14 JModUrol,Vol.18No.1Jan.2013 肾细胞癌是人类最常见的肾脏恶性肿瘤, 已成为危害中老年人健康和生命的疾病之一 [1 2] 近年来, PPAR γ 与肿瘤的关系倍受人们的关注, 研究显示 PPAR γ 在肿瘤组织中的表达上调,PPAR γ 的特异性激动剂能诱导人乳腺癌前

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裕庞
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1 现代泌尿外科杂志 2013 年 1 月第 18 卷第 1 期 13 论著文章编号 : (2013) 姜黄素通过 PPAR γ 途径促进人肾癌细胞的调亡张涛 1, 周洁 2, 陈敏 3, 陈仙 1, 汪翼 1, 欧阳新平 4 1, 罗志刚 (1 南华大学附属第二医院泌尿外科, 湖南衡阳 ;2 解放军第 169 医院普通外科, 湖南衡阳 ;3. 衡阳市中心血站, 湖南衡阳 ;4. 南华大学医学院生理学教研室, 湖南衡阳 ) Apoptosisinducedbycurcuminthroughperoxisomeproliferatoractivatedreceptor γ signalingpathwayinhumanrenalcelcarcinoma ZHANG Tao 1,ZHOU Jie 2,CHEN Min 3,CHEN Xian 1,WANG Yi 1,OU YANG Xin ping 2,LUO Zhi gang 1 (1 DepartmentofUrology,theSecondAfiliated Hospital,UniversityofSouthChina,Hengyang421001; 2 Departmentof GeneralSurgery,the169th HospitalofChinese People s Liberation Army,Hengyang ;3.TheBloodCenterofHengyangCity,Hengyang421001;4.DepartmentofPhysiology,Medical Colege,UniversityofSouthChina,Hengyang421001,China) ABSTRACT:Objective 犜狅犲狓狆犾狅狉犲狋犺犲犲犳犳犲犮狋狅犳犮狌狉犮狌犿犻狀狅狀狋犺犲犮犲犾狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋犻狅狀犪狀犱犪狆狅狆狋狅狊犻狊犻狀犺狌犿犪狀狉犲狀犪犾犮犲犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪犮犲犾犾犻狀犲犃 498 犪狀犱狋狅犻狀狏犲狊狋犻犵犪狋犲狋犺犲狆狅狋犲狀狋犻犪犾犿犲犮犺犪狀犻狊犿.Methods 犃 498 犮犲犾狊狑犲狉犲狋狉犲犪狋犲犱狑犻狋犺犮狌狉犮狌犿犻狀 (10,50 犪狀犱 100μ 犿狅犾 / 犔 ) 犳狅狉 12,24,48 犪狀犱 72 犺. 犜犺犲犮犲犾狏犻犪犫犻犾犻狋狔狑犪狊犱犲狋犲犮狋犲犱狑犻狋犺犕犜犜犪狊犪狔. 犜犺犲狉犪狋犲狅犳狋狌犿狅狉犻狀犺犻犫犻狋犻狅狀狑犪狊犮犪犾犮狌犾犪狋犲犱. 犜犺犲犪狆狅狆狋狅狊犻狊狅犳犃 498 犮犲犾狊狑犪狊犿犲犪狊狌狉犲犱狑犻狋犺犳犾狅狑犮狔狋狅犿犲狋狉狔. 犜犺犲犿犚犖犃犪狀犱狆狉狅狋犲犻狀犲狓狆狉犲狊犻狅狀狊狅犳犅犮犾 2, 犅犪狓犪狀犱狆犲狉狅狓犻狊狅犿犲狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋狅狉犪犮狋犻狏犪狋犲犱狉犲犮犲狆狋狅狉 γ ( 犘犘犃犚 γ) 犻狀犺狌犿犪狀狉犲狀犪犾犮犲犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪犮犲犾狊狑犲狉犲犿犲犪狊狌狉犲犱狑犻狋犺犚犲犪犾狋犻犿犲犘犆犚犪狀犱犠犲狊狋犲狉狀犅犾狅狋狉犲狊狆犲犮狋犻狏犲犾狔. 