第 35 卷第 1 期 2014 年 1 月 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻 犪狀犑犻犪狅狋狅狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ) 犞狅犾.35 犖狅.1 犑犪狀.2014 基础研究 犌 250 抗原肽与犎犅犮犃犵融合基因原核表达载体的构建及表达
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- 盘俸 管
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1 第 35 卷第 1 期 2014 年 1 月 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻 犪狀犑犻犪狅狋狅狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ) 犞狅犾.35 犖狅.1 犑犪狀.2014 基础研究 犌 250 抗原肽与犎犅犮犃犵融合基因原核表达载体的构建及表达蛋白的免疫分析 刘波 1,2, 孙泽强 2, 刘庆勇 2, 陈杰 2, 王司军 2, 杨广笑 3, 王全颖 3 (1. 山东大学医学院, 山东济南 ;2. 山东大学附属济南市中心医院泌尿外科, 山东济南 ;3. 西安华广生物工程公司, 陕西西安 ) 摘要 : 目的构建肾癌 G250 抗原肽与 HBcAg 重组基因的原核表达质粒 pet28a(+)/c G250 肽 C, 并通过大肠杆菌进行原核表达并纯化, 分析表达融合蛋白的免疫原性及抗原性 方法 PCR 扩增编码 G250 抗原中 249~268 氨基酸的基因片段, 将 G250 肽插入去除主要免疫优势区的重组质粒 pgemex/hbcag 中, 获得重组质粒 pgemex/c G250 肽 C, 为更换酶切位点, 以 pgemex/c G250 肽 C 为模板,PCR 扩增 C G250 肽 C 基因片段, 最终将目的基因亚克隆入原核表达质粒 pet28a(+) 中,IPTG 诱导融合蛋白表达, 利用 Ni 2+ NTA 亲和层析法纯化重组融合蛋白,SDS PAGE 鉴定融合蛋白的表达, 纯化后融合蛋白经腹腔注射免疫 BALB/c 小鼠, 间接 ELISA 法检测小鼠血清中抗体的滴度 结果酶切及基因测序鉴定证实融合基因正确重组于表达质粒 pet28a(+) 中, 原核表达并纯化后, 该分离纯化融合蛋白纯度达 95% 以上, 其相对分子质量约为 BALB/c 小鼠经 4 次免疫后, 所有小鼠血清中均可检测到抗体, 免疫第 6 周其血清中抗体滴度可达到 , 抗 G250 肽抗体滴度达到 , 抗 HBcAg 抗体滴度不超过 结论成功构建肾癌 G250 抗原肽与 HBcAg 重组基因原核表达质粒 pet28a(+)/c G250 肽 C, 在大肠杆菌中可高效表达, 纯化后融合蛋白具有较强的免疫原性, 能诱导小鼠产生高滴度和高特异性的抗体 关键词 : 融合蛋白 ;G250;HBcAg; 免疫原性 ; 肾癌中图分类号 :R 文献标志码 :A 文章编号 : (2014) 犇犗犐 : /jdyxb 犆狅狀狊狋狉狌犮狋犻狅狀犪狀犱狆狉狅犽犪狉狔狅狋犻犮犲狓狆狉犲狊犻狅狀狅犳狉犲犮狅犿犫犻狀犪狀狋犵犲狀犲犌 250 犪狀狋犻犵犲狀犻犮狆犲狆狋犻犱犲 犎犅犮犃犵犪狀犱狋犺犲犻犿犿狌狀狅犵犲狀犻犮犻狋狔犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狋犺犲犳狌狊犻狅狀狆狉狅狋犲犻狀 LIU Bo 1,2,SUNZe qiang 2,LIU Qing yong 2,CHENJie 2, WANGSi jun 2,YANG Guang xiao 3,WANG Quan ying 3 (1.SchoolofMedicineofShandongUniversity,Ji