610 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 izingfactor,edhf) 介导其中,NO 和 PGI 2 通常在较大血管发挥主要的扩张血管作用, 而 EDHF 通 [2] 常在中小血管中发挥作用 EDHF 的本质及其信号通路目前并不完全清楚, 但在 EDHF 介导的血管舒张过程中

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两杭
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1 第 34 卷第 5 期 2013 年 9 月西安交通大学学报 ( 医学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻犪狀犑犻犪狅狋狅狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ) 犞狅犾.34 犖狅.5 犛犲狆.2013 钙激活钾通道在高糖所致内皮源性超极化因子介导的内皮舒张功能障碍中的作用赵丽梅, 王燕, 杨勇, 杨予白, 邓秀玲 ( 西安交通大学医学院生理学与病理生理学系, 陕西西安 ) 摘要 : 目的研究血管内皮细胞 (VEC) 钙激活钾通道 (KCa) 在高糖所致内皮源性超极化因子 (EDHF) 介导的内皮舒张功能障碍中的作用方法采用离体血管张力实验, 观察高糖孵育大鼠肠系膜三级动脉 3h 后,IKCa 和 SKCa 在 EDHF 介导的内皮舒张功能变化中的作用 ; 采用 Westernblot 技术, 观察高糖孵育人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)48h 对 KCa 3.1 和 KCa2.3 蛋白表达的影响结果 30mmol/L 葡萄糖孵育大鼠肠系膜三级动脉 3h 可显著降低乙酰胆碱 (ACh) 诱导的内皮舒张反应 EDHF 介导的内皮舒张反应及 IKCa 和 SKCa 介导的 EDHF 舒张反应 30mmol/L 葡萄糖孵育 HUVEC48h 显著降低 KCa3.1 和 KCa2.3 通道蛋白表达而渗透压对照组 30mmol/L 甘露醇孵育大鼠肠系膜三级动脉和 HUVEC 对上述指标无明显影响结论高糖损伤大鼠肠系膜三级动脉 EDHF 介导的内皮舒张功能, 其机制与降低血管内皮细胞上 KCa 的表达和功能有关关键词 : 钙激活钾通道 ; 高糖 ; 内皮源性超极化因子 (EDHF); 内皮舒张功能障碍 ; 糖尿病 ;KCa3.1;KCa2.3 中图分类号 :R331 文献标志码 :A 文章编号 : (2013) 犇犗犐 : /jdyxb 犈犳犲犮狋狅犳犮犪犾犮犻狌犿犪犮狋犻狏犪狋犲犱狆狅狋犪狊狊犻狌犿犮犺犪狀狀犲犾狊狅狀犈犇犎犉犿犲犱犻犪狋犲犱犲狀犱狅狋犺犲犾犻犪犾犱犻犪狊狋狅犾犻犮犱狔狊犳狌狀犮狋犻狅狀犻狀犱狌犮犲犱犫狔犺犻犵犺犵犾狌犮狅狊犲 ZHAOLi mei,wang Yan,YANG Yong,YANG Yu bai,deng Xiu ling (DepartmentofPhysiologyandPathophysiology,MedicalSchoolof Xi anjiaotonguniversity,xi an710061,china) 犃犅犛犜犚犃犆犜 :Objective 犜狅犻狀狏犲狊狋犻犵犪狋犲狋犺犲狉狅犾犲狅犳犲狀犱狅狋犺犲犾犻犪犾犮犪犾犮犻狌犿犪犮狋犻狏犪狋犲犱狆狅狋犪狊犻狌犿犮犺犪狀狀犲犾狊犻狀犲狀犱狅狋犺犲犾犻狌犿犱犲狉犻狏犲犱犺狔狆犲狉狆狅犾犪狉犻狕犻狀犵犳犪犮狋狅狉 ( 犈犇犎犉 ) 犿犲犱犻犪狋犲犱犲狀犱狅狋犺犲犾犻犪犾犱犻犪狊狋狅犾犻犮犱狔狊犳狌狀犮狋犻狅狀犻狀犱狌犮犲犱犫狔犺犻犵犺犵犾狌犮狅狊犲.Methods 犜犺犲犮犺犪狀犵犲狊狅犳犃犆犺犻狀犱狌犮犲犱狏犪狊狅犱犻犾犪狋犪狋犻狅狀犿犲犱犻犪狋犲犱犫狔犐犓犆犪犪狀犱犛犓犆犪犻狀犿犲狊犲狀狋犲狉狔犪狉狋犲狉犻狅犾犲狊狅犳狉犪狋狊犻狀犮狌犫犪狋犲犱狑犻狋犺犺犻犵犺犵犾狌犮狅狊犲 ( 犿犪狀狀犻狋狅犾犪狊犮狅狀狋狉狅犾 ) 犳狅狉 3 犺狅狌狉狊狑犲狉犲犿犲犪狊狌狉犲犱犫狔犿狌犾狋犻犿狔狅犵狉犪狆犺狊狔狊狋犲犿. 