犜犺犲狊狆犲犮犻犳犻犮犻狀犺犻犫犻狋狅狉狅犳犘犘犃犚 γ 犌犠 9662 狑犪狊狌狊犲犱犻狀狋犺犻狊狊狋狌犱狔.Results 犜犺犲狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋犻狅狀狊狅犳犺狌犿犪狀狉犲狀犪犾犮犲犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪犮犲犾狊狑犲狉犲狊犻犵狀犻犳犻犮犪狀狋犾狔犻狀犺犻犫犻狋犲犱犫狔狋狉犲犪狋犿犲狀狋狑犻狋犺犮狌狉犮狌犿犻狀 (10,50 犪狀犱 100μ 犿狅犾 / 犔 ) 犳狅狉 24,48 犪狀犱 72 犺犻狀犪犱狅狊犲犱犲狆犲狀犱犲狀狋犪狀犱狋犻犿犲犱犲狆犲狀犱犲狀狋犿犪狀狀犲狉. 犜犺犲狉犪狋犲狊狅犳犪狆狅狆狋狅狊犻狊狅犳犃 498 犮犲犾狊狑犲狉犲狊犻犵狀犻犳犻犮犪狀狋犾狔犻狀犮狉犲犪狊犲犱犫狔狋狉犲犪狋犿犲狀狋狑犻狋犺犮狌狉犮狌犿犻狀 (10,50 犪狀犱 100μ 犿狅犾 / 犔 ) 犳狅狉 48 犺犻狀犪犱狅狊犲犱犲狆犲狀犱犲狀狋犿犪狀狀犲狉. 犜犺犲犲狓狆狉犲狊犻狅狀狊狅犳犿犚犖犃犪狀犱狆狉狅狋犲犻狀狅犳犅犮犾 2 犻狀犃 498 犮犲犾狊狑犲狉犲狊犻犵狀犻犳犻犮犪狀狋犾狔犱犲犮狉犲犪狊犲犱犻狀犪犱狅狊犲犱犲狆犲狀犱犲狀狋犿犪狀狀犲狉犫狔狋狉犲犪狋犿犲狀狋狑犻狋犺犮狌狉犮狌犿犻狀 (10,50 犪狀犱 100μ 犿狅犾 / 犔 ) 犳狅狉 48 犺. 犜犺犲犲狓狆狉犲狊犻狅狀狊犿犚犖犃犪狀犱狆狉狅狋犲犻狀狅犳犅犪狓犪狀犱犘犘犃犚 γ 犻狀犃 498 犮犲犾狊狑犲狉犲狊犻犵狀犻犳犻犮犪狀狋犾狔犻狀犮狉犲犪狊犲犱犻狀犪犱狅狊犲犱犲狆犲狀犱犲狀狋犿犪狀狀犲狉犫狔狋狉犲犪狋犿犲狀狋狑犻狋犺犮狌狉犮狌犿犻狀 (10,50 犪狀犱 100μ 犿狅犾 / 犔 ) 犳狅狉 48 犺. 犌犠 9662 狉犲狏犲狉狊犲犱狆犪狉狋犾狔狋犺犲犲犳犳犲犮狋狅犳犮狌狉犮狌犿犻狀狅狀狋犺犲狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋犻狅狀狊犪狀犱犪狆狅狆狋狅狊犻狊狅犳犺狌犿犪狀犲狀犱狅犿犲狋狉犻犪犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪犮犲犾狊.Conclusion 犆狌狉犮狌犿犻狀犻狀犺犻犫犻狋狊狋犺犲犮犲犾狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋犻狅狀犪狀犱狆狉狅犿狅狋犲狊狋犺犲犮犲犾犪狆狅狆狋狅狊犻狊犻狀犺狌犿犪狀狉犲狀犪犾犮犲犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪犮犲犾狊, 犻狀狑犺犻犮犺犘犘犃犚 γ 狊犻犵狀犪犾犻狀犵狆犪狋犺狑犪狔狑犪狊犻狀狏狅犾狏犲犱. KEY WORDS: 犮狌狉犮狌犿犻狀 ; 狉犲狀犪犾犮犲犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪 ; 狆犲狉狅狓犻狊狅犿犲狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋狅狉犪犮狋犻狏犪狋犲犱狉犲犮犲狆狋狅狉 γ; 犪狆狅狆狋狅狊犻狊 ; 狆狉狅犾犻犳犲狉犪狋犻狅狀摘要 : 目的观察姜黄素对人肾癌细胞株 A498 细胞增殖和凋亡的影响, 并探讨 PPAR γ 途径在其中的作用方法姜黄素 ( μmol/L) 处理 A498 细胞 h 采用 MTT 法测定细胞活力, 并计算肿瘤细胞抑制率, 流式细胞术测定细胞凋亡实时定量 PCR 和 WesternBlot 分别检测 Bcl 2 Bax 及 PPAR γmrna 和蛋白的表达观察 PPAR γ 阻断剂 GW9662 对姜黄素作用的影响结果姜黄素 ( μmol/L) 分别处理人肾癌细胞株 A498 细胞 h 后, 以浓度和时间依赖的方式抑制细胞增殖促进细胞凋亡, 同时以浓度依赖的方式下调了 A498 细胞中 Bcl 2 的表达, 增加了 Bax 和 PPAR γ 的表达 GW9662 部分地消除了姜黄素对 A498 细胞增殖和凋亡的影响结论姜黄素抑制人肾癌细胞增殖促进其凋亡, 其机制涉及到 PPAR γ 途径关键词 : 姜黄素 ; 肾细胞癌 ; 过氧化酶增殖物激活受体 γ; 细胞凋亡 ; 增殖中图分类号 :R 文献标志码 :A 收稿日期 : 修回日期 : 基金项目 : 衡阳市 2011 年科学技术发展计划基金 (No.2011KJ49) 通讯作者 : 罗志刚, 男 ( 汉族 ), 博士, 主任医师.E mail:luozhigang855@126.com 作者简介 : 张涛 (1978 ), 男 ( 汉族 ), 硕士, 主治医师. 研究方向 : 泌尿系统肿瘤的防治.E mail:zhangtao538@126.com