nan250012;2.departmentofurinarysurgery, Ji nancentralhospitalafiliatedtoshandonguniversity,ji nan250013; 3.Xi anhuaguangbiologicalengineeringco.ltd.,xi an710025,china) 犃犅犛犜犚犃犆犜 :Objective 犜狅犮狅狀狊狋狉狌犮狋狋犺犲犌 250 犪狀狋犻犵犲狀狆犲狆狋犻犱犲犪狀犱犎犅犮犃犵狉犲犮狅犿犫犻狀犪狀狋犵犲狀犲狆狉狅犽犪狉狔狅狋犻犮犲狓狆狉犲狊犻狅狀狆犾犪狊犿犻犱狆犈犜 28 犪 (+)/ 犆 犌 250 狆犲狆狋犻犱犲 犆犪狀犱犪狀犪犾狔狕犲狋犺犲犻犿犿狌狀狅犵犲狀犻犮犻狋狔狅犳狋犺犲犳狌狊犻狅狀狆狉狅狋犲犻狀犲狓狆狉犲狊犲犱犻狀 犈. 犮狅犾犻犅犔 21( 犇犈 3).Methods 犜犺犲犵犲狀犲犳狉犪犵犿犲狀狋狊狅犳犲狀犮狅犱犻狀犵犌 250 犪狀狋犻犵犲狀犻犮狆犲狆狋犻犱犲 / 狑犲狉犲犪犿狆犾犻犳犻犲犱犫狔犘犆犚, 狋犺犲犌 250 狆犲狆狋犻犱犲狑犪狊犻狀狊犲狉狋犲犱狋狅狉犲犿狅狏犲狋犺犲犿犪犼狅狉犻犿犿狌狀狅犱狅犿犻狀犪狀狋狉犲犵犻狅狀狅犳狋犺犲狉犲犮狅犿犫犻狀犪狀狋狆犾犪狊犿犻犱狆犌犈犕犈犡 / 犎犅犮犃犵狋狅狅犫狋犪犻狀狋犺犲狉犲犮狅犿犫犻狀犪狀狋狆犾犪狊犿犻犱狆犌犈犕犈犡 / 犆 犌 250 狆犲狆狋犻犱犲 犆. 犉狅狉狋犺犲狉犲狆犾犪犮犲犿犲狀狋狅犳狋犺犲犲狀狕狔犿犲犱犻犵犲狊狋犻狅狀狊犻狋犲狊, 狆犌犈犕犈犡 / 犆 犌 250 狆犲狆狋犻犱犲 犆狑犪狊狌狊犲犱犪狊犪狋犲犿狆犾犪狋犲, 犆 犌 250 狆犲狆狋犻犱犲 犆犵犲狀犲犳狉犪犵犿犲狀狋狑犪狊犪犿狆犾犻犳犻犲犱犫狔犘犆犚, 犪狀犱犳犻狀犪犾狔狋犺犲狋犪狉犵犲狋犵犲狀犲狑犪狊狊狌犫犮犾狅狀犲犱犻狀狋狅狋犺犲狆狉狅犽犪狉狔狅狋犻犮犲狓狆狉犲狊犻狅狀狆犾犪狊犿犻犱狆犈犜 28 犪 (+). 犐犘犜犌狑犪狊狌狊犲犱狋狅犻狀犱狌犮犲狋犺犲犲狓狆狉犲狊犻狅狀狅犳狋犺犲犳狌狊犻狅狀狆狉狅狋犲犻狀, 狑犺犻犮犺狑犪狊狋犺犲狀狆狌狉犻犳犻犲犱犫狔犖犻 2+ 犖犜犃犪犳犳犻狀犻狋狔犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔. 犛犇犛 犘犃犌犈狑犪狊狌狊犲犱狋狅犻犱犲狀狋犻犳狔狋犺犲狆狉狅狋犲犻狀犲狓狆狉犲狊犻狅狀. 犅犃犔犅 / 犮犿犻犮犲狑犲狉犲犻狀狋狉犪狆犲狉犻狋狅狀犲犪犾狔犻狀犼犲犮狋犲犱狑犻狋犺狆狌狉犻犳犻犲犱犳狌狊犻狅狀狆狉狅狋犲犻狀犪狀犱狋犺犲狊犲狉狌犿犪狀狋犻犫狅犱狔狋犻狋犲狉狑犪狊犱犲狋犲犮狋犲犱犫狔犻狀犱犻狉犲犮狋犈犔犐犛犃.Results 收稿日期 : 修回日期 : 基金项目 : 山东省自然科学基金资助项目 ( 犖狅. 犢 2006 犆 04) 犛狌狆狆狅狉狋犲犱犫狔狋犺犲犖犪狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲犉狅狌狀犱犪狋犻狅狀狅犳犛犺犪狀犱狅狀犵犘狉狅狏犻狀犮犲 ( 犖狅. 犢 2006 犆 04) 通讯作者 : 刘庆勇, 教授, 博士, 硕士生导师. 犈 犿犪犻犾 : 犮狅犿作者简介 : 刘波 (1987 ), 男 ( 汉族 ), 硕士研究生, 主要从事肾癌的免疫治疗. 犈 犿犪犻犾 : 狊犻狀犪. 犮狅犿网络出版时间 : 网络出版地址 : 犺狋狆 :// 狑狑狑. 犮狀犽犻. 狀犲狋 / 犽犮犿狊 / 犱犲狋犪犻犾 / 犚 犺狋犿犾
