前 言 中藥廠實施 GMP 由來已久, 檢驗為品管必要手段 中藥品質要求越來越高, 公告污穢物質限量標準日益嚴苛, 常需精密儀器配合才能達到檢測標準 多數中藥廠受限於經費規模, 無法購置精密儀器或欠缺檢驗技術人員, 因此許多項目必須委外檢測 委外檢測依規定需向衛福部中醫藥司報備核准, 收到之檢測報告

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1 中藥產業中藥材辨識能力培訓 中藥理化鑑別 曾木全 JUNE/2018 1

2 前 言 中藥廠實施 GMP 由來已久, 檢驗為品管必要手段 中藥品質要求越來越高, 公告污穢物質限量標準日益嚴苛, 常需精密儀器配合才能達到檢測標準 多數中藥廠受限於經費規模, 無法購置精密儀器或欠缺檢驗技術人員, 因此許多項目必須委外檢測 委外檢測依規定需向衛福部中醫藥司報備核准, 收到之檢測報告常缺原始記錄及檢測過程品保及品管數據, 難判結果是否精確 業者應了解檢測原裡, 懂得如何觀看檢測報告, 對中藥品質才能提升 2

3 中藥品質化學檢測品項 鑑別試驗: TLC 與呈色反應 乾燥減重:水分及揮發性成分含量 雜質檢查 : 總灰分 酸不溶性灰分 異物 含量測定 : 抽提物 指標成分定量 精油含量 重金屬限量 : 鉛 鎘 汞 砷或總重金屬 有機氯劑農藥殘留 :BHC 總量 DDT 總量 PCNB 總量 黃麴毒素之檢測 二氧化硫檢測 馬兜鈴酸含量檢測 3

4 總重金屬 及重金屬分項檢測

5 中藥重金屬分析 檢體前處理 乾式消化法 濕式消化法 微波消化法 硫硝酸還流消化法 註 : 1. 用上述任何適當之消化法將檢體處理成澄明水溶液 2. 各檢體消化法需評估方法適用性或其他賦型劑之干擾因素 檢測方法 比色法 ( 總重金屬 ) 火焰式原子吸收光譜法 (FLAA) 砷 汞分析 CVAAS( 冷蒸氣原子吸收光譜法 ) 石墨爐式原子吸收光譜法 (GFAA) 感應耦合電漿原子發射光譜法 (ICP/OES) 感應耦合電漿質譜法 (ICP/MS) 5

6 總重金屬比色法 分析原理 : 重金屬 (Pb, Cu, Cd, Zn, Bi, Hg, As, Ni, Co, Sb, Sn 等 ) 離子, 在酸性下與 Thioacetamide ( 硫代乙醯胺 )- 甘油試液呈色, 並與一定濃度之 Pb 標準溶液生成之 PbS 之顏色 ( 灰白混濁液 ) 作比較, 以 ppm 表示 S H 3 C NH 2 Sample 100ppm Pb

7 總重金屬比色法 總重金屬比色法屬於半定量檢驗應有數據報告 ( 記載 未檢出 或 ND 均非正確表示方式 ) 分為 1,2,3 不同檢測方法, 除檢品溶液 標準品溶液外, 尚有對照溶液配置應用 有公告限量與無公告限量品項作法不同 檢測極限對於 10ppm 以下很難分辨顏色情況下如何作方法修正? 總重金屬含量太高應進行重金屬分項檢測

8 砷檢查法 A: 氣體發生瓶 ( 錐形燒瓶 ) B: 磨砂接頭 C: 氣體洗淨管內裝經飽和醋酸鉛溶液浸濕經再擠乾之乾燥精製棉團 D: 球形接頭 E:15 ml 吸收管, 內置 3.0 ml 二乙基二硫代胺基甲酸銀 (Silver diethyldithiocarbamate) 試液吸收液 K: 兩管球形接頭固定夾 對照標準液 : 1.32ug/mL As2O3 1 ug/ml As Note: 1. 反應時間約 45 分鐘 2. 吸收液置於 525nm 下測吸光度 砷氣 AsH3 產生器 : 檢液 +dil H2SO4 +KI TS.+ SnCl2 + Zn

