庆 徐 迫 雄 编 委 ( 以 姓 氏 笔 画 为 序 ) 王 丰 王 颖 莹 吴 蓉 张 华 张 波 张 雪 张 晓 莉 陈 鸣 陈 翠 敏 罗 阳 周 来 新 府 伟 灵 赵 猛 姚 春 艳 夏 涵 徐 迫 雄 黄 庆 黄 君 富 蒋 天 伦 薛 强 各 彭 人 民 军 医 出 版 社 Peoplés Military Medical Press 北 京

2 图 书 在 版 编 目 (CIP) 数 据 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 / 府 伟 灵 主 编. 一 北 京 z 人 民 军 医 出 版 社 ISBN I 脂 II. 府 m. 临 床 医 学 一 医 学 检 验 町. R 中 国 版 本 图 书 馆 CIP 数 据 核 字 (2005 ) 第 号 策 划 编 辑. 焦 健 姿 加 工 编 辑. 海 湘 珍 贵 任 审 读 : 黄 栩 兵 出 版 人. 齐 学 进 出 版 发 行 人 民 军 医 出 版 社 经 销 : 新 华 书 店 通 信 地 址 : 北 京 市 复 兴 路 22 号 甲 3 号 邮 编 : 电 话 :(010) ( 发 行 部 ) ( 总 编 室 ) 传 真 :(010) ( 发 行 部 ) ( 办 公 室 网 址 : 印 刷 三 河 市 春 园 印 刷 有 限 公 司 开 本 :787mmX 1092 皿 m 1/16 装 订 : 春 园 装 订 厂 印 张 :18.5 字 数 :440 千 宇 版 次 :2005 年 7 月 第 1 版 印 次 :2005 年 7 月 第 1 次 印 刷 印 数 : 定 价 :42.00 元 版 权 所 有 侵 权 必 究 购 买 本 社 图 书, 凡 有 缺 倒 脱 页 者, 本 杜 负 责 调 换 电 话 :(010)

3 内 容 提 要 本 书 系 统 地 介 绍 了 临 床 检 验 学 理 论 研 究 新 进 展 和 先 进 技 术, 从 血 液 尿 便 精 液 及 浆 膜 积 液 等 临 床 检 验 医 学 应 用 最 基 础 和 最 广 泛 的 理 论 与 技 术, 到 DNA 扩 增 技 术 生 物 传 感 器 技 术 生 物 芯 片 及 蛋 白 质 组 学 等 新 理 论 与 高 精 尖 技 术 在 临 床 检 验 中 的 应 用, 都 进 行 了 详 细 地 阐 述 立 足 于 临 床 实 践, 紧 跟 医 学 理 论 与 技 术 的 飞 速 发 展, 既 有 作 者 丰 富 的 临 床 检 验 经 验, 又 反 映 了 当 前 临 床 检 验 的 最 新 研 究 动 态 和 成 果 全 书 分 14 章, 内 容 新 颖, 资 料 翔 实, 阐 述 深 刻, 科 学 实 用. 适 用 于 各 大 医 院 检 验 医 师 和 相 关 科 研 人 员 在 工 作 中 阅 读 参 考, 亦 可 供 医 学 院 校 教 师 和 高 年 资 研 究 生 阅 读 责 任 编 辑 焦 健 姿 海 湘 珍

4 前 临 床 检 验 学 是 对 临 床 标 本 进 行 正 确 收 集 和 检 测, 并 做 出 准 确 解 释 和 应 用 的 一 门 学 科 它 可 为 临 床 提 供 重 要 的 客 观 的 诊 断 依 据, 对 某 些 疾 病 的 诊 断 甚 至 有 决 定 性 意 义 临 床 检 验 学 是 涉 及 多 种 专 业 学 科 的 一 门 边 缘 学 科, 也 是 运 用 基 础 医 学 的 理 论 和 技 术 为 临 床 医 学 服 务 的 学 科 它 的 基 本 任 务 是 通 过 生 物 微 生 物 血 清 化 学 生 物 物 理 细 胞 或 其 他 检 验, 以 获 取 脏 器 功 能 状 态 病 原 体 和 病 理 变 化 等 诊 断 参 考 依 据, 从 而 与 其 他 检 查 相 配 合 以 确 定 诊 断 因 此, 临 床 检 验 人 员 应 具 有 扎 实 的 检 验 学 理 论 基 础 和 高 超 的 检 验 操 作 技 能, 否 则, 无 法 提 供 准 确 和 及 时 的 报 告. 医 院 实 验 室 早 已 不 限 于 使 用 显 微 镜 的 年 代, 各 种 先 进 仪 器, 如 自 动 化 技 术 激 光 色 谱 分 析 质 谱 分 析 荧 光 分 析 流 式 细 胞 术 DNA 扩 增 技 术 等 一 系 列 高 精 尖 的 技 术 手 段, 已 被 普 遍 采 用, 另 外, 还 应 具 有 扎 实 的 医 学 理 论 和 实 践 经 验, 才 能 正 确 地 对 各 种 检 验 结 果 做 出 合 理 和 恰 当 的 解 释, 为 临 床 提 供 咨 询 服 务, 帮 助 临 床 医 师 将 这 些 数 据 正 确 地 应 用 于 诊 断 治 疗 和 预 防 工 作 中 去 21 世 纪 将 是 科 学 技 术, 特 别 是 生 物 科 学 迅 速 发 展 的 时 代, 随 着 生 命 的 奥 妙 不 断 被 揭 示, 将 会 有 更 多 更 新 的 技 术 应 用 于 临 床 检 验 如 果 说 20 世 纪 医 院 实 验 室 为 医 师 和 患 者 提 供 多 达 成 万 的 检 验 项 目, 那 么 21 世 纪 有 可 能 提 供 更 多 更 新 的 检 验 项 目, 将 更 为 有 效 地 帮 助 人 类 与 疾 病 作 斗 争 因 此, 为 了 能 紧 跟 医 学 理 论 与 技 术 的 飞 速 发 展, 本 书 从 血 液 和 尿 液 等 临 床 检 验 医 学 应 用 最 基 础 和 最 广 泛 的 理 论 与 技 术.JJ 化 学 发 光 基 因 诊 断 和 基 因 芯 片 理 论 与 技 术 在 临 床 检 验 学 中 的 应 用, 详 细 阐 述 了 近 年 来 各 分 支 检 验 的 实 用 技 术 概 况 与 研 究 进 展, 从 而 为 临 床 检 验 专 业 人 员 了 解 和 熟 悉 本 专 业 的 新 理 论 新 技 术 和 新 项 目 有 一 个 总 体 认 识, 有 利 于 开 展 更 多 更 准 的 诊 断 新 技 术 和 新 项 日 本 书 的 参 编 人 员 均 是 长 期 从 事 临 床 检 验 工 作 和 科 研 的 专 业 人 员, 均 具 有 较 高 的 素 质, 均 获 得 了 硕 士 博 士 学 位 或 者 有 博 士 后 研 究 生 的 工 作 经 历, 对 临 床 检 验 学 理 论 和 技 术 均 有 较 高 造 诣 府 伟 灵 于 第 三 军 医 太 学 西 南 医 院 2005 年 6 月

5 自 录 第 1 章 血 细 胞 分 析 仪 的 进 展 及 临 床 应 用 " " " " " ". (1) 第 一 节 血 细 胞 分 析 仪 原 理 简 介 "... " " " " " (1) 一 血 细 胞 分 析 " " " " " " " " " (1) 二 红 细 胞 检 测 原 理 " " " " " " "... (2) 三 血 红 蛋 自 含 量 检 测 " " "... " " (2) 第 二 节 血 细 胞 直 方 图 与 疾 病 诊 断 " " " " α 一 自 细 胞 直 方 图 与 疾 病 诊 断 "... "... " " (3) 二 红 细 胞 直 方 图 与 疾 病 诊 断 " " " "... " ". (4) 三 血 小 板 直 方 图 与 疾 病 诊 断 "... " "... " ". (6) 四 小 血 小 板 " " " " " " " " " (8) 第 三 节 正 常 参 考 值 对 照 表 " "... " "... " (8) 第 z 章 精 液 的 实 验 室 诊 断 现 状 与 研 究 进 展 " " " " " (11) 第 一 节 精 液 分 析 现 状 " " " " " " (11) 一 精 液 分 析 标 本 的 采 集 与 运 送 " " " " " " (1 2) 二 精 液 分 析 的 目 的 " " " " " " (1 2) 三 精 液 分 析 的 主 要 内 容 " "... " "... " (12) 第 二 节 计 算 机 辅 助 的 精 液 分 析 " " " " (1 8) 一 CASA 系 统 中 的 主 要 参 数 术 语.. (1 8) 二 CASA 系 统 的 基 本 组 成 " "... " "... " (19) 三 CASA 在 精 液 分 析 中 的 应 用 价 值 " " " (1 9) 四 CASA 系 统 仪 器 性 能 简 介 "... " " " (20) 五 ZKPACS-E 型 精 子 质 量 检 测 分 析 系 统 "... " " " (22) 第 三 节 精 子 质 量 分 析 仪 在 精 液 分 析 中 的 应 用 " " " " (24) 一 SQA 工 作 原 理 " " " " " " "... (24) 二 SQA 系 统 的 基 本 配 置 " "... " "... " (24) 三 SQA 系 统 常 用 参 数 定 义 " " " " " (25) 四 SQA 系 统 在 精 液 分 析 中 的 应 用 "... " " " (2 日 五 SQAll C-P 型 精 液 质 量 分 析 仪 简 介 "... " " " (27) 第 四 节 抗 精 子 抗 体 与 男 性 不 育 " " "... " " (28) 一 人 类 精 子 抗 原 " " " " " " " " (28) 二 人 类 生 殖 系 统 免 疫 屏 障 " "... " " (28) 三 抗 精 子 抗 体 产 生 原 因 与 机 制 (29) 4

6 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 四 抗 精 子 抗 体 引 起 不 育 的 机 制 " " "... " " (29) 五 抗 精 子 抗 体 的 检 测 " " " " " " " (30) 第 3 章 浆 膜 腔 积 液 检 验 进 展 " "... "... " " (36) 第 一 节 概 述 " " " " " (36) 一 漏 出 液..... " " " " " " "... (36) 二 渗 出 液 " " " " " " " "... (36) 三 浆 膜 腔 积 液 检 验 的 目 的 " "... "... " " (36) 四 浆 膜 腔 积 液 标 本 的 采 集 和 保 存 (3 7) 第 二 节 浆 膜 腔 积 液 常 规 检 验 " " " " " " ω 7) 一 浆 膜 腔 积 液 的 物 理 学 检 查 "... " " " " (37) 二 浆 膜 腔 积 液 的 化 学 检 查 " "... "... " " (37) 三 浆 膜 腔 积 液 的 显 微 镜 检 查 "... " " " " (38) 第 三 节 浆 膜 腔 积 液 检 验 新 技 术 " " " " " " (39) 一 自 动 血 液 分 析 仪 在 浆 膜 腔 积 液 细 胞 计 数 及 分 类 中 的 应 用 " "... (39) 二 尿 液 沉 渣 分 析 系 统 在 浆 膜 腔 积 液 细 胞 计 数 和 自 细 胞 分 类 计 数 中 的 应 用 " (40) 三 DNA 探 针 杂 交 技 术 在 结 核 性 浆 膜 腔 积 液 诊 断 中 的 应 用 " "... (40) 四 流 式 细 胞 仪 (FCM) 在 浆 膜 腔 积 液 脱 落 细 胞 DNA 倍 体 分 析 中 的 应 用 " (40) 五 透 射 电 镜 在 浆 膜 腔 积 液 细 胞 学 超 微 结 构 和 肿 瘤 组 织 类 型 鉴 别 诊 断 中 的 应 用 (4 1) 六 PCR 技 术 在 浆 膜 腔 积 液 检 验 中 的 应 用 " " " " " (41) 第 四 节 浆 膜 腔 积 液 鉴 别 诊 断 的 实 验 室 检 查 进 展 " " "... (41) 一 浆 膜 腔 积 液 的 酶 学 检 查 " "... "... " " (42) 二 浆 膜 腔 积 液 肿 瘤 标 志 物 的 检 测 " "... " " " (43) 三 浆 膜 腔 积 液 中 免 疫 学 指 标 的 检 测 "... " " (45) 四 其 他 生 化 指 标 的 检 测 " "... "... " " (47) 五 浆 膜 腔 积 液 的 细 菌 培 养 和 药 敏 实 验 "... " " " (49) 第 五 节 浆 膜 腔 积 液 的 鉴 别 " "... "... " " (50) 一 漏 出 液 与 渗 出 液 的 鉴 别 " "... "... " " (50) 二 渗 出 液 的 鉴 别 " " " " "... " (51) 第 六 节 浆 膜 腔 积 液 检 验 相 关 的 几 个 问 题 "... " " " (52) 一 重 视 胸 腹 水 检 验 " " " " " "... " (52) 二 规 范 胸 腹 水 检 验 的 操 作 规 程 " " " " " (52) 三 严 格 要 求 标 本 的 送 检 (52) 第 4 章 粪 便 检 验 及 进 展 " " " " " " (54) 第 一 节 粪 便 常 规 检 验 方 法 回 顾 " " " " " " (54) 第 二 节 大 便 隐 血 实 验 的 进 展 "... " " " (55) 一 放 射 性 核 素 方 法 " " " " " "... " (55) 二 免 疫 学 方 法 " " " " " " " " (56) 三 其 他 方 法 " " " " " " " " (57) 第 三 节 粪 便 基 因 检 验 的 研 究 进 展 " " " " " " (57) 2