犜犺犲狆狉狅狋犲犻狀犾犲狏犲犾狊狅犳犓犆犪 3.1 犪狀犱犓犆犪 2.3 犻狀犮狌犾狋狌狉犲犱犺狌犿犪狀狌犿犫犻犾犻犮犪犾狏犲犻狀犲狀犱狅狋犺犲犾犻犪犾犮犲犾狊 ( 犎犝犞犈犆狊 ) 狑犲狉犲犱犲狋犲犮狋犲犱犫狔犠犲狊狋犲狉狀犫犾狅狋.Results 犜犺犲狏犪狊狅犱犻犾犪狋犪狋犻狅狀犿犲犱犻犪狋犲犱犫狔犈犇犎犉, 犐犓犆犪犪狀犱犛犓犆犪狑犪狊犻犿狆犪犻狉犲犱犻狀 30 犿犿狅犾 / 犔犵犾狌犮狅狊犲犻狀犮狌犫犪狋犲犱犿犲狊犲狀狋犲狉狔犪狉狋犲狉犻狅犾犲狊, 犫狌狋狀狅狋犻狀 30 犿犿狅犾 / 犔犿犪狀狀犻狋狅犾犻狀犮狌犫犪狋犲犱狅狀犲狊. 犐狀犮狌犫犪狋犻狅狀狑犻狋犺 30 犿犿狅犾 / 犔犵犾狌犮狅狊犲犳狅狉 48 犺狅狌狉狊狊犻犵狀犻犳犻犮犪狀狋犾狔犱犲犮狉犲犪狊犲犱狋犺犲狆狉狅狋犲犻狀犲狓狆狉犲狊犻狅狀狅犳犓犆犪 3.1 犪狀犱犓犆犪 2.3.Conclusion 犎犻犵犺犵犾狌犮狅狊犲犻犿狆犪犻狉狊犈犇犎犉犿犲犱犻犪狋犲犱狉犲犾犪狓犪狋犻狅狀, 狑犺犻犮犺犿犪狔犫犲狉犲犾犪狋犲犱狋狅狋犺犲犱狅狑狀狉犲犵狌犾犪狋犻狅狀狅犳犓犆犪犮犺犪狀狀犲犾狊. 犓犈犢犠犗犚犇犛 : 犮犪犾犮犻狌犿犪犮狋犻狏犪狋犲犱狆狅狋犪狊犻狌犿犮犺犪狀狀犲犾 ; 犺犻犵犺犵犾狌犮狅狊犲 ; 犲狀犱狅狋犺犲犾犻狌犿犱犲狉犻狏犲犱犺狔狆犲狉狆狅犾犪狉犻狕犻狀犵犳犪犮狋狅狉 ( 犈犇犎犉 ); 犲狀犱狅狋犺犲犾犻犪犾犱犻犪狊狋狅犾犻犮犱狔狊犳狌狀犮狋犻狅狀 ; 犱犻犪犫犲狋犲狊 ; 犓犆犪 3.1; 犓犆犪 2.3 糖尿病血管病变是糖尿病致死和致残的主要原因, 其发生发展与血管内皮细胞 (vascularendothe lialcel,vec) 损伤及功能障碍密切相关内皮介导的血管舒张功能障碍是糖尿病内皮功能紊乱的主要特征之一, 被认为是糖尿病血管疾病发生的第一 [1] 步内皮舒张功能由 VEC 释放的一氧化氮 (nitric oxide,no) 前列环素 (prostacyclin,pgi 2 ) 和内皮源性超极化因子 (endothelium derivedhyperpolar 收稿日期 : 修回日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 (No , ) 和陕西省自然科学基金资助项目 (No.2011JQ4021) SupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina (No , )andtheNaturalScienceFoundationof ShaanxiProvince(No.2011JQ4021) 通讯作者 : 邓秀玲, 教授, 博导.E mail:dengxl@mail.xjtu.edu.cn 作者简介 : 赵丽梅 (1978 ), 女 ( 汉族 ), 博士, 讲师. 研究方向 : 糖尿病心血管重塑.E mail:meilizhao@mail.xjtu.edu.cn 网络出版时间 : 网络出版地址 :htp://

