Med J Chin PLA, Vol. 39, No. 6, June 1, 肿瘤的生长 转移和浸润均与血管生成有关, 抑制肿瘤血管生成可抑制肿瘤的生长和转移 [1] 研 究表明, 抗血管生成的药物能阻止肿瘤血管网的形 成, 有效抑制肿瘤生长 [2-3] 膀胱癌是泌尿系统最 常见

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1 470 解放军医学杂志 2014 年 6 月 1 日第 39 卷第 6 期 论 著 灵芝多糖对顺铂抑制荷膀胱癌 T24 细胞裸鼠肿瘤生长及血管生成作用的影响 郭鹏荣, 盛玉文, 刘奔, 王超, 刘轶丹, 傅德望, 王成财 [ 摘要 ] 目的探讨灵芝多糖对膀胱癌的化疗增敏效应和对肿瘤血管生成的抑制作用 方法应用 MTS 法测定灵芝多糖联合顺铂对人膀胱癌 T24 细胞体外增殖的影响 采用 Chou-Talalay 联合指数法 ( 即中效原理 ) 判定两药合用时的相互作用关系 建立 T24 荷瘤裸鼠模型, 观察灵芝多糖和顺铂的联合治疗效应, 采用免疫组化染色检测荷瘤裸鼠肿瘤组织的微血管密度 (MVD) 及血管内皮生长因子 () 碱性成纤维细胞生长因子() 的表达水平, 采用实时荧光定量 PCR(real-time PCR) 法和 Western blotting 检测荷瘤裸鼠肿瘤组织中 和 的表达情况 结果灵芝多糖在体外能有效抑制 T24 细胞的增殖, 且与顺铂联用具有协同效应 (CI<1) 免疫组化染色显示, 灵芝多糖可显著增强顺铂对荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用 (P<0.05), 并可抑制肿瘤组织的血管生成及 的表达 实时荧光定量 PCR 和 Western blotting 检测也显示与单用顺铂比较, 灵芝多糖联合顺铂治疗后荷瘤裸鼠肿瘤组织中 和 的表达显著下降 结论灵芝多糖和顺铂能协同抑制 T24 细胞的体外增殖 ; 灵芝多糖可增强顺铂对 T24 荷瘤裸鼠肿瘤生长及血管生成的抑制作用, 其机制可能与下调 和 的表达有关 [ 关键词 ] 灵芝多糖 ; 顺铂 ; 膀胱肿瘤 ; 药物协同作用 ; 血管生成 [ 中图分类号 ] R [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] (2014) [DOI] /j.issn Influence of Ganoderma lucidum polysaccharide on the inhibitory effects of cisplatin on the tumor growth and angiogenesis in bladder cancer (T24) cells -bearing nude mice GUO Peng-rong, SHENG Yu-wen *, LIU Ben, WANG Chao, LIU Yi-dan, FU De-wang, WANG Cheng-cai Department of Urology, First Hospital of Liaoning Medical University, Jinzhou, Liaoning , China * Corresponding author, syw9818@163.com This work was supported by the Natural Science Foundation of Liaoning Province ( ) [Abstract] Objective To explore the chemo-sensitizing effect and inhibitory effect of Ganoderma lucidum polysaccharide (GLP) on tumor angiogenesis of bladder cancer. Methods The effect of GLP combined with cisplatin on the in vitro proliferation of human bladder cancer cell lines T24 was determined by MTS assay. The interaction between the two drugs was evaluated using the Chou-Talalay method. A T24 (bladder cancer)-bearing nude mouse model was established, and then the therapeutic effect of GLP combined with cisplatin was