7 目 录 一 粪 便 基 因 筛 检 的 分 子 生 物 学 基 础 "... " " " (57) 二 粪 便 基 因 突 变 检 测 方 法 " "... "... " " (58) 第 四 节 粪 便 检 验 的 新 思 路 " "... "... " " (59) 一 基 因 芯 片 技 术 " " " " "... " (59) 二 色 质 谱 分 析 " " " " " " " " (60) 第 5 章 影 响 临 床 检 验 结 果 分 析 的 前 阶 段 因 素 "... " " " (63) 第 一 节 生 理 因 素 " " " " " "... " (63) 一 年 龄 (63) 二 性 别 " " " " " " " " " (64) 三 昼 夜 节 律 " " " " " " " " " (65) 四 月 经 " " " " " " " " " (65) 五 娃 娘..... " " " " " " " " (66) 六 生 活 习 惯 " " " " " " " " " (6 7) 七 其 他 因 素 " " " " " " " " " (68) 第 二 节 标 本 来 集 因 素 " " " " " " " (68) 一 空 腹 持 续 时 间 " " " " " "... (69) 二 标 本 采 集 时 间 " " " " " "... " (69) 三 取 血 时 的 姿 势 " " " " " "... " (70) 四 止 血 带 应 用 时 间 " " " " " "... " (70) 五 静 脉 输 注 " " " " " " " (71) 六 运 动 " " " " " " " " " (7 1) 七 抗 凝 剂 "... " " " "... (72) 八 稳 定 剂..... " " " " " " "... (74) 九 抗 凝 剂 / 血 液 比 例 " " " " " " " (77) 十 标 本 处 理 及 存 放 " " " " " "... " (78) 十 一 抗 凝 剂 的 选 用 " " " " " "... " (79) 第 三 节 内 源 性 干 扰 因 素 " " " "... " " (79) 一 药 物 及 其 代 谢 产 物 " " " " "... " (79) 二 洛 血 " " " " " " " " " (81) 第 6 章 DNA 甲 基 化 分 析 技 术 及 其 在 检 验 医 学 的 应 用 " "... (83) 第 一 节 概 述 " " " "... (83) 第 二 节 DNA 甲 基 化 分 析 技 术.. (84) 一 DNA 甲 基 化 非 特 异 性 分 析 " " " " " " (84) 二 DNA 甲 基 化 特 异 性 分 析 "... " " " " (86) 三 DNA 甲 基 化 相 关 基 因 的 筛 选 及 新 的 甲 基 化 位 点 寻 找 技 术 "... (90) 第 三 节 DNA 甲 基 化 与 肿 瘤 疾 病 诊 断 " " " " " " (98) 一 DNA 甲 基 化 及 其 所 致 基 因 沉 默 机 制 " " " "... (99) 二 DNA 甲 基 化 与 基 因 突 变 " " " "... " ". (1 02) 三 DNA 甲 基 化 是 肿 瘤 表 观 遗 传 学 生 物 学 标 志 物 " " " (1 03) 3

8 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 第 四 节 人 类 表 观 基 因 组 计 划 " "... "... " ". (1 06) 一 HEP 的 实 施 内 容 与 意 义 " " " " ". (1 06) 二 HEP 的 展 望 " " " " " " "... ". (1 07) 第 7 章 遗 传 病 基 因 诊 断 的 途 径 和 方 法 " " " " ". (1 11) 第 一 节 概 述 " " " " " " " ".... (1 11) 第 二 节 基 因 突 变 的 类 型 " " "... " ".... (1 11) 第 三 节 基 因 诊 断 的 途 径 " " "... " " " ". (1 12) 一 直 接 检 测 法 (1 13) 二 间 接 诊 断 法 多 态 性 连 锁 分 析 " "... " " ". (1 13) 第 四 节 基 因 检 测 的 标 本 制 备 " " " "... " ". (1 14) 第 五 节 基 因 突 变 的 检 测 技 术 " " " "... " ". (1 14) 一 点 突 变 的 检 测 " " " " " "... ". (1 14) 二 片 段 性 突 变 的 检 测 " " "... " " " ". (1 20) 三 动 态 突 变 的 检 测 " " " " " "... ". (1 21) 第 8 章 生 物 传 感 器 技 术 " " " " " "... ". (1 23) 第 一 节 概 述 " " " " " " " ".... (1 23) 一 国 内 外 传 感 器 发 展 现 状 及 趋 势 " "... " " ". (1 23) 二 生 物 传 感 器 " " " "... " "... (124) 第 二 节 生 物 传 感 器 分 类 及 简 介 " " " " ". (1 29) 一 生 物 传 感 器 的 分 类 " " "... " " " ". (1 29) 二 各 种 生 物 传 感 器 的 简 介 " "... ".... " ". (1 29) 第 二 节 传 感 技 术 在 检 验 医 学 的 应 用 与 展 望 " " " " (1 37) 一 压 电 生 物 传 感 器 在 检 验 医 学 上 的 应 用 " " " ".... (1 38) 二 SPR 生 物 传 感 器 在 医 学 检 验 领 域 的 应 用 " " " ".... (1 42) 三 光 纤 生 物 传 感 器 在 医 学 检 验 领 域 的 应 用 " " " ".... (1 43) 四 结 语 "... " " "... " " ". (1 44) 第 9 章 生 物 芯 片 技 术 及 应 用 " "... "... " ". (1 47) 第 一 节 概 述 " " " " ".... (1 47) 一 生 物 芯 片 的 概 念 " " " " " "... ". (1 47) 二 生 物 芯 片 技 术 的 发 展 " "... "... " ". (1 47) 三 生 物 芯 片 的 分 类 " " "... ". (1 48) 第 二 节 基 因 芯 片.. (1 49) 一 基 因 芯 片 的 概 念 " " " " " "... ". (1 50) 二 基 因 芯 片 的 制 备 一 一 探 针 困 化 技 术 " "... " " ". (1 50) 三 基 因 芯 片 的 应 用 " " "... " "... ". (1 52) 第 三 节 蛋 白 芯 片 " " " " " " "... ". (1 55) 一 抗 体 芯 片 " " " " " " " ".... (1 55) 二 SELDI 蛋 白 芯 片 " " " " " "... ". (1 56) 第 四 节 组 织 芯 片 " " " "... " "... (157) 4

9 目 录 一 组 织 芯 片 的 概 念 " " " " "... ". (1 57) 二 组 织 芯 片 的 制 作 " " " " "... ". (1 58) 三 组 织 芯 片 的 可 信 度 的 评 价 " " " " ". (1 59) 四 组 织 芯 片 的 应 用 ".... " " " "... (159) 第 五 节 诊 断 芯 片 " " " " " " "... ". (1 60) 一 遗 传 病 的 生 物 芯 片 检 测 " " " "... " (160) 二 肿 瘤 的 生 物 芯 片 检 测 " " " "... " ". (1 61) 三 感 染 性 疾 病 的 生 物 芯 片 检 测 (1 61) 第 10 章 微 量 元 素 检 测 及 其 最 新 研 究 进 展 " "... " " ". (1 64) 第 一 节 微 量 元 素 及 其 在 人 体 内 的 生 理 意 义 " " " " (1 64) 一 微 量 元 素 在 体 内 的 分 布 " " " "... " ". (1 64) 二 微 量 元 素 在 人 体 中 的 主 要 生 理 作 用 " " " " " ". (1 65) 三 微 量 元 素 与 临 床 关 系 " "... "... " ". (1 72) 第 二 节 微 量 元 素 检 测 方 法 " "... "... " ". (1 74) 一 原 子 吸 收 分 光 光 度 法 " "... " ". (1 74) 二 原 子 荧 光 光 谱 法 " " " " " "... ". (1 75) 三 原 子 发 射 光 谱 " " " " " "... ". (1 77) 第 三 节 生 物 样 品 前 处 理 方 法 概 述 " "... " " ". (1 80) 一 样 品 的 采 集 和 制 各 " " "... " " " ". (1 81) 二 生 物 组 织 的 储 存 " " " " " "... ". (1 81) 三 生 物 组 织 中 蛋 白 质 的 去 除 " " ". (1 81) 四 生 物 组 织 中 微 量 组 分 的 萃 取 " "... " ". (1 82) 五 生 物 组 织 的 消 化 " " " " "... ". (1 82) 六 常 见 生 物 样 品 处 理 介 绍 " "... "... " ". (1 83) 七 展 望 "... "... " " " (184) 第 11 章 自 身 免 疫 性 疾 病 " " "... " " " ". (1 86) 第 一 节 红 斑 狼 疮 " " " " " " "... ". (1 86) 一 病 因 "... " " " " ". (1 86) 二 发 病 机 制 " " " " " " " ".... (1 87) 三 临 床 表 现 " " " " ".... (1 87) 四 临 床 检 测 " "... " " " " (188) 第 二 节 类 风 湿 关 节 炎 (1 91) 一 病 因 和 发 病 机 制 " " " " " "... ". (1 91) 二 临 床 表 现 " " " " "... " ".... (1 91) 三 临 床 检 测 " " " " " " " (1 92) 第 三 节 强 直 性 脊 柱 炎 " " " " " " " ". (1 95) 一 病 因 和 发 病 机 制 " " "... " "... ". (1 95) 二 临 床 表 现 " " " " "... " ".... (1 95) 三 实 验 室 检 查 " " " "... " "... (195) s

10 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 第 四 节 皮 肌 炎..... " " " " " " " ". (198) 一 病 因 和 发 病 机 制..... " " " " "... ". (198) 二 临 床 表 现 " " " " " " " ". (198) 三 实 验 诊 断 " " " " " " ".... (199) 第 五 节 硬 皮 病 " " " " " " " " ". (200) 一 病 因 和 发 病 机 制 " " " " " "... ". (200) 二 临 床 表 现 " " " " " " "... (200) 三 临 床 检 测 (201) 第 六 节 干 燥 综 合 征 " " " " " "... ". (201) 一 病 因 和 发 病 机 制 " " " " " "... ". (201) 二 临 床 表 现 " " " " " " " " ". (202) 三 实 验 室 检 查 " " " " " " "... ". (202) 第 七 节 混 合 性 结 缔 组 织 病 " "... "... " ". (203) 一 病 困 和 发 病 机 制 " " " " " "... ". (204) 二 临 床 表 现 " " " " " " " ". (204) 三 实 验 室 检 查 " " " " " " "... ". (204) 第 12 章 SELEX 技 术 及 其 应 用 " "... "... ". (208) 第 一 节 SELEX 技 术 的 基 本 原 理 及 技 术 流 程 " " " " (209) -, SELEX 技 术 的 基 本 原 理 " " " " " " ". (209) 二 SELEX 技 术 基 本 流 程 " "... "... " ". (209) 三 影 响 SELEX 过 程 的 因 素 " " " " ". (214) 四 SELEX 技 术 类 型 " " "... " "... ". (21 日 第 二 节 适 配 子 与 抗 体 的 比 较 " " " " " ". (216) 一 适 配 子 的 优 越 性 " " " " " "... ". (217) 二 与 抗 体 分 子 的 比 较 " " "... " ".... (217) 三 问 题 与 展 望 " " "... " "... ". (218) 第 三 节 在 临 床 检 验 和 检 测 方 面 的 应 用 " " " " " (219) 一 双 位 点 结 合 试 验 ( 夹 心 法 ) "... " ". (219) 二 流 式 细 胞 术 " " " " " " "... ". (219) 三 生 物 传 感 器 " " " " "... ". (220) 四 荧 光 偏 振 " "... " " "..... (220) 五 分 子 信 标.. (221) 六 毛 细 管 电 泳 " " " " " " "... ". (221) 七 蛋 白 组 研 究 " " " " " "... ". (221) 八 分 子 开 关 " " " " " " " (222) 九 适 配 子 核 酸 药 物 的 研 究 进 展 " " " " " ". (222) 第 13 章 蛋 白 质 组 学 在 检 验 医 学 中 的 应 用 " " " " ".... (227) 第 一 节 蛋 白 质 组 学 概 述 " " "... " " " ". (227) 一 蛋 白 质 组 与 基 因 组 的 关 系 "... " " " " ". (228) 凸

11 目 录 二 定 义 及 研 究 范 围 " " " " " "... ". (228) 三 蛋 白 质 组 学 研 究 相 关 技 术 "... " " " " ". (229) 四 国 内 外 研 究 现 状 及 应 用 前 景 " "... " " ". (230) 第 二 节 蛋 白 质 组 学 中 应 用 的 主 要 技 术 " " " ". (232) 一 双 向 凝 胶 电 泳 技 术 " " "... " " " ". (232) 二 质 谱 技 术 "... " " "... ".... (237) 三 蛋 自 质 组 芯 片 和 SELDI 技 术 " " " ". (241) 第 三 节 蛋 白 质 组 学 在 检 验 医 学 中 的 应 用 (241) 一 蛋 白 质 组 学 在 肿 瘤 诊 断 中 的 应 用 " "... " " ". (241) 二 蛋 白 质 组 学 在 病 原 微 生 物 检 测 中 的 应 用 " " " " (244) 三 蛋 白 质 组 学 在 检 验 医 学 中 的 其 他 应 用 " " " ".... (245) 四 问 题 和 展 望 " " " " " " "... ". (247) 第 14 章 生 物 信 息 学 与 检 验 医 学 " " " " ". (250) 第 一 节 生 物 信 息 学 概 述 " " "... " " " ". (250) 一 生 物 信 息 学 概 念 " " " " " "... ". (250) 二 生 物 信 息 学 研 究 的 内 容 " "... "... ". (253) 三 生 物 信 息 学 与 检 验 医 学 " "... "... ". (262) 第 二 节 生 物 信 息 学 与 临 床 免 疫 学 " "... " " ". (263) 一 抗 原 表 位 图 谱 绘 制 与 抗 体 疫 苗 药 物 设 计 " " " ".... (263) 二 生 物 信 息 学 与 变 态 反 应 及 自 身 免 疫 疾 病 " " " ".... (265) 三 生 物 信 息 学 与 器 官 移 植 " "... "... " ". (267) 四 生 物 信 息 学 与 HIV 研 究 进 展 " "... " ". (267) 第 三 节 生 物 信 息 学 在 感 染 研 究 方 面 的 应 用 " " " ".... (270) 一 微 生 物 基 因 组 计 划 " " "... " " " ". (270) 二 病 原 体 疫 苗 研 究 " " " " "... ". (272) 三 生 物 信 息 学 在 细 菌 感 染 诊 断 中 的 应 用 " " " " (273) 四 生 物 信 息 学 在 感 染 治 疗 中 的 应 用 " " " " " (276) 第 四 节 生 物 信 息 学 在 肿 瘤 诊 断 的 应 用 " " " " ". (277) 一 肿 瘤 基 因 表 达 谱 研 究 " "... "... " ". (277) 二 新 型 抗 肿 瘤 药 物 的 开 发 " " " "... " ". (278) 三 肿 瘤 专 门 数 据 库 的 建 立 " " " " " (279) 7