9 重金屬分項檢測 火焰式原子吸收光譜法 (FLAA) 石墨爐式原子吸收光譜法 (GFAA) 感應耦合電漿原子發射光譜法 (ICP/OES) 感應耦合電漿質譜法 (ICP/MS) 砷 汞分析 CVAAS( 冷蒸氣原子吸收光譜法 ) 檢量線製作, 線性回歸係數 r 值 0.99 檢體前處理 符合 TFDA 公告之實驗室品質管理規範 儀器定期校正並留存記錄 LOQ 及 LOD 應予評估備查 委外檢測應簽訂委外契約並向中醫藥司報備

10 火焰式原子吸收光譜法 (FLAA)

11 Temp( ) 石墨爐式原子吸收光譜法 (GFAAS) Graphite Furnace Atomic absorption spectrometry 石墨爐中原子化過程 Steps in GF atomisation 淨化 乾燥 灰化 原子化 Time(5secs)

12 感應耦合電漿原子發射光譜法 (ICP/OES) Inductively coupled plasma Optical emission spectroscopy 樣品經霧化後, 形成氣膠 (Aerosol) 藉由載送氣流輸送至電漿焰炬, 經由射頻 (Radio-frequency) 感應耦合電漿的加熱, 將各待測元素激發 由各激發原子或離子所發射出的光譜線, 經由光柵分光, 分解出各特定波長的發射譜線 各譜線的強度, 再由光檢器予以偵測 可同時測定樣品中多元素 (ppb 級 )

13 感應耦合電漿質譜法 (ICP/MS) Inductively coupled plasma mass spectrometry 檢品溶液經霧化後, 形成氣膠 (Aerosol) 輸送至電漿, 受熱後產生去溶劑 分解 原子化 / 離子化等反應, 將待分析元素形成單價正離子, 再透過真空 界面傳輸進入質譜儀, 並由質量分析器將各特定質荷比 (m/z) 之離子予以 解析, 再以電子倍增器加以檢測, 可用於多元素之定性定量工作, 既快速 又靈敏, 可同時測定多元素及同位素比測定的功能 亦可在前方連接 HPLC 先行金屬物種分離後, 再以 ICP-MS 分析 detector detector

14 分析元素 ICP-MS 分析參數選定 主要定量分析質量數 ICP-MS 質量 (m/z) 次要定性分析離子質量數 Pb( 鉛 ) 208 Pb 206 Pb 207 Pb Cu( 銅 ) 63 Cu 65 Cu Cd( 鎘 ) 114 Cd 111 Cd 112 Cd As( 砷 ) 75 As -- Hg( 汞 ) 202 Hg 200 Hg 201 Hg Rh( 銠 ) Rhodium ( 內標 ) 103 Rh -- Note: 1. 檢體前處理針對內標加入時機點應參考藥典規定 2. 應保留內標讀值參計算之證據

15 ICP-MS analysis for Heavy Metal

16 中藥材含重金屬限量基準 衛生福利部 衛部中字第 號令 一 藥事法第 21 條第三款所稱 藥品中一部或全部含有污穢或異物者, 有關中藥材含重金屬限量基準詳如附件, 本基準自中華民國 生效 二 行政院衛生署 署授藥字第 號公告 署授藥字第 號令 署授藥字第 號令 署授藥字第 號令及 署授藥字第 號公告等規定與本基準有牴觸部分, 自本基準生效日起停止適用