evaluated. The microvessel density (MVD) and the expressions of vascular endothelial growth factor () and basic fibroblast growth factor () in the tumor tissue were determined by immunohistochemical staining, and the expression levels of and in tumor tissue were determined by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting. Results GLP combined with cisplatin markedly inhibited T24 cells proliferation in vitro showing a synergistic effect (CI<1). Immunohistochemical staining showed that GLP could enhance the inhibitory effect of cisplatin on the tumor growth in the tumorbearing nude mice (P<0.05), and it could also inhibit the angiogenesis and expressions of and in the tumor tissue. The real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting showed that the expression levels of and in tumor tissue significantly decreased in the tumor-bearing nude mice after being treated with GLP combined with cisplatin as compared with those treated by cisplatin alone. Conclusions GLP combined with cisplatin could inhibit the proliferation of T24 cells in vitro synergically. GLP could enhance the inhibitory effect of cisplatin on tumor growth and angiogenesis in T24 tumor-bearing nude mice, and the mechanism may be related to the down-regulation of and expressions. [Key words] Ganoderma lucidum polysaccharide; cisplatin; urinary bladder neoplasms; drug synergism; angiogenesis [ 基金项目 ] 辽宁省自然科学基金 ( ) [ 作者简介 ] 郭鹏荣, 硕士研究生 主要从事膀胱肿瘤的基础与临床研究 [ 作者单位 ] 辽宁锦州 辽宁医学院附属第一医院泌尿外科 ( 郭鹏荣 盛玉文 刘奔 王超 刘轶丹 傅德望, 王成财 ) [ 通讯作者 ] 盛玉文, syw9818@163.com

2 Med J Chin PLA, Vol. 39, No. 6, June 1, 肿瘤的生长 转移和浸润均与血管生成有关, 抑制肿瘤血管生成可抑制肿瘤的生长和转移 [1] 研 究表明, 抗血管生成的药物能阻止肿瘤血管网的形 成, 有效抑制肿瘤生长 [2-3] 膀胱癌是泌尿系统最 常见的恶性肿瘤, 其中 70%~80% 为浅表性膀胱癌 虽然大多数膀胱癌可经手术切除, 但术后复发率较 高, 可达 60%~70% 因此, 对膀胱癌患者进行辅 助性治疗尤为重要 [4] 现代医学对于肿瘤多采用包 括中西医结合在内的综合治疗, 近年研究表明, 中 药一方面可直接抑制肿瘤细胞的生长, 另一方面还可抑制肿瘤新生血管的形成 灵芝多糖 (Ganoderma lucidum polysaccharide,glp) 是灵芝孢子粉中最有效 的成分之一, 可提高机体免疫力, 但其对肿瘤血管 生成的影响鲜见报道 本研究观察了灵芝多糖联合 化疗药物对膀胱癌生长及其血管生成的抑制作用, 并探讨其可能机制, 以期为膀胱癌的治疗提供依 据 1 材料与方法 1.1 材料人膀胱癌 T24 细胞株购自中科院上海细胞库 15 只 4~6 周龄雌性 