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1 藏 灵 菇 源 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 调 节 大 鼠 肠 道 菌 群 平 衡 的 研 究 董 牧 群 1, 熊 利 霞 1, 谢 远 红 1, 张 红 星 1, 刘 慧 1*, 贾 慧 1, 连 正 兴 (1. 北 京 农 学 院 食 品 科 学 与 工 程 学 院 / 微 生 态 制 剂 关 键 技 术 开 发 北 京 市 工 程 实 验 室 / 食 品 质 量 与 安 全 北 京 实 验 室, 北 京 ;2. 中 国 农 业 大 学 动 物 科 技 学 院, 北 京 ) 1 摘 要 : 利 用 从 藏 灵 菇 中 筛 选 出 的 发 酵 性 能 优 良 且 产 胆 盐 水 解 酶 的 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 菌 株, 制 备 冻 干 菌 粉 作 为 受 试 物 进 行 大 鼠 动 物 试 验, 探 讨 其 对 预 防 性 高 胆 固 醇 血 症 大 鼠 肠 道 菌 群 平 衡 的 作 用 采 用 预 防 高 胆 固 醇 血 症 大 鼠 模 型, 将 40 只 大 鼠 (SPF 级 3 周 龄 ) 分 为 高 脂 模 型 组 低 剂 量 试 验 组 中 剂 量 试 验 组 和 高 剂 量 试 验 组 进 行 试 验, 试 验 组 分 别 灌 胃 低 中 高 剂 量 的 受 试 物, 高 脂 模 型 组 灌 胃 蒸 馏 水, 连 续 7 周 结 果 表 明, 前 5w 四 组 大 鼠 粪 便 中 3 类 菌 的 数 量 处 于 平 缓 变 化 状 态, 且 3 个 试 验 组 与 高 脂 模 型 组 相 比 无 显 著 性 差 异 ; 5w 时, 预 防 性 高 胆 固 醇 血 症 模 型 建 立 成 功,3 个 试 验 组 大 鼠 粪 便 中 乳 杆 菌 的 数 量 极 显 著 (P<0.01) 高 于 高 脂 模 型 组, 沙 门 氏 菌 的 数 量 极 显 著 (P<0.01) 低 于 高 脂 模 型 组, 产 气 荚 膜 梭 菌 的 数 量 显 著 (P<0.05) 低 于 高 脂 模 型 组 ; 其 中 低 剂 量 组 的 乳 杆 菌 数 量 最 高 而 沙 门 氏 菌 和 产 气 荚 膜 梭 菌 数 量 最 低, 说 明 低 剂 量 试 验 组 优 于 中 高 剂 量 试 验 组 显 示 藏 灵 菇 源 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 能 够 调 节 高 胆 固 醇 血 症 大 鼠 肠 道 有 益 菌 的 生 长, 并 抑 制 有 害 菌 的 繁 殖, 具 有 良 好 的 调 节 肠 道 菌 群 平 衡 的 效 果 2 关 键 词 : 藏 灵 菇 ; 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 ; 动 物 试 验 ; 肠 道 菌 群 平 衡 中 图 分 类 号 :Q 文 献 标 志 码 :A 文 章 编 号 : Research of Kluyveromyces marxianus M3 isolated from Tibetan mushrooms on the intestinal flora balance in rat DONG Mu-qung 1,XIONG Li-xia 1,XIE Yuan-hong 1,ZHANG Hong-xing 1,LIU Hui1,1 *,JIA Hui 1,LIAN Zheng-xing 2 (1. College of Food Science and Engineering,Beijing University of Agriculture / Beijing engineering laboratory of key technology development of Microecologics / Beijing Laboratory of Food Quality and Safety, Beijing102206, China; (2. 