17 中藥材重金屬 總重金屬 限量基準 通則規範限量基準中藥材品項但書 分項重金屬 砷 3.0 ppm 鉛 5.0 ppm 鎘 1.0 ppm 汞 0.2 ppm 所有品項但排除以下優先適用之測項限量 經衛生福利部指定之特定品項中藥材, 得個別適用 總重金屬限量基準 特定分項重金屬限量基準 或 不適用 重金屬限量基準通則性規範 總重金屬 20 ppm 龜板膠 鹿角膠 阿膠 水蛭 沒藥 乳香 血竭 虻蟲 馬勃 石燕及鐘乳石 不採分項重金屬限量基準 30 ppm 地龍 龍骨 龍齒 白 ( 明 ) 礬 皂礬 玄明粉 芒硝 代赭石 赤石脂 自然銅 膽礬 礞石 爐甘石及五靈脂 優先適用 特定分項重金屬 砷 5.0 ppm 澤瀉 牡丹皮 龍膽 貝母 地骨皮 黃芩 葛根 栝樓根 ( 天花粉 ) 牛膝 柴胡 桔梗 黃連 遠志 鬱金 延胡索 何首烏 莪朮 羌活 苦參 紫草 乾薑 升麻 芎藭 ( 川芎 ) 桑白皮 知母 豬苓 天麻 天門冬 吐根 防風 半夏 白芷 白朮 附子 白茅根 木香 高良薑 莨菪根 細辛 地黃 白芍 赤芍 蒼朮 大黃 當歸 麥門冬 茯苓 海螵蛸 石菖蒲及三七不適用 砷 限量昆布 海帶 海藻 冬蟲夏草 雄黃及砒石 優先適用 特定分項重金屬 限量基準外, 該品項其餘分項重金屬限量值仍須符合 分項重金屬 限量基準通則規範 鉛 10.0 ppm 連翹 細辛 廣藿香 菟絲子 魚腥草 杜仲葉 丁豎杇 巴戟天 伸筋草 側柏葉 骨碎補 黃蘗 ( 黃柏 ) 蟬蛻 鵝不食草 紅花 川牛膝 淫羊藿 淡竹葉及白花蛇舌草 鉛 15.0 ppm 枇杷葉 桂皮 桂枝 杜仲 白及 五加皮 滑石及薄荷 不適用 鉛 限量 乾漆 卷柏 萬點金 ( 岡梅 ; 燈稱草 ) 鉛丹及密陀僧 鎘 0.3 ppm 丹參 甘草 白芍 赤芍 黃耆及紅耆 鎘 1.5 ppm 細辛 旋覆花 瞿麥 百合 蟬蛻及茵陳 不適用 鎘 限量 昆布 海帶 海藻 海螵蛸 蛇床子 墨旱蓮 ( 旱蓮草 ) 烏藥 鵝不食草 川牛膝 萬點金 ( 岡梅 ; 燈稱草 ) 丁豎杇 蚶殼草 ( 老公根 ; 積雪草 ; 雷公根 ) 骨碎補 枸骨葉及薑黃 汞 0.5 ppm 鬱金 不適用 汞 限量 乾漆 藥食兩用中藥材 其異常物質限量基準及檢驗方法比照食品安全衛生管理等相關 菊花 蓮子 白木耳 龍眼肉 烏梅乾 百合 枸杞 山藥 薄荷 芡實 山楂 肉豆蔻 草豆蔻 砂仁 黃精 絞股藍 ( 七葉膽 ) 小茴香及八角茴香等十八項 依衛生福利部 衛部中字第 號令辦理

18 黃麴毒素檢測 Aflatoxin 18

19 黃麴毒素毒性 黃麴毒素 (Aflatoxin) 是由 Aspergillus flavus 及 Aspergillus parasiticus 所產生的黴菌毒素代謝產物, 被認為具有潛在性的肝毒害 (hepatoxin) 及致癌物 (carcinogen) 典型之黃麴毒素中毒症狀有嗜眠 體溫上升和神經症狀 胰臟消化酵素活性減低, 免疫能力減弱, 血液凝固延遲, 肝臟腫大及脂肪移動失調等諸多毒害 Chemical and physical properties of aflatoxins Aflatoxin Molecular formula MW Mp B 1 C 17 H 12 O B 2 C 17 H 14 O G 1 C 17 H 12 O G 2 C 17 H 14 O

20 黃麴毒素主要成分有 B1 B2 G1 G2; 其中以 B1 之毒性最強, 危害亦最大 O O O O 黃麴毒素之特性 O O O O Aflatoxin B1 OCH 3 O O Aflatoxin B2 OCH 3 中藥材含多量之碳水化合物與營養成分, 由於台灣高溫與潮濕氣候, 若藥材貯藏不當則易造成真菌滋長而產生黃麴毒素 O O O O O OCH 3 O O O O O O OCH 3 O 黃麴毒素係為化學物質非酵素活性物質, 熔點高, 不易受熱破壞, 因此無法以加熱濃縮萃取製程予以消除 Aflatoxin G1 Aflatoxin G2 20

