岛津LC应用系统
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5 Access to your success SHIMADZU Co-Sense for BA Co-Sense for BA + LCMS
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13 100 ul 100 ul 50 ul 10 ul 50 ul 10 ul
14 10 ul 100 ul Drug Protein
15 Sample introduction pump Auto-sampler Pretreatment column Dilution pump 90% Sample introduction pump 10% Auto-sampler Free Drug Pretreatment column
16 µ
17 ODS
18
19 µ Time (min)
20 µ 500 L 200 L 100 L Time (min)
21 Time (min) Time (min)
22
23
24 Pretreatment Column Shim-pack MAYI-ODS (4.6mmi.d. x 10mm) Extraction mobile phase 10mM ammonium acetate/acetonitrile = 95/5 Flow rate 3mL/min Column temperature 45ºC Injection volume 5, 10 or 50µL Extraction time 1 or 2min Dilution factor 8 fold Analysis Column Phenomenex Mercury MS (4.0mmi.d. x 10mm, 5µm) Mobile phase A : 10mM ammonium acetate, B : acetonitrile Gradient program Extraction time 1min 5%B(0-0.5min) 90%B(3-4min) - 5%B(4.01min) - STOP(5min) or Extraction time 2min 5%B(0-1.5min) 90%B(4-5min) - 5%B(5.01min) - STOP(6min) Flow rate 0.8mL/min Split ratio 1 : 3 (mass spectrometer : waste) Column temperature 45ºC Ionization Electrospray ionization Probe voltage +4.5 kv or 3.5kV Nebulizing gas flow 4.5L/min
25 SIM chromatograms of standards µg/mL each, 5µL 2 1
26 Compound RSD, % (n=5) Standard Plasma spiked Metoprolol Propranolol Lidocaine Dibucaine Bupivacaine each 1ug/mL, 5uL
27
28 Area Conc.(µg/mL)
29
30 1st run 101st run 201st run 301st run 0.1µg/mL each, plasma spiked, Injection volume : 50µL, Extraction time : 2min
31 Column pressure at start time (MPa) Pump A Pump B Pump C Pump C for pretreatment Number of Injection
32 LCMS UV - - UV 230nm ESI(+) SIM m/z 235
33 CH 3 CH 3 NH C O CH 2 N C 2 H 5 C 2 H 5 M+H + 0.1% / = 8 / 2, ESI(+)
34 r = LCMS-ESI-(+) (µg/l)
35 0.13% 2.99% LCMS 0.18% 1.16% ml
36
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43 UV 10uL
44
45 α
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47 min.
48 min.
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67 CPMC MTMC PHC Arprocarb NAC MPMC XMC MIPC BPMC Mercaptodim ethur
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70 ( ) (O- ) ) ( )
71
72
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75 S/N=3 2ppb
76 / 3-30 XMC 40 BDMC
77 (1)
78
79
80 5000e3 4500e3 4000e3 3500e3 TIC e3 2500e3 2000e3 1500e3 1000e3 500e3 0e : SIM
81 Int e3 200e3 O H 3 C S O CH 3 C H C CH 3 O N O C N H CH 3 M.W e e m/z Int e3 200e3 150e3 100e3 M.W H 3 C C H 3 CS NOCONHCH 3 50e e m/z Int e3 100e3 50e M.W. 238 CH 3 OCON CH 3 H 3 C N CH 3 H 3 C N N CH e m/z
82 Int e3 200e3 100e3 M.W OCONHCH 3 O C O CH 3 CH e m/z Int e3 750e3 500e3 M.W e e m/z Int e3 500e3 250e3 M.W e m/z
83 Int e3 400e3 300e3 200e3 M.W e e m/z Int e3 150e3 100e3 M.W e e m/z Area SIM 8 ~ 1000 ppb 800e3 700e3 600e3 500e3 400e3 300e3 200e3 100e3 0e Conc
84 GPC
85 GPC UV detector Column Mobile Phase Flow Rate Fraction Volume : Shodex CLN-pak EV-2000 ( 20.0mmI.D. 300mmL) Guard column : Shodex CLN-pak EV-G : Acetone/Cyclohexane = 2/8 (V/V) : 4mL/min. : 10mL
86 Elution Map Bio Beads SX Fraction No. Recovery % Elution Profiles from GPC(2.2cm i.d. x 50cm, CH 2 Cl 2 -cyclohexane 1:1)
87
88 RID-20A
89 !!
90
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93 NH2 R C COOH H
94
95 : : --- UV/VIS OPA ---
96
97 : 440nm ( ) or 570nm (primary) : 130 : : :
98 (Ex=350nm, Em=460nm) :
99 Ninhydrin OPA Reaction primary, secondary amine primary amine Reaction Temp. 130 C Ambient Reaction Speed First First Detection Visible detector Fluoresces detector Reagent Stability unstable less stable Amino Acid itself Column Oven CationExchange Column Fluorescence detector Hypochrolite OPA reagent ethanethiol 2-mercaptoethanol 3-mercaptopropionic acid N-acetylcysteine (Shimadzu patent)
100 Postcolumn repeatability, RSD around 1% Precolumn repeatability, RSD more than 2%
101 Column : Revered Phase Column (ODS) Reagent : OPA (Fluorescence) FMOC (Fluorescence) Fluorescamine (Fluorescence) DANS-Cl (Fluorescence) PITC (UV)
102
103 LC-20AT LC-20AT (x2) DGU-20A3 SIL-20A CTO-20A SPD-20A Tray CBM-20A lite LC-Solution LC-2010HT
104
105
106 LC-20A
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