2.College of Animal Science & Technology, China Agricultural University, Beijing , China) Abstract:To evaluate the effects of Kluyveromyces marxianus M3, with good fermentation performance and production of bile salt hydrolase, isolated from Tibetan mushrooms on the intestinal flora balance in experimental hypercholesterolemia rat, 40 rats (43 weeks old) were divided into 4 groups and fed a high fat diet supplemented with low, medium and high dose of freeze-dried K. marxianus M3 powder for a 7-week experimental period. According to our results, in the first five weeks, the number of the 3 kinds of bacteria in the rat feces was in a state of gradual change, and there was no significant difference between the three experimental groups and the high-fat model group;at the fifth week, the preventive hypercholesterolemia model was established successfully, the number of lactobacillus (p<0.01) in the three experimental groups was significantly higher than that in the high-fat model group, while the number of Salmonella (p<0.01) and Clostridium perfringens (p<0.05) was significantly 1 收 稿 日 期 : 基 金 项 目 : 北 京 市 自 然 科 学 基 金 ( ); 转 基 因 生 物 新 品 种 培 育 重 大 专 项 抗 病 转 基 因 羊 新 品 种 培 育 (2014ZX ); 北 京 市 属 高 等 学 校 高 层 次 人 才 引 进 与 培 养 项 目 天 然 乳 酸 菌 素 对 畜 产 品 中 重 要 致 病 菌 的 抑 菌 机 制 及 作 用 研 究 (CIT&TCD ) 第 一 作 者 : 董 牧 群 (1989_), 女, 硕 士, 研 究 方 向 为 农 产 品 贮 藏 与 加 工 @qq.com 通 讯 作 者 : 刘 慧 (1963_), 女, 教 授, 硕 士, 研 究 方 向 为 食 品 微 生 物 与 发 酵 [email protected] 1

2 lower than the high-fat model; among all of the experimental groups, the number of lactobacillus in the low dose group is the highest whlie Salmonella and Clostridium perfringens is the lowest, showing that the effect of low dose group is better than the medium and high dose group. The results in this work demonstrated that Kluyveromyces marxianus M3 kept the growth of intestinal beneficial bacteria and inhibited the breeding of harmful bacteria in the hypercholesterolemia rats, it has good effect on the intestinal flora balance. Key words: Tibetan mushrooms; Kluyveromyces marxianus; animal experiment; intestinal flora balance 肠 道 菌 群 是 一 个 复 杂 的 微 生 态 系 统, 在 正 常 生 理 条 件 下 参 与 维 生 素 的 合 成 胆 汁 酸 的 降 解 营 养 物 质 的 消 化 及 局 部 和 全 身 的 免 疫 [1] 肥 胖 高 脂 血 症 糖 