2 1 期刘波, 孙泽强, 刘庆勇, 等.G250 抗原肽与 HBcAg 融合基因原核表达载体的构建及表达蛋白的免疫分析 7 犜犺犲狉犲犮狅犿犫犻狀犪狀狋犵犲狀犲狑犪狊犮狅狀犳犻狉犿犲犱狋狅犫犲犮狅狉狉犲犮狋犫狔狋犺犲狉犲狊狋狉犻犮狋犻狅狀犲狀狕狔犿犲犱犻犵犲狊狋犻狅狀犪狀犱犇犖犃狊犲狇狌犲狀犮犻狀犵. 犃犳狋犲狉狆狉狅犽犪狉狔狅狋犻犮犲狓狆狉犲狊犻狅狀犪狀犱狆狌狉犻犳犻犮犪狋犻狅狀, 狋犺犲狆狌狉犻狋狔狅犳狋犺犲犳犻狀犪犾犳狌狊犻狅狀狆狉狅狋犲犻狀狉犲犪犮犺犲犱犪犾犲狏犲犾犺犻犵犺犲狉狋犺犪狀 95% 犪狀犱犻狋狊狉犲犾犪狋犻狏犲犿狅犾犲犮狌犾犪狉犿犪狊狑犪狊犪犫狅狌狋 犃犳狋犲狉犳狅狌狉狋犻犿犲狊狅犳犻犿犿狌狀犻狕犪狋犻狅狀, 狋犺犲犪狀狋犻犫狅犱狔狋犻狋犲狉犮狅狌犾犱犫犲犱犲狋犲犮狋犲犱犻狀狋犺犲犫犾狅狅犱狊犲狉狌犿狅犳犪犾犅犃犔犅 / 犮犿犻犮犲. 犃犳狋犲狉狊犻狓狋犻犿犲狊狅犳犻犿犿狌狀犻狕犪狋犻狅狀, 狋犺犲犪狀狋犻犫狅犱狔狋犻狋犲狉犻狀狋犺犲犫犾狅狅犱狊犲狉狌犿狉犲犪犮犺犲犱狌狆狋狅 , 狋犺犲狋犻狋犲狉狅犳犪狀狋犻 犌 250 狆犲狆狋犻犱犲犪狀狋犻犫狅犱狔狉犲犪犮犺犲犱狌狆狋狅 , 犪狀犱狋犺犲狋犻狋犲狉狅犳犪狀狋犻 犎犅犮犃犵狆犲狆狋犻犱犲犪狀狋犻犫狅犱狔狑犪狊犾犲狊狋犺犪狀 Conclusion 犜犺犲犌 250 犪狀狋犻犵犲狀狆犲狆狋犻犱犲犪狀犱犎犅犮犃犵狉犲犮狅犿犫犻狀犪狀狋犵犲狀犲狆狉狅犽犪狉狔狅狋犻犮犲狓狆狉犲狊犻狅狀狆犾犪狊犿犻犱狆犈犜 28 犪 (+ )/ 犆 犌 250 狆犲狆狋犻犱犲 犆狑犲狉犲狊狌犮犮犲狊犳狌犾狔犮狅狀狊狋狉狌犮狋犲犱犪狀犱犺犻犵犺犾狔犲狓狆狉犲狊犲犱犻狀犈. 犮狅犾犻犅犔 21( 犇犈 3). 犜犺犲狆狌狉犻犳犻犲犱犳狌狊犻狅狀狆狉狅狋犲犻狀犺犪狊犪狊狋狉狅狀犵犻犿犿狌狀狅犵犲狀犻犮犻狋狔犪狀犱犻狀犱狌犮犲狊犿犻犮犲狋狅狆狉狅犱狌犮犲犪狀狋犻犫狅犱犻犲狊狑犻狋犺犺犻犵犺狋犻狋犲狉犪狀犱犺犻犵犺狊狆犲犮犻犳犻犮犻狋狔. 犓犈犢犠犗犚犇犛 : 犳狌狊犻狅狀狆狉狅狋犲犻狀 ; 犌 250; 犎犅犮犃犵 ; 犻犿犿狌狀狅犵犲狀犻犮犻狋狔 ; 狉犲狀犪犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪 肾癌是一种免疫原性很强的肿瘤, 生物免疫治疗对其有良好的治疗效应, 疫苗研究成为目前肾癌免疫 [1] 治疗的热点之一 G250 抗原是碳酸酐酶家族成员之一, 它与具有碳酸酐酶活性的细胞黏附因子 : 碳酸酐酶 IX(MN/CAIX) 的基因结构完全相同, 因此也称为 CAIX( 简称 G250) [2], 其在肾癌组织中高度特异性表达, 成为目前肾癌诊断 治疗 预后的理想靶 [3 4] 点 研究证实, 肾癌特异性 G250 抗原中氨基酸 249~268 形成的抗原肽 (G250 肽 /249), 同时包含 CTL 表位和 Th 表位, 可诱导 CD4 + 及 CD8 + 的 T 细胞免疫反应, 可刺激机体产生针对该肽的抗肾癌免疫反应, 故 G250 肽 /249 为肾癌肽疫苗治疗的理想靶 [5 6] 点 目前, 以 G250 抗原表位肽为基础的肾癌肽疫苗研究已完成相应临床报告 研究结果表明, 单纯 G250 抗原表位肽存在免疫原性弱 在体内不能产生理想的抗肾癌治疗效应等弱点, 而不同免疫佐剂在治疗效应方面具有重要作用, 故寻找理想的免疫佐剂, 增强其免疫原性成为以 G250 抗原表位肽为基础的 [7 8] 肾癌肽疫苗治疗的研究热点之一 故本实验使用 HBcAg 作为免疫佐剂, 期待提高 G250 肽 /249 的免疫原性, 将编码鼠 G250 肽 /249 的基因片段插入到 HBcAg 的主要免疫优势区 (MIR), 最终构建出原核表达质粒 pet28a(+)/c G250 肽 C, 通过原核表达和纯化, 成功获得融合蛋白, 并进一步分析其免疫原性, 为下一步研究该融合蛋白疫苗在小鼠肾癌模型治疗效应方面奠定基础 1 材料与方法 1.1 材料 pgem T Easy 质粒 删除了 MIR 区的重组质粒 pgemex/hbcag 原核表达质粒 pet28a (+) 大肠杆菌犈. 犮狅犾犻 DH5α 和犈. 