21 中藥材含黃麴毒素限量標準 衛部中字第 號令 有害物質限量公告藥材 總黃麴毒素 (Aflatoxin) 黃麴毒素 B1 10 ppb 5 ppb 食品類黃麴毒素公告限量 八角茴香 大棗 大腹皮 女貞子 小茴香 山楂 山茱萸 枸杞 胡椒 麴類 延胡索 橘皮 黃耆 紅耆 蓮子 柏子仁 使君子 檳榔 麥芽 決明子 遠志 薏苡仁 地龍 蜈蚣 水蛭 全蠍 白殭蠶 酸棗仁 桃仁 胖大海 陳皮 苦杏仁 香附 甘草 玄參 射干 防風 總黃麴毒素 (Aflatoxin) 15 ppb 花生 玉米 10 ppb 米 麥 豆 高梁類 堅果 21

22 黃麴毒素分析方法 化學分析方法 :HPLC 方法 ( 藥典 ) LC/MS/MS 分析 : 建議複驗方法 22

23 黃麴毒素分析檢體前處理 Sampling Extraction---- dil MeOH ext. Clean up ---- SPE or Immunoaffinity column Quality & Quantification

24 TIC chromatogram of mixed Aflatoxins (HPLC method) B1 B2 LOQ: G2, B2: 0.2ppb G1, B1: 0.4ppb G2 G1

25 黃麴毒素之 LC/MS/MS 分析 Aflatoxin Ion pairs (m/z) Cone-V CE Precursors ion > Products ion (V) (ev) B1 313 > 241* 313 > 285 B2 315 > 259* 315 > 287 G1 329 > 200* 329 > 243 G2 331 > 189* 331 > 313 * Quantitative ion

26 農藥殘留檢測方法 GC-ECD GC-MS-MS--MRM LC/MS/MS--MRM

27 農藥殘留分析之前處理技術 LLE (liquid-liquid extraction) SPE (solid-phase extraction) SPEM (solid-phase microextraction) SFE (supercritical fluide extraction) GPC (gel permeation chromatography) D-SPE (dispersion SPE)

28 中藥材農藥殘留有機氯劑之檢驗 檢體 5g 加去離子水 20mL, 混合, 靜置 10min 加丙酮 50mL, 振盪萃取 3min 抽氣過濾 殘渣以丙酮 50mL 重複萃取 2 次 合併濾液, 減壓濃縮 加入 10%NaCl 30mL 及正己烷 50mL 移至分液漏斗振盪萃取 2min 靜置分層 上層 ( 有機層 )--- 保留 下層 ( 水層 ) 移至另一支分液漏斗, 加入 3g NaCl 及正己烷 50mL, 振盪萃取 2min 合併有機層 分取上層 以無水硫酸鈉脫水 濃縮到乾 殘渣以正己烷 5mL 溶解 取上述溶液進行淨化步驟

29 淨化步驟 以正己烷 5mL 洗滌矽酸鎂固項萃取 (SPE) 注入待淨化之樣品溶液 以正己烷沖提三次, 每次 5mL 以濃縮瓶收集沖提液 減壓濃縮 以正己烷定容至 5mL 作為檢液 GC/ECD or GC/MS(MS) 檢測

30 農藥種類與監測品項 有機農藥 : 有機磷 有機氯 有機氮 有機硫 有機金屬 硝基 醯銨 腈基等化合物 台灣中藥典只監測有機氯劑中總 BHC 總 DDT 及總 PCNB 總 BHC=α-BHC +β-bhc +γ-bhc +δ-bhc 總 DDT= o,p -DDT + p,p -DDT + p,p -DDD + p,p -DDE 總 PCNB=PCNB + Pentachloroaniline + Methyl Pentachlorophenyl Sulfide