尿 病 等 代 谢 性 疾 病 及 抗 生 素 等 药 物 的 使 用, 均 会 引 起 肠 道 菌 群 失 衡 [2] 当 肝 脏 发 生 病 变 时, 会 造 成 脂 质 代 谢 紊 乱, 肝 细 胞 胆 汁 排 泌 减 少, 肠 蠕 动 减 慢, 微 绒 毛 损 伤, 消 化 道 功 能 减 弱, 肠 道 清 除 排 空 能 力 降 低 [3], 肠 道 抗 体 溶 菌 酶 黏 液 分 泌 减 少, 肠 壁 局 部 抵 抗 力 下 降 [4], 使 得 有 害 菌 数 量 增 长 甚 至 占 优 势, 造 成 严 重 的 肠 道 菌 群 失 衡 有 研 究 报 道, 肝 功 能 损 害 越 严 重 肠 道 菌 群 失 调 亦 越 严 重 [5] 课 题 前 期 采 用 高 通 量 筛 选 技 术, 从 藏 灵 菇 中 分 离 筛 选 并 鉴 定 出 发 酵 性 能 优 良 的 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3(Kluyveromyces marxianus M3), 经 实 验 证 明 M3 可 在 生 长 代 谢 过 程 中 产 生 高 活 力 胆 盐 水 解 酶, 且 产 量 较 高 ; 又 经 体 外 试 验 证 明 其 具 有 较 强 的 耐 胃 肠 道 逆 环 境 特 性 和 良 好 的 降 胆 固 醇 功 效 [6] 目 前, 国 内 外 对 乳 酸 菌 调 节 肠 道 菌 群 平 衡 的 研 究 报 道 颇 多, 而 对 酵 母 菌 调 节 肠 道 菌 群 平 衡 的 研 究 [7] 少 见 报 道 伍 静 等 人 利 用 抗 生 素 干 扰 建 立 小 鼠 肠 道 菌 群 失 衡 模 型, 并 利 用 乳 酸 菌 制 剂 进 行 调 节 治 疗 Angelakis E 等 研 究 了 乳 酸 菌 对 小 鼠 体 重 肠 道 菌 群 的 作 用 [8] [9] Bruzzese E 等 人 利 用 乳 酸 菌 对 患 有 囊 [10] 胞 性 纤 维 症 儿 童 进 行 随 机 临 床 试 验, 证 明 其 对 肠 道 菌 群 失 衡 和 肠 炎 有 恢 复 作 用 童 佩 探 讨 了 布 拉 酵 母 调 节 儿 童 肠 道 菌 群 失 调 造 成 的 便 秘 与 腹 泻 的 疗 效 有 关 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 促 进 有 益 菌 的 生 长, 调 节 肠 道 菌 群 平 衡 的 研 究 尚 未 见 文 献 报 道 本 试 验 通 过 对 灌 胃 不 同 剂 量 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 的 预 防 性 高 胆 固 醇 血 症 大 鼠 粪 便 中 乳 杆 菌 沙 门 氏 菌 和 产 气 荚 膜 梭 菌 的 活 菌 数 量 的 检 测, 研 究 其 调 节 预 防 性 高 胆 固 醇 血 症 大 鼠 肠 道 菌 群 平 衡 的 效 果, 旨 在 为 开 发 研 制 酵 母 菌 功 能 性 食 品 提 供 科 学 理 论 依 据 1 材 料 与 方 法 1.1 实 验 材 料 试 验 菌 株 与 试 验 动 物 试 验 菌 株 : 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3(Kluyveromyces marxianus M3), 由 北 京 市 自 然 基 金 课 题 组 从 藏 灵 菇 中 筛 选 与 鉴 定, 并 确 定 为 高 产 胆 盐 水 解 酶 的 菌 株 [11] 受 试 物 : 于 优 化 发 酵 条 件 下 对 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3(Kluyveromyces marxianus M3) 进 行 发 酵, 经 离 心 浓 缩 和 真 空 冷 冻 干 燥 后, 得 到 活 菌 数 量 可 达 10 8 CFU/g 的 冻 干 菌 粉, 按 每 5mL 温 热 蒸 馏 水 溶 解 1g 冻 干 菌 粉 的 比 例 制 备 为 受 试 物 试 验 动 物 :40 只 SPF 级 3 周 龄 断 乳 健 康 雌 性 Wistar 大 鼠, 体 重 130~150g, 由 北 京 维 通 利 华 实 验 动 物 技 术 有 限 公 司 提 供, 动 物 许 可 证 编 号 SCXK( 京 ) 动 物 饲 料 与 灌 胃 剂 量 动 物 饲 料 :SPF 级 高 脂 饲 料 (78.8% 基 础 饲 料 1% 胆 固 醇 10% 蛋 黄 粉 10% 猪 油 0.2% 胆 盐 ), 均 由 北 京 科 澳 协 力 饲 料 有 限 公 司 提 供, 许 可 证 编 号 SCXK( 京 ) SPF 级 基 础 饲 料 ( 粗 蛋 白 20.8%, 粗 脂 肪 4.5%, 粗 灰 分 6.83%, 水 分 10%, 粗 纤 维 2