2 610 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 izingfactor,edhf) 介导其中,NO 和 PGI 2 通常在较大血管发挥主要的扩张血管作用, 而 EDHF 通 [2] 常在中小血管中发挥作用 EDHF 的本质及其信号通路目前并不完全清楚, 但在 EDHF 介导的血管舒张过程中, 内皮钙激活钾通道 (calcium activatedpotas siumchannels,k Ca ) 发挥着重要作用 VEC 有两种 K Ca 通道参与 EDHF 介导的血管舒张反应, 即中电导钙激活钾通道 (intermediate conductancecalcium activated potassiumchannel,, 也称为 K Ca3.1) 和小电导钙激活钾通道 (smal conductancecalcium activatedpotassi um,sk Ca ) 中的第三亚型 SK3( 也称为 K Ca2.3) 糖尿病的特点是慢性高血糖, 高糖可以诱发和加重糖尿病 [3] 血管内皮依赖的舒张功能障碍但是, 关于 VEC 上的 K Ca 在高糖所致 EDHF 介导的内皮舒张功能障碍中的作用目前还不清楚本研究将观察高糖孵育对大鼠肠系膜三级动脉 EDHF 介导的舒张功能的影响, 以及在其中的作用 1 材料与方法 1.1 实验动物与仪器清洁级健康雄性 Sprague Dawely 大鼠, 体重 180~200g( 西安交通大学医学院实验动物中心提供 ) DMT610 微血管张力测定系统 ( 丹麦 DMT 公司 ), 微型凝胶电泳系统 ( 美国 Bio Rad 公司 ) 1.2 试剂及溶液苯肾上腺素 (phenylephrine, PE) 及乙酰胆碱 (acetylcholine,ach) 一氧化氮合酶 (Nitric OxideSynthase,NOS) 阻断剂左旋硝基精氨酸甲酯 (NG Nitro L arginine MethylEster,L NAME) 环氧酶 (cyclo oxygenase,cox) 阻断剂吲哚美辛 (Indometacin,INDO) 阻断剂 TRAM 34 SK Ca 阻断剂 UCL 1684 D 葡萄糖及甘露醇均购自 Sigma Aldrich 公司 ( 美国 ) Anti K Ca3.1 及 anti K Ca2.3 抗体购于 Alomone 公司 ( 以色列 ),GAPDH 抗体购自上海康成生物公司 Krebs Henseleit(KH) 缓冲液 (mmol/l):nacl 115,KCl4.6,NaHCO 3 25,NaH 2PO 4 2H 2O1.2, MgCl 2 6H 2O1.2,CaCl 22.5, 葡萄糖 10,NaOH 调 ph 至离体血管犈犇犎犉介导的内皮依赖性舒张功能的检测大鼠腹腔内注射戊巴比妥钠 (50mg/kg) 麻醉, 迅速取出肠系膜血管, 置于氧饱和的 4 KH 液体中在解剖显微镜下分离肠系膜三级动脉, 小心去除动脉周围的脂肪与结缔组织, 剪成约 3mm 的动脉环, 固定于 DMT 系统浴槽 ( 含 mL/L O 2 和 50mL/LCO 2 混合气饱和的 KH 液 5mL) 内的传感器上动脉环分为对照组高糖组和甘露醇组 ( 渗透压对照组 ), 后两组浴槽内分别加入终浓度为 30 mmol/l 葡萄糖和 30mmol/L 甘露醇动脉环的张力变化通过 DMT 换能系统采集, 并用 Chart7 生物信号采集分析软件记录将血管初张力调零, 待稳定后给予 3mN 的前负荷, 平衡稳定 1h 平衡期间每隔 15min 用 37 预热的新鲜 KH 液更换一次 1h 后, 先用 K + KH 液 ( 含 60mmol/L K + ) 检验动脉环的收缩性, 预收缩 3 次, 相邻两次刺激的收缩幅度差别小于 10% 才能用于实验平衡后,10-6 mol/lpe 预收缩达到坪值后, 以 10-5 mol/l ACh 