12 早 在 20 世 纪 50 年 代 美 国 库 尔 特 (Coulter) 首 先 发 明 了 电 阻 式 血 细 胞 分 析 仪, 便 开 创 了 血 细 胞 分 析 的 新 纪 元 a 进 入 20 世 纪 80 年 代 Coulter 公 司 又 利 用 电 阻 ( 测 体 积 ) 激 光 ( 测 核 形 态 高 能 电 磁 波 ( 测 颗 粒 密 度 等 几 项 技 术 共 同 检 测 综 合 分 析, 使 血 细 胞 分 析 的 结 果 更 加 准 确. 与 此 同 时, 也 有 人 利 用 粒 细 胞 所 具 有 的 大 量 过 氧 化 物 酶, 而 单 核 细 胞 此 酶 较 少, 淋 巴 细 胞 则 无 此 酶 存 在 的 特 点, 把 化 学 染 色 与 激 光 分 析 相 结 合 进 行 细 胞 分 类, 从 此 细 胞 从 单 一 技 术 进 入 高 科 技 发 展 的 新 阶 段. 20 世 纪 90 年 代 初 又 有 人 从 细 胞 膜 的 结 构 差 异 进 行 分 类, 比 如 幼 稚 细 胞 膜 上 的 脂 类 多, 结 舍 的 硫 化 氨 基 酸 多, 对 膜 的 保 护 性 强, 溶 血 剂 不 易 破 坏, 成 熟 细 胞 则 反 之. 目 前, 发 达 国 家 的 半 自 动 血 细 胞 分 析 仪 己 经 淘 汰, 取 而 代 之 的 是 不 同 功 能 的 全 自 动 分 析 仪, 甚 至 是 几 种 仪 器 联 合 使 用, 电 脑 控 制 o Sysmex 将 血 细 胞 分 析 仪 网 织 红 细 胞 计 数 推 片 机 全 部 联 在 一 起, 通 过 仪 器 识 别, 然 后 根 据 红 细 胞 的 多 少 决 定 是 否 计 数 网 织 红 细 胞, 又 根 据 血 细 胞 比 容 (H CT) 的 高 低 决 定 推 片 的 角 度, 根 据 直 方 图 的 形 态 决 定 是 否 需 要 镜 栓, 同 时 还 设 直 了 自 动 加 样 和 真 空 采 血 装 置, 从 而 太 太 提 高 了 结 果 的 准 确 性 和 工 作 效 率 第 一 节 血 细 胞 分 析 仪 原 理 简 介 血 细 胞 分 析 仪 的 主 要 分 析 原 理 z 根 据 血 细 胞 非 传 导 的 性 质, 在 漫 入 电 解 质 的 微 孔 管 内 外 各 有 一 个 电 极, 当 电 流 接 通 后, 两 电 极 形 成 电 流, 动 力 泵 产 生 负 压, 开 始 充 量 吸 样, 由 于 细 胞 为 不 良 导 体, 在 经 过 微 孔 的 一 瞬 间, 电 阻 增 大, 产 生 相 应 的 脉 神 传 导 ( 电 压 ). 称 为 通 过 脉 冲, 此 时 电 压 增 加 和 变 化 的 程 度 取 决 于 非 传 导 性 细 胞 占 据 小 孔 感 应 区 的 体 积, 即 细 胞 体 积 越 大, 引 起 的 脉 冲 越 大, 所 产 生 的 脉 冲 振 幅 越 高, 再 经 过 放 大, 阑 值 调 节.5 剔, 整 形, 计 数, 得 出 结 果. 一 血 细 胞 分 析 由 于 细 胞 为 不 良 导 体, 以 电 解 质 榕 液 中 悬 浮 颗 粒 在 通 过 小 孔 时 引 起 的 电 阻 变 化 为 基 础, 进 行 血 细 胞 计 数 和 体 积 测 定, 这 种 方 法 称 电 阻 法, 也 被 称 为 库 尔 特 原 理. 把 经 过 电 解 质 溶 液 稀 释 的 细 胞 悬 液 倒 入 一 个 不 导 电 的 容 器 中 ( 塑 料 杯 ). 把 小 孔 管 插 入 细 胞 悬 液 中, 小 孔 管 的 内 侧 充 满 了 稀 释 液, 并 有 一 个 内 电 极, 外 侧 细 胞 悬 液 中 有 一 个 外 电 极, 当 电 流 接 通 后 小 孔 内 外 侧 的 电 极 形 成 稳 定 的 电 流, 稀 释 液 通 过 小 孔 向 内 部 流 动, 当 细 胞 通 过 小 孔 时, 瞬 时 引 起 了 电 压 变 化 而 出 现 一 个 脉 神 传 导, 称 为 通 过 脉 冲, 再 经 过 以 下 步 骤 得 出 结 果 (1) 放 大 z 细 胞 通 过 小 孔 时 所 产 生 的 脉 神 传 导 微 弱, 难 以 直 接 触 发 计 数 电 路, 必 须 经 电 子 放

13 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 大 器 把 微 伏 信 号 放 大 成 伏 级 信 号 (2) 阙 值 调 节 2 在 一 定 范 围 内 调 节 参 考 电 平 大 小, 使 计 数 结 果 更 加 符 合 实 际. (3) 瓢 别 = 各 种 微 粒 通 过 微 孔 时 均 可 产 生 讯 号 讯 号 电 平 ( 脉 冲 幅 度 与 微 粒 子 大 小 成 正 比, 所 为 班 别 就 是 根 据 阑 值 调 节 器 提 供 的 参 考 电 平, 把 低 于 参 考 电 平 的 假 讯 号 去 掉, 以 提 高 准 确 性. (4) 整 形 = 经 放 大 和 瓢 剔 的 波 形 不 一 致, 须 经 过 整 形 器 调 整 为 形 状 一 致 标 准 的 平 顶 波 后 才 能 触 发 电 路, 送 入 计 数 系 统, 得 出 计 数 结 果, (5) 计 数 得 出 结 果, 二 红 细 胞 检 测 原 理 绝 大 多 数 血 细 胞 分 析 仪 都 使 用 电 阻 法 进 行 红 细 胞 计 数 和 血 细 胞 比 容 测 定, 原 理 同 自 细 胞, 其 中 计 数 结 果 包 括 自 细 胞 由 于 红 自 细 胞 比 例 为 750 '1, 故 白 细 胞 因 素 可 忽 略 不 计, 当 有 自 血 病 或 贫 血 伴 有 核 红 细 胞 增 加 时, 应 减 去 自 细 胞 或 有 核 红 细 胞 三 血 红 蛋 白 含 量 检 测 经 稀 释 的 血 液 加 入 溶 血 剂 后, 使 细 胞 洛 解 释 放 出 血 红 蛋 白, 与 溶 血 剂 的 有 关 成 分 结 合 形 成 血 红 色 的 衍 生 物, 再 进 入 血 红 蛋 白 (H b) 检 测 系 统, 在 530~550nm 波 长 下 比 色, 吸 光 度 的 变 化 与 血 红 蛋 白 含 量 成 正 比 ( 图 1-1) r 3,- 30fl Ifll 小 板 一 一 版 冲 大 小 RDW MPV PCT 1 : 2" 000 桥 释 红 细 胞 PC 孔 + 产 生 脉 冲 4 血 标 丰 L >:lo fl 红 细 胞, 时 冲 大 小 RDW MPV MC 卫 HCLMCHC r 血 红 蛋 ól~ì~!11 池 + 血 rl 蛋 白 剖 1 1 : 250 稀 籽 L 白 细 胞 孔 -~I 数 + 脉 冲 大 中 f1 一 [[ 图 1-1 血 细 胞 分 析 的 具 体 流 程 注 E 加 溶 血 剂 后, 红 细 胞 破 坏, 白 细 胞 脱 水, 脱 水 后 白 细 胞 的 大 小 取 决 于 胞 内 有 形 成 分 的 多 少, L 为 单 个 核, 小, 颗 粒 少, 35-98f l, N 叶 多, 颗 粒 多, I1, M 核 虽 太, 颗 粒 少, MPV, 平 均 血 小 板 体 积, PCT, 血 小 板 比 积, RDW, 红 细 胞 分 布 宽 度, MCH, 平 均 血 红 蛋 白 含 量, MCHC, 平 均 血 红 蛋 白 浓 度 第 二 节 血 细 胞 直 方 图 与 疾 病 诊 断 先 进 的 血 细 胞 分 析 仪 不 仅 能 检 测 更 多 的 实 验 参 数, 而 且 还 能 提 供 相 应 的 直 方 图, 直 方 图 的 变 化 对 分 析 实 验 结 果 的 准 确 性 加 强 质 量 控 制 及 临 床 诊 断 有 重 要 意 义 此 外, 各 类 参 数 在 疾 病 2

14 第 1 章 血 细 胞 卦 析 仪 的 进 展 及 临 床 应 用 的 诊 断 中 也 有 噩 噩 童 义, 如 g 红 细 胞 卦 布 宜 度 (RDW), 是 反 映 缸 细 胞 体 积 异 质 性 改 变 的 重 ' 盘, 能 客 观 地 反 映 红 细 胞 大 小 不 等 的 程 度. 用 撞 z 1 缺 铁 性 贫 血 的 诊 断 和 疗 撞 观 察,2 缺 铁 性 黄 血 和 珠 置 白 生 成 障 碍 性 贫 血 的 鉴 别 诊 断 g 3 有 助 于 黄 血 的 病 因 学 分 类. 平 均 血 小 提 体 积 (MPV), 鉴 别 血 小 板 减 少 的 病 园 和 评 价 骨 髓 增 生 情 况. 血 小 板 比 积 (PCT), 反 映 血 小 板 的 且 盘 量, 是 PLT MPV 的 综 合 评 价 指 标 血 红 置 白 分 布 菌 度 (HDW), 反 映 红 细 胞 内 血 红 置 白 撞 度 异 质 性 改 变, 特 别 在 遗 恃 性 璋 形 虹 细 胞 增 多 症 和 伊 珠 蛋 白 生 成 障 碍 性 贫 血 的 语 断 有 重 要 意 义. 红 细 胞 血 红 蛋 白 骨 量 分 布 密 度 (HCDW), 用 于 高 龄 盘 血 和 IDA 的 鉴 别 诊 断. 一 自 细 胞 直 方 图 与 疾 病 诊 断 L 正 常 自 细 胞 直 方 图 不 同 的 仪 器 世 置 的 技 术 参 敢 不 同, 使 用 的 试 剂 不 同, 直 方 图 的 圄 形 也 平 且 相 同. 血 细 胞 粒 摩 卦 布 固 分 析 范 围 为 30...g00f1. 以 四 个 鉴 别 钱 来 完 成, 低 鉴 别 钱 (LD) 自 动 世 在 fl. 高 鉴 别 线 (UD) 世 在 的 处, 自 细 胞 糟 血 量 把 自 细 胞 分 布 图 分 成 三 个 部 分 小 细 胞 中 细 胞 大 细 胞 ). 如 图 1-2 和 圄 1-3 所 示 z 2. 异 常 自 细 胞 直 方 图 ( 且 图 1-4 和 图 1-5) Wß C 4.5 RHBGC B 4.47 x HCT 129 MM CCV I MCH MPUCl HC 吗 L l n l I' W-SCR W MLCCR N - 飞,v - s cc 28.9 W- MCC x l W-LCC ( lt X \09 Xl0! 9 X IO' 川 o 200 lnl RDW- SD 40.4 ri 比 斗 1 D 飞.v 14.6 n Mrv I'- LCR fl n J 红 细 胞 ( f]) i 缸 小 眶 ([ 1 1~ 而 百 有 百 王 面 τ~o (%) (%) 固 1-2 Ac-900 系 列 血 细 胞 分 析 仪 正 常 直 方 固 注 E 直 方 闺 中 横 坐 标 为 血 红 细 胞 体 积 ( 单 位 自 由, 纵 坐 标 为 血 细 胞 百 分 比 (%). WBC 自 细 胞, RBC. 红 细 胞, HGB 血 红 蛋 白, HCT 血 细 胞 比 容, MCV, 平 均 红 细 胞 容 积, MCH. 平 均 红 细 胞 血 红 置 自 量 含 量 ;MCHC 平 均 红 阳 胞 血 红 蛋 白 浓 度, PLT 血 小 板, W-SCR. 白 细 胞 小 细 胞 百 分 比, W-MCR 白 细 胞 中 等 太 小 细 胞 比 例, W-LCR. 白 细 胞 太 细 胞 比 例, w-scc. 白 细 胞 小 细 胞 计 数, W-MCC 白 细 胞 中 等 太 小 细 胞 计 敏, W-LCC. 自 细 胞 太 细 胞 计 戳, RDW- 皿 红 细 胞 分 布 体 积 宽 度 >40fl,, PDW 血 小 扳 分 布 宽 匮, MPV 平 均 血 小 板 体 积 ;P-LCR 大 小 血 小 板 比 率 3

15 临 床 植 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 川 八 RDW- SD 41.9 fi, / J, RD 飞 V MPV 11.4 fl 们 固 1-3 S 归 mu F-800 血 细 胞 分 析 仪 正 常 宣 方 图 控 lrdw-sd 红 细 胞 分 布 宽 度 >4ofl;RDW. 红 细 胞 分 布 宽 度 impv 平 均 血 小 板 体 积 自 细 胞 飞.VßC 15.8 lq9/l LYM 啊. MID 0.1 刷 % G 仪 八 '} 也 自 细 胞 WßC 7.0 I09!L LYM % MI I) % GRA % o o 5U 100 [50 2UO 25U U 4 锁 } 图 1-4 中 性 粒 细 胞 比 例 糟 高 { 左 1 和 降 低 { 右 ] 的 AC-'OO 自 细 胞 直 方 图 注, LYM, 小 细 胞, MlD 单 核 细 胞, GR 九 中 性 粒 细 胞 22.8X 10 9 f L 4.9X lo'fl LYM I'H% MO+GR% LYM I'H== 1.5x 10'fL MO+GR == 2 1.3x lo'fl 困 1-' 中 性 越 细 胞 比 例 增 高 ( 左 } 和 降 低 { 右 } 的 S 严 mu: F-800 白 细 胞 宣 方 国 注, LYMPH% 小 白 细 胞 百 分 率 õmo+gr% 单 核 细 胞 和 中 性 粒 细 胞 百 分 率, LYMPH 小 自 细 胞 计 数, MO+GR. 单 核 细 胞 和 中 性 粒 细 胞 计 数 二 红 细 胞 直 方 图 与 疾 病 诊 断 1. 小 细 胞 性 盘 血 (l)rdw le 常 z 直 方 圄 1-61 显 示 红 细 胞 主 群 左 事, 分 布 在 ft. 峰 顶 约 在 7S f1 处 ordw13.4%. 提 示 为 " 小 细 胞 低 色 章 ", 血 片 上 RBC 体 积 偏 小, 大 小 一 致. (2)RDW 轻 度 增 高 g 直 方 圄 1-62 显 示 红 细 胞 主 群 左 事, 主 要 分 布 在 ft. 峰 顶 4