犮狅犾犻 BL21 完全弗氏佐剂 不完全弗氏佐剂等试剂由西安华广生物工程公司提供 ;T4DNA 连接酶 限制性内切酶 羊抗小鼠 IgG HRP 购自华美生物工程公司 ;Ni 2+ NTA 亲和层析蛋白纯化柱购自 Novagen 公司 ;G250 肽 /249 由西安蓝晶生物科技有限公司合成 ;BALB/c 小鼠 (6 只, 雌性,6~8 周, 体质量 15~20g) 购自西安交通大学医学院实验动物中心 ; 引物合成 DNA 测序由北京奥科鼎盛生物技术有限公司完成 1.2 方法 PCR 扩增编码鼠 G250 肽特异性抗原表位的基因片段根据在 GenBank 上查询编码小鼠的 G250 肽 (249~268) 基因序列 (GenBank:AB ), 采用非对称互补引物合成方法, 设计正负两条引物, 正向引物的 5' 端加入保护碱基 C 及犡犺狅 Ⅰ 酶切位点 (CTCGAG), 负向引物 5' 端加入犅犪犿 HⅠ 酶切位点 (GGATCC) 及保护碱基 C, 为后续的融合基因连入载体奠定了基础 设计引物如下 :F:5 CCTCGAGGAGATC CACGTGGTGCACCTCAGTACTGCTTTCTCCG AAC 3,R:5 CGGATCCGCGGCCCAAGGCTTC ATGAAGTTCGGAGAAAGC 3 反应条件为 : 94 预变性 5min,94 变性 50s,35 退火 50s, 72 延伸 50s, 共 30 个循环,72 延伸 5min 构建重组质粒 pgem T/G250 肽回收并纯化 PCR 产物, 将其连接入 pgem T Easy 载体, 构建重组质粒 pgem T/G250 肽, 并转化入感受态犈. 犮狅犾犻 DH5α 中, 使用 Amp + 培养基筛选阳性菌株, 挑取单菌落接种于含 Amp + 的 LB 液体培养基中振荡培养, 碱性裂解法小提质粒, 犅犪犿 HⅠ 及犡犺狅 Ⅰ 酶切鉴定并基因序列测序 构建重组质粒 pgemex C G250 肽 C 碱性裂解法大量提取质粒 pgem T/G250 肽, 犡犺狅 Ⅰ 及犅犪犿 H Ⅰ 双酶切 pgem T/G250 肽, 回收并纯化 G250 肽目的基因片段, 将其连接入删除了 MIR 区的 pgemex/hbcag 中, 构建重组质粒 pgemex 1/C G250 肽 C, 然后转化入感受态细菌犈. 犮狅犾犻 DH5α 中, 将阳性表达菌株接种于含 Amp + 的 LB 液体培养基中振荡培养, 扩增细菌, 碱性裂解法小提质粒, 将鉴定正确的重组克隆进行 DNA 序列分析
3 8 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 35 卷 PCR 扩增 C G250 肽 C 基因片段 pge MEX/C G250 肽 C 重组质粒中 C G250 肽 C 融合基因两端的酶切位点分别为犈犮狅 RⅠ 和犛犪犮 Ⅱ, 为下一步构建原核表达质粒 pet28a(+)/c G250 肽 C, 需将犛犪犮 Ⅱ 酶切位点更换为犛犪犾 Ⅰ 酶切位点, 故以 pge MEX/C G250 肽 C 为模板, 设计合成两条正负引物, PCR 扩增 C G250 肽 C 基因片段 正向引物的 5' 端加入保护碱基 G 且酶切位点为犈犮狅 RⅠ(GAATTC), 负向引物 5' 端加入保护碱基 G 且设计酶切位点为犛犪犾 Ⅰ(GTCGAC) F:5 GGAATTCATGATTACGCCAAGCTT GGG;R:5 GGTCGACTCACGGAAGTGTTGAT AGGA 反应条件为:94 预变性 5min,94 变性 50s,60 退火 50s,72 延伸 50s, 共 30 个循环, 72 延伸 5min 构建重组质粒 pgem T/C G250 肽 C 回收并纯化 PCR 产物, 将其连接入 pgem T Easy 载体, 构建重组质粒 pgem T/C G250 肽 C, 然后转化入感受态细菌犈. 