31 Parameters of GC/MS/MS analysis of Chlorinated pesticide Chlorinated pesticide Ion pairs (m/z) Precursors ion > Products ion α-bhc 181 > 109*, 181 > β-bhc 181 > 109*, 181 > γ-bhc 181 > 109*, 181 > δ-bhc 181 > 109*, 181 > o,p -DDT 235 > 165*, 235 > p,p -DDT 235 > 165*, 235 > p,p -DDD 235 > 165*, 235 > p,p -DDE 246 > 176*, 246 > o,p -DDE 246 > 176*, 250 > PCNB (Quintozene) 295 > 237, 237 > Pentachloroaniline 265 > 194*, 265 > Methyl Pentachloro -phenyl Sulfide 296 > 263*, 296 > Hexachlorobenzene 284 > 249*, 284 > Heptachlor 272 > 237*, 237 > Heptachlor epoxide 217 > 182*, 289 > Aldrin 263 > 193*, 263 > Dieldrin 263 > 193*, 263 > Endrin 263 > 193*, 263 > Oxychlordane 387 > 263*, 387 > Trans-Chlordane 373 > 266*, 375 > Cis- Chlordane 373 > 266*, 375 > CE (ev)

32 Pesticides (TIC)

33 Pesticides (MRM Spectrums)

34 Pesticides (MRM Spectrums)

35 公告藥材農藥殘留限量標準 農藥殘留品項限量標準適用範圍 DDT 總量 BHC 總量 1.0ppm 0.9ppm 人參 甘草 黃耆 番瀉葉 PCNB(Quintozene) 總量 1.0ppm 35

36 有機氯劑農藥殘留 (21 品項 ) 限量表 α-bhc α-hexachlorocyclohexane α- 六氯環己烷 ( 蟲必死 ) 300 ppb β-bhc β-hexachlorocyclohexane β- 六氯環己烷 ( 蟲必死 ) δ-bhc δ-hexachlorocyclohexane δ- 六氯環己烷 ( 蟲必死 ) γ-bhc γ-hexachlorocyclohexane(lindane) γ- 六氯環己烷 ( 蟲必死 ) 600 ppb HCB Hexachlorobenzene 六氯苯 100 ppb PCNB Quintozene 五氯硝苯 1000 ppb PCA Pentachloroaniline 五氯苯胺 MPCPS Methyl Pentachlorophenyl sulphide 五氯苯基甲基硫化物 Heptachlor Heptachlor 飛佈達 50 ppb Heptachlor EXO Heptachlor epoxide 環氧飛佈達 Aldrin Aldrin 艾氏劑 ( 阿特靈 ) 50 ppb Dieldrin Dieldrin 狄式劑 ( 地特靈 ) Oxychlordane Oxychlordane 氧化可氯丹 50 ppb Trans-chlordane Trans-chlordane 反式 - 氯丹 (α- 氯丹 ) Cis-chlordane Cis-chlordane 順式 - 氯丹 (β- 氯丹 ) Endrin Endrin 安特靈 50 ppb op-dde 2,4'- DDE 2,4'- 滴滴依 1000 ppb pp-dde 4,4'- DDE 4,4'- 滴滴依 op-ddt 2,4'- DDT 2,4'- 滴滴涕 pp-ddd 4,4'- DDD 4,4'- 滴滴滴 pp-ddt 4,4'- DDT 4,4'- 滴滴涕

37 二氧化硫檢測

38 中藥材含二氧化硫分析方法 SO2 + H2O 25% H3PO4 H2SO3 H2SO3 + H2O2 H2SO4 + H2O Titrate with 0.01N NaOH, Each ml eq. to 0.32mg SO2