2 14 JModUrol,Vol.18No.1Jan.2013 肾细胞癌是人类最常见的肾脏恶性肿瘤, 已成为危害中老年人健康和生命的疾病之一 [1 2] 近年来, PPAR γ 与肿瘤的关系倍受人们的关注, 研究显示 PPAR γ 在肿瘤组织中的表达上调,PPAR γ 的特异性激动剂能诱导人乳腺癌前列腺癌结肠癌和肺癌等多种肿瘤细胞的凋亡, 抑制其增殖 [3 4] 姜黄素是从姜黄中提取的一种植物多酚, 对多种肿瘤细胞均具有抑制作用 [5 6], 能增加 PPAR γ 的表达和转录活性, 具有 PPAR γ 激动剂的作用 [7 8], 但目前还不清楚, 姜黄素是否通过 PPAR γ 途径促进肾癌细胞的凋亡抑制其增殖? 因此本研究旨在探讨姜黄素对人肾癌细胞株 A498 细胞增殖和凋亡的影响, 并探讨 PPAR γ 信号通路在其中的作用 1 材料与方法 1 1 材料药物及主要化学试剂 DMEM 培养基购自美国 Invitrogen 公司小牛血清为杭州四季青产品四甲基偶氮唑盐 (methylthiazolyltetrazolium, MTT) 胰蛋白酶和姜黄素等为美国 Sigma 公司产品 MMLV 第一链 cdna 合成试剂盒和 HotStar TaqMaster Mix 试剂盒为美国 Invitrogen 公司产品兔抗人 Bcl 2 Bax 和 PPAR γ 和磷酸甘油醛脱氢酶 (glyceraldehyde phosphate dehydrogenase, GAPDH) 单克隆抗体以及辣根过氧化物酶标记二抗均由美国 SantaCruz 公司提供, 引物由上海生物工程技术服务有限公司提供实验仪器 CO2 培养箱为德国 Heraeus 公司产品酶标仪由美国宝特公司提供流式细胞仪为美国贝克曼库尔特公司产品 ABI7500 荧光定量 PCR 仪及分析软件为美国 ABI 公司产品 GOS7500 型凝胶成像分析系统为美国 UVP 公司产品垂直电泳仪与转膜系统由美国 BioRad 公司提供 1 2 实验方法细胞培养人肾癌细胞株 A498 细胞由上海艾研生物科技有限公司提供细胞培养于含 10% 小牛血清 ( 体积分数 ) 的 DMEM 培养液中在 37 下 5% CO2( 体积分数 ) 饱和湿度培养箱内培养, 待细胞长至培养箱约 60%~70% 融合时, 胰蛋白酶消化传代, 每 2~3d 传代 1 次, 取对数生长期的细胞用于实验实验分组实验分为以下组 :1A498 细胞组 ( 对照 );2 不同剂量的姜黄素 ( μmol/L) 处理 h 组 ;3PPAR γ 特异性阻断剂 GW9662 处理 48 h 组 ;4100 μmol/l 姜黄素和 GW9662 共同处理 48h 组 MTT 法测定细胞增殖对数生长期的 A498 细胞, 胰蛋白酶消化后轻轻吹打成 /ml 的细胞悬液, 以每孔个细胞接种于 96 孔培养板, 置于 37 5% CO2 温箱中培养 12h 后更换为含姜黄素的培养液, 使姜黄素的终浓度分别为 μmol/L 分别培养 h, 每一个浓度设 6 个重复孔培养结束后每孔加入 5 mg/ ml 的 MTT 试剂 20μL, 继续培养 4h 吸去上清液, 每孔加入 200μLDMSO, 低速摇床 10 min, 使 MTT 还原产物完全溶解, 用酶标仪在 490nm 处测定吸光度 A 值以 0μmol/L 组或处理 0h 组作为对照, 其细胞存活率记为 100%, 各组 A 值与空白调零组对照校正各组肿瘤细胞的抑制率按公式进行计算 : 肿瘤细胞抑制率 =(1- 实验孔平均 A 值 )/ 对照孔平均 A 值 100% 流式细胞术测定细胞凋亡取对数生长期的人肾癌细胞株 A498 细胞, 调整细胞浓度为 / ml, 接种于 50 ml 培养瓶内 A498 细胞经不同浓度的姜黄素处理 48h 后, 胰蛋白酶消化,1000r/min 离心 5min 收集细胞, 用 4 预冷 PBS 液洗涤 2 次 70% 乙醇溶液 ( 体积分数 ) 固定后,PBS 清洗 3 次, 加入 50μg/mL 碘化丙啶,10μg/mL 核糖核酸酶和 Triton100 (10%) 