3 4.4%, 钙 1.23%, 磷 0.96%) 灌 胃 剂 量 : 低 中 高 剂 量 试 验 组 分 别 按 照 0.5mL/100g bw d 1.0mL/100g bw d 2.0mL/100g bw d 剂 量 进 行 受 试 物 灌 胃, 高 脂 模 型 组 灌 胃 蒸 馏 水 培 养 基 PDA 培 养 基 :(g/l) 马 铃 薯 200.0, 葡 萄 糖 20.0, 琼 脂 15.0,pH 自 然 MRS 培 养 基 :(g/l) 蛋 白 胨 10.0, 牛 肉 粉 5.0, 酵 母 粉 4.0, 葡 萄 糖 20.0, 吐 温 mL, 磷 酸 氢 二 钾 2.0, 乙 酸 钠 5.0, 柠 檬 酸 三 铵 2.0, 硫 酸 镁 0.2, 硫 酸 锰 0.05, 琼 脂 15.0,pH 6.2±0.1 亚 硫 酸 铋 琼 脂 (BS):(g/L) 蛋 白 胨 10.0, 牛 肉 粉 5.0, 葡 萄 糖 5.0, 磷 酸 氢 二 钠 4.0, 硫 酸 亚 铁 0.3, 亚 硫 酸 钠 6.0, 柠 檬 酸 铋 铵 2.0, 煌 绿 0.025, 琼 脂 18.0,pH 7.5±0.1 亚 硫 酸 盐 - 多 粘 菌 素 - 磺 胺 嘧 啶 琼 脂 基 础 (SPS):(g/L) 胰 酪 胨 15.0, 酵 母 粉 10.0, 柠 檬 酸 铁 0.5, 琼 脂 15.0,pH 7.0±0.1 标 准 BUY 培 养 基 和 YT 微 孔 接 种 板,Biolog 鉴 定 仪 专 用 [12] 主 要 仪 器 设 备 日 立 全 自 动 生 化 分 析 仪 7080 型 日 本 日 立 公 司 ;752 紫 外 - 可 见 分 光 光 度 计 北 京 东 南 仪 城 实 验 室 设 备 厂 ;TGL-20M 型 高 速 台 式 冷 冻 离 心 机 湘 仪 离 心 机 厂 ;Biolog MicroStation 微 生 物 快 速 鉴 定 仪 美 国 Biolog 公 司 ;Moticam1300 数 码 显 微 摄 像 系 统 Motic 实 业 集 团 ;DL-CJ-IND 型 无 菌 超 净 工 作 台 北 京 东 联 哈 尔 仪 器 制 造 有 限 公 司 ;SKP 型 恒 温 培 养 箱 黄 石 恒 丰 医 疗 器 械 有 限 公 司 等 1.2 试 验 方 法 试 验 条 件 试 验 大 鼠 于 北 京 大 学 医 学 部 动 物 实 验 室 饲 养, 许 可 证 编 号 SYXK( 京 ) 大 鼠 均 饲 养 于 SPF 级 环 境,5 只 / 笼, 自 由 采 食 采 水, 室 内 通 风 条 件 良 好, 正 常 昼 夜 变 化, 相 对 湿 度 40%~70%, 室 温 18~ 试 验 分 组 与 处 理 试 验 大 鼠 适 应 性 饲 养 7d 后, 将 大 鼠 分 为 高 脂 模 型 组 低 剂 量 试 验 组 中 剂 量 试 验 组 和 高 剂 量 试 验 组, 试 验 大 鼠 均 饲 喂 高 脂 饲 料, 试 验 组 灌 胃 受 试 物, 高 脂 模 型 组 灌 胃 蒸 馏 水, 连 续 7 周 每 周 称 体 重 1 次, 并 依 此 调 整 灌 胃 量 粪 便 的 采 集 在 动 物 试 验 第 周 时, 轻 轻 挤 压 大 鼠 直 肠 部, 分 别 收 集 新 鲜 粪 便 约 2g 于 无 菌 试 管 中, 并 立 即 将 试 管 放 入 厌 氧 罐 中 酵 母 菌 的 分 离 与 鉴 定 (1) 于 10mL PDA 液 体 培 养 基 中 加 入 1g 大 鼠 粪 便 ( 采 集 于 试 验 第 1 周 ), 富 集 培 养 18~24h, 再 采 用 酸 化 PDA 培 养 基 (10% 酒 石 酸 调 节 灭 菌 后 的 PDA 培 养 基 ph 至 3.5) 进 行 稀 释 涂 布 平 板 法 分 离, 挑 取 表 面 光 滑 的 乳 白 色 圆 形 菌 落, 按 常 规 方 法 进 行 纯 化 培 养, 获 得 待 鉴 定 菌 种 [13] (2) 待 鉴 定 菌 种 单 个 菌 落 连 续 划 线 BUY 平 板 26 培 养 24~48h 制 备 菌 悬 液 ( 纯 净 水 ) 浊 度 计 调 整 浊 度 为 47%±3%T 接 种 YT 微 孔 接 种 板 26 培 养 24~48h Biolog 自 动 微 生 物 鉴 定 仪 读 取 鉴 定 结 果 类 肠 道 菌 的 平 板 培 养 与 计 数 3