BALB/c 裸鼠购自北京华阜康生物科技股份有限公司 ( 许可证号 :SCXK 京 ) RPMI 1640 胎牛血清 胰蛋白酶由美国 Hyclone 公司提供 二甲亚砜 (DMSO) 由 Sigma 公司提供 灵芝多糖购自杭州众芝康菇生物技术有限公司, 使用时用 0.5% 羧甲基纤维素钠溶液溶解, 以 RPMI 1640 培养液稀释至工作浓度 顺铂由山东齐鲁制药厂提供, 用生理盐水溶解 CellTiter 96 AQueous 单溶液细胞增殖检测试剂盒购自 Promega 公司 CD34 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,) 碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,) 多克隆抗体购自美国 Santa Cruz 公司 GTVision TM Ⅲ 抗鼠兔通用型免疫组化检测试剂盒由基因科技上海有限公司提供 BCA 蛋白浓度测定试剂盒购自碧云天生物技术研究所 1.2 MTS 法检测细胞增殖活性将对数生长期的 T24 细胞消化后, 以 个 / 孔接种于 96 孔板 ( 每孔 100μl) 细胞过夜贴壁后分为生理盐水组 灵芝多糖组 顺铂组及顺铂 + 灵芝多糖组, 分别用等体积的生理盐水 灵芝多糖 ( 终浓度分别为 mg/ml) 顺铂( 终浓度分别为 mg/L) 及顺铂 + 灵芝多糖 (0.0625mg/L+0.125mg/ml 0.125mg/L+0.25mg/ ml 0.25mg/L+0.5mg/ml 0.5mg/L+1.0mg/ml 1.0mg/L+2.0mg/ml) 联合处理 每组设 3 个复孔 继续培养 3d 后, 按照 CellTiter 96 AQueous 单溶液细胞 增殖检测试剂盒说明书, 每孔加入 20μl MTS/PMS 混合液, 继续培养 3~4h 显色, 在 570nm 波长下用酶标仪测定吸光 (A) 值 细胞增殖抑制率 (%)=[1-( 实验组 A 值 / 对照组 A 值 )] 100% 1.3 药物联合作用评价采用 Chou-Talalay 联合指数法 ( 即中效原理 ) 判定两药的相互作用 [5-6] 肿瘤抑制率 (f a) 计算方法与上述细胞增殖抑制率计算方法相同 根据中效方程式 fa/fu=(d/dm)m ( 其中 fu=1-fa,d 为药物浓度,m 为斜率,Dm 为中效浓度 ), 两边取对数 :lg(fa/f u)=mlg D-mlg Dm, 设 y=lg(fa/fu),x=lgd,b=m,a=-mlgdm, 即得到直线方程式 :y=a+bx 灵芝多糖和顺铂的联合指数 (CI) 可由公式求出 :CI=D 1 /Dx 1 +D 2 /Dx 2 +αd 1 D 2 / (Dx 1 Dx 2 ), 其中 D 1 D 2 为两药合用时产生 x 效应时两药各自所需浓度,Dx 1 Dx 2 为两药单独使用时产生 x 效应时两药各自的浓度 两种药物作用机制不同时 α=0, 相同时 α=1 灵芝多糖与顺铂的作用机制不同, 故 α=0 若 CI<1 为协同,CI=1 为相加,CI>1 为拮抗 1.4 体内抑瘤实验取对数生长期人膀胱癌 T24 细胞, 台盼蓝染色显示活细胞数 >95% 将 个细胞重悬于 200μl PBS, 皮下接种于裸鼠右侧腋窝 待小鼠肿瘤长至纵径 4~5mm 时, 随机分为生理盐水组 顺铂组 顺铂 + 灵芝多糖组, 每组 5 只, 分别以生理盐水 生理盐水 灵芝多糖 (200mg/kg) 灌胃 18d, 同时以生理盐水 顺铂 (25mg/kg) 顺铂 (25mg/kg) 腹腔注射 5d, 每 3d 测量肿瘤横径 (W) 及纵径 (L) 肿瘤体积计算公式为:V=πLW2/6, 并以此绘制肿瘤生长曲线 第 19 天处死小鼠, 剥离瘤块, 并按以下公式计算生长抑制率 : 生长抑制率 (%)=(C-T)/C 100% 其中 C 为生理盐水组平均瘤重,T 为药物治疗组平均瘤重 1.5 免疫组化染色检测 CD34 和 表达水平剥离的肿瘤组织均经 4% 甲醛溶液固定, 石蜡包埋后, 连续切片, 厚度为 3μm 采用免疫组化 SP 法检测各组标本中 CD34 和 的表达水平 经一抗孵育过夜, 二抗孵育 1h 后, 进行 DAB 显色, 苏木精复染后封片 其中 CD34 为血管内皮细胞标记物, 用于标记肿瘤微血管 肿瘤微血管密度 (microvessel density,mvd) 计数方法 [7] : 在 400 倍视野下计数微血管的数量, 每例计数 3 个最高值视野, 并取其平均值作为该例的 MVD 值 在肿瘤区域内的单个或成丛的内皮细胞不管成腔与否均视为单个微血管 MVD 和免疫组化阳性评分采用双盲法, 由 2 人分别对同一切片进行计数和评分 1. 6 实时荧光定量 PCR 检测肿瘤组织内 及 b F G F m R N A 表达水平各组肿瘤组织置于匀浆