检验动脉环的内皮功能, 舒张率超过 75% 则认为内皮完整本研究均采用内皮完整的动脉环符合条件的各组血管继续用相应液体平衡 2h 后, 用 10-6 mol/lpe 预收缩血管, 待稳定后观察累积浓度的 ACh(10-9 ~ 10-4 mol/l) 或硝普钠 (SNP) 诱导的血管舒张需加阻断剂时, 则将所需终浓度的阻断剂加入浴槽内 KH 液中, 孵育 15 min 后进行上述收缩舒张反应以 ACh 各种浓度所致的舒张幅度达到 PE 预收缩幅度的百分比作血管舒张反应的量效曲线 1 只大鼠的动脉环每个浓度下测量的舒张百分比计算为 1 个数据, 每组每个浓度下 6 个有效数据 ( 狀 =6) 1.4 人脐静脉内皮细胞的培养 HUVEC 细胞株 (CRL 1730, 购于 ATCC) 采用含 100 ml/l FBS 的 DMEM/F12 培养基,37,50mL/LCO 2 培养箱中培养 3d 换液 1 次, 至 90% 融合时用 2.5g/L 胰蛋白酶消化传代 1.5 犠犲狊狋犲狉狀犫犾狅狋法检测高糖对犎犝犞犈犆犓犆犪表达的影响取对数生长期细胞, 以 /ml 的密度接种于六孔板中细胞分为 3 组 : 对照组高糖组 (30 mmol/l 葡萄糖孵育 ) 和甘露醇组 (30mmol/L 甘露醇孵育 ) 不同刺激因素孵育细胞 48h, 细胞收获后用 RIPA 裂解缓冲液匀浆提取细胞总蛋白,BCA 蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度, 取 20μg 蛋白上样于聚丙烯酰胺凝胶 (SDS PAGE) 蛋白经电泳后, 随后转移至 PVDF 膜上用 BSA 封闭 1h, 抗 K Ca3.1 或 K Ca2.3 抗体 (1 200)4 过夜, 用连辣根过氧化物酶 (HRP) 的二抗 (1 5000) 室温孵育 1h, 加入化学发光剂, 暗室中曝光, 对 X 胶片进行显影和定影以 GAPDH 作为内参, 结果用目的蛋白条带与 GAPDH 条带灰度的比值表示按上述方法处理的一批细胞提取蛋白后测得的蛋白表达量计算为一个数据, 共重复 5 次 ( 狀 =5) 1.6 统计学处理所有数据以均数 ± 标准差表示, 用 SPSS16.0 统计软件做统计分析, 用 Prism5.0 软

3 5 期赵丽梅, 王燕, 杨勇, 等. 钙激活钾通道在高糖所致内皮源性超极化因子介导的内皮舒张功能障碍中的作用 611 件做统计图, 两组比较采用狋检验, 多组比较采用单因素方差分析, 两两比较采用 Bonferroni 检验犘 < 0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 高糖损伤犈犇犎犉介导的内皮舒张功能应用 30mmol/L 甘露醇孵育大鼠肠系膜三级动脉环 3h 后, 由 ACh 诱发的内皮介导的舒张反应及 EDHF 介导的舒张反应无显著变化 ( 图 1A, 狀 =6, 犘 >0.05 狏狊. 对照组 ) 而应用 30mmol/L 葡萄糖孵育动脉环 3h 后,10-7 ~10-4 mol/l ACh 诱导的内皮舒张程度显著降低 ( 图 1A, 狀 =6, 犘 <0.01 狏狊. 甘露醇组 ), 高糖组 10-4 mol/l ACh 引起血管舒张的最大舒张百分比 (R max%) 为 (61.64±12.48)%, 而甘露醇组为 (96.83±3.03)% 在预孵育 100μmol/LL NAME 和 10μmol/LINDO 后, 动脉环舒张功能进一步降低, 且高糖组由 10-7 ~10-4 mol/l ACh 诱导的内皮舒张程度低于甘露醇组 ( 图 1B, 狀 =6, 犘 <0.05 或犘 < 0.01 狏狊. 