4 取 1g 动 物 粪 便 于 9mL 无 菌 生 理 盐 水 中 匀 浆 混 匀, 由 10-1 梯 度 稀 释 梯 度 至 10-8, 根 据 预 试 结 果, 选 择 适 当 的 3 个 稀 释 度, 分 别 取 0.1mL 稀 释 液 以 涂 布 法 均 匀 接 种 于 相 应 培 养 基 平 板 上, 每 个 稀 释 度 设 3 个 重 复 培 养 后 观 察 平 板 上 菌 落 特 征, 挑 取 典 型 菌 落 进 行 革 兰 氏 染 色, 观 察 菌 体 形 态, 并 计 数 典 型 菌 落, 计 算 每 克 湿 粪 便 中 各 类 细 菌 的 活 菌 数 量 乳 杆 菌 采 用 MRS 培 养 基 (36±1) 厌 氧 罐 中 培 养 48h 后 计 数 ; 沙 门 氏 菌 采 用 BS 培 养 基 (36±1) 培 养 24h 后 计 数 黑 色 有 金 属 光 泽 菌 落 ; 产 气 荚 膜 梭 菌 采 用 SPS 培 养 基 (36±1) 厌 氧 培 养 48h 后 计 数 黑 色 菌 落 [14] 调 节 肠 道 菌 群 平 衡 结 果 判 断 标 准 采 用 方 差 分 析 进 行 统 计 分 析, 根 据 给 予 受 试 物 前 后 各 组 大 鼠 肠 道 菌 群 值 的 变 化 进 行 评 价 [15] : (1) 粪 便 中 双 歧 杆 菌 和 / 或 乳 杆 菌 增 加, 产 气 荚 膜 梭 菌 减 少 或 不 增 加, 拟 杆 菌 肠 杆 菌 和 ( 或 ) 肠 球 菌 减 少 或 无 明 显 变 化 ; (2) 粪 便 中 双 歧 杆 菌 和 / 或 乳 杆 菌 增 加, 产 气 荚 膜 梭 菌 减 少 或 不 增 加, 拟 杆 菌 肠 杆 菌 和 ( 或 ) 肠 球 菌 明 显 增 加, 但 增 加 幅 度 低 于 双 歧 杆 菌 和 ( 或 ) 乳 杆 菌 增 加 的 幅 度 符 合 以 上 两 项 要 求 之 一, 经 统 计 学 处 理 有 显 著 性 差 异, 可 判 定 受 试 物 具 有 调 节 肠 道 菌 群 平 衡 的 作 用 数 据 处 理 菌 落 计 数 结 果 根 据 GB 进 行 处 理 [16], 试 验 结 果 利 用 SAS9.0 软 件 包 进 行 统 计 分 析 实 验 结 果 以 x ±s 表 示, 采 用 单 因 素 方 差 分 析, 组 间 用 t 检 验 2 结 果 与 分 析 2.1 酵 母 菌 分 离 与 鉴 定 结 果 利 用 从 藏 灵 菇 中 筛 选 的 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 M3(Kluyveromyces marxianus M3) 菌 株 制 备 的 冻 干 菌 粉 对 大 鼠 进 行 灌 胃 试 验 后, 从 大 鼠 粪 便 中 分 离 酵 母 菌 只 得 到 M3-ds 菌 株 酵 母 菌 M3-ds 在 PDA 培 养 基 上 的 菌 落 呈 乳 白 色, 微 隆 起, 表 面 光 滑, 不 透 明, 有 光 泽 的 圆 形 菌 落 ( 图 1A), 革 兰 氏 染 色 图 显 示 其 菌 体 形 态 ( 图 1B) 与 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 M3(Kluyveromyces marxianus M3)( 图 2) 相 似 [17], 经 微 生 物 快 速 鉴 定 仪 鉴 定 为 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 (Kluyveromyces marxianus), 由 此 进 一 步 证 明 了 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 M3(Kluyveromyces marxianus M3) 具 有 良 好 的 耐 受 胃 肠 道 逆 环 境 能 力 [18] 图 1 M3-ds 菌 落 形 态 及 革 兰 氏 染 色 图 4