3 472 解放军医学杂志 2014 年 6 月 1 日第 39 卷第 6 期 器, 用 Trizol 法提取细胞总 RNA, 反转录成 cdna 后, 参照 Pro m e g a 公司 G ota q q P C R M a s t e r M i x (A6001) 说明书进行荧光定量 PCR 扩增, 引物序列为 : 上游 5'-GAGGAGCAGTTACGGTCTGTG-3', 下游 5 ' -TCCT T TCCT TAG CTG AC ACT TGT- 3 '; 上游 5'-AAGAGCGACCCTCACATCAA-3', 下游 5'-CGTTTCAGTGCCACATACCAA-3';GAPDH 上游 5'-GGAGCGAGATCCCTCCA A A AT-3', 下游 5'-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3' 荧光定量 PCR 扩增反应体系如下 : 模板 1μl, 上 下游引物各 0.4μl,2 GoTaq qpcr Master Mix 荧光染料 10μl, ddh 2 O 8.2μl, 总反应体积为 20μl 反应条件:95 预变性 5min;40 个热循环 (95 变性 3s,60 延伸 34s); 溶解曲线生成的反应程序为 : 95 15s,60 1min,95 15s 以 GAPDH 作为内参照基因 1.7 Western blotting 检测肿瘤组织中 和 的表达各组肿瘤组织进行研磨 匀浆 超声处理后, 加入细胞裂解液于冰上裂解, 离心取上清液, 用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测样品蛋白浓度 将样品加入等量的 2 SDS 上样缓冲液, 用 S D S - PAGE 电泳分离后, 蛋白湿转至 PVDF 膜上 (360mA, 1h),PVDF 膜经 4% 脱脂奶粉室温封闭 1h, 加入兔抗人 单克隆抗体 (1:1000),4 孵育过夜, 洗膜 5min 3 次, 再加入 HRP 标记的羊抗兔 IgG(1:3000) 室温孵育 1h, 洗膜 5min 3 次后进行化学发光检测 1.8 统计学处理采用 SPSS 11.5 软件进行统计分析 计量资料以 x±s 表示 多组间数据比较采用单因素方差分析 (One-way ANOVA), 进一步两两比较采用 Tukeys 多重检验 (Tukey 's multiple comparison test) P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 灵芝多糖和顺铂对膀胱癌 T24 细胞生长的协同抑制不同浓度顺铂和灵芝多糖单独或联合处理人膀胱癌 T 2 4 细胞, 3 d 后检测药物对细胞增殖的影响, 计算结果显示顺铂的半数抑制浓度 (IC 50 ) 为 0.441mg/L, 灵芝多糖的 IC 50 为 3.188mg/ml 采用 Chou-Talalay 联合指数法判定两药联合应用的效应, 结果显示, 顺铂和灵芝多糖在 5 种浓度组合 (0.0625mg/L+0.125mg/ml 0.125mg/L+0.25mg/ml 0.25mg/L+0.5mg/ml 0.5mg/L+1.0mg/ml 1.0mg/ L m g / m l) 时的肿瘤抑制率 (f a) 分别为 , 而 C I 均小于 1 ( 分别为 ), 表明顺铂和灵芝多糖在较低浓度时即能有效抑制 T24 细胞的生长, 且呈现协同效应 2.2 灵芝多糖对顺铂抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长作用的影响 BALB/c 裸鼠皮下接种 T24 细胞, 待肿瘤长至纵径 4~5mm 大小, 将裸鼠随机分为 3 组, 每 3d 测量肿瘤体积, 结果显示, 生理盐水组肿瘤生长迅速, 与生理盐水组比较, 顺铂组及顺铂 + 灵芝多糖组肿瘤生长显著受抑 (P<0.01), 且与顺铂组比较, 顺铂 + 灵芝多糖组肿瘤生长亦明显受抑 (P<0.05, 图 1) 实验结束( 第 19 天 ) 后处死裸鼠, 剥离瘤块并称重, 结果显示, 生理盐水组瘤重 (1.42±0.09g) 明显大于顺铂组 (0.78±0.13g) 及顺铂 + 灵芝多糖组 (0.52±0.08g), 差异有统计学意义 (P<0.01), 且顺铂组瘤重明显大于顺铂 + 灵芝多糖组 (P<0.05) 顺铂组和顺铂 + 灵芝多糖组的抑瘤率分别为 % 和 63.24% GLP 2000 Tumor volume (mm 3 ) Time after treatment (d) 图 1 灵芝多糖 (200mg/kg) 和顺铂 (25mg/kg) 联合治疗对荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响 (n=5) Fig. 1 Effects of combination therapy of GLP (200mg/kg) and cisplatin (25mg/kg) on the tumor growth in tumor-bearing mice (n=5) P<0.01, P<0.001 compared with normal saline group; (3) P<0.05 compared with cisplatin group (3) (3) 2.3 顺铂和灵芝多糖对裸鼠皮下移植瘤血管生成的影响免疫组化染色显示, 与顺铂组比较, 顺铂 + 灵芝多糖组微血管分布较稀疏, 肿瘤 MVD 显著降低 ( 图 2) 统计学分析显示, 顺铂组及顺铂 + 灵芝多糖组肿瘤 MVD 均明显低于生理盐水组 (P<0.05), 且顺铂组明显低于顺铂 + 灵芝多糖组 (P<0.05, 表 1) 2. 4 免疫组化检测裸鼠移植瘤组织血管生成相关蛋白的表达免疫组织染色显示, 生理盐水组 和 表达率高, 着色深, 而顺铂组和顺铂 + 灵芝多糖组中的 和 表达率低, 着色较淡 ( 图 3) 统计学分析显示, 顺铂组和顺铂 + 灵芝多糖组 和 的表达水平明显低于生理盐水组 (P<0.01), 且与顺铂组比较, 顺铂 + 灵芝多糖组肿瘤组织中 和 的表达水平显著下调 (P<0.01,P<0.05) 2.5 实时荧光定量 PCR 和 Western blotting 检测裸鼠移植瘤组织中 和 的表达实时荧光定量 PCR 检测结果显示, 与生理盐水组比较, 顺铂组和 (3) (3) (3)

4 Med J Chin PLA, Vol. 39, No. 6, June 1, GLP Fig. 2 staining 400) 表 1 顺铂和灵芝多糖对裸鼠皮下移植瘤 MVD 及 表达的影响 (x±s,n=5) Tab. 1 Effects of cisplatin and GLP on the microvessel density (MVD) and expression of and in the subcutaneously transplanted tumor in nude mice (x±s, n=5) Group MVD (/HP) 18.07± ± ± ± ± ± GLP 3.00± ±0.70 (3) 0.87±0.64 P<0.01 compared with normal saline group; P<0.05, (3) P<0.01 compared with cisplatin group 图 2 顺铂和灵芝多糖对裸鼠皮下移植瘤血管生成的影响 ( 免疫组化染色 400) Effects of cisplatin and GLP on angiogenesis in the subcutaneously transplanted tumor of nude mice (Immunohistochemical 顺铂 + 灵芝多糖组 和 mrna 的表达水平 明显降低 (P<0.001), 且顺铂 + 灵芝多糖组的 和 mrna 表达水平明显低于顺铂组 (P<0.001, P<0.05, 图 4) Western blotting 结果显示, 顺铂组和 顺铂 + 灵芝多糖组 和 蛋白表达明显低于 生理盐水组, 且顺铂 + 灵芝多糖组的 和 蛋白表达明显低于顺铂组 ( 图 5) 3 讨论 +GLP 灵芝多糖是从灵芝孢子粉中提取的多糖组分, Fig. 3 图 3 顺铂和灵芝多糖对裸鼠皮下移植瘤 和 蛋白表达的影响 ( 免疫组化染色 400) Effects of cisplatin and GLP on the expression of and in the subcutaneously transplanted tumor of nude mice (Immunohistochemistry staining 400) Relative mrna expression GLP +GLP 图 4 顺铂和灵芝多糖对裸鼠皮下移植瘤 和 mrna 表达的影响 Fig. 4 Effects of cisplatin and GLP on the mrna expression of and in the subcutaneously transplanted tumor of nude mice P<0.001 compared with normal saline group; P<0.001, (3) P<0.05 compared with cisplatin group (3) GAPDH +GLP 图 5 顺铂和灵芝多糖对裸鼠皮下移植瘤 和 蛋白表达的影响 (Western blotting) Fig. 5 Effects of cisplatin and GLP on the expression of and in the subcutaneously transplanted tumor of nude mice (Western blotting)