甘露醇组 ), 高糖组的 R max% 为 (28.46± 8.83)%, 甘露醇组为 (81.13±6.96)%, 这表明高糖介导的内皮舒张功能障碍涉及 EDHF 的作用受损图 1 高糖对内皮完整的大鼠肠系膜三级动脉犃犆犺浓度效应曲线的影响 Fig.1Efectofhighglucoseoncumulativeconcentration responsecurvesto AChinthethird orderendothelium intact mesentericarteriesfromrats A:ACh 诱导大鼠肠系膜三级动脉舒张曲线 ;B:ACh 诱导大鼠肠系膜三级动脉 EDHF 舒张曲线高糖组和甘露醇组分别由 30mmol/L 葡萄糖或 30mmol/L 甘露醇孵育 3h;INDO(indomethacin):COX 阻断剂 ;L NAME:NOS 阻断剂每组狀 =6, 与甘露醇组比较, 犘 < 0.05, 犘 <0.01 高糖和甘露醇孵育肠系膜三级动脉 3h 后,PE 诱导血管收缩至稳定,10-10 ~10-5 mol/lsnp 诱导舒张, 对照组高糖组和甘露醇组在 SNP 各浓度诱导的血管舒张程度均无显著性差异 ( 图 2), 说明高糖对肠系膜三级动脉舒张功能的影响不涉及血管平滑肌的直接扩张作用 2.2 高糖损伤犓犆犪 3.1 和犓犆犪 2.3 介导的内皮舒张功能加入 100μmol/L L NAME 10μmol/LINDO 和 10μmol/LTRAM 34 后, 高糖组和甘露醇组舒张功能进一步降低, 且高糖组由 10-6 ~10-4 mol/l ACh 诱导的内皮舒张程度低于甘露醇组 ( 图 3, 狀 =6, 犘 <0.01 狏狊. 甘露醇组 ), 表明高糖引起的 EDHF 作用减弱与 SK Ca 介导的舒张作用受损有关 ; 加入 100 μmol/ll NAME 10μmol/LINDO 和 0.1μmol/L UCL 1684 后, 高糖组由 10-6 ~10-4 mol/l ACh 诱导的内皮舒张程度低于甘露醇组 ( 狀 =6, 犘 <0.05 或犘 <0.01 狏狊. 甘露醇组 ), 表明高糖引起的 EDHF 作用减弱与介导的舒张作用受损有关图 2 高糖对内皮完整的大鼠肠系膜三级动脉犛犖犘浓度效应曲线的影响 Fig.2Efectofhighglucoseoncumulativeconcentration responsecurvestosnpinthethird orderendothelium intact mesentericarteriesfromrats 高糖组和甘露醇组大鼠肠系膜三级动脉分别由 30mmol/L 葡萄糖或 30mmol/L 甘露醇孵育 3h; 每组狀 =6, 与对照组比较, 犘 > 高糖下调犎犝犞犈犆狊上犓犆犪 3.1 和犓犆犪 2.3 通道蛋白的表达为了明确高糖引起介导的内皮舒张功能障碍是否与 K Ca3.1 和 K Ca2.3 通道表达改变

4 612 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷图 3 高糖对内皮完整的大鼠肠系膜三级动脉犐犓犆犪和犛犓犆犪介导的舒张反应的影响 Fig.3EfectofhighglucoseonIKCaandSKCa mediatedvasodilatationinthethird orderendothelium intactmesen tericarteriesfromrats A:SKCa 介导的 ACh 诱导的大鼠肠系膜三级动脉 EDHF 舒张曲线 ;B:IKCa 介导的 ACh 诱导的大鼠肠系膜三级动脉 EDHF 舒张曲线高糖组和甘露醇组大鼠肠系膜三级动脉分别由 30mmol/L 葡萄糖或 30mmol/L 甘露醇孵育 3h;TRAM 