5 Fig. 1 Colony morphology and gram stain of M3-ds ( 注 :A 为 M3-ds 在 PDA 培 养 基 上 的 菌 落 形 态 ;B 为 革 兰 氏 染 色 图 ) 图 2 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 革 兰 氏 染 色 图 Fig. 2 Gram stain of M3 2.2 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 对 大 鼠 体 重 的 影 响 表 1 藏 灵 菇 源 酵 母 冻 干 菌 粉 对 大 鼠 体 重 的 影 响 ( x ±s, n=10) Table 1 Effect of lyophilized saccharomycetes from Tibetan Kefir on body weight of rats ( x ±s, n=10) 组 别 体 重 (g) 1w 3w 5w 7w 高 脂 模 型 组 155.1± ± ± ±20.8 低 剂 量 试 验 组 154.3± ± ± ±20.9 中 剂 量 试 验 组 156.2± ± ± ±21.3 高 剂 量 试 验 组 155.4± ± ± ±21.2 由 表 1 可 知, 大 鼠 的 体 重 随 着 喂 养 时 间 逐 渐 增 加 试 验 结 束 时, 低 中 高 剂 量 3 个 试 验 组 大 鼠 体 重 与 高 脂 模 型 组 基 本 无 差 异, 表 明 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 对 大 鼠 体 重 基 本 无 影 响 2.3 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 对 大 鼠 肠 道 中 乳 杆 菌 数 量 的 影 响 表 2 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 对 大 鼠 肠 道 中 乳 杆 菌 的 影 响 (n=10) Table 2 Effect of Kluyveromyces marxianus M3 from Kefir on sum of Lactobacilli in the intestinaltract of rats (n=10) 组 别 乳 杆 菌 活 菌 数 量 (lg CFU/g) 1w 3w 5w 7w 高 脂 模 型 组 8.04± ± ± ±0.02 低 剂 量 试 验 组 7.97± ± ±0.32 ** 9.32±0.22 ** 中 剂 量 试 验 组 8.11± ± ±0.21 ** 9.96±0.41 ** 高 剂 量 试 验 组 7.92± ± ±0.18 ** 9.04±0.14 ** 注 : ** : 与 模 型 组 比 较 P<0.01 在 机 体 肠 道 内, 作 为 人 体 和 动 物 肠 道 内 定 殖 且 占 绝 对 优 势 的 一 类 生 理 活 性 菌, 乳 杆 菌 可 通 过 产 生 5

6 乳 酸 乙 酸 过 氧 化 氢 等 抗 菌 物 质, 对 宿 主 维 持 肠 道 健 康 产 生 有 益 影 响, 乳 杆 菌 数 量 的 提 高 对 于 维 持 肠 道 菌 群 平 衡 有 重 要 作 用, 且 有 利 于 提 高 机 体 健 康 水 平 [19] 由 表 2 可 见, 试 验 初 期 4 组 大 鼠 粪 便 中 乳 杆 菌 的 数 量 相 差 无 几 试 验 的 前 5w, 高 脂 模 型 组 大 鼠 粪 便 中 乳 杆 菌 的 数 量 随 着 大 鼠 的 成 长 未 发 生 显 著 变 化, 增 势 缓 慢 ;3 个 试 验 组 乳 杆 菌 的 数 量 呈 平 缓 上 升 趋 势, 增 量 较 为 明 显 5~7w 时,3 个 试 验 组 大 鼠 粪 便 中 乳 杆 菌 的 数 量 极 显 著 (P<0.01) 高 于 高 脂 模 型 组,5w 时 低 剂 量 试 验 组 数 量 最 高,7w 时 中 剂 量 试 验 组 数 量 最 高 这 可 能 是 因 为, 试 验 的 前 5w,M3 菌 株 开 始 在 肠 道 中 定 植 并 大 量 繁 殖 至 占 有 一 定 优 势,5w 后 开 始 发 挥 作 用, 促 进 了 乳 杆 菌 的 繁 殖 综 上, 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 (Kluyveromyces marxianus M3) 能 够 极 显 著 提 高 试 验 组 大 鼠 肠 道 乳 杆 菌 的 数 量, 以 低 中 剂 量 效 果 最 为 明 显 2.4 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 对 大 鼠 肠 道 中 沙 门 氏 菌 数 量 的 影 响 表 3 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 对 大 鼠 肠 道 中 沙 门 氏 菌 的 影 响 (n=10) Table 3 Effect of Kluyveromyces marxianus