5 474 解放军医学杂志 2014 年 6 月 1 日第 39 卷第 6 期 具有提高机体免疫力的功效 [8] 早在 1971 年, 日本 学者就已经报道了灵芝多糖对 S180 肉瘤细胞小鼠皮 下移植瘤的抑制作用 [9], 后续研究也验证了灵芝多 糖的抗肿瘤效应 [10] 在本研究中, 我们选取顺铂 作为化疗药物, 联合灵芝多糖治疗 T24 荷瘤裸鼠, 结果显示, 两药在体外对 T24 细胞具有协同抑制作 用, 与单用顺铂相比能更有效地抑制实体瘤的生长 (P<0.05), 提示灵芝多糖作为化疗增敏剂在膀胱癌 的治疗中具有较好的应用前景 本研究结果显示, 灵芝多糖在体外对膀胱癌 T24 细胞的增殖抑制作用不如传统化疗药顺铂, 但 在较高浓度下也表现出一定的抑制作用 虽然部分 研究显示灵芝多糖在体外对肉瘤细胞 (S180 H22 和 U14) 无抑制或杀伤作用, 认为灵芝多糖是通过增 强免疫功能而发挥抗肿瘤作用的 [10], 但也有研究显 示灵芝多糖在体外单独使用即能显著抑制人结肠癌 LoVo 细胞增殖 [11], 诱导人肝癌细胞 HepG2 凋亡 [12] [13] 曲红光等研究发现, 灵芝多糖对人卵巢癌细胞系 SKOV3 及其顺铂耐药株 SKOV3/DD 均有抑制作用, 抑制率分别为 50.0% 和 18.7% 上述研究结果表明, 灵芝多糖在体外能否抑制肿瘤细胞的增殖可能与细 胞株的不同有关, 其具体机制尚需进一步研究 近年来中药成分抑制肿瘤血管生成的研究较 多, 目前普遍认为抑制血管生成是中药抗肿瘤的主 要机制之一 和 作为血管生成的重要促 进因子, 与肿瘤的生长和转移密切相关 [14], 但灵 芝多糖对肿瘤血管生成的抑制作用鲜有报道 张晓 [15] 春等对鸡胚尿囊膜血管生成模型进行研究, 证 实灵芝多糖的抗肿瘤作用与其抑制血管生成和细胞 黏附有关 本研究观察了灵芝多糖联合顺铂对膀胱 癌血管生成的影响, 结果表明, 两药联合能有效抑 制肿瘤组织中新生血管的形成, 其机制可能与下调 和 的表达有关 综上所述, 灵芝多糖与顺铂存在一定的协同作 用, 联合应用可发挥较好的抗肿瘤效应, 可能成为 有效的肿瘤化疗辅助药物 参考文献 [1] Claesson-Welsh L. Blood vessels as targets in tumor therapy[ J]. Ups J Med Sci, 2012, 117: [2] Choudhary S, Hegde P, Pruitt JR, et al. Macrophage migratory inhibitor y factor promotes bladder cancer progression via increasing proliferation and angiogenesis[ J]. Carcinogenesis, 2013, 34(12): [3] Reckamp KL. Antiangiogenic agents as second-line therapy for advanced non-small cell lung cancer[ J]. Cancer Lett, 2012, 321: [4] Cote RJ, Datar RH. Therapeutic approaches to bladder cancer: identifying targets and mechanisms[ J]. Crit Rev Oncol Hematol, 2003, 46(Suppl): S67-S83. [5] Chou TC, Talalay P. Quantitative analysis of dose-ef fect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors[ J]. Adv Enzyme Regul, 1984, 22(4): [6] Chou TC. D r ug combinat i o n studies and t h e i r s y n erg y quantification using the Chou-Talalay method[ J]. Cancer Res, 2010, 70: [7] Edel MJ, Robbins PD, Papadimitriou JM, et al. Assessment of