39 SO2 蒸餾裝置 Cooling water 0.3% H2O2 N2 gas Sample + 25% H3PO4

40 中藥材含二氧化硫限量標準 有害物質限量公告藥材 二氧化硫 400 ppm 牛膝 葛根 天麻 天門冬 栝樓根 ( 天花粉 ) 白及 白芍 赤芍 白朮 山藥 百合 白果 龍眼肉 烏梅 枸杞 山楂 大棗 黨參 當歸 川芎 知母 山奈 蓮子 白木耳 芡實 二氧化硫 150 ppm 除前款以外之中藥材 ( 礦物性藥材未規範 ) 二氧化硫 比照食品安全衛生管理等相關標準及規定 * 衛部中字第 號令 藥食兩用中藥材 :* 菊花 蓮子 白木耳 龍眼肉 烏梅乾 百合 枸杞 山藥 薄荷 芡實 山楂 肉豆蔻 草豆蔻 砂仁 黃精 絞股藍 ( 七葉膽 ) 小茴香及八角茴香等十八項

41 品質含量測定 乾燥減重 ( 水分, 精油 ) 水抽提物含量 稀醇抽提物含量 指標成分定量 馬兜鈴酸檢測

42 乾燥減重 定量結果為檢品水分及揮發性成分含量 以 105 烤箱 稱量瓶 (Weighing bottle) 及乾燥器 (Desiccator) 操作 植物性檢體剪碎平舖 乾燥至恆量 (Constant weight), 兩次稱量差異在 0.25% 以內

43 水抽提物及稀醇抽提物含量 浸漬 8 小時, 每隔 0.5 小時振搖一次, 再淨置 16 小時 ( 總共 24 小時 ) 過濾與洗滌殘渣, 定容, 分取一半抽提液在水浴上蒸乾稱重 自然重力濾紙過濾, 不宜減壓過濾 中藥材之抽提物應以乾品計算抽提物含量 ( 即扣除乾燥減重值換算 )

44 指標成分定量 指標成分為製劑中處方藥材之指標性成分, 用作測定藥物相對強度, 通常為具有生理活性成分, 若其生理活性成分不明者, 可另測定其他可定量之成分 指標成分定量為確保中藥濃縮製劑半製品 成品與標準湯劑具有同等性 計量單位為 mg/day 每個方劑應選擇來自二種以上藥材之指標成分予以定量 指標成分之規格範圍為標誌量之 ±50% 以內

45 不同廠葛根湯濃縮製劑指標成份定量結果 葛根湯基準方處方組成 葛根 6g 麻黃 4.5g 大棗 4g 桂枝 3g 白芍 3g 炙甘草 3g 及生薑 4.5g 指標成分標誌量 (mg/day) 係由各廠以至少三批藥材之數據自行訂定, 因各廠商每日服用量不盡相同, 但基準方內藥材一日量均相同, 故換算成處方中 單位藥材含甘草酸之量 有所差異, 原因如何? 藥效可否相同? 廠名濃縮倍數 ( 一日量 ) 浸膏與賦形劑比 標誌量 (mg/day) 指標成分 藥材一日量 (g) 處方藥材 單位藥材含量 (mg/g) A 7.08:1 (4.5g) 1.14: Glycyrrhizin 3 炙甘草 3.5 B 6.2:1 (9g) 1:1 12 Glycyrrhizin 3 炙甘草 4.0 C 14:1 (4.0g) 2:1 28 Glycyrrhizin 3 炙甘草 9.3

46 單位藥材標誌量 (mg/g) 葛根湯濃縮製劑中 Glycyrrhizin 成分單位藥材標誌量比較分佈圖 廠家編號 藥廠之標誌量 ( 規格分佈範圍 : mg/g) 日本薬局方第 15 版規格 ( mg/g) 日本薬局方甘草規格 (25.0mg/g 以上 ) 中華中藥典甘草規格 ( mg/g)

47 單位藥材標誌量 (mg/g) 葛根湯濃縮製劑中 Paeoniflorin 成分單位藥材標誌量比較分佈圖 ( 由低到高排列 ) 廠家編號 藥廠之標誌量 ( 規格分佈範圍 : mg/g) 日本薬局方第 15 版規格 ( mg/g ) 日本薬局方芍藥規格 (20.0mg/g 以上 ) 中華中藥典白芍規格 (10.0mg/g 以上 )

48 馬兜鈴酸含量檢測 HPLC 方法 LC/MS/MS 方法 O COOH O COOH O NO 2 O NO 2 OCH 3 Aristolochic acid I Aristolochic acid II