34: 选择性 IKCa 阻断剂 ;UCL 1684: 选择性 SKCa 阻断剂每组狀 =6, 与甘露醇组比较, 犘 <0.05, 犘 <0.01 有关, 我们用 30mmol/L 葡萄糖 (30mmol/L 甘露醇作为对照 ) 孵育培养的 HUVECs48h, 采用 Western blot 法观察细胞上 K Ca3.1 和 K Ca2.3 通道蛋白表达的变化结果显示,30 mmol/l 葡萄糖孵育 HU VECs48h 可使 K Ca3.1 和 K Ca2.3 通道蛋白表达分别降低 54.60% 和 75.72%( 图 4, 狀 =5, 犘 <0.01 狏狊. 甘露醇组 ), 而 30mmol/L 甘露醇孵育 48h 对 HU VECs 的 K Ca3.1 和 K Ca2.3 通道蛋白表达无明显影响这一结果说明高糖通过下调 K Ca3.1 和 K Ca2.3 通道表达引起介导的内皮舒张功能障碍图 4 高糖对培养的犎犝犞犈犆上犓犆犪 3.1 和犓犆犪 2.3 蛋白表达的影响 Fig.4EfectofhighglucoseonproteinexpressionofKCa3.1andKCa2.3channelsinculturedHUVEC A:30mmol/L 葡萄糖和 30mmol/L 甘露醇孵育 HUVEC48h 后 KCa3.1 蛋白的表达 ;B:30mmol/L 葡萄糖和 30mmol/L 甘露醇孵育 HUVEC48h 后 KCa2.3 蛋白的表达 ; 每组狀 =5, 与甘露醇组比较, 犘 < 讨论本研究中, 我们用大鼠肠系膜三级动脉环和培养的 HUVECs 证实 :1 高糖损伤正常大鼠肠系膜三级动脉内皮 EDHF 介导的血管舒张功能, 这与其损伤介导的舒张功能有关 ;2 高糖下调培养的 HU VECs 上的 K Ca3.1 和 K Ca2.3 表达, 这可能是高糖致介导的舒张功能损伤的原因之一 [4] [5] 越来越多的动物和人体血管实验表明, 在糖尿病状态下, 内皮依赖的血管舒张反应受损 FUKAO [6] 等研究发现, 在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型上, 肠系膜动脉 EDHF 诱导的血管平滑肌细胞超极化 [7] 显著降低 WIGG 等也在同类模型上发现超极化的降低是 EDHF 介导的动脉舒张能力下降的主要原因 EDHF 通常在中小血管中发挥其扩血管作用无论是 1 型还是 2 型糖尿病, 其主要特点是慢性高血糖, 而

5 5 期赵丽梅, 王燕, 杨勇, 等. 钙激活钾通道在高糖所致内皮源性超极化因子介导的内皮舒张功能障碍中的作用 613 [4]?ZKAN 等用高糖孵育大鼠肠系膜动脉发现高糖能够损伤 EDHF 介导的内皮依赖的血管舒张效应因此, 本研究中采用大鼠肠系膜三级动脉来观察高糖对 EDHF 介导的内皮舒张功能的影响 EDHF 介导的血管扩张与 VEC 上的 K Ca 通道关系密切在不同血管内皮上的表达特点 [8] 是随着血管直径的减小而增加这与 EDHF 在不同血管的作用特点是一致的细胞内钙增加时, 激活, 导致 K + 外流, 引起 VEC 超极化, 然后经肌内皮间隙连接的电偶联作用或者通过细胞间 K + 聚积激活 Kir2.1 和 ( 或 )Na + /K + ATP 酶导致血 [9] 管平滑肌细胞超极化, 引起血管扩张应用和 SK Ca 特异性的通道阻断剂和激动剂研究证实和 SK Ca 在内皮依赖的血管舒张效应中扮演至关重要的 [10] 角色 K Ca3.1 和 K Ca2.3 敲除小鼠表现为严重的 [11] 内皮依赖性血管舒张功能障碍和血压升高的这种作用在人的血管上也得到了证实 [12] 内皮介导的血管舒张反应损伤与的功能或表达改变有关在很多疾病模型中都得到了证实例如,5/6 