犮狅犾犻 DH5α 中, 将阳性表达菌株接种于含 Amp + 的 LB 液体培养基中振荡培养, 扩增细菌, 碱性裂解法小提质粒, 犈犮狅 RⅠ 及犛犪犾 Ⅰ 酶切鉴定, 将鉴定正确的重组克隆进行 DNA 序列分析 构建原核表达质粒 pet28a(+ )/C G250 肽 C 碱性裂解法大量提取质粒 pgem T/C G250 肽 C, 通过犈犮狅 RⅠ 犛犪犾 Ⅰ 分别酶切 pgem T/C G250 肽 C 及 pet28a(+), 制备含有相同黏性末端的目的片段, 并分别回收 纯化酶切产物, 通过 T4DNA 酶连接, 最终构建原核表达质粒 pet28a (+)/C G250 肽 C, 然后转化入感受态犈. 犮狅犾犻 DH5α 大肠杆菌中, 将阳性表达菌株接种于含 Kana + 的 LB 液体培养基中振荡培养, 扩增细菌, 经犈犮狅 RⅠ 犛犪犾 Ⅰ 酶切鉴定及测序证实重组质粒构建成功 重组质粒 pet28a(+)/c G250 肽 C 的原核诱导表达原核表达质粒 pet28a(+)/c G250 采用凝血酶酶切去掉氨基端 (N 端 ) 的组氨酸标记 (His TagD) 等多肽, 最后再次经 Ni 2+ NTA 柱洗脱, 未结合蛋白质即为纯化的融合蛋白, 在经 SDS PAGE 分析 考马斯亮蓝染色, 通过吸光度扫描分析融合蛋白纯度 动物免疫免疫方案 :BALB/c 小鼠 6 只, 每周腹腔注射免疫 1 次,200μL/ 只, 第 1 次免疫用等体积的弗氏完全佐剂与融合蛋白的乳化混合物, 第 2 次免疫用弗氏不完全佐剂与融合蛋白的乳化混合物, 此后免疫时仅用融合蛋白而不加佐剂, 共免疫 6 次 分别于初次免疫前和 2 次免疫后每周剪鼠尾采血分离血清 间接 ELISA 法检测血清抗体用包被缓冲液稀释融合蛋白, 包被 96 孔板, 每孔 100μL, 洗涤液洗涤后, 加入 1~6 号小鼠免疫前血清和不同稀释度的免疫后血清 ( 从 开始倍比稀释 ),37 孵育 1h, 再次洗涤后加入 HRP 标记的山羊抗鼠 IgG (1 5000),37 孵育 1h,TMB 显色 10 min 后 H 2SO 4 终止反应, 用酶标仪测定犃 450 值, 以免疫前血清为阴性对照,P/N>2.1 者判为阳性 间接 ELISA 法检测表达蛋白的抗原特异性分别制备 G250 肽 /249 和 HBcAg 包被板, 一抗为不同稀释度的免疫后血清 ( 从 开始倍比稀释 ), 二抗为 HRP 标记的山羊抗鼠 IgG(1 5000), TMB 显色 10min 后 H 2SO 4 终止反应, 用酶标仪测定犃 450 值,P/N>2.1 者判为阳性 2 结果 2.1 犌 250 肽犘犆犚产物的凝胶电泳鉴定采用非对称互补引物模板法 PCR 扩增 G250 肽 /249 目的基因, 理论上为 74bp 在 10g/L 琼脂糖凝胶电泳中, 可见到与理论值相符的 DNA 条带 ( 图 1) 肽 C 转化感受态细菌犈. 犮狅犾犻 BL21(DE3), 使用 Ka na + 培养基筛选阳性菌株, 随机挑选单菌落接种于含 Kana + 的 LB 液体培养基中振荡培养至犃 600 为 0.4, 然后将培养液加入到 200mL 含 Kana + 的 LB 的培养液中继续振荡培养 10h, 加 IPTG 至终浓度为 1mmol/L, 继续振荡培养 8h 原核表达蛋白的分离和纯化使用裂解缓冲液洗及超声细胞粉碎机裂解诱导表达的细菌沉淀, 将沉淀充分溶解于 8mol/L 尿素中, 室温 20h, 收集上清入透析袋中透析 48h 按 Novagen 公司操作方法, 采用 Ni 2+ NTA 亲和层析法分离纯化目的蛋白, 图 1 犌 250 肽犘犆犚产物的琼脂糖凝胶电泳鉴定 Fig.1ResultofG250peptidePCR A:DNA marker;b:g250pcr 产物