M3 from Kefir on sum of Salmonella in the intestinaltract of rats (n=10) 组 别 沙 门 氏 菌 活 菌 数 量 (lg CFU/g) 1w 3w 5w 7w 高 脂 模 型 组 6.72± ± ± ±0.34 低 剂 量 试 验 组 6.68± ± ±0.11 ** 4.51±0.25 ** 中 剂 量 试 验 组 6.57± ± ±0.02 ** 4.62±0.32 ** 高 剂 量 试 验 组 6.64± ± ±0.24 ** 4.61±0.28 ** 注 : ** : 与 模 型 组 比 较 P<0.01 在 机 体 肠 道 微 生 态 失 衡 时, 致 病 菌 如 沙 门 氏 菌 大 量 增 加, 产 生 毒 副 作 用, 引 起 机 体 消 化 机 能 紊 乱, 危 害 机 体 健 康 [20] 由 表 3 可 见, 试 验 初 期 4 组 大 鼠 粪 便 中 沙 门 氏 菌 的 数 量 相 差 不 大 试 验 前 5w, 高 脂 模 型 组 大 鼠 粪 便 中 沙 门 氏 菌 的 数 量 随 着 大 鼠 的 成 长 逐 渐 降 低,3 个 试 验 组 的 下 降 趋 势 与 高 脂 模 型 组 相 比 更 加 明 显 5~7w 时,3 个 试 验 组 大 鼠 粪 便 中 沙 门 氏 菌 的 数 量 极 显 著 (P<0.01) 低 于 高 脂 模 型 组, 且 低 剂 量 试 验 组 数 量 最 低 这 可 能 是 因 为 从 5w 开 始 M3 菌 株 在 肠 道 中 定 殖 占 优 势, 对 沙 门 氏 菌 有 一 定 的 抑 制 作 用, 并 且 随 着 时 间 的 增 加, 肠 道 中 乳 杆 菌 数 量 也 逐 渐 增 加, 抑 制 沙 门 氏 菌 的 繁 殖 综 上, 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3(Kluyveromyces marxianus M3) 能 够 极 显 著 降 低 试 验 组 大 鼠 肠 道 沙 门 氏 菌 的 数 量, 且 低 剂 量 效 果 最 为 明 显 2.5 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 对 大 鼠 肠 道 中 产 气 荚 膜 梭 菌 数 量 的 影 响 表 4 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 对 大 鼠 肠 道 中 产 气 荚 膜 梭 菌 的 影 响 (n=10) Table 4 Effect of Kluyveromyces marxianus M3 from Kefir on sum of Clostridium perfringens in the intestinaltract of rats (n=10) 组 别 产 气 荚 膜 梭 菌 活 菌 数 量 (lg CFU/g) 1w 3w 5w 7w 高 脂 模 型 组 6.54± ± ± ±0.25 低 剂 量 试 验 组 6.63± ± ±0.19 ΔΔ 4.69±0.02 ΔΔ 中 剂 量 试 验 组 6.61± ± ± ±0.29 高 剂 量 试 验 组 6.52± ± ± ±0.23 注 : ΔΔ : 与 模 型 组 比 较 P<0.05 在 机 体 肠 道 内, 产 气 荚 膜 梭 菌 属 于 致 病 菌, 可 分 泌 外 毒 素, 引 起 胃 肠 道 坏 死 性 病 变, 若 其 数 量 达 6

7 到 一 定 水 平, 不 利 机 体 健 康 [21] 由 表 4 可 见, 试 验 初 期 4 组 大 鼠 粪 便 中 气 荚 膜 梭 菌 的 数 量 差 别 不 明 显 前 5w, 高 脂 模 型 组 大 鼠 粪 便 中 产 气 荚 膜 梭 菌 的 数 量 随 着 大 鼠 的 成 长 逐 渐 降 低 ;5~7w, 低 剂 量 试 验 组 大 鼠 粪 便 中 产 气 荚 膜 梭 菌 的 数 量 显 著 (P<0.05) 低 于 高 脂 模 型 组 这 应 该 是 因 为 5w 后,M3 菌 株 一 方 面 选 择 性 的 增 加 了 有 益 菌 乳 杆 菌 的 数 量 ; 另 一 方 面, 抑 制 了 产 气 荚 膜 梭 菌 的 生 长 综 上, 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3(Kluyveromyces marxianus M3) 能 够 显 著 降 低 试 验 组 大 鼠 产 气 荚 膜 梭 菌 的 数 量, 且 以 低 剂 量 效 果 尤 为 明 显 3 讨 论 机 体 肠 