vascularity in breast carcinoma by computer-assisted video analysis (CAVA) and its association with axillary lymph node status[ J]. Breast Cancer Res Treat, 1998, 47: [8] Lin ZB. Modern research on Ganoderma lucidum[m]. Beijing: Beijing Medical University and China Xie-he Medical University Joint Publishing House, [ 林志彬. 灵芝的现代研 究 [M]. 北京 : 北京医科大学中国协和医科大学联合出版社, 1996: ] [9] Sasaki T, Arai Y, Ikekawa T, et al. Antitumor polysaccharides from some polyporaceae, Ganoderma applanatum (Pers.) Pat and Phellinus linteus (Berk. et Curt) Aoshima[ J]. Chem Pharm Bull (Tokyo), 1971, 19(4): [10] Ning AH, Sun XD, Cao Q, et al. Elementarily the inhibition of ganoderma polysaccharides for mice tumor[ J]. Chin J Microecol, 2003, 15(6): [ 宁安红, 孙晓东, 曹婧, 等. 灵芝多糖抗 肿瘤作用的初步探讨 [ J]. 中国微生态学杂志, 2003, 15(6): ] [11] Liang ZEN, Yi YJ, Guo Y T, et al. Effects of combination of Ganoderma lucidum polysacchrides and 5-fluorouracil on proliferation and apoptosis in LoVo cells[ J]. Chin Tradit Pat Med, 2012, 34(11): [ 梁曾恩妮, 易有金, 郭雨桐, 等. 灵芝多糖联合 5- 氟尿嘧啶对 LoVo 细胞增殖及凋亡的影 响 [ J]. 中成药, 2012, 34(11): ] [12] Xu J, Wu L, Xu QF. Research about the apoptosis of liver cancer HepG2 cells induced by Ganoderma lucidum polysaccharides[ J]. Chin Mod Med, 2009, 16(23): 7-9. [ 徐晋, 吴丽, 徐巧芳. 灵芝 多糖诱导人肝癌细胞 HepG2 凋亡的研究 [ J]. 中国当代医药, 2009, 16(23): 7-9.] [13] Qu HG, Gao L, He D, et al. Reversal effect of Ganoderma lucidum polysaccharides on cisplatin-induced resistance of ovarian cancer cells lines[ J]. Chin J Gerontol, 2012, 32(5): [ 曲红光, 高磊, 贺丹, 等. 灵芝多糖对顺铂诱导卵巢癌细胞耐药株的 逆转 [ J]. 中国老年学杂志, 2012, 32(5): ] [14] Stratman AN, Dav is MJ, Dav is GE. and FGF prime vascular tube mor phogenesis and sprouting directed by hematopoietic stem cell cytokines[ J]. Blood, 2011, 117(14): [15] Z h a n g XC, C h e n G L, M a B, e t a l. G a n o d e r m a l u c i d u m polysaccharides inhibit angiogenesis and cell adhesion in chicken chorioallantoic membrane model[ J]. Basic Med Sci Clin, 2005, 25(9): [ 张晓春, 陈赣玲, 马兵, 等. 灵芝多糖抑制鸡 胚尿囊膜模型中的血管生成及细胞黏附 [ J]. 基础医学与临 床, 2005, 25(9): ] ( 收稿日期 : ; 修回日期 : ) ( 责任编辑 : 李恩江 )