49 含馬兜鈴酸成分之中藥材廣防己 (Aristolochia fangchi Wu.) 關木通 (Aristolochia manshuriensis Kom.) 北馬兜鈴 (Aristolochia contorta Bunge) 之果實馬兜鈴 (Aristolochia debilis Sieb.et Zucc.) 之果實青木香為馬兜鈴之地下部天仙藤為馬兜鈴之帶葉莖藤 細 上述藥材之製劑禁止製造 輸入 並註銷其藥品許可證 辛為馬兜鈴科植物 (Asiasrum 屬 ) 之乾燥根及根莖 北細辛藥材 ( 全草 ) 北細辛 ( 根 )

50 含細辛藥材及其製劑之管理規定 藥材:藥用部位由全草改用根部, 並依公告之檢驗規格及方法檢驗合格後, 始得供製造及調劑 含細辛之中藥製劑 1. 濃縮製劑 : 製程以水煎煮方式製造, 成品依廠內既定之 HPLC 檢驗方法檢驗合格後, 始得販售 2. 傳統製劑 ( 丸 散 膏 丹 ) 內服及外用液劑 : 細辛原料藥材應經水煎, 或採用單味濃縮細辛製劑, 與其他原料藥材合併製造 ; 成品依廠內既定之 HPLC 檢驗方法檢驗合格後, 始得販售

51 Quantitative analysis of Aristolochic acids by HPLC mau mau (1) AA-II (2) 0.6 AA-I 10 AA-II min mau mau 12.5 (3) AA-II (4) AA-I 5 20 AA-I min 5 mau mau (5) (6) min min min min (1) AAs Std (2) Sample-1 (3) Sample-2 (4) Sample-3 (5) Sample-4 (6) Sample-5 Limit of detection : 1 ppm of Aristolochic acids I and II

52 Quantitative analysis of Aristolochic acids by LC/MS/MS Parameters of MRM for aristolochic acid analysis Parameters Parent ion Daughter ion Dwell Cone Collision energy Ingredients (m/z) (m/z) (secs) (Volt) (ev) aristolochic acid I aristolochic acid II HPLC analytic parameters: (1) Column:Zorbax Extend C18, 2.1 x150mm, 5μm (2). Mobile phase:ch3cn:0.1 % HCOOH+NH4Ac (35: 65) (3). Flow rate:0.3 ml/min(split ratio:1:1) (4). Injection volume:20μl

53 Quantitative analysis of Aristolochic acids by LC/MS/MS 12.5ppm AA-II AA-I AA-Std A Sm (SG, 2x9) 2: Diode Array TIC 6.53e % AA II AA I 0 AA-Std A Sm (SG, 2x9) 100 % 0 AA-Std A Sm (SG, 2x9) 100 % 0 AA-Std A Sm (SG, 2x9) AA II: 329 > AA I: 359 > 298 1: MRM of 3 Channels ES > e7 1: MRM of 3 Channels ES > e6 1: MRM of 3 Channels ES+ TIC 1.25e7 Limit of detection : AA-I :10 ppb AA-II:10 ppb % 5.95 IS 9.14 AA II AA I Time 12.5ppm sample (a) AA-II % (b) % AA-I % m/z nm Journal of Food and Drug Analysis, Vol.13 No.2 p ( 藥物食品分析期刊 )

54 馬兜鈴酸毒性物質含量規定 我國現行規定 :HPLC 不得檢出 美國歐盟規定 :LC-MS-MS 不得檢出 HPLC 檢測法之 LOQ( 最低檢測濃度 ) 為 2ppm LC-MS-MS 檢測法之 LOQ 為 10ppb

55 結 論 理化檢驗雖耗費巨額成本, 但畢竟是品質保證重要一環, 只要精進廠內檢驗技術及設備, 各種測項盡量由自己檢驗, 應屬降低製造成本最實惠之投資 國內中藥廠實施 GMP 品管制度已達國際水準, 製造廠商應支持政府訂定更嚴謹之品質規範, 以阻擋國外劣質中藥入侵, 間接保障國人健康及業者之永續發展

56 謝謝您的參與 敬請指教 曾木全 鞠躬

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