染液 200μL, 室温下避光染色 15 min 后, 流式细胞仪进行检测, 并计算细胞凋亡率实时定量 PCR 检测 Bcl 2 Bax 和 PPAR γmrna 的表达取对数生长期的 A498 细胞, 分别加入姜黄素使其终浓度为 μmol/L 作用不同处理时间胰蛋白酶消化,1000r/min 离心 5min 收集细胞按照 Trizol 试剂盒操作说明提取细胞的总 RNA 按照 MMLV 第一链 cdna 合成试剂盒说明, 以提取的总 RNA 为模板进行逆转录反应, 合成 cdna 第一链后, 选取适量的 cdna 样品 10 倍梯度稀释后, 分别进行实时定量 PCR 反应, 反应总体系为 25 μl, 其中包含 cdna 4 μl, 上下游引物 (10μmol/L) 各 0 5μL,HotStarTaq Master Mix (2 )12 5μL, 加灭菌去离子水补足到 25μL PCR 扩增条件为 :94 15 min 激活 HotStarTaqDNA 合成酶, 扩增循环 94 60s,62 85s, 共进行 50 个循环 Bcl 2 引物 : 上游,5 GAACTGGGGGAG GATTGTGG 3, 下游,5 CCGGTTCAGGTACT CAGTCA 3 Bax 引物 : 上游,5 GATGATTGC CGCCGTGGAC 3 下游,5 GGGTGAGGAGGCTT GAGGAG 3 PPAR γ 引物 : 上游,5 TTCCTGT CAAGATCGCCCTCG 3 下游, 5 TGGGGAT

3 现代泌尿外科杂志 2013 年 1 月第 18 卷第 1 期 15 GTCTCATAATGCCA 3 同时扩增 GAPDH 基因作为内对照,GAPDH 引物 : 上游,5 CATGTTCGT CATGGGTGTGA 3, 下游, 5 GGTGCTAAG CAGTTGGTGGT 3 采用 2 CT 法处理荧光定量 PCR 数据, 结果以对照组为 100% 对目的基因 mrna 的表达进行分析 WesternBlot 检测 Bcl 2 Bax 和 PPAR γ 蛋白质的表达不同浓度的姜黄素于不同时间处理 A498 细胞后, 离心收集细胞加入蛋白裂解液 RI PA300 μl 裂解细胞 40 min,15000r/min 离心 20min, 收集上清, 即提取细胞的总蛋白 BAC 法进行蛋白定量,-80 保存备用取 100μL 蛋白质样本加入到 2 SDS 凝胶缓冲液中, 煮沸使蛋白质充分变性 6%SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 2h 分离蛋白质, 电压为 100mV 将分离的蛋白质用半干转膜仪转移至聚偏氟乙稀膜上, 丽春红染色观察转移效果, 并确定蛋白质分子量标准的位置 10% 脱脂牛奶室现剂量依赖性 ; 相同浓度的姜黄素不同作用时间之间细胞抑制率有显著性差异 (P<0 05), 呈现时间依赖性 ( 图 1) 图 1 姜黄素对人肾癌细胞株 A498 细胞增殖的影响 2 2 姜黄素对人肾癌细胞株 A498 细胞凋亡率的影响姜黄素 ( μmol/L) 处理人肾癌细胞株 A498 细胞 48h 后, 与对照组相比, 用姜黄素组凋亡率显著性增加, 且细胞凋亡率随药物浓度的增加而增加, 呈现剂量依赖性 ( 均 P<0 05, 图 2) 温下封闭 2h, 加入兔抗人 Bcl 2(1 200) Bax(1 200) PPAR γ(1 200) 和 GAPDH(1 150) 抗体,4 下过夜三羟甲基氨基甲烷缓冲液洗膜 3 次, 每次 10min 然后加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗,4 下孵育 4h, 三羟甲基氨基甲烷缓冲液洗膜 3 次蛋白质印迹荧光检测试剂盒显示于 X 光片, 经显影和定影后, 凝胶图像分析系统对胶片进行扫描和半定量分析统计学方法所有实验数据用 x±s 表示, 每个实验设 6 个复孔 (n=6), 组间差异采用单因素方差分析 ; 两两比较采用 q 检验 ; 用 SPSS16.0 统计软件系统进行数据分析 P<0 05 为差异有统计学意义 2 结果 2 1 姜黄素对人肾癌细胞株 A498 细胞增殖的抑制作用同一时间不同药物浓度 ( μmol/L) 处理之间的细胞抑制率有显著性差异 (P<0 