4 1 期刘波, 孙泽强, 刘庆勇, 等.G250 抗原肽与 HBcAg 融合基因原核表达载体的构建及表达蛋白的免疫分析 重组质粒狆犌犈犕 犜 / 犌 250 肽的酶切鉴定及测序结果 1 酶切鉴定 : 通过犡犺狅 Ⅰ 及犅犪犿 HⅠ 双酶切鉴定重组质粒 pgem T/G250 肽,10g/L 琼脂糖凝胶电泳结果显示在 66bp 处可见与 G250 肽 /249 理论值相符的一明显条带 ( 图 2) 2 基因测序 : 经 DNA SIS 软件分析, 结果显示融合基因序列与理论序列完全相符 2.4 犆 犌 250 肽 犆犘犆犚产物的凝胶电泳鉴定以 pgemex/c G250 肽 C 为模板, 设计合成 2 条正负引物,PCR 扩增 C G250 肽 C 基因片段, 理论上为 511bp 在 10g/L 琼脂糖凝胶电泳图中可见到与理论值相符的一条 DNA 带 ( 图 4) 图 2 重组质粒狆犌犈犕 犜 / 犌 250 肽的双酶切鉴定 图 4 犆 犌 250 肽 犆犘犆犚产物的琼脂糖凝胶电泳鉴定 Fig.4ResultofC G250peptide CPCRproduct A:DNA marker;b:c G250 肽 CPCR 产物 Fig.2IdentificationofplasmidpGEM T/G250peptideby doubleenzymedigestion A:DNA marker;b: 经犡犺狅 Ⅰ 及犅犪犿 HⅠ 双酶切的 pgem T/G250 肽重组质粒 ;C:pGEM T/G250 肽重组质粒 2.3 重组质粒狆犌犈犕犈犡 犆 犌 250 肽 犆的酶切鉴定及测序结果 1 酶切鉴定 : 通过犈犮狅 RⅠ 及犛犪犾 Ⅰ 双酶切鉴定, 理论上应可切出 3986bp 和 508bp 两个片段 10g/L 琼脂糖凝胶电泳结果可见与理论值相符的明显 DNA 条带 ( 图 3) 2 基因测序 : 经 DNA SIS 软件分析, 结果显示融合基因序列与理论序列完全相符 2.5 重组质粒狆犌犈犕 犜 / 犆 犌 250 肽 犆的酶切鉴定与测序结果 1 酶切鉴定 : 通过犈犮狅 RⅠ 及犛犪犔 Ⅰ 双酶切鉴定, 理论上应可切出 4218bp 和 508bp 两个片段 10g/L 琼脂糖凝胶电泳结果可见与理论值相符的明显 DNA 条带 ( 图 5) 2 基因测序 : 经 DNA SIS 软件分析, 结果显示融合基因序列与理论序列完全相符 图 5 重组质粒狆犌犈犕 犜 / 犆 犌 250 肽 犆的双酶切鉴定 Fig.5IdentificationofplasmidpGEM T/C G250peptide C bydoubleenzymedigestion A:DNA marker;b: 经犈犮狅 RⅠ 及犛犪犔 Ⅰ 双酶切的 pgem T/C 图 3 重组质粒狆犌犈犕犈犡 犆 犌 250 肽 犆的双酶切鉴定 Fig.3IdentificationofplasmidpGEMEX C G250peptide C peptide Cbydoubleenzymedigestion A:DNA marker;b: 经犈犮狅 RⅠ 及犛犪犔 Ⅰ 双酶切的 pgemex C G250 肽 C 重组质粒 ;C:pGEMEX C G250 肽 C 重组质粒 G250 肽 C 重组质粒 ;C:pGEM T/C G250 肽 C 重组质粒 2.6 原核表达质粒狆犈犜 28 犪 (+)/ 犆 犌 250 肽 犆的构建与鉴定结果 1 酶切鉴定 : 通过犈犮狅 RⅠ 及犛犪犔 Ⅰ 双酶切鉴定重组质粒 pet28a(+)/c G250 肽 C, 理论上应切出 5434bp 和 508bp 两个片段 在 10g/L
5 10 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 35 卷 琼脂糖凝胶电泳结果可见与理论值相符的明显 DNA 条带 ( 图 6) 2 基因测序 : 经 DNA SIS 软件分析, 结果显示融合基因序列与理论序列完全相符 2.8 血清抗体的检测结果免疫 4 周后, 所有小鼠血清中均可检测到中和抗体, 免疫第 6 周其血清中抗体滴度均可达到 , 最高抗体滴度可达到 ( 表 1) 表 1 间接犈犔犐犛犃法检测血清抗体滴度 Tab.1 SerumantibodytiterdetectedbyindirectELISA ( 狀 =6) 图 6 重组质粒狆犈犜 28 犪 (+)/ 犆 犌 250 肽 犆的双酶切鉴定 