道 正 常 菌 群 失 衡 会 造 成 肠 道 功 能 紊 乱, 对 机 体 正 常 代 谢 和 抗 感 染 能 力 有 影 响, 易 引 发 肠 道 感 染, 出 现 便 秘 腹 泻 等 症 状 维 持 肠 道 菌 群 平 衡, 对 保 持 机 体 健 康 水 平 具 有 重 要 意 义 [22] [23] 课 题 组 谢 远 红 等 人 试 验 研 究 表 明, 高 胆 固 醇 血 症 模 型 建 立 成 功 时, 高 脂 模 型 组 大 鼠 血 清 胆 固 醇 和 甘 油 三 酯 水 平 较 高, 肝 功 能 紊 乱, 肝 脏 组 织 病 理 切 片 表 明 肝 脏 发 生 病 变 ; 而 试 验 组 大 鼠, 血 清 胆 固 醇 和 甘 油 三 酯 基 本 保 持 在 正 常 水 平, 肝 脏 组 织 病 理 切 片 正 常, 肝 脏 未 发 生 病 变 当 肝 脏 发 生 病 变 时, 脂 质 代 谢 紊 乱, 肝 细 胞 胆 汁 排 泌 减 少, 肠 道 清 除 排 空 能 力 降 低, 肠 道 抗 体 溶 菌 酶 黏 液 分 泌 减 少, 肠 壁 局 部 抵 抗 力 下 降, 使 得 有 害 菌 数 量 增 长 甚 至 占 优 势, 造 成 严 重 的 肠 道 菌 群 失 衡 通 过 对 大 鼠 粪 便 中 3 种 具 有 代 表 性 的 肠 道 菌 群, 即 乳 杆 菌 ( 有 益 菌 ) 沙 门 氏 菌 ( 致 病 菌 ) 和 产 气 荚 膜 梭 菌 ( 致 病 菌 ) 的 活 菌 数 量 的 测 定, 根 据 受 试 物 调 节 肠 道 菌 群 平 衡 结 果 判 断 标 准, 可 判 定 藏 灵 菇 源 克 鲁 维 酵 母 菌 M3(Kluyveromyces marxianus M3) 对 大 鼠 具 有 调 节 肠 道 菌 群 平 衡 的 效 果 这 是 因 为 藏 灵 菇 源 马 克 斯 克 鲁 维 酵 母 菌 M3 具 有 良 好 的 耐 受 胃 肠 道 逆 环 境 特 性 [18], 能 够 定 植 在 肠 道 中, 并 大 量 繁 殖 占 有 一 定 优 势, 使 肠 道 中 有 益 菌 数 量 上 升, 有 害 菌 数 量 下 降, 从 而 起 到 调 节 肠 道 菌 群 平 衡 的 效 果 ; 同 时,M3 菌 株 产 生 高 活 力 的 胆 盐 水 解 酶, 能 有 效 降 低 血 清 总 胆 固 醇 (TC) 甘 油 三 脂 (TG) 的 含 量, 从 而 减 缓 机 体 肝 脏 组 织 病 变, 维 持 肠 道 正 常 生 理 功 能, 使 有 害 菌 数 量 不 占 优 势, 亦 起 到 调 节 肠 道 菌 群 平 衡 的 功 效 参 考 文 献 : [1] 吴 夏 飞, 连 娜 琦, 陆 春 风, 等. 肠 道 菌 群 对 慢 性 肝 脏 疾 病 影 响 的 研 究 进 展 [J]. 中 国 药 理 学 通 报,2013,12: (DOI: /j.issn ) [2] 王 生, 黄 晓 星, 余 鹏 飞, 等. 肠 道 菌 群 失 调 与 结 肠 癌 发 生 发 展 之 间 关 系 的 研 究 进 展 [J]. 中 国 药 理 学 通 报,2014,08: (DOI: /j.issn ) [3] 张 胜 利, 许 君 望, 魏 动 娃. 微 生 态 制 剂 联 合 谷 氨 酰 胺 在 肝 硬 化 失 代 偿 治 疗 中 的 疗 效 观 察 [J]. 中 国 现 代 医 药 杂 志,2010,12(10): (DOI: /j.issn ) [4] 杨 林 辉, 蔡 俊, 陈 东 风. 非 酒 精 性 脂 肪 性 肝 炎 患 者 肠 道 菌 群 的 变 化 及 意 义 [J]. 临 床 肝 胆 病 杂 志,2012,02: [5] Lata J1, Novotný I, Príbramská V,etal. The effect of probiotics on gut flora,level of endotoxin and Child-Pugh score in cirrhotic patients:results of a double-blind randomized study[j]. Eur J Gastroenterol Hepatol,2007,19(12): (DOI: /MEG.0b013e3282efa40e) [6] 刘 慧, 何 欢, 熊 利 霞, 等. 藏 灵 菇 源 克 鲁 维 酵 母 K1 菌 株 胆 盐 水 解 酶 的 特 性 研 究 [J]. 中 国 酿 造, 2010,11:69~73. 7

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