05), 呈图 2 不同浓度的姜黄素对人肾癌细胞株 A498 细胞细胞凋亡率的影响与对照比较 ;P<0 05; 与 10μmol/L 姜黄素组比较,P<0 05,; # 与 50μmol/L 姜黄素组比较,P < 姜黄素对人肾癌细胞株 A498 细胞中 Bcl 2 BaxmRNA 和蛋白表达的影响姜黄素以浓度依赖的方式降低了人肾癌细胞株 A498 细胞中 Bcl 2mR NA 和蛋白的表达 ( 均 P<0 05); 同时以浓度依赖的方式增加了人肾癌细胞株 A498 细胞中 Bax mrna 和蛋白的表达 ( 图 3 图 4) 图 3 姜黄素处理人肾癌细胞株 A498(48h 后 ) 细胞中 Bcl 2(A) 和 BaxmRNA(B) 的表达 A:Bcl 2mRNA 相对表达水平 ;B:BaxmRNA 相对表达水平与对照组比较,P<0 05; 与 10μmol/L 姜黄素组比较,P <0 05;! 与 50μmol/L 姜黄素组比较,P<0 05

4 16 JModUrol,Vol.18No.1Jan.2013 图 4 姜黄素处理人肾癌细胞株 A498(48h 后 ) 细胞中 Bcl 2 和 Bax 蛋白表达 A B:WesternBlot 技术显示图 ;C D: 灰度扫描结果图与对照组比较,P<0 05; 与 10μmol/L 姜黄素组组比较,P <0 05;! 与 50μmol/L 姜黄素组比较,P< 姜黄素对人肾癌细胞株 A498 细胞中 PPAR γ mrna 和蛋白表达的影响姜黄素以浓度和时间依赖的方式增加了人肾癌细胞株 A498 细胞中 PPAR γ mrna 和蛋白的表达 ( 均 P<0 05, 图 5 图 6) 图 5 姜黄素对人肾癌细胞株 A498 细胞中 PPAR γmrna 表达的影响用和 100μmol/L 姜黄素处理 A498 细胞 48h(A) 或 100μmol/L 姜黄素处理 A498 细胞 h(B) 后, 采用实时定量 PCR 检测 PPAR γmrna 水平与对照比较,P<0 05; 与 10μmol/L 姜黄素或 24h 组比较,P< 0 05; # 与 50μmol/L 姜黄素或 48h 组比较,P<0 05 图 6 姜黄素对人肾癌细胞株 A498 细胞中 PPAR γ 蛋白表达的影响 A B:WesternBlot 技术显示图 ;C D: 灰度扫描结果图用和 100μmol/L 姜黄素处理 A498 细胞 48h 或 100μmol/L 姜黄素处理 A498 细胞 h(D) 后, 采用 WesternBlot 检测 PPAR γ 蛋白水平与对照比较,P<0 05; 与 10μmol/L 姜黄素或 24h 组比较,P<0 05; # 与 50μmol/L 姜黄素或 48h 组比较,P<0 05

5 现代泌尿外科杂志 2013 年 1 月第 18 卷第 1 期 PPAR γ 特异性阻断剂 GW9662 对姜黄素作用的影响用 100μmol/L 姜黄素和 PPARγ 特异性阻断剂 GW9662 处理 A498 细胞 48h 后, 进行细胞生长抑制率 (A) 细胞凋亡率 (B) 的比较结果显示 PPAR γ 特异性阻断剂 GW9662 部分逆转了姜黄素抑制人肾癌细胞株 A498 细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用 ( 图 7) 图 7 PPARγ 特异性阻断剂 GW9662 对姜黄素诱导人肾癌细胞株 A498 细胞凋亡的影响与对照比较,P<0 05; 与姜黄素组比较,P< 讨论肾细胞癌是常见的恶性肿瘤之一, 约占成年人全部恶性肿瘤的 2%~3%, 占肾脏肿瘤的 90%~95%, 其发病率在泌尿系统肿瘤中仅次于膀胱癌而位居第 2 位 [9] 肾细胞癌的恶性度高, 早期难以发现,50% 的患者在临床出现症状时已经失去了手术时机, 而且肾细胞癌对常规的放疗化疗均不敏感, 晚期或转移性肾癌 IFN α 和 IL 2 治疗的有效率仅为 15% ~ 20% [10] 因此寻求新的有效的肾细胞癌治疗方法显得十分重要姜黄素是从中药姜黄的根茎中提取出来的一种脂溶性酚类色素, 是姜黄的主要活性成分研究发现姜黄素具有广泛的药理作用, 包括抗炎抗氧化抗动 [11 12] 脉粥样硬化保护肝脏和肾脏等作用近年来姜黄素的抗肿瘤作用备受关注研究显示姜黄素能抑制多种肿瘤细胞的生长, 