16 第 1 章 血 细 胞 分 析 仪 的 进 展 及 临 床 应 用 约 在 65fl 处 RDW 轻 度 增 高, 为 16.8% 提 示 为 " 小 细 胞 低 色 素 和 不 均 一 性 ", 血 片 上 红 细 胞 体 积 明 显 减 小, 大 小 差 异 不 明 显 (3 )RDW 明 显 增 高 : 直 方 图 显 示 红 细 胞 有 两 个 细 胞 峰, 小 细 胞 峰 明 显 左 移, 峰 顶 位 于 50fl 处 ; 较 大 细 胞 峰 顶 位 于 90fl 处, RDW 显 著 增 高, 达 35.4% 提 示 为 " 小 细 胞 低 色 素 和 不 均 一 性 " 血 片 上 红 细 胞 体 积 偏 小, 且 明 显 大 小 不 均 RBC 3.68 HGB89 RBC 3.38 RBC 4.5 HCT.271 HGB 70 HGB 103 岛 lcv 73.6 HCT.219 HCT MCV MCV 69.5 MCH24.2 MCH 20.7 MCH 22.5 MCHC329 MCHC320 MCHC 35.4 RD 矶 T 13.4 RD 矶 T 16.8 RDW 红 细 胞 红 细 胞 红 细 胞 图 1-6 RDW 直 方 图 与 小 细 胞 贫 血 注 :1 RDW 正 常 的 小 红 细 胞 直 方 图 ;2 RDW 轻 度 增 高 的 小 红 细 胞 直 方 图 ;1 RDW 明 显 增 高 的 小 红 细 胞 直 方 图 2. 太 细 胞 性 贫 血 (l) RDW 正 常 : 直 方 图 显 示 红 细 胞 峰 明 显 右 移, 主 群 分 布 在 75 ~ 130 日, 峰 顶 约 在 100fl 处 o RDW 仅 12.1% 提 示 为 " 大 细 胞 性 " 血 片 上 红 细 胞 体 积 较 大, 但 大 小 一 致 o (2)RDW 轻 度 增 高 : 直 方 图 显 示 红 细 胞 峰 明 显 右 移, 主 群 分 布 在 75~150fl, 峰 顶 约 在 105fl 处 o RDW 轻 度 增 高, 为 16.4% 提 示 为 " 大 细 胞 不 均 一 性 " 血 片 上 红 细 胞 体 积 明 显 增 大, 且 大 小 差 异 较 明 显 (3)RDW 明 显 增 高 : 直 方 图 显 示 红 细 胞 峰 明 显 右 移, 且 有 两 个 峰, 以 峰 顶 位 于 100fl 处 的 细 胞 峰 为 主 ;RDW 显 著 增 高, 达 25.8% 提 示 为 " 大 细 胞 不 均 一 性 " 血 片 上 红 细 胞 体 积 增 大, 且 大 小 差 异 较 明 显 RBC 2.84 RBC 2.36 RBC 2.37 MCV 99.7 HGB82 HGB 81 HC1.283 HCT.253 HCT. 205 ( HGB99 MCV MCV MCH34.9 MCH 34.7 MCH34.2 MCHC 350 MCHC 324 MCHC 324 人 RD 矶 T 12.1 RDW 16.4 RDW 红 细 胞 红 细 胞 红 细 胞 图 1-7 RDW 直 方 图 与 大 细 胞 性 贫 血 注 :1 RDW 正 常 的 大 红 细 胞 直 方 图 ;2 RDW 轻 度 增 高 的 大 红 细 胞 直 方 图 ;3 RDW 明 显 增 高 的 大 红 细 胞 直 方 图

17 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 3. 正 常 细 胞 性 贫 血 (l )RDW 正 常 : 直 方 图 显 示 一 一 红 细 胞 主 群 分 布 在 55 ~ 110fl, 峰 顶 约 在 88fl 处 RDW 13.3% 提 示 为 正 常 分 布, 血 片 土 红 细 胞 形 态 正 常, 大 小 一 致 (2)RDW 轻 度 增 高 : 直 方 图 显 示 红 细 胞 主 群 主 要 分 布 在 40~ 120 日, 峰 顶 约 在 80fl 处 红 细 胞 轻 度 增 高, 为 17.6% 提 示 为 " 不 均 一 性 " 血 片 上 红 细 胞 体 积 形 态 正 常, 大 小 差 异 不 明 显 (3)RDW 明 显 增 高 : 直 方 图 显 示 红 细 胞 主 群 分 布 在 40 ~ 150 日, 峰 顶 约 在 90fl 处, RDW 显 著 增 高, 达 25.7% 提 示 为 " 不 均 一 性 " 怀 疑 " 异 常 分 布 " 血 片 上 红 细 胞 形 态 正 常, 大 小 差 异 较 为 明 显 o RBC 3.07 RBC 3.05 RBC 3.40 HGB 89 HGB86 HGB99 HCT.268 HCT.265 HCT 308 MCV 87.4 MCV 86.8 MCV 90.7 MCH 29.0 MCH28.2 NCH MCHC. 337 八 2 MCHC 325 MCHC 321 RDW. 13 RDW 17.6 RD 矶 T 25.7 l...d, 气 红 细 胞 红 细 胞 红 细 胞 图 1-8 RDW 直 方 图 与 正 常 细 胞 性 贫 血 直 方 图 注 :1 RDW 正 常 的 小 红 细 胞 直 方 图 ;2 RDW 轻 度 增 高 的 小 红 细 胞 直 方 图 ;3 RDW 明 显 增 高 的 小 红 细 胞 三 血 小 板 直 方 图 与 疾 病 诊 断 1. 大 血 小 板 血 小 板 直 方 图 显 示 ( 图 1-9) : 血 小 板 分 布 峰 右 移, 在 35fl 处 才 接 近 横 坐 标, MPV 明 显 增 高, 达 13. 8f 为 : 大 血 小 板 ;MPV 和 RDW 正 常, 排 除 小 红 细 胞 干 扰 ; 而 在 白 细 胞 直 方 图 的 35fl 处 可 见 1 个 0.5cm 的 小 峰 血 片 上 可 见 较 多 的 血 小 板 2. 血 小 板 凝 集 血 小 板 直 方 图 显 示 ( 图 1-10) : 分 布 峰 左 侧 起 点 较 高, 离 横 坐 标 约 0.6cm, 右 侧 在 20fl 处 离 横 坐 标 约 0.4cm, 这 与 正 常 血 小 板 直 方 图 有 明 显 差 别 提 示 为 " 血 小 板 J 疑 集 ";MCV 和 RDW 正 常, 可 排 除 小 红 细 胞 干 扰 ; 而 在 白 细 胞 直 方 图 可 见 一 个 0.8cm 高 的 小 峰 血 片 上 可 见 5~15 个 聚 集 成 堆 的 血 小 板 3. 小 红 细 胞 干 扰 血 小 板 直 方 图 显 示 ( 图 1-11) : 在 分 布 峰 的 右 侧 离 横 坐 标 较 高, 呈 拖 尾 状 ; 提 示 血 小 板 分 布 异 常, 参 数 分 析 MCV 为 53.5fl; 血 片 上 可 见 较 多 的 小 红 细 胞, 白 细 胞 直 方 图 分 布 正 常 这 是 一 个 典 型 的 小 红 细 胞 干 扰 血 小 板 直 方 图 的 病 例

18 , 第 1 章 血 细 胞 卦 析 仪 的 进 展 及 临 床 应 用 L 飞 飞 LMEEVYOAB0C2<< EOI IOI O 2 面 面 自 细 胞 民 M1MMMR 4O10GCCC3C 飞 }VHBV3l 3C l 6 自 细 胞 400 WGMLYB RO C i 2 EO <.7 HA <.2 RMMMl HRlB GCDCCCC1 飞 BVi HV1i 3C3I9150 I73435 l l 红 细 胞 红 细 胞 ~ 飞 PpMPcGLPT rvv PPMPCiDPT1W V7093 7I NEXTIO 血 小 陋 血 小 l& 固 1-' 有 大 血 小 板 的 血 小 板 直 方 固 圈 1-10 有 血 小 板 报 集 的 血 小 板 直 方 圆 性, LY. 淋 巴 细 胞 ;MQ. 单 棋 细 胞 ;EQ. 嘈 酸 性 粒 细 胞, BA, 啼 ' 曼 性 位 细 胞 白 细 胞 4i mijl2 2阳 飞 红 1' 帽 300 : W 配 L Y O R O A MGEB l 46MMMWZ72 3 到 RßC 4.50 HGH 75 HCT.241 MCV 53.5 MCH 16.7 MC HC 312 RDW20.9 : l L 飞 : 3 " 一 - 皿 血 d E 白 I'LT314 I'L1'.320 MI'V 10.2 I' DW 16.9 国 1-11 小 红 细 胞 干 扰 的 血 小 敏 宣 方 图 7

19 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 四 小 血 小 板 血 小 板 直 方 图 显 示 ( 图 1-12) : 血 小 板 分 布 于 2~15fl 范 围, 集 中 于 2~ 10 日, MPV 仅 为 6.4fl 提 示 为 " 小 血 小 板 " 血 片 上 可 见 许 多 小 血 小 板 l 八 PLT 329 PCT.227 MPV 6.9 PDW 16.4 血 小 报 图 1-12 小 红 细 胞 干 扰 的 血 小 板 直 方 图 第 三 节 正 常 参 考 值 对 照 表 常 用 各 参 数 的 含 义 及 参 数 范 围 见 表 1-1 表 1-1 常 用 各 参 数 的 含 义 及 参 数 范 围 英 文 简 称 中 文 全 称 参 考 值 范 围 WBC RBC Hb HCT MCV MCH 岛 1CHC RDW-CV RDW-SD HDW HCDW PLT MPV P-LCR PCT NEUT LYMPH,LYM MONO EO BASO,BA 白 细 胞 (4. 0~10. 0) X 10' /L 红 细 胞 (4. 0~5. 5) X /L 血 红 蛋 白 120~160g/L 血 细 胞 比 容 O. 42~0. 49 平 均 红 细 胞 体 积 82~92fl 平 均 红 细 胞 血 红 蛋 白 含 量 27~31pg 平 均 红 细 胞 血 红 蛋 白 浓 度 320~350g/L 红 细 胞 分 布 宽 度 <0.14fl 红 细 胞 分 布 宽 度 <40fl 血 红 蛋 白 分 布 密 度 红 细 胞 血 红 蛋 白 含 量 分 布 密 度 O. 152 士 O. 94 血 小 板 C1 00~300) X 10' /L 平 均 血 小 板 体 积 9~17fl 大 小 血 小 板 比 率 O. 15~0. 30 血 小 板 比 积 PLTXMPV 大 自 细 胞 3~5XI0' /LCO. 5~0. 7) 小 自 细 胞 1~3XI09 /LCO. 2~0. 4) 单 核 细 胞 O. 067~ X 109 /L (0. 03~0. 08) 嗜 酸 性 粒 细 胞 O. 005~0. 05 X 10' /LCO. 005~0. 05) 嗜 碱 性 细 胞 O. 02~0. 05 X 10' /L ( 薛 强 黄 庆 府 伟 灵 )

20 第 1 章 血 细 胞 分 析 仪 的 进 展 及 临 床 应 用 参 考 文 献 1 周 光 延 血 常 规 检 查 中 国 临 床 医 生.2000, 28(6), z 代 碧 珍, 杭 永 伦. 血 常 规 标 本 的 采 集 对 检 验 结 果 的 影 响. 泸 州 医 学 院 学 报.2000, 23 (1), 9 3 岳 保 红, 敬 明 辉, 黄 波 田, 等 缺 铁 性 贫 血 MCHC 结 果 分 析, 上 海 医 学 检 验 杂 志.2000, 15(4), 罩 理 灵, 石 青 峰, 罩 理 现 - 肝 病 患 者 红 细 胞 体 积 分 布 宽 度 变 化 及 临 床 意 义 - 华 夏 医 学.2000, 13(4), 王 爱 梅 探 讨 血 液 分 析 仪 对 自 血 病 诊 断 的 实 用 价 值. 实 用 新 医 学.2000, 2( 的, 安 凤 娟. ABX MICROS OT-18 全 自 动 血 液 分 析 仪 臼 细 胞 分 类 应 用 探 讨. 悔 郭 医 学 高 等 专 科 学 校 学 报, 1999, 12(2), 黄 劲, 张 敬, 彭 政. Sysmex SE-9000 血 液 分 析 仪 白 细 胞 分 类 结 果 的 评 价 同 济 医 科 大 学 学 报, 2000; 29(4), 刘 英, 李 萍 血 液 分 析 仪 中 异 常 提 示 符 的 意 义. 黑 龙 江 医 药 科 学.1998, 21(6), 43 9 郝 崇 华, 刘 建 红 SF-3000 全 自 动 血 液 分 析 仪 自 细 胞 分 类 的 临 床 应 用 实 用 医 技.2000, 7(8), 陈 国 梁, 王 春 燕, 张 强 发, 等 CD- 3500R 血 液 分 析 仪 白 细 胞 分 类 结 果 评 价 上 海 医 学 检 验 杂 志.2000, 15 (2), 钟 政 荣, 王 月 华, 如 j 凯, 等. 血 小 板 计 数 时 报 警 信 号 分 析. 蚌 埠 医 学 院 学 报.2000, 25(2), 谢 友 运, 殷 明 刚, 王 亚 亿, 等 CELL DYN 610 型 血 液 分 析 仪 测 定 指 端 血 静 脉 血 七 项 参 数 结 果 分 析 自 贡 医 药. 1996, 18(2), Bartels PC, Schoorl-M. Time dependent increase of differential monocyte count on the Sysmex NE-8000 Clin Lab Haematol.1998, 20(3), Korninger L, Mustafa G, Schwarzinger 1. The Haematology Analyser SF-3000: performance of the 8UtO mated white blood cell differential CQunt in c 皿 parison to the Haematology Analyser NE Clin Lab Haematol. 1998, 20(2), Matsuno K, Ishizuka S. New technology of automated blood cel1 differential counting. Rinsho Byori, 1998, 46(4), Buttarello M, Bulian p, Temporin V, et al. Sysmex SE-9000 hematology analyzer: performance evalua tion on leukocyte differential counts using an NCCLS H20-A protocol. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Am J Clin Pathol. 1997, 108(6), Vives-Corrons JL, Jou JM, Aymerich M, etal. Evaluation of the Coulter MAXM. Differentialleukocyte count and left-shift alarm. Sangre Barc, 1997; 42 (1): Lippi G, Nicoli M, Modena N, etal. Clinical performance of leukocyte differential on the new Roche Cobas Vega haematological analyzer. Eur J Clin Chem Clin Biochem, 1997; 35(2): Despotis GJ, Alsoufiev A, Hogue CW, etal. Evaluation of complete blood count results from a new, on site hemocytometer compared with a laboratory-based hemocytometer. Crit Care Med, 1996; 24 (7): Joyner RE, Brooks MJ. Evaluation of the automated leucocyte count and differential from the Cel1-Dyn 3500 in sickle cell disease. Clin Lab Haematol, 1995; 17(4): Fodinger M, Speiser-W, Karabentcheva S, et al. Evaluation of a total hematology analysis system (Sys mex H S-(30). Benefits for large laboratories by reducing manual work load and optimizing screening efficacy for pathologic samples. Am J Clin Pathol, 1995; 104(5): q