肾切除尿毒症大鼠的颈动脉舒张反应降低 [9] 与内皮 K Ca3.1 和 K Ca2.3 表达减少有关 ; 原发性高血压患者大网膜动脉内皮介导的血管舒张反应损伤 [13] 与 K Ca3.1 表达减少有关但是, 关于 VEC 上的在糖尿病内皮舒张功能障碍中的作用目前还不清楚为探讨高糖是否参与糖尿病时 ED HF 介导的舒张功能障碍, 我们采用高糖体外孵育正常大鼠肠系膜三级动脉 3h 并应用特异性的阻断剂 TRAM 34 和 UCL 1684 观察其内皮介导的舒张反应的变化结果首次发现高糖能诱导介导的舒张反应降低这个结果将丰富高糖降低小血管内皮舒张反应的机制, 也提示高糖可能是糖尿病状态下介导的舒张反应降低的始动因子之一最新研究发现, 糖尿病时 K Ca 的表达发生了改变, 在糖尿病大鼠的海绵组织,K Ca3.1 和 K Ca2.3 通道的 [14] mrna 和蛋白水平的表达均下调而高糖作为内皮功能障碍以及糖尿病血管病变发生的一个重要因素, 其对 K Ca3.1 和 K Ca2.3 表达的影响如何尚无文献报道我们采用高糖孵育培养的 HUVEC 观察 K Ca3. 1 和 K Ca2.3 蛋白表达的变化结果显示高糖可以降低 HUVEC 上的 K Ca3.1 和 K Ca2.3 通道蛋白表达这提示高糖下调 VEC 上的 K Ca3.1 和 K Ca2.3 表达可能是其导致介导的舒张功能损伤的原因之一本研究仅是对高糖诱导糖尿病小动脉内皮舒张功能障碍及机制的初步探讨高糖是通过何种机制影响的表达和功能, 降低整体血糖水平是否会改善糖尿病动物小动脉舒张功能, 这些问题还需要进一步研究参考文献 : [1] 犇犐犖犌犎, 犜犚犐犌犌犔犈犆犚. 犈狀犱狅狋犺犲犾犻犪犾犮犲犾犱狔狊犳狌狀犮狋犻狅狀犪狀犱狋犺犲狏犪狊犮狌犾犪狉犮狅犿狆犾犻犮犪狋犻狅狀狊犪狊狊狅犮犻犪狋犲犱狑犻狋犺狋狔狆犲 2 犱犻犪犫犲狋犲狊 : 犪狊犲狊狊犻狀犵狋犺犲犺犲犪犾狋犺狅犳狋犺犲犲狀犱狅狋犺犲犾犻狌犿 [ 犑 ]. 犞犪狊犮犎犲犪犾狋犺犚犻狊犽犕犪狀犪犵, 2005,1(1): [2] 犉犈犔犈犜犗犝犕. 犆犪犾犮犻狌犿犪犮狋犻狏犪狋犲犱狆狅狋犪狊犻狌犿犮犺犪狀狀犲犾狊犪狀犱犲狀犱狅狋犺犲犾犻犪犾犱狔狊犳狌狀犮狋犻狅狀 : 狋犺犲狉犪狆犲狌狋犻犮狅狆狋犻狅狀狊 [ 犑 ]. 犅狉犑犘犺犪狉犿犪犮狅犾, 2009,156(4): [3] 犓犃犠犃犖犗犎, 犕犗犜犗犢犃犕犃犜, 犎犐犚犃犛犎犐犕犃犗, 犲狋犪犾. 犎狔狆犲狉犵犾狔犮犲犿犻犪狉犪狆犻犱犾狔狊狌狆狆狉犲狊犲狊犳犾狅狑犿犲犱犻犪狋犲犱犲狀犱狅狋犺犲犾犻狌犿犱犲狆犲狀犱犲狀狋狏犪狊狅犱犻犾犪狋犻狅狀狅犳犫狉犪犮犺犻犪犾犪狉狋犲狉狔 [ 犑 ]. 犑犃犿犆狅犾犆犪狉犱犻狅犾, 1999,34(1): [4]? 犣犓犃犖犕犎, 犝犕犃犛. 犐狀犺犻犫犻狋犻狅狀狅犳犪犮犲狋狔犾犮犺狅犾犻狀犲犻狀犱狌犮犲犱犈犇犎犉狉犲狊狆狅狀狊犲犫狔犲犾犲狏犪狋犲犱犵犾狌犮狅狊犲犻狀狉犪狋犿犲狊犲狀狋犲狉犻犮犪狉狋犲狉狔 [ 犑 ]. 犔犻犳犲犛犮犻,2005,78(1): [5] 犌犚犈犈犖犓, 犅犚犃犖犇犕犇, 犕犝犚犘犎犢犕犘. 犘狉犲狏犲狀狋犻狅狀狅犳犿犻狋狅犮犺狅狀犱狉犻犪犾狅狓犻犱犪狋犻狏犲犱犪犿犪犵犲犪狊犪狋犺犲狉犪狆犲狌狋犻犮狊狋狉犪狋犲犵狔犻狀犱犻犪犫犲狋犲狊 [ 犑 ]. 犇犻犪犫犲狋犲狊,2004,53 ( 犛狌狆狆犾 1): 犛 110 犛 118. [6] 犉犝犓犃犗犕, 犎犃犜犜犗犚犐犢, 犓犃犖犖犗犕, 犲狋犪犾. 犃犾狋犲狉犪狋犻狅狀狊犻狀犲狀犱狅狋犺犲犾犻狌犿犱犲狆犲狀犱犲狀狋犺狔狆犲狉狆狅犾犪狉犻狕犪狋犻狅狀犪狀犱狉犲犾犪狓犪狋犻狅狀犻狀犿犲狊犲狀狋犲狉犻犮犪狉狋犲狉犻犲狊犳狉狅犿狊狋狉犲狆狋狅狕狅狋狅犮犻狀犻狀犱狌犮犲犱犱犻犪犫犲狋犻犮狉犪狋狊 [ 犑 ]. 