并且可以诱导部分肿瘤细胞分化凋亡, 提高患者免疫力, 是一种有开发前景的天然抗肿瘤新药, 美国国立癌症所已将其列为第三代癌 [10,13] 化学预防药研究显示姜黄素抑制人肾癌 ACHN 细胞的增殖, [10] 诱导人肾癌 ACHN 细胞的凋亡姜黄素还可以抑制人肾癌 786 O 细胞增殖, 促进人肾癌 786 O 细胞凋 [14] 亡本研究结果显示, 姜黄素以浓度和时间依赖的方式抑制人肾癌细胞株 A498 细胞增殖, 同时以浓度依赖的方式促进肾癌细胞的凋亡, 这些结果与以往的研究结果一致, 然而其详细的机制还不清楚抗凋亡基因 Bcl 2 和促凋亡基因 Bax 是 Bcl 2 家族成员中重要的凋亡调控基因 Bcl 2 和 Bax 表达水平的高低与细胞凋亡调控密切相关, 可以反映肿瘤 [15 细胞的凋亡敏感性 ] 研究显示在肾癌细胞中 Bcl 2 的表达降低, 而 Bax 的表达水平升高研究表明姜黄素可通过上调 ACHN 细胞中 IκB 和下调 NF κb 活性, 调控凋亡相关基因 Bcl 2/Bax 的表达 [10] 刘 [16] 波等研究发现姜黄素调节凋亡相关蛋白 Surviv in Bc l2 和 Bax 的转录水平抑制多发性骨髓瘤细胞 RPMI8226 增殖并诱导凋亡这些表明凋亡相关基因 Bcl 2/Bax 可能是姜黄素的作用靶点本研究的结果显示姜黄素以浓度依赖的方式降低了人肾癌细胞株 A498 细胞中 Bcl 2 的表达, 增加了细胞中 Bax 的表达, 这可能是姜黄素诱导肾癌细胞凋亡发挥抗肾癌作用的机制过氧化物酶体增殖物激活受体属于核受体超家族成员, 有 α β 和 γ 三种亚型 PPAR 和 9 顺式视黄酸受体 (RXR) 结合形成异二聚体异二聚体与过氧化物酶体增殖物反应元件结合而发挥调控基因转录的作用 Bcl 2 和 Bax 是 PPAR γ 的下游重要靶基 [17] 因研究发现 PPAR γ 在多种肿瘤中呈现高表达包括乳腺癌肾癌前列腺癌肺癌子宫颈癌胃癌 [18 19] 等,PPAR γ 的激动剂能抑制这些肿瘤的生长杨风光等研究发现 PPAR γ 的激动剂曲格列酮能诱导肾癌细胞株 786 O 和 A498 细胞的凋亡而研究 [20 21] 表明姜黄素具有 PPAR γ 激动作用本研究结果显示姜黄素以浓度和时间依赖的方式上调了了人肾癌细胞株 A498 细胞中 PPAR γ 的表达水平, PPAR γ 特异性阻断剂 GW9662 部分逆转了姜黄素抑制人肾癌细胞株 A498 细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用这些结果表明姜黄素抑制人肾癌细胞增殖促进其凋亡可能涉及到 PPAR γ 信号通路总之, 本研究表明姜黄素抑制人肾癌细胞增殖促进其凋亡, 其机制涉及到 PPAR γ 途径参考文献 : [1]HUANG CC,PAN CC,LIN CC,etal.XP11 2translocation renalcelcarcinoma:clinicalexperienceoftaipeiveteransgen eralhospital[j].jchin MedAssoc,2011,74(11): [2]SAUKSC,HSU MS,MARGOLISDJ,etal.Clearcelrenal

6 18 JModUrol,Vol.18No.1Jan.2013 celcarcinoma:multiphasic multidetectorctimagingfeatures helppredictgenetickaryotypes[j].radiology,2011,261(3): [3]CATALANOS,MAURO L,BONOFIGLIO D,etal.Invivo andinvitroevidencethatpparγligandsareantagonistsoflep tinsignalinginbreastcancer[j].amjpathol,2011,179(2): [4]LIH,SORENSON AL,POCZOBUTTJ,etal.Activationof PPARγin myeloidcelspromoteslungcancerprogressionand metastasis[j].plosone,2011,6(12): [5]YE