21 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 22 Lacombe F, Cazaux N, Briais A, etal. Evaluation of the leukocyte differential flags on an hematologic an alyzer. The Cobas Argos 5 Diff. Am J Clin Pathol. 1995, 104(5), Corberand JX, Segonds C, Fontanilles AM, et al. Evaluation of the Vega haematology analyser in a university hospital setting. Clin-Lab-Haematol, 1999; 21(1): Takubo T, Tatsumi-N. Quality control in a manual and an automated leukocyte different 国 1 count. Southeast Asian J Trop Med Public Health, 1999; 30 (Suppl3) : Dzik S, Moroff G, Dumont L. A multicenter study evaluating three methods for counting residual WBCs in WBC-reduced blood components: Nageotte hemocytometry, flow cyt 皿 etry, and microfluorometry. Transfusion, 2000; 40(5): 口

22 在 17 世 纪, Leeuwenhoek 对 精 于 进 行 了 首 次 描 述, 但 直 到 1928 年, 精 于 计 数 才 被 认 为 与 男 性 生 育 力 相 关 自 此, 各 种 精 子 试 验 及 精 液 参 数 的 研 究 开 始 逐 步 发 展, 以 期 能 鉴 别 男 性 是 否 具 有 生 育 能 力. ~acleod(1942) MacLeod 和 Gold (l 953) Eli.sson (l 97 1) 及 Hellinga (l 949, 1976) 等 几 位 科 学 家 建 立 的 精 子 与 精 液 传 统 分 析 基 础 理 论 与 方 法, 至 今, 仍 具 有 重 要 的 参 考 价 值, 并 且 是 许 多 新 方 法 的 重 要 参 考 指 标 不 育 是 一 个 世 界 性 问 题. 20 世 纪 90 年 代, 联 合 国 世 界 卫 生 组 织 (World Health Organi zation, WHO) 统 计 资 料 显 示, 全 球 约 15% 育 龄 夫 妇 存 在 不 育 问 题, 其 中, 男 性 因 素 导 致 的 不 育 占 15%, 女 性 因 素 导 致 的 不 育 占 30%, 其 余 部 分 则 是 男 女 双 方 共 同 的 因 素 和 其 他 未 确 定 因 素 所 导 致 我 国 同 期 统 计 资 料 显 示, 育 龄 夫 妇 不 育 的 发 生 率 约 为 12.5% 此 外, 随 着 科 技 的 飞 速 发 展, 全 球 污 染 问 题 日 益 严 重, 人 类 的 精 于 质 量 正 悄 然 下 降 在 过 去 50 年 时 间 里, 男 性 精 子 数 量 几 乎 减 少 了 一 半, 并 且, 还 以 每 年 2.1% 的 速 度 在 减 少 同 时, 畸 形 劣 质 精 子 比 例 逐 渐 增 多, 精 子 活 力 穿 透 力 致 孕 率 在 不 断 下 降, 以 致 使 男 性 不 育 的 比 例 也 正 在 逐 年 上 升. 因 此, 随 着 社 会 的 进 步, 医 学 的 发 展, 人 们 对 评 价 男 性 生 育 能 力 及 精 子 质 量 的 精 液 分 析 实 验 诊 断 理 论 与 技 术 提 出 了 更 高 的 耍 求, 近 年 来, 逐 步 发 展 起 来 的 抗 精 子 抗 体 检 测 计 算 机 辅 助 的 精 液 分 析 精 液 质 量 分 析 仪 流 式 细 胞 精 液 分 析 等 在 精 液 分 析 领 域 的 应 用, 为 全 面 准 确 快 速 客 观 地 评 价 精 液 质 量 提 供 了 可 靠 的 手 段, 广 泛 应 用 于 临 床 男 性 不 育 精 子 与 精 液 质 量 的 评 价, 以 及 体 内 或 体 外 人 工 授 精 精 于 库 精 子 冷 冻 与 保 存 等. 第 一 节 精 液 分 析 现 状 精 液 (semen) 主 要 由 精 子 (spermatozoa, sperm) 和 精 浆 Cseminal plasma) 两 大 部 分 组 成, 精 于 是 男 性 的 生 殖 细 胞 (germ cel1); 精 浆 是 运 送 精 于 的 载 体, 也 是 营 养 精 于 激 发 精 于 活 力 的 重 要 物 质 a 精 子 是 由 阜 丸 产 生, 精 浆 则 是 男 性 副 性 腺 ( 附 晕 精 囊 前 列 腺 尿 道 球 腺 和 尿 道 旁 腺 ) 分 泊 的 混 合 液. 在 精 液 中 精 子 仅 占 很 少 的 一 部 分, 大 部 分 都 是 精 浆. 困 此 事 丸 输 精 管 道 及 附 属 性 腺 的 结 构 和 功 能 的 损 害 或 病 变 均 可 影 响 精 液 质 量 而 且 人 体 是 一 个 整 体, 除 了 全 身 性 疾 病 会 影 响 精 液 质 量 外, 每 一 个 体 所 处 环 境 的 改 变 营 养 有 害 物 品 接 触 吸 烟 饮 酒, 甚 至 精 神 情 绪 改 变, 都 会 引 起 精 液 质 量 的 变 化. 正 常 人 精 液 中 的 精 囊 液 与 前 列 腺 液 的 比 例 为 2' 1. 精 囊 液 偏 碱, 前 列 腺 液 偏 酸, 因 而 精 液 ph 偏 碱, 一 般 为 O. 精 液 的 渗 透 压 对 精 子 的 活 力 具 有 重 要 的 影 响 作 用, 如 渗 透 压 过 高 时 精 子 出 现 曲 尾 畸 形. 人 类 刚 射 出 精 液 的 渗 透 压 远 远 低 于 生 理 盐 水 的 渗 透 压, 一 般 为 生 理 盐 水 的 在 正 常 情 况 下, 附 事 内 的 渗 透 压 很 高, 精 于 在 附 擎 的 渗 透 压 环 境 中 失 水, 活 力 极 低, 代 谢 很 慢, 因 而 能 够 被 保 存. 精 于 一 且 离 开 附 率 与 精 浆 发 生 接 触, 立 即 进 入 低 渗 环 境, 从 而 吸 收 水 分 呈 现 激 活 状 态 11

23 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 一 精 液 分 析 标 本 的 采 集 与 运 送 精 液 标 本 的 采 集 与 运 送 是 精 液 检 查 的 一 个 重 要 步 骤, 采 集 与 运 送 方 法 恰 当 与 否 将 直 接 影 响 检 查 结 果 的 准 确 程 度 在 采 集 精 液 标 本 前 必 须 禁 房 事, 禁 欲 时 间 最 短 不 得 少 于 48h. 最 长 不 得 超 过 7d. 由 于 精 子 生 成 数 目 变 化 范 围 较 大, 且 精 液 分 析 受 多 种 因 素 ( 环 境 温 度 等 ) 的 影 响, 因 此 不 能 单 凭 一 次 精 液 分 析 结 果 做 出 判 断, 一 般 应 间 隔 1~2 周 进 行 2 或 3 次 复 查 圄 标 本 运 送 过 程 中 本 应 当 保 存 在 适 当 的 温 度 环 境 下 (20~40 "C). 温 度 过 高 或 过 低 都 将 影 响 精 子 活 力 或 活 率, 精 液 标 本 应 当 在 采 集 后 于 保 温 条 件 下 (20 ~ 40 "C)l h 内 送 到 实 验 室 检 验, 液 化 后 立 即 分 析, 或 在 射 精 后 lh 内 分 析 a 如 果 未 收 集 到 射 出 的 全 部 精 液, 特 别 是 丢 失 了 射 精 过 程 中 的 第 一 部 分 精 液 的 标 本, 以 及 标 本 运 送 过 程 的 时 间 过 长 ( 超 过 2h) 标 本, 均 不 能 做 精 液 分 析 精 液 采 集 方 法 主 要 有 手 淫 法 和 体 外 排 精 法 其 中, 手 淫 法 最 为 理 想, 采 精 者 可 直 接 在 实 验 室 内 进 行, 也 可 以 让 采 集 者 在 一 个 安 静 的 房 间 由 本 人 手 程 将 精 液 射 入 灭 菌 干 燥 容 器 内, 在 30min 内 送 到 化 验 室 并 注 意 保 温 而 体 外 排 精 法 由 于 易 漏 掉 精 子 密 度 最 高 的 前 段 精, 故 不 主 张 采 用, 仅 适 用 于 手 在 E 或 电 按 摩 采 集 法 不 能 采 精 的 患 者 二 精 液 分 析 的 目 的 就 临 床 医 师 而 言, 精 液 分 析 的 目 的 是 观 测 生 育 力 鉴 别 不 育 原 因 或 检 测 生 育 力 的 变 化, 他 们 所 关 心 的 是 受 精 或 避 孕 对 精 液 质 量 的 最 低 标 准 而 就 流 行 病 学 或 毒 理 学 家 言, 精 液 分 析 是 评 价 工 作 场 所 环 境 因 素 药 品 化 学 物 质 的 危 险 因 素 的 基 础 对 于 整 个 社 会 而 言, 对 人 群 生 育 力 降 低 概 率 的 判 断 远 远 重 要 于 对 个 人 生 育 力 高 低 的 准 确 评 价 当 然, 精 液 分 析 的 最 终 目 的 是 要 能 够 精 确 地 预 测 或 判 断 男 性 个 体 精 液 标 本 的 生 育 力 但 由 于 精 液 分 析 受 多 种 因 素 的 影 响, 要 达 到 上 述 目 标 还 比 较 困 难 对 生 育 力 的 精 确 预 测 或 判 断 受 限 于 精 子 本 身 的 特 征 因 素, 以 及 受 精 过 程 与 体 外 精 液 分 析 的 方 法 等 多 种 因 素 而 且, 精 子 生 青 力 还 受 限 于 精 卵 结 合 的 方 式, 如 是 性 交 还 是 体 外 人 工 授 精 Ci n vitro Fertilization, IVF) ; 精 子 状 态, 如 是 新 鲜 精 子 还 是 冻 融 精 子 s 以 及 妇 女 因 素, 如 女 性 的 年 龄 子 宫 或 输 卵 管 环 填 因 素 等 精 液 分 析 的 结 论 有 时 比 较 明 朗 当 精 液 分 析 结 果 显 示 无 精 子 无 快 速 前 向 运 动 精 子 或 异 常 形 态 精 子 比 例 较 高 时, 男 性 生 育 力 可 明 确 地 判 断 为 比 较 差 但 在 多 数 情 况 下, 对 于 精 液 分 析 结 果 的 判 断 需 要 一 定 的 经 验 与 技 术 团 三 精 液 分 析 的 主 要 内 容 ( 一 精 液 常 规 分 析 精 液 常 规 分 析 FA 或 RSA) 是 评 价 男 性 生 育 力 的 传 统 方 法, 其 主 要 检 测 内 容 包 括 精 子 密 度 活 率 与 活 力 形 态 学 的 检 查 等 回 它 可 提 供 辜 丸 精 子 发 生 及 附 阜 精 子 成 熟 情 况 据 估 计, SFA 评 价 生 育 力 仅 有 70% 的 准 确 性, 即 SFA 与 实 际 生 育 力 之 间 不 尽 一 致 a 除 了 无 精 子 症 或 少 弱 畸 形 精 子 症 外, 精 液 常 规 分 析 并 不 能 把 有 生 育 力 和 无 生 育 力 的 患 者 完 全 区 分 开, 但 是, 精 确 的 SFA 仍 然 是 男 性 不 育 的 重 要 检 测 手 段 1. 精 液 的 理 化 特 征 精 液 是 一 种 有 一 定 载 稠 度 的 半 流 动 状 液 体. 精 液 的 颜 色, 难 以 做 出 确 切 的 判 断 一 般 认 为, 正 常 人 刚 射 出 的 精 液 有 强 烈 剌 激 的 石 榴 花 样 的 腥 味, 呈 灰 白 或 灰 黄 12