犅狉犑犘犺犪狉犿犪犮狅犾,1997,121(7): [7] 犠犐犌犌犛犑, 犜犃犚犈犕, 犜犗犖犜犃犕犃, 犲狋犪犾. 犆狅犿狆犪狉犻狊狅狀狅犳犲犳犲犮狋狊狅犳犱犻犪犫犲狋犲狊犿犲犾犻狋狌狊狅狀犪狀犈犇犎犉犱犲狆犲狀犱犲狀狋犪狀犱犪狀犈犇犎犉犻狀犱犲狆犲狀犱犲狀狋犪狉狋犲狉狔 [ 犑 ]. 犃犿犑犘犺狔狊犻狅犾犎犲犪狉狋犆犻狉犮犘犺狔狊犻狅犾,2001,281(1): 犎 232 犎 240. [8] 犔犈犝犚犃犖犌犝犈犚犞, 犌犔犝犃犐犛犘, 犞犃犖犎犗犝犜犜犈犘犕, 犲狋犪犾. 犗狆犲狀犲狉狊狅犳犮犪犾犮犻狌犿犪犮狋犻狏犪狋犲犱狆狅狋犪狊犻狌犿犮犺犪狀狀犲犾狊犪狀犱犲狀犱狅狋犺犲犾犻狌犿犱犲狆犲狀犱犲狀狋犺狔狆犲狉狆狅犾犪狉犻狕犪狋犻狅狀狊犻狀狋犺犲犵狌犻狀犲犪狆犻犵犮犪狉狅狋犻犱犪狉狋犲狉狔 [ 犑 ]. 犖犪狌狀狔狀犛犮犺犿犻犲犱犲犫犲狉犵狊犃狉犮犺犘犺犪狉犿犪犮狅犾,2008,377 (2): [9] 犓犗犎犔犈犚犚, 犅犚犃犎犔犈犚犛, 犅犝犛犆犎犆, 犲狋犪犾. 犈狀犱狅狋犺犲犾犻犪犾犓犆犪犮犺犪狀狀犲犾狊, 犈犇犎犉狊犻犵狀犪犾犻狀犵, 犪狀犱犪狉狋犲狉犻犪犾犫犾狅狅犱狆狉犲狊狊狌狉犲 [ 犑 ]. 犉狌狀犱犪犿犆犾犻狀犘犺犪狉犿犪犮狅犾,2008,22(1):9. [10] 犔犐犝犢, 犛犈犔犔犓犈犈犠, 犉犈犖犌犑, 犲狋犪犾. 犆犪犾犮犻狌犿犪犮狋犻狏犪狋犲犱狆狅狋犪狊犻狌犿犮犺犪狀狀犲犾狊犮狅狀狋狉犻犫狌狋犲狋狅犺狌犿犪狀狊犽犲犾犲狋犪犾犿狌狊犮犾犲犿犻犮狉狅狏犪狊犮狌犾犪狉犲狀犱狅狋犺犲犾犻犪犾犱狔狊犳狌狀犮狋犻狅狀狉犲犾犪狋犲犱狋狅犮犪狉犱犻狅狆狌犾犿狅狀犪狉狔犫狔狆犪狊狊 [ 犑 ]. 犛狌狉犵犲狉狔,2008,144(2): [11] 犠犈犛犜犗犖犃犎, 犃犅犛犐犕, 犎犃犚犖犗犈, 犲狋犪犾. 犜犺犲犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犪狀犱犳狌狀犮狋犻狅狀狅犳犆犪 (2+) 狊犲狀狊犻狀犵狉犲犮犲狆狋狅狉狊犻狀狉犪狋犿犲狊犲狀狋犲狉犻犮犪狉狋犲狉狔 ; 犮狅犿狆犪狉犪狋犻狏犲狊狋狌犱犻犲狊狌狊犻狀犵犪犿狅犱犲犾狅犳狋狔狆犲犐犐犱犻犪犫犲狋犲狊 [ 犑 ]. 犅狉犑犘犺犪狉犿犪犮狅犾,2008,154(3): [12] 犃犖犌犝犔犗犑, 犆犝犈犞犃犛犘, 犉犈犚犖犃犖犇犈犣犃, 犲狋犪犾. 犇犻犪犫犲狋犲狊犻犿狆犪犻狉狊犲狀犱狅狋犺犲犾犻狌犿犱犲狆犲狀犱犲狀狋狉犲犾犪狓犪狋犻狅狀狅犳犺狌犿犪狀狆犲狀犻犾犲狏犪狊犮狌犾犪狉狋犻狊狊狌犲狊犿犲犱犻犪狋犲犱犫狔犖犗犪狀犱犈犇犎犉 [ 犑 ]. 犅犻狅犮犺犲犿犅犻狅狆犺狔狊犚犲狊犆狅犿犿狌狀,2003,312(4): [13] 犔犐犑, 犣犎犗犝犣, 犑犐犃犖犌犇犑, 犲狋犪犾. 犚犲犱狌犮狋犻狅狀狅犳犖犗犪狀犱犈犇犎犉犿犲犱犻犪狋犲犱狏犪狊狅犱犻犾犪狋犪狋犻狅狀犻狀犺狔狆犲狉狋犲狀狊犻狅狀 : 狉狅犾犲狅犳犪狊狔犿犿犲狋狉犻犮犱犻犿犲狋犺狔犾犪狉犵犻狀犻狀犲 [ 犑 ]. 犆犾犻狀犈狓狆犎狔狆犲狉狋犲狀狊,2007,29(7): [14] 犣犎犝犑犎, 犑犐犃犚犘, 犡犝犔犠, 犲狋犪犾. 犚犲犱狌犮犲犱犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀狅犳犛犓 3 犪狀犱犐犓 1 犮犺犪狀狀犲犾狆狉狅狋犲犻狀狊犻狀狋犺犲犮犪狏犲狉狀狅狌狊狋犻狊狊狌犲狅犳犱犻犪犫犲狋犻犮狉犪狋狊 [ 犑 ]. 犃狊犻犪狀犑犃狀犱狉狅犾,2010,12 (4): ( 编辑韩维栋 )

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