MX,LIY,YIN H,etal.Curcumin:updated molecular mechanismsandinterventiontargetsinhumanlungcancer[j]. IntJMolSci,2012,13(3): [6]HOSSAIN DM,BHATTACHARYYA S,DAST,etal.Cur cumin:the multi targetedtherapyforcancerregression [J]. FrontBiosci(ScholEd),2012,4(1): [7]DONGSZ,ZHAOSP,WUZH,etal.Curcuminpromotescho lesterolefluxfrom adipocytesrelatedtoppargamma LXRal pha ABCA1passway[J].MolCelBiochem,2011,358(1 2): [8] 平键, 成扬, 徐列明. 姜黄素通过激活过氧化物酶体增殖子活化受体 γ 诱导肝星状细胞凋亡 [J]. 中国药理学通报,2007,23 (10): [9]PALSK,FIGLINRA.Unravelingtheroleofhypoxia inducible factorinrenalcelcarcinoma:abiologicalandtherapeuticper spective[j].cancerdiscov,2011,1(3): [10] 李刚, 种铁, 王子明. 姜黄素抑制肾癌 ACHN 细胞增殖及促凋亡的实验研究 [J]. 现代泌尿外科杂志,2010,15 (1): [11]WILKEN R,VEENA MS,WANG MB,etal.Curcumin:Are viewofanti cancerpropertiesandtherapeuticactivityinheadand necksquamouscelcarcinoma[j].molcancer,2011,10:12 [12]JURENKAJS.Anti inflammatorypropertiesofcurcumin,ama jorconstituentofcurcumalonga:areviewofpreclinicalandclin icalresearch [J].Altern MedRev,2009,14(2): [13]BAOB,ALIS,BANERJEE,etal.CurcuminanalogueCDFin hibitspancreatictumorgrowthbyswitchingonsuppressormi crornasandatenuating EZH2expression [J].CancerRes, 2012,72(1): [14] 刘岩, 张春阳, 姜华茂. 姜黄素抑制人肾癌 786 细胞增殖及对细胞周期影响的研究 [J]. 辽宁医学院学报,2007,28(2):4 5. [15]AJILIF,KAABIB,DAROUICHE A,etal.Prognosticvalue ofbcl 2andBaxtumorcelexpressioninpatientswithnonmus cle invasivebladdercancerreceiving bacilus Calmete Guerin immunotherapy[j].ultrastructpathol,2012,36(1): [16] 刘波, 白庆咸, 陈协群, 等. 姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞表达 Survivin Bc l2 Bax 的影响 [J]. 中国实验血液学杂志,2007,15 (4): [17]MIGLIO G,ROSA AC,RATTAZZIL,etal.Thesubtypesof peroxisomeproliferator activatedreceptorsexpressedbyhuman podocytesandtheirroleindecreasingpodocyteinjury [J].BrJ Pharmacol,2011,162(1): [18]ROBBINS GT,NIE D.PPAR gamma,bioactivelipids,and cancerprogression [J].FrontBiosci,2012,17(1): [19]NUNEZ ANITA RE,CAJERO JUAREZ M,ACEVESC.Per oxisomeproliferator activatedreceptors:roleofisoformgamma intheantineoplasticefectofiodineinmammarycancer[j].curr CancerDrugTargets,2011,11(7): [20] 杨彩虹, 吴正祥, 吴强, 等. 