24 第 2 章 精 液 的 实 验 室 诊 断 现 状 与 研 究 进 展 色, 自 行 液 化 后 则 为 半 透 明 的 乳 白 色 或 灰 黄 色 目 长 时 间 未 排 精 者 射 出 的 精 液 可 略 带 淡 黄 色 老 年 男 性 精 液 呈 暗 黄 色 精 液 量 的 主 要 组 成 部 分 是 附 属 性 腺 的 分 泌 物 正 常 人 一 次 排 出 的 精 液 量 为 2~5ml. 平 均 为 2.4 士 1. 3ml. 但 精 液 量 与 射 精 频 数 有 关 圄 一 定 的 精 液 量 是 保 证 精 子 活 动 的 问 质, 并 可 中 和 阴 道 的 酸 性 分 泌 物, 保 护 精 子 的 生 命 力, 以 利 于 精 子 通 过 子 宫 颈 口 圄 < 1. 5ml >8.0ml 可 视 为 异 常 因 刚 射 出 的 精 液 呈 稠 厚 的 胶 冻 状, 在 前 列 腺 分 泌 的 蛋 白 酶 的 作 用 下, 5min 后 从 凝 固 状 态 转 变 成 流 动 状 液 体 的 过 程, 称 之 为 精 液 液 化 Cliquescence) 精 液 的 暂 时 凝 固 及 随 后 的 液 化 属 正 常 生 理 现 象, 与 精 襄 腺 分 泌 的 凝 固 蛋 白 及 前 列 腺 分 泌 的 液 化 因 子 有 关, 观 察 液 化 时 间, 标 本 应 放 在 37 'C. 每 10min 观 察 1 次 a 正 常 人 刚 排 出 的 精 液 有 高 度 的 截 稠 性, 镜 下 观 察 精 子 呈 不 活 动 状 态 精 液 离 体 后 5~10min 开 始 液 化.20~40min 完 全 液 化, 液 化 后 可 看 到 具 有 完 全 正 常 活 力 的 精 子 精 液 秸 稠 度 测 定 对 评 价 精 浆 质 量 提 供 了 一 个 客 观 依 据 辈 古 稠 度 增 高 的 临 床 意 义 与 精 液 液 化 异 常 相 同, 并 可 反 映 前 列 腺 困 慢 性 炎 症 所 造 成 的 功 能 障 碍 精 液 的 ph 值 由 来 自 前 列 腺 的 酸 性 分 泌 物 及 精 囊 的 碱 性 分 泌 决 定, 正 常 范 围 为 7. 2~ 8.0. 精 液 ph 值 >8. O. 常 见 于 急 性 感 染, 应 怀 疑 前 列 腺 因 炎 症 而 导 致 酸 分 泊 物 的 减 少, 如 柑 橡 酸 g 精 液 ph 值 <7. O. 多 见 于 少 精 或 无 精 症, 常 反 映 输 精 管 道 阻 塞 先 天 性 精 囊 发 育 不 全 或 附 靠 病 变 注 意, 在 精 液 标 本 采 集 不 完 全 的 情 况 下, 也 应 当 完 整 地 记 录 精 液 的 ph 值 2. 精 子 密 度 ( 浓 度 ) 及 精 子 总 数 精 子 密 度 (sperm density) 是 指 每 毫 升 精 液 中 的 精 子 数 日, 也 称 精 子 计 数 (sperm count) 和 精 子 浓 度 (sperm concentration) 精 子 总 数 (tot.1 sperm count) 表 示 表 示 一 次 排 精 全 部 射 出 精 液 量 中 的 精 子 总 数 日, 即 精 子 密 度 (1 0' /m!) 与 精 液 量 (ml) 的 乘 积 由 于 正 常 人 精 子 有 较 高 的 密 度 活 动 度 及 精 液 有 较 强 的 教 稠 性, 计 数 前 应 进 行 适 当 的 稀 释, 并 杀 死 或 抑 制 精 子 活 动 和 降 低 精 液 的 霜 稠 性 20 世 纪 80 年 代 以 前 常 采 用 计 算 血 液 白 细 胞 方 法, 使 用 标 准 血 细 胞 计 数 器 来 检 验 将 精 液 标 本 充 分 混 匀 后, 按 1'20 比 例 稀 释 后, 滴 入 血 细 胞 计 数 盘 内, 于 室 温 中 静 置 2,... 5min, 使 精 子 完 全 沉 积, 然 后 以 高 倍 镜 计 数 中 央 大 方 格 内 5 个 中 方 格 的 精 子 数, 计 数 原 则 为 " 数 上 不 数 下, 数 左 不 数 右 " 5 个 中 方 格 的 精 子 数 乘 以 10' 即 为 每 ml 精 液 中 的 精 子 数 现 在 常 采 用 Makler 精 子 计 数 板 Microcell 精 子 计 数 池 计 算 机 辅 助 精 液 分 析 (CASA) 精 子 质 量 分 析 仪 (SQA) 精 子 图 像 分 析 仪 等 检 测 精 子 总 数 可 反 映 体 内 精 子 生 成 状 态, 并 与 禁 欲 时 间 长 短 有 关. 正 常 人 精 液 精 子 密 度 变 化 很 大 Glezennan 和 Bartoou (1 986) 报 道, 正 常 精 液 的 精 子 密 度 为 (3 0~250) X 10' /L, 国 内 江 鱼 报 道 为 (1 0~130) X 10' /L, 王 信 少 (1 989) 等 报 道 为 (29~167) X 10' /L. WHO 规 定 2 精 子 密 度 致 孕 的 低 限 为 20 X 10' /L. 一 次 排 精 总 数 少 于 1 X 10' /L 为 不 正 常 目 前 公 认, 精 子 密 度 低 于 20 X 10' /L 为 不 正 常, 连 续 3 次 检 查 皆 低 下 者 可 确 定 为 少 精 症, 精 液 中 多 次 未 查 到 精 子 为 无 精 子 症, 主 要 见 于 辈 丸 生 精 功 能 低 下, 先 天 性 输 精 管 精 囊 缺 陷 或 输 精 管 阻 塞 但 必 须 强 调 的 是, 精 子 数 20 X 10' /L 的 患 者 并 非 无 生 育 力, 有 些 受 孕 需 要 较 长 时 间 而 已 回 精 索 静 脉 曲 张 铅 等 重 金 属 有 害 工 业 污 染 大 剂 量 放 射 线 及 某 些 药 物, 均 可 引 起 精 子 减 少 正 常 人 从 50 岁 开 始 精 子 数 减 少, 以 至 逐 步 消 失 3. 精 子 活 力 与 活 率 精 子 活 力 (motility) 是 指 活 动 精 子 的 运 动 能 力, 是 测 定 精 子 活 动 能 力 的 定 性 方 法 g 精 子 活 率 (vitality) 是 指 精 子 总 数 中 活 精 子 所 占 比 例, 是 测 定 活 精 子 和 死 精 子 的 定 量 方 法 精 子 活 力 与 活 率 取 决 于 奋 鞭 毛 运 动 精 子 的 百 分 率 该 检 验 要 在 射 精 后 2h 内 进 行, 精 液 标 本 应 保 持 在 37 'C 从 完 全 液 化 并 充 分 混 匀 的 精 液 标 本 中 取 一 滴 (<10μ1) 新 鲜 精 液 滴 13

25 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 于 干 净 标 准 的 载 玻 片 或 专 用 于 精 液 分 析 的 计 数 板 上, 盖 上 盖 玻 片, 室 温 (l 8~24 "C) 静 置 lmin, 在 低 倍 显 微 镜 F 随 机 选 择 10 个 视 野, 观 察 精 子 活 动 状 态, 计 算 活 动 精 子 百 分 率. 应 当 注 意, 检 测 用 的 精 液 量 及 盖 玻 片 大 小 应 当 标 准 化, 以 保 证 分 析 时 精 液 量 的 一 致 性 ( 如 20μ1) 盖 玻 片 至 玻 片 的 高 度 应 当 使 精 子 具 有 可 充 分 旋 转 运 动 的 空 间 因 精 子 活 力 可 受 时 间 温 度 精 液 液 化 程 度 等 的 影 响, 因 此, 应 当 控 制 好 室 温, 当 温 度 范 围 超 过 18~20 "C 肘, 精 子 动 力 会 有 部 分 改 变, 因 此, 实 验 室 的 室 温 应 当 标 准 化. 精 子 的 前 向 运 动 是 其 质 量 评 估 的 关 键 o 精 液 活 力 分 为 4 个 等 级 ( 表 2-1). 国 内 习 惯 分 为 5 个 等 级 ( 表 2-2) WHO (l 994) 将 表 2-1 精 子 活 动 级 别 (WHO 1994) 表 2-2 精 于 运 动 级 别 { 国 内 } 级 别 精 子 运 动 状 态 级 别 精 子 运 动 状 态 A B C D 快 速 直 线 前 向 运 动 慢 速 或 无 定 向 运 动 非 前 向 运 动 不 运 动 I E 皿 町 不 活 动, 无 向 前 运 动 活 动 不 良, 向 前 运 动 微 弱, 不 呈 直 线 运 动, 也 不 活 泼 活 动 一 般, 有 中 等 的 向 前 运 动 较 好, 有 中 速 运 动, 但 波 形 运 动 的 较 多 良 好, 为 快 速 直 线 运 动, 很 快 超 越 一 个 视 野, 运 动 活 泼 精 子 活 力 检 验 除 了 显 微 镜 检 查 外, 还 有 连 续 摄 影 法 和 精 子 质 量 分 析 仪 测 定 法 a 在 用 上 述 方 法 评 价 精 子 活 率 时, 检 测 结 果 易 受 多 种 因 素 影 响, 如 将 在 精 液 中 不 动 的 精 子 均 判 定 为 死 精 子. 现 主 要 采 用 精 子 体 外 活 体 染 色 技 术 定 量 测 定 精 子 活 率 精 子 体 外 活 体 染 色 原 理 在 于, 精 子 是 否 染 色 与 精 子 膜 的 损 伤 程 度 有 关, 死 精 子 因 其 头 部 膜 受 损, 染 色 液 可 以 渗 透 到 细 胞 内 而 使 细 胞 着 色, 而 活 精 子 则 有 完 整 的 细 胞 膜, 染 色 液 不 易 渗 入, 精 子 不 着 色. 常 用 的 精 子 体 外 活 体 染 色 技 术 主 要 有 伊 红 Y 或 胎 盼 蓝 法 和 苯 胶 黑 伊 红 法 如 果 级 和 I 级 精 子 在 40% 以 上, 常 为 男 性 不 育 症 的 原 因 之 一 精 索 静 脉 曲 张 者 由 于 静 脉 回 流 不 畅 造 成 阴 囊 内 温 度 过 高 和 辜 丸 组 织 缺 氧, 可 使 精 子 活 力 降 低 泌 尿 生 殖 系 统 的 非 特 异 性 感 染, 如 太 肠 埃 希 菌 感 染, 以 及 某 些 抗 代 谢 药 抗 癌 药 雌 激 素 氧 氮 芥 ( 氧 化 氮 芥 ) 等, 都 可 使 精 子 活 力 下 降 4. 精 子 形 态 精 子 形 态 (mophorlogy) 的 检 测 对 精 母 细 胞 和 生 育 力 是 一 个 敏 感 的 指 标. 正 常 形 态 精 子 似 蠕 蚂 状, 由 头 体 尾 三 部 分 构 成 头 部 略 扁, 呈 卵 圆 形, 顶 体 区 清 晰 规 则, 占 精 子 头 部 40%~70%. 在 精 子 头 部 前 端 呈 透 亮 区 g 体 部 细 长, 不 到 头 宽 的 1/ 3. 轮 廓 直 而 规 则, 与 头 纵 轴 成 一 直 线 g 尾 部 细 长, 外 观 规 则 而 不 卷 曲, 一 般 长 50~ 60μmo 胞 浆 小 滴 ( cytop!asma drop!et) 是 精 子 的 残 存 体, 大 小 不 超 过 精 子 头 部 1/3. 与 头 部 相 连 一 些 形 态 粗 大 的 畸 形 精 子 在 未 染 色 的 精 液 中 通 过 亮 视 野 显 微 镜 检 查 就 能 明 确 随 着 相 差 显 微 镜 的 使 用, 通 过 载 玻 片 上 湿 的 精 液 标 本 就 可 以 获 得 细 致 的 精 子 形 态 学 检 查 但 是, 最 准 确 的 检 查 需 要 将 精 液 标 本 染 色 后 显 微 镜 观 察 当 精 子 计 数 <10X 10' /m! 时, 应 将 精 液 500r/min 离 心 10min, 取 沉 淀 涂 片 g 精 子 数 >10X 10' /m! 时, 直 接 取 l 滴 精 液 涂 片, 空 气 中 自 然 干 燥 精 液 涂 片 染 色 方 法 很 多, 巴 民 染 色 法 是 男 科 实 验 室 中 最 常 用 的 精 子 染 色 方 法 其 他 常 用 的 有 HE( 苏 木 精 - 伊 红 染 色 法 或 瑞 - 姬 民 染 色 法, 形 态 的 特 殊 鉴 别 可 用 改 良 巴 民 染 色 法, 自 细 胞 与 生 精 细 胞 的 鉴 别 可 使 用 WHO 推 荐 的 正 甲 苯 眩 蓝 过 氧 化 物 酶 染 色 法. 精 子 异 常 形 态 种 类 较 多, 但 缺 乏 统 一 分 类 标 准, 各 种 畸 形 精 子 见 表 正 常 精 液 中 异 常 形 态 精 子 10%~15%.>20% 为 异 常 精 子 畸 变 可 出 现 在 精 子 产 生 和 附 辜 储 存 过 程 中 未 成 14

26 第 2 章 精 液 的 实 验 室 诊 断 现 状 与 研 究 进 展 熟 精 子 增 多 与 附 皇 功 能 障 碍 有 关, 或 频 繁 射 精 也 可 造 成 异 常 精 子 的 形 态 常 与 感 染 外 伤 雄 激 素 变 化 或 化 学 药 物 及 遗 传 因 素 影 响 有 关 生 殖 系 统 的 非 特 异 性 感 染, 可 导 致 尖 头 和 不 定 形 头 精 子 比 例 增 多 精 索 静 脉 曲 张 由 于 静 脉 回 流 不 畅 造 成 阴 囊 内 温 度 过 高 和 事 丸 组 织 缺 氧, 可 引 起 精 子 头 部 或 体 部 肿 胀 或 缺 陷, 以 及 双 头 精 子 胞 浆 小 滴 精 子 卷 尾 精 子 的 增 多 服 用 激 素 或 某 些 化 学 药 品, 精 液 中 会 出 现 不 成 熟 的 精 子 及 其 他 生 殖 细 胞 和 精 子 细 胞 体 的 胞 质 小 滴 表 2-3 异 常 精 子 的 种 类 与 特 征 精 于 部 位 头 部 体 部 尾 部 其 他 异 常 形 态 种 类 大 圆 头 小 圆 头 尖 头 梨 形 头 无 头 双 头 无 顶 体 混 舍 畸 形 分 支 双 体 体 部 肿 太 缺 如 混 合 畸 形 无 尾 短 尾 双 尾 或 多 尾 卷 曲 尾 曲 尾 破 尾 混 合 畸 形 胞 浆 小 滴 异 常 形 态 特 征 头 部 长 >5.0μm, 宽 >3. μm 头 部 长 <4.0μm, 宽 <2.5μm 头 部 长 >7.0μm, 宽 <3. μm 头 部 呈 梨 形 仅 有 体 尾 部 2 个 头, 1 个 体 部 和 尾 部 头 部 呈 锅 铲 形, 顶 体 部 分 或 全 部 脱 落 上 述 2 种 以 上 头 部 畸 形 有 分 叉 z 个 体 部 体 部 粗 大, 宽 >2.0μm 无 体 部 上 述 2 种 以 上 体 部 畸 形 尾 部 缺 失, 只 有 精 子 头 明 显 比 正 常 形 态 精 子 尾 部 短 2 个 或 多 个 尾 部 尾 部 异 常 卷 曲, 可 尾 与 尖 衔 接 尾 部 呈 90. 弯 曲 尾 部 某 处 畸 形 呈 破 口 状 上 述 2 种 以 上 尾 部 畸 形 胞 浆 小 滴 大 于 正 常 精 子 头 部 的 1/3 ( 二 ) 精 子 功 能 指 标 分 析 传 统 的 精 液 分 析 检 查 主 要 包 括 精 子 密 度 活 力 与 活 率 形 态 学 指 标, 在 一 定 程 度 上 反 映 了 男 性 的 生 育 能 力 但 有 时 精 液 常 规 分 析 的 结 果 与 实 际 生 育 力 之 间 不 尽 一 致 临 床 上 常 发 现, 在 己 排 除 女 方 不 孕 因 素 的 基 础 上, 一 些 男 性 不 育 患 者 上 述 指 标 是 正 常 的, 妻 子 仍 不 能 怀 孕, 而 精 液 常 规 分 析 精 子 密 度 低 下 者 其 妻 子 仍 可 怀 孕 的 事 实 有 研 究 表 明, 精 液 常 规 分 析 与 实 际 生 育 力 的 一 致 性 仅 有 70% 精 子 功 能 指 标 的 测 定, 更 能 客 观 地 反 映 精 子 的 受 精 能 力, 是 对 精 液 常 规 分 析 的 必 要 补 充 a 精 子 功 能 测 定 主 要 有 =1 精 子 运 动 功 能 指 标 的 测 定 s 2 精 子 穿 卵 试 验 s 3 精 子 宫 颈 鑫 液 的 相 互 作 用 s 4 精 子 膜 功 能 测 定 g 5 精 子 核 功 能 测 定 g 6 精 子 线 粒 体 功 能 测 定 g 7 精 子 顶 体 反 应 和 顶 体 酶 活 力 测 定 等 1. 精 子 活 力 的 测 定 及 其 运 动 特 征 的 分 析 精 子 活 动 能 力 是 精 子 受 精 的 重 要 指 标, 因 此, 客 观 而 准 确 地 分 析 精 子 活 力 在 男 性 不 育 的 l 临 床 诊 断 中 占 有 极 为 重 要 的 地 位. 在 我 国, 目 前 15

27 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 临 床 上 仍 推 荐 由 训 练 有 素 的 检 验 人 员 严 格 按 照 WHO 编 辑 人 类 精 液 及 精 子 宫 颈 输 液 相 互 作 用 实 验 室 检 验 手 册 进 行 精 子 活 力 及 活 率 的 测 定 但 这 些 测 定 往 往 带 有 一 定 的 主 观 性 重 复 性 差 等 不 足 目 前, 已 发 展 了 一 系 列 客 观 评 价 人 类 精 子 活 力 及 其 运 动 特 征 的 新 技 术, 如 采 用 浊 度 分 析 法 激 光 散 射 测 量 仪 显 微 摄 像 术 连 续 分 步 曝 光 照 相 术 计 算 机 辅 助 的 精 液 分 析 (CASA) 技 术 等 其 中, 以 CASA 技 术 受 到 普 遍 重 视, 它 可 以 达 到 客 观 准 确 地 量 化 分 析 精 子 运 动 轨 迹, 获 得 精 子 运 动 的 多 项 参 数 然 而 CASA 系 统 受 诸 多 因 素 影 响, 如 测 定 精 子 浓 度 的 准 确 性 受 精 液 中 细 胞 成 分 和 非 精 子 的 颗 粒 物 质 的 干 扰, 测 定 活 动 精 子 百 分 率 也 受 精 液 中 非 精 子 物 质 的 干 扰, 以 及 由 于 不 同 厂 家 不 同 类 型 的 CASA 系 统 参 数 设 置 的 差 异 而 使 彼 此 的 检 测 结 果 无 相 比 性, 加 上 CASA 所 反 映 的 是 单 个 精 子 的 运 动 参 数, 缺 乏 对 精 子 群 体 的 了 解. 因 此, 当 前 仍 推 荐 以 直 接 目 测 法 来 判 断 精 子 群 体 活 力 及 其 活 动 精 子 百 分 率, 使 用 血 细 胞 计 数 器 来 测 定 精 子 数 2. 精 子 宫 颈 载 液 相 互 作 用 测 定 宫 颈 毅 液 是 精 子 在 受 精 过 程 中 须 穿 越 的 第 一 道 屏 障 只 有 月 经 中 期 妇 女 的 宫 颈 载 液 才 适 合 于 精 子 的 穿 透 影 响 精 子 穿 透 宫 颈 猫 液 的 因 素 包 括 宫 颈 军 古 液 的 理 化 状 态 精 浆 酶 的 活 性 及 精 子 运 动 的 质 量 精 子 和 宫 颈 毅 液 相 互 作 用 试 验 分 体 内 试 验 和 体 外 试 验 体 内 试 验 即 性 交 后 试 验 (post-coital test, PCT), 体 外 试 验 主 要 包 括 玻 片 试 验 毛 细 管 试 验 和 精 子 - 宫 颈 输 液 接 触 试 验 PCT 结 果 取 决 于 精 子 与 宫 颈 裁 液 的 相 互 作 用, 任 何 一 方 的 异 常 均 可 影 响 PCR 结 果 因 此, PCT 不 仅 能 测 定 宫 颈 薪 液 中 的 话 精 子 的 数 量, 也 可 以 了 解 性 交 后 一 定 时 间 内 精 子 在 女 性 体 内 存 活 和 运 动 情 况 毛 细 管 试 验 操 作 简 便, 实 验 条 件 易 控 制, 影 响 因 素 少, 特 别 是 可 以 作 用 供 者 的 宫 颈 输 液 或 宫 颈 毅 液 代 用 品, 可 方 便 地 同 时 检 测 一 批 标 本 此 外, 该 试 验 还 可 以 用 来 鉴 别 导 致 PCT 结 果 异 常 的 因 素 是 在 男 方 还 是 女 方, 具 有 很 大 的 临 床 实 用 价 值 影 响 毛 细 管 试 验 的 主 要 因 素 包 括 精 子 质 量 ( 精 子 活 动 力 形 态 正 常 精 子 百 分 率 宫 颈 苦 苦 液 的 性 状 试 验 时 的 温 度 穿 透 时 间 及 毛 细 管 放 置 的 位 置 玻 片 试 验 的 原 理 和 作 用 类 似 毛 细 管 穿 透 试 验, 区 别 在 于 此 法 在 载 玻 片 上 直 接 观 察 精 子 对 宫 颈 输 液 的 穿 透, 比 毛 细 管 法 更 为 简 便 3. 精 子 顶 体 反 应 和 顶 体 酶 活 力 测 定 人 类 精 子 在 离 开 男 性 生 殖 道 时, 还 不 能 立 即 与 卵 子 受 精 它 必 须 在 雌 性 生 殖 道 内 经 历 一 段 成 熟 过 程, 才 能 获 得 受 精 能 力, 这 一 生 理 现 象 称 为 精 子 获 能 人 类 精 子 顶 体 位 于 精 子 头 前 端, 覆 盖 在 精 子 核 前 面, 由 顶 体 帽 和 赤 道 板 组 成, 是 一 个 膜 结 合 的 帽 状 结 构 顶 体 内 含 有 多 种 蛋 白 水 解 酶 和 磷 酸 脂 酶 固 获 能 的 精 子 穿 过 卵 丘 细 胞 外 基 质 时 被 激 活 引 发 顶 体 反 应 (acrosome reaction, AR) 将 1 页 体 内 的 酶 释 放 出 来 以 溶 解 卵 放 射 冠 及 透 明 带 精 子 只 有 在 体 内 经 过 获 能 顶 体 反 应, 才 能 穿 入 卵 细 胞 与 其 融 合, 完 成 受 精 因 此, 检 测 精 子 是 否 发 生 顶 体 反 应 有 助 于 预 测 精 子 的 受 精 能 力. 精 子 顶 体 酶 是 一 种 特 殊 的 丝 氨 酸 水 解 蛋 白 酶, 它 在 引 起 精 子 顶 体 反 应 精 卵 特 异 性 结 合 使 精 子 穿 过 透 明 带 等 受 精 过 程 中 起 着 关 键 作 用, 目 前, 对 顶 体 酶 在 受 精 生 物 学 和 男 性 不 育 中 的 诊 断 价 值 越 来 越 引 起 人 们 的 重 视 a 检 测 精 子 顶 体 酶 的 试 验 主 要 有 凝 集 素 免 疫 荧 光 染 色 法 及 考 马 斯 亮 蓝 染 色 法 回 前 者 的 检 测 原 理 主 要 是 利 用 钙 离 子 载 体 A23187 诱 导 精 子 发 生 顶 体 反 应, 然 后 用 能 与 精 子 顶 体 中 含 有 的 大 量 糖 蛋 白 的 糖 基 结 合 的 豌 豆 凝 集 素 (pisum sativum ag glutinin, PSA) 作 为 探 针 检 测 精 子 顶 体 反 应 后 者 的 检 测 原 理 也 是 利 用 钙 离 子 载 体 A23187 诱 导 精 子 发 生 顶 体 反 应, 发 生 顶 体 反 应 后 的 精 子 顶 体 丢 失, 顶 体 区 不 着 色, 顶 体 完 整 而 被 考 马 斯 亮 蓝 染 上 紫 蓝 色 的 精 子 则 为 没 有 发 生 顶 体 反 应 的 精 子 精 子 顶 体 酶 活 力 的 测 定 可 直 接 用 明 16

28 第 2 章 精 液 的 实 验 室 诊 断 现 状 与 研 究 进 展 胶 法 测 定 精 子 顶 体 酶 活 性, 其 检 测 原 理 是 精 子 在 明 胶 制 成 的 薄 膜 上 孵 青 后, 引 起 顶 体 的 解 聚, 释 放 出 顶 体 酶, 将 明 胶 溶 解 成 亮 环, 酶 活 性 的 大 小 可 依 据 亮 环 直 径 大 小 来 判 断. 此 外, 顶 体 酶 的 活 性 还 可 通 过 检 测 酶 活 性 反 映 顶 体 酶 全 部 活 性 的 存 在 于 精 子 顶 体 的 精 氨 酸 酸 胶 酶 来 确 定 其 原 理 是 精 氨 酸 酸 胶 酶 以 Nα 苯 甲 酷 DL 精 肢 酸 p 硝 酸 基 苯 胶 (BAPNA) 为 底 物, 分 解 产 生 有 色 产 物 硝 酸 基 苯 眩, 通 过 测 定 硝 酸 基 苯 肢 的 产 量 可 推 算 出 精 氨 酸 酸 胶 酶 的 活 性, 从 而 反 映 顶 体 酶 的 全 部 活 性, 4. 精 卵 相 互 作 用 的 测 定 精 卵 细 胞 相 互 作 用 的 评 估 是 评 价 人 类 精 子 受 精 力 最 重 要 最 可 靠 的 方 法, 临 床 上 应 用 最 广 泛 的 精 卵 相 互 作 用 的 试 验 是 精 子 穿 去 透 明 带 金 黄 仓 鼠 卵 试 验 (sperm penetration of zona-free hamster egg assay, SPA), 简 称 精 子 穿 卵 试 验 SPA 是 测 定 精 子 获 能 顶 体 反 应 卵 膜 融 合 能 力 以 及 精 子 核 解 聚 能 力 的 经 典 方 法, 国 外 己 将 其 作 为 精 子 功 能 的 常 规 检 测 方 法 但 由 于 此 实 验 条 件 要 求 高, 操 作 步 骤 多, 技 术 要 求 高, 国 内 仅 限 于 研 究 机 构 用 于 研 究 目 的, 临 床 未 作 常 规 展 开 在 临 床 实 践 中.SPA 可 用 于 以 下 几 个 方 面 1 对 原 因 不 明 的 不 育 者, 检 测 其 精 子 的 功 能 g 2 在 女 方 进 行 强 有 力 的 治 疗, 如 促 性 腺 激 素 治 疗 和 输 卵 管 成 形 术 前, 确 定 其 丈 夫 精 子 的 受 精 能 力 p 3 估 计 不 育 症 患 者 精 液 异 常 的 严 重 程 度 观 察 治 疗 效 果 g 4 IVF-ET 时, 估 计 供 精 者 精 液 标 本 的 质 量 和 作 受 孕 率 的 估 计 g 5 检 测 生 殖 抗 体, 如 抗 精 子 抗 体 对 生 殖 的 影 响 p 6 输 精 管 结 扎 前, 男 性 受 精 能 力 监 测 p 7 评 价 化 疗 或 放 疗 对 男 性 肿 瘤 患 者 生 育 力 的 影 响 g 3 估 计 化 学 药 品 环 境 中 的 毒 物 和 药 物 对 人 精 子 受 精 能 力 的 影 响 5. 精 子 膜 功 能 的 测 定 在 精 子 功 能 检 测 中, 精 子 膜 功 能 试 验 也 引 起 人 们 的 关 注 精 子 膜 上 含 有 丰 富 的 多 聚 不 饱 和 脂 肪 酸 及 多 种 蛋 白 成 分, 精 子 膜 的 功 能 与 精 子 获 能 顶 体 反 应 及 精 卵 融 合 密 切 相 关 精 子 膜 功 能 的 测 定, 可 预 测 精 子 的 受 精 能 力 反 映 精 子 膜 结 构 完 整 性, 常 采 用 活 体 染 色 法 胎 盼 蓝 或 伊 红 Y. 死 精 子 染 色, 活 精 子 不 染 色 ) ; 而 反 映 精 子 膜 生 理 功 能 的 完 整 性 则 采 用 精 子 尾 部 低 渗 肿 胀 试 验 (hypo-o8motic 8welling te8t. HOST) 其 主 要 检 测 原 理 为 g 精 子 在 低 渗 溶 液 中, 必 须 重 新 建 立 内 外 液 体 间 的 平 衡, 水 分 子 通 过 精 子 膜 进 入 精 子, 使 其 精 子 体 积 增 大 而 膨 胀, 这 是 活 精 子 膜 功 能 正 常 的 标 志, 而 膜 功 能 不 全 ( 包 括 死 精 子 ) 的 精 子 表 现 为 不 膨 胀 目 前, 对 HOST 的 临 床 价 值 仍 有 争 议, 对 是 否 能 预 测 精 子 的 受 精 能 力 有 不 同 的 看 法, 尚 需 积 累 更 多 的 资 料 6. 精 子 核 功 能 的 测 定 精 子 核 是 精 子 重 要 的 细 胞 器, 体 现 了 父 方 遗 传 物 质 精 子 发 生 过 程 中, 各 期 生 精 细 胞 核 内 DNA 的 含 量 发 生 规 律 性 变 化, 与 核 DNA 结 合 的 核 蛋 白 也 发 生 组 型 转 换 ( 即 从 组 蛋 白 过 度 蛋 白 鱼 精 蛋 白 ) 成 熟 的 精 子 核 内 DNA 与 鱼 精 蛋 白 紧 密 结 合, 高 度 浓 缩, 抑 制 了 基 国 的 表 达, 使 遗 传 物 质 保 持 稳 定. 精 子 核 成 熟 度 直 接 影 响 精 子 的 受 精 能 力 和 受 精 后 原 核 的 形 成 及 胚 胎 的 着 床 目 前, 检 测 精 子 核 功 能 的 主 要 试 验 有 精 子 核 DNA 荧 光 染 色 精 子 核 染 色 质 抗 解 聚 试 验 苯 胶 蓝 染 色 法 检 测 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 精 子 核 蛋 白 组 分 的 测 定 等 7. 精 子 线 粒 体 功 能 的 测 定 精 子 线 粒 休 位 于 精 子 尾 部 的 中 段, 形 成 线 粒 体 鞠 结 构 哺 乳 类 动 物 每 个 精 子 约 含 有 75 个 线 粒 体 线 粒 体 是 精 子 运 动 能 量 提 供 的 场 所 线 粒 体 鞠 局 部 或 完 全 缺 失 线 粒 体 的 体 积 及 分 布 异 常, 都 可 能 使 精 子 运 动 能 力 发 生 障 碍 而 导 致 不 育 a 在 弱 精 子 症 和 死 精 子 症 中, 可 见 大 量 线 粒 体 缺 陷 的 存 在, 目 前, 检 测 线 粒 体 功 能 的 试 验 主 要 有 硝 基 四 氮 哇 蓝 (nitroblue tetrazolium. NBT) 法 测 定 线 粒 体 功 能 及 精 子 线 粒 体 DNA 的 测 定 17