姜黄素通过过氧化物酶体增生物激活受体 γ 在大鼠实验性结肠炎中发挥抗炎作用 [J]. 胃肠病学, 2008,13(3): [21]RINWAP,KAURB,JAGGIAS,etal.InvolvementofPPAR gammaincurcumin mediatedbeneficialefectsinexperimental dementia[j].naunynschmiedebergsarchpharmacol,2010, 381(6): ( 编辑何宏灵 ) 短篇与个案文章编号 : (2013) 异位肾并输尿管囊肿 1 例程应生, 张志炎, 郑攀丰 ( 湖北省公安县人民医院泌尿外科, 湖北公安 ) 关键词 : 异位肾 ; 输尿管囊肿中图分类号 :R692 1 文献标志码 :C 后于左髂总血管处有长径 5.0cm 囊性包块,2 包块有 1 管道相连, 为输尿管, 髂总血管处包块为异位肾, 肾动脉来自髂总动脉血管切除异位肾, 打开膀胱, 左输尿管口处有 10 0cm 6.0cm 4.0cm 囊性包块, 打开囊壁, 囊液为黑色, 切除囊肿, 修补膀胱, 放置膀胱造瘘管尿管腹腔及耻骨后引流管, 术后恢复顺利术后病检 : 输尿管囊肿, 异位肾并积水, 慢性输尿管炎并积水术后 20d 痊愈出院 2 讨论 1 病例报告患者, 男性,24 岁左下腹隐痛不适 3d 入院查体未发现异常腹部平片和静脉尿路造影 (intravenousurography,ivu) 示左肾缺如, 膀胱内囊性病变 ( 图 1), 右肾正常 CT 示左肾缺如, 膀胱内囊性病变膀胱镜下见膀胱三角区左侧见 6.0cm 4.0cm 隆起, 表面黏膜完整, 未窥清左输尿管口, 右输尿管口喷尿正常硬膜外醉下剖腹探查, 进入腹腔, 膀胱左侧底部有长图 1 静脉尿路造影径 10 0cm 的囊性包块, 左侧腹膜输尿管囊肿指输尿管末端呈囊性膀胱内膨出, 膨出的外层为膀胱黏膜, 中间为薄层肌肉胶原组织, 内层为输尿管黏膜诊断主要依靠 B 超 IVU 及膀胱镜检查, 三者结合可提高诊断率治疗原则是解除梗阻, 防止返流, 处理并发症及保护肾功能对囊肿较小无明显症状者, 可不予处理, 严密观察对于需手术患者, 应根据患侧肾功能积水程度有无返流及囊肿大小等情况决定术式伴有异位或重复输尿管畸形的输尿管囊肿以及直径 >3.0cm 的输尿管囊肿, 宜行开放手术内镜下治疗输尿管囊肿疗效显著, 治疗有效率 80%~91% 在有电切镜的条件下, 腔内治疗应成为首选的治疗方法本病例术前 CT 检查膀胱后的囊性病变形如肾脏轮廓, 考虑为异位积水肾, 本病例如此巨大的输尿管囊肿临床少见, 造成误诊 ( 编辑王玮 )

SOURCE: 14 JModUrol,Vol.18No.1Jan.2013 肾细胞癌是人类最常见的肾脏恶性肿瘤, 已成为危害中老年人健康和生命的疾病之一 [1 2] 近年来, PPAR γ 与肿瘤的关系倍受人们的关注, 研究显示 PPAR γ 在肿瘤组织中的表达上调,PPAR γ

SOURCE: 14 JModUrol,Vol.18No.1Jan.2013 肾细胞癌是人类最常见的肾脏恶性肿瘤, 已成为危害中老年人健康和生命的疾病之一 [1 2] 近年来, PPAR γ 与肿瘤的关系倍受人们的关注, 研究显示 PPAR γ 在肿瘤组织中的表达上调,PPAR γ SOURCE: 现代泌尿外科杂志 http:// 2013 年 1 月第 18 卷第 1 期 13 论著文章编号 :1009 8291(2013)01 0013 06 姜黄素通过 PPAR γ 途径促进人肾癌细胞的调亡张涛 1, 周洁 2, 陈敏 3, 陈仙 1, 汪翼 1, 欧阳新平 4, 罗志刚 1 (1 南华大学附属第二医院泌尿外科, 湖南衡阳 421001;2 解放军第 169 医院普通外科,