29 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 第 二 节 计 算 机 辅 助 的 精 液 分 析 传 统 的 精 液 分 析 往 往 带 有 很 大 的 主 观 性, 由 于 检 测 手 段 实 验 室 条 件 检 验 人 员 的 水 平 与 经 验 的 不 同, 对 精 子 运 动 能 力 的 判 断 缺 少 严 格 的 量 化 指 标, 造 成 了 检 验 结 果 的 差 异, 也 降 低 了 检 验 报 告 结 果 的 客 观 性 和 可 比 性, 给 临 床 诊 断 和 科 研 工 作 带 来 了 一 定 的 困 难 分 析 的 结 果 有 时 相 差 甚 远. 而 利 用 Makler 板 ( 或 Macro 板 ) 进 行 精 子 运 动 轨 迹 图 像 分 析, 计 算 精 子 的 平 均 直 线 运 动 速 度, 操 作 流 程 多, 工 作 量 大 圄 计 算 机 辅 助 的 精 液 分 析 (Computer Assisted Semen Analysis, CASA) 是 20 世 纪 80 年 代 发 展 起 来 的 新 技 术, 是 一 类 计 算 机 支 持 的 精 子 运 动 测 试 系 统 该 测 试 系 统 是 视 频 技 术 与 计 算 机 技 术 的 高 度 结 合, 除 可 分 析 精 子 密 度 活 动 百 分 率 等 精 子 参 数 指 标 外, 更 在 客 观 地 定 量 评 价 精 子 运 动 的 速 度 及 运 动 的 方 式 与 能 力 方 面 显 示 了 其 独 特 的 优 越 性, 太 大 克 服 了 传 统 测 定 方 法 所 存 在 的 费 时 信 息 量 少 准 确 度 差 主 观 性 高 等 缺 陷 80 年 代 后 期 建 立 的 CASA 技 术 主 要 是 临 床 上 用 来 评 价 人 类 精 子 的 质 量, 为 男 性 不 育 和 人 工 授 精 提 供 诊 断 依 据 近 年 来 这 项 技 术 己 被 引 用 到 男 性 生 殖 毒 理 学 研 究 领 域 一 CASA 系 统 中 的 主 要 参 数 术 语 下 面 列 出 了 在 CASA 系 统 中 分 析 精 子 运 动 能 力 的 术 语 1. 轨 迹 速 度 (curvilinear velocity, VCL) 也 称 曲 线 速 度, 即 精 子 头 部 沿 其 实 际 行 走 曲 线 的 运 动 速 度 2. 平 均 路 径 速 度 Caverage path velocity, V AP) 精 子 头 沿 其 空 间 平 均 轨 迹 的 运 动 速 度, 这 种 平 均 轨 迹 是 计 算 机 将 精 子 运 动 的 实 际 轨 迹 平 均 后 计 算 出 来 的, 可 因 不 同 型 号 的 仪 器 而 有 所 改 变 3. 直 线 运 动 速 度 Cstraight-line velocity, VSL) 也 称 前 向 运 动 速 度, 即 精 子 头 部 直 线 移 动 距 离 的 速 度 4. 直 线 性 Cl inearity, LIN) 也 称 线 性 度, 即 精 子 运 动 曲 线 的 直 线 分 离 度, 即 VSL/VCL 5. 精 子 侧 摆 幅 度 Camplitude 01 lateral head displacement, ALH) 精 子 头 实 际 运 动 轨 迹 对 平 均 路 径 的 侧 摆 幅 度, 可 以 是 平 均 值, 也 可 以 是 最 大 值 不 同 型 号 的 CASA 系 统 由 于 计 算 方 法 不 一 致, 因 此 相 互 之 间 不 可 直 接 比 较 6. 前 向 性 Cstraightness, STR) 也 称 直 线 性, 计 算 公 式 为 VSL/VAP, 即 精 子 运 动 平 均 路 径 的 直 线 分 离 度 7. 摆 动 性 CWOB) 精 子 头 沿 其 实 际 运 动 轨 迹 的 空 间 平 均 路 径 摆 动 的 尺 度, 计 算 公 式 为 VAP/VCL. 8. 鞭 打 频 率 Cbeat cross frequency, BCF) 也 称 摆 动 频 率, 即 精 子 头 部 跨 越 其 平 均 路 径 的 频 率 9. 平 均 移 动 角 度 CMAD) 精 子 头 部 沿 其 运 动 轨 迹 瞬 间 转 折 角 度 的 时 间 平 均 值 10. 运 动 精 子 密 度 每 毫 升 精 液 中 VAP>Oμm/s 的 精 子 数 ( 图 2-1) 4 苗

30 第 2 章 精 液 的 实 验 室 诊 断 现 状 与 研 究 进 展 曲 线 路 径 图 2-1 CASA 系 统 参 数 术 语 示 意 图 二 CASA 系 统 的 基 本 组 成 (1) 相 差 显 微 镜 恒 温 装 置 和 专 用 计 数 板 (Makler 板 Macro 板 或 Microcell 计 数 池 等 ) 组 成 摄 像 系 统 (2) 高 速 高 分 辨 率 的 摄 像 机 和 电 视 监 视 器 组 成 摄 像 系 统 (3) 计 算 机 分 析 处 理 系 统 及 打 印 输 出 系 统 三 CASA 在 精 液 分 析 中 的 应 用 价 值 CASA 是 近 十 年 来 发 展 起 来 的 新 技 术, 现 已 逐 步 应 用 于 男 科 实 验 室 常 规 分 析 CASA 的 应 用 提 高 了 男 性 不 育 实 验 室 诊 断 精 子 质 量 研 究 分 析 与 评 价 的 准 确 性 与 客 观 性, 为 人 类 不 育 提 供 了 可 靠 的 客 观 评 价 指 标 CASA 具 有 的 客 观 高 效 高 精 度 的 特 点, 尤 其 能 分 析 与 精 子 运 动 功 能 相 关 的 多 种 参 数 CASA 系 统 与 传 统 精 液 分 析 技 术 与 方 法 相 比, 其 主 要 进 步 在 于 CASA 能 更 准 确 地 确 定 精 子 浓 度 ( 计 数 ) 与 运 动 特 征 CASA 的 一 般 工 作 流 程 为 : 通 过 计 算 机 数 字 化 影 像 设 备 " 观 察 " 显 微 镜 下 精 子 ; 实 验 室 技 术 人 员 " 指 导 " 计 算 机 识 别 精 子 外 观 像 什 么, 是 如 何 运 动 的 ; 当 计 算 机 随 后 看 到 了 在 显 微 镜 下 的 精 于 时, 计 算 机 可 绘 制 出 每 个 单 个 桔 子 的 数 字 影 像 或 轨 迹 图, 包 括 桔 子 在 显 微 镜 视 野 范 围 内 运 动 的 速 度 和 路 径 通 过 此 种 分 析 方 法, 可 以 了 解 正 常 和 异 常 桔 子 的 许 多 " 微 " 特 征 CASA 系 统 识 别 精 子 是 根 据 人 为 设 定 的 大 小 和 灰 度 来 判 断 的, 准 确 性 受 精 液 中 细 胞 成 分 和 非 细 胞 颗 粒 的 影 响 计 算 精 子 活 动 率 时, 精 子 只 有 产 生 了 一 定 的 位 移, CASA 系 统 才 认 为 是 活 动 精 子, 而 对 原 地 摆 动 的 精 子 则 判 断 为 不 活 动 桔 子, 测 出 的 值 低 于 实 际 结 果 Davis 认 为 CASA 系 统 参 数 的 设 置 阑 值 的 设 定 视 屏 取 像 率 等 都 可 以 影 响 最 终 结 果 CASA 对 精 子 密 度 有 一 定 的 限 制, 在 (20~50) X 10 6 Iml 范 围 内 检 测 结 果 较 理 想 精 于 密 度 过 高 时, 标 本 需 要 适 当 稀 释, 一 般 采 用 同 份 精 浆 标 本 稀 释 精 子 密 度 过 低 时 应 多 选 几 个 视 野 采 样 随 着 软 件 系 统 的 不 断 改 进, 目 前 新 的 CASA 系 统 可 检 测 较 大 桔 子 密 度 范 围 的 精 液 标 本 用 于 CASA 系 统 的 精 子 计 数 板 有 Makler 板 和 Microcell 计 数 池, Macro 计 数 板 也 可 用 于 CASA 系 统, 而 Micro-

31 临 床 检 验 学 实 用 技 术 与 新 进 展 cell 可 能 更 适 用 由 于 CASA 系 统 的 设 置 缺 乏 统 一 的 国 际 标 准, 不 同 厂 商 和 型 号 的 CASA 系 统 分 析 结 果 可 比 性 差, 目 前.WHO 并 不 推 荐 在 精 液 常 规 分 析 中 应 用 CASA 技 术, 尤 其 是 分 析 精 子 密 度 和 活 动 率 但 是, 精 液 的 自 动 化 分 析 是 今 后 发 展 的 趋 势.CASA 在 分 析 精 子 运 动 功 能 指 标 方 面 尤 其 具 有 优 势 目 前, 国 内 己 有 多 家 实 验 室 引 进 CASA 技 术, 国 产 的 CASA 系 统 也 己 进 入 临 床 应 用, 随 着 CASA 本 身 系 统 的 不 断 改 进, 其 应 用 前 景 还 是 十 分 广 阔 的. 四 CASA 系 统 仪 器 性 能 简 介 1. WLJY-9000 型 伟 力 彩 色 精 子 质 量 检 测 系 统 北 京 伟 力 技 贸 公 司 (http, //www. weili. com/) 研 制 的 WLJY-9000 型 伟 力 彩 色 精 子 质 量 检 测 系 统 将 现 代 化 的 计 算 机 技 术 和 先 进 和 图 像 处 理 技 术 结 合 运 用 于 精 子 质 量 的 临 床 检 验 它 以 WHO 精 液 检 验 标 准 为 依 据, 通 过 对 精 子 动 ( 静 ) 态 图 像 中 精 子 运 动 特 性 的 全 面 分 析, 既 可 定 量 分 析 精 子 总 数 活 动 力 活 动 率, 也 可 分 析 精 子 运 动 速 度 和 运 动 轨 迹, 为 临 床 提 供 有 关 精 子 质 量 的 各 项 指 标 的 准 确 数 据, 检 测 过 程 迅 速, 项 目 齐 全, 可 为 检 验 男 性 生 育 能 力 提 供 重 要 的 科 学 依 据 WLJY-9000 型 CASA 分 析 系 统 所 检 测 的 各 项 参 数 运 动 速 度 和 活 力 分 级 的 直 图 以 及 精 子 运 动 轨 迹 图 像 等 可 选 择 打 印 输 出, 被 检 测 对 象 的 分 析 结 果 也 可 保 存 备 份 和 查 询 该 系 统 还 可 以 将 精 子 动 静 态 分 析 过 程 彩 色 图 像 即 时 输 出, 可 供 被 检 者 本 人 观 看 或 教 学 之 用 此 外, 系 统 独 有 光 路 标 定 功 能 可 自 动 修 正 光 路 系 统 误 差, 虚 拟 网 络 区 域 放 大 等 功 能, 增 加 了 该 系 统 的 使 用 范 围 而 且 系 统 能 在 多 种 显 微 镜 物 镜 放 大 倍 数 下 作 用, 并 使 系 统 操 作 更 加 灵 活 主 要 工 作 原 理 z 精 子 形 态 图 像 及 精 子 运 动 图 像 极 CCD 摄 像 头 采 集 后, 经 视 频 输 出 口 输 入 到 监 视 器 和 计 算 机 图 像 采 集 卡 中, 计 算 机 相 应 的 操 作 软 件 根 据 设 定 的 精 于 大 小 和 灰 度 精 子 运 动 的 移 位 及 前 述 的 精 子 运 动 有 关 参 数, 对 采 集 到 的 图 像 进 行 动 态 分 析 处 理 ; 分 析 结 果 打 印 输 出, 同 时 也 可 将 结 果 储 存 或 将 精 子 运 动 状 态 录 制 到 录 像 带 上, 以 供 日 后 对 比 分 析 与 研 究 之 用 ( 图 2-2) 固 2-2 WWY-9000 型 伟 力 彩 色 精 子 质 量 检 测 系 统 构 成 示 意 图 2. 系 统 基 本 配 置 WLJY-9000 型 伟 力 彩 色 精 子 质 量 检 测 系 统 及 其 系 统 构 成 示 意 图 见 图 2-3. 其 主 要 的 基 本 配 置 如 下 (1) 图 像 采 集 卡, PCI 高 速 彩 色 图 像 采 集 卡 (2) 计 算 机 配 置, Intel Pentium- II 350M.4.3G 硬 盘, 32M 内 存.35cm PHILIPS 彩 色 显 示 2 口