Fig.6IdentificationofplasmidpET28a(+ )/C G250pep tide Cbydoubleenzymedigestion A:DNA marker;b: 经犈犮狅 RⅠ 及犛犪犔 Ⅰ 双酶切的 pet28a(+)/c G250 肽 C 重组质粒 ;C:pET28a(+)/C G250 肽 C 重组质粒 2.7 重组质粒狆犈犜 28 犪 (+)/ 犆 犌 250 肽 犆的原核表达和纯化结果使用裂解缓冲液洗及超声细胞粉碎机裂解诱导表达的细菌沉淀,8mol/L 尿素中洗涤后收集上清并透析,Ni 2+ NTA 亲和层析法分离纯化目的蛋白, 凝血酶酶切去掉氨基端 (N 端 ) 的组氨酸标记 (His TagD) 等多肽, 最后再次经 Ni 2+ NTA 柱洗脱, 最后获得了纯度达 95% 以上的融合蛋白, 经 SDS PAGE 和考马斯亮蓝染色后, 在相对分子质量约为 处可见 1 条新的蛋白条带, 与融合蛋白的理论值相符 ( 图 7) 小鼠编号 免疫次数 3 周 4 周 5 周 6 周 免疫小鼠血清中抗犌 250 肽及犎犅犮犃犵抗体滴度 免疫 4 周后,6 只小鼠中有 5 只血清中抗 G250 肽 /249 抗体的滴度可达到 , 检测不到抗 HBc 抗体, 免疫 6 周后所有小鼠血清中抗 HBc 抗体滴度不超过 , 抗 G250 肽 /249 抗体最高达 ( 表 2) 表 2 间接犈犔犐犛犃法检测血清抗犌 250 肽 /249 抗体滴度 Tab.2 Serumantibodytiterofanti G250peptide/249detec tedbyindirectelisa ( 狀 =6) 小鼠编号 免疫次数 4 周 5 周 6 周 讨论 图 7 融合蛋白的犛犇犛 犘犃犌犈电泳分析 Fig.7SDS PAGEanalysisoftherecombinantprotein A: 纯化融合蛋白 ;B: 蛋白 marker;c:pet28a(+) 诱导表达上清 ; D:pET28a(+) 诱导表达沉淀 ;E:pET28a(+)/C G250 肽 C 诱导表达上清 ;F:pET28a(+ )/C G250 肽 C 诱导表达沉淀 (1/2 稀释 );G:pET28a(+)/C G250 肽 C 诱导表达沉淀 (1/4 稀释 ) 研究证实, 肾癌对免疫治疗有较好的反应性, 开展有效的肾癌疫苗免疫治疗显得尤为重要 G250 抗原及其表位肽良好的肾癌肿瘤特异性成为肾癌疫苗主动免疫及靶向治疗的理想靶点 目前, 在各种疫苗研究中, 肽疫苗具有能诱发特异的免疫应答, 且分子结构简单, 生产 纯化 保存方便及安全等优点成为研究热点之一 然而, 由于抗原肽分子量小 免疫原性 [9] 弱, 在临床上获得的治疗效果有限 目前,G250 抗原表位肽在肾癌肽疫苗治疗研究中, 多采用不同的方式增强其免疫原性, 产生更强的肾癌免疫治疗效应 [10] KIM 等制备 G250 肽 鲍氏不动杆菌外膜蛋白 A 融合蛋白, 并冲击树突状细胞去治疗 RENCA 小鼠肾癌
6 1 期刘波, 孙泽强, 刘庆勇, 等.G250 抗原肽与 HBcAg 融合基因原核表达载体的构建及表达蛋白的免疫分析 11 肿瘤模型, 获得了理想的针对 G250 抗原肽的特异性抗肾癌免疫反应 另外, 包括 G250 抗原肽联合 IFN r 完全弗氏佐剂等肾癌免疫治疗及 G250 抗原肽冲击树突状细胞促进 CD4 + 的活化 增殖, 提高免疫反应 [11 12] 等已完成相应的实验研究 HBcAg 颗粒能激发机体较强的体液免疫及细胞免疫应答, 在 HBcAg 的刺突尖部 78~83 氨基酸是 HBcAg 的 MIR 区, 是插入外源基因的理想部位, 在此部位融合, 即可显著增强外源基因的免疫原性, 同 [13] 时并可以废除或降低 HBcAg 本身的免疫原性, 在实验及临床应用研究中证实了其可作为理想的载 [14 15] 体 本研究室曾将 β 淀粉样肽基因及表皮生长因子受体 Ⅲ 型突变体的 pep 3 抗原表位 (EGFRvⅢ/ pep 3) 基因成功插入 HBcAg 的 MIR 区, 通过原核表达获得的融合蛋白具有良好的免疫原性, 可诱导产生 [16 17] 高效价抗体 基于以上理论基础, 本实验通过基因工程技术将编码鼠 G250 肽的基因片段插入 HB cag 的 MIR 区, 构建原核表达质粒 pet28a(+)/c G250 肽 C, 通过原核表达成功获得融合蛋白 该融合蛋白其 N 端的 His 纯化标签和凝血酶蛋白酶切位点, 利于后续的分离纯化及在纯化完成后切除上述融合标签, 最终获得纯度达 95% 以上的融合蛋白 间接 ELISA 法检测显示, 该融合蛋白能诱导小鼠产生高滴度和高特异性的中和抗体, 且血清抗体中抗 G250 肽 / 249 抗体, 最高达 由于 G250 肽 /249 抗原表位代替了 HBcAg 的 MIR 区, 使 HBcAg 的抗原性显著下降, 抗 HBc 抗体滴度不超过 在本研究设计中使用鼠源性 G250 肽 /249 的目的主要为便于下一步可直接使用小鼠 RENCA 肾癌模型进行治疗效应研究, 首先证实该融合蛋白是否可以在小鼠体内诱导产生理想的抗肿瘤治疗效应, 为进一步研究人源性 G250 肽 /249 与 HBcAg 融合基因奠定基础 综上所述, 我们成功制备了鼠 G250 肽 /249 与 HBcAg 重组基因的纯化融合蛋白, 该融合蛋白具有较强的免疫原性, 能诱导小鼠产生高滴度和高特异性的抗体, 为进一步研究该融合蛋白疫苗在小鼠 REN CA 肾癌模型中治疗效应奠定了基础 参考文献 : [1] 犔犑犝犖犌犅犈犚犌犅, 犆犗犠犃犖犖犆, 犎犃犖犅犝犚犢犇犆, 犲狋犪犾. 犈犃犝犵狌犻犱犲犾犻狀犲狊狅狀狉犲狀犪犾犮犲犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪 : 狋犺犲 2010 狌狆犱犪狋犲 [ 犑 ]. 犈狌狉犝狉狅犾,2010,58(3): [2] 犗犘犃犞犛犓犢犚, 犘犃犛犜犗犚犈犓犗犞? 犛, 犣犈犔犖? 犓犞, 犲狋犪犾. 犎狌犿犪狀犕犖 / 犆犃 9 犵犲狀犲, 犪狀狅狏犲犾犿犲犿犫犲狉狅犳狋犺犲犮犪狉犫狅狀犻犮犪狀犺狔犱狉犪狊犲犳犪犿犻犾狔 : 狊狋狉狌犮狋狌狉犲犪狀犱犲狓狅狀狋狅狆狉狅狋犲犻狀犱狅犿犪犻狀狉犲犾犪狋犻狅狀狊犺犻狆狊 [ 犑 ]. 犌犲狀狅犿犻犮狊,1996,33(3): [3] 犌犚犃犅犕犃犐犈犚犓, 犇犈犠犕, 犝犈犕犝犚犃犎, 犲狋犪犾. 犚犲狀犪犾犮犲犾 犮犪狉犮犻狀狅犿犪 犪狊狅犮犻犪狋犲犱犌 250 犿犲狋犺狔犾犪狋犻狅狀犪狀犱犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀 : 犻狀狏犻狏狅 犪狀犱犻狀狏犻狋狉狅狊狋狌犱犻犲狊 [ 犑 ]. 犝狉狅犾狅犵狔,2002,60(2): [4] 犜犗犛犜犃犐犖犑, 犔犐犌, 犌犈犖犜犐犔 犘犈犚犚犈犜犃, 犲狋犪犾. 犆犪狉犫狅狀犻犮犪狀 犺狔犱狉犪狊犲 9 犻狀犮犾犲犪狉犮犲犾狉犲狀犪犾犮犲犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪 : 犪犿犪狉犽犲狉犳狅狉犱犻犪犵 狀狅狊犻狊, 狆狉狅犵狀狅狊犻狊犪狀犱狋狉犲犪狋犿犲狀狋 [ 犑 ]. 犈狌狉犑犆犪狀犮犲狉,2010,46 (18): [5] 犞犐犛犛犈犚犛犕犔, 犞犚犐犈犛犕犐, 犈犖犌犈犔犈犖犎犘, 犲狋犪犾. 犚犲狀犪犾犮犲犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪 犪狊狅犮犻犪狋犲犱犪狀狋犻犵犲狀犌 250 犲狀犮狅犱犲狊犪狀犪狋狌狉犪犾狔狆狉狅 犮犲狊狊犲犱犲狆犻狋狅狆犲狆狉犲狊犲狀狋犲犱犫狔犺狌犿犪狀犾犲狌犽狅犮狔狋犲犪狀狋犻犵犲狀 犇犚犿狅犾犲 犮狌犾犲狊狋狅犆犇 4(+) 犜犾狔犿狆犺狅犮狔狋犲狊 [ 犑 ]. 犐狀狋犑犆犪狀犮犲狉,2002,100 (4): [6] 犞犐犛犛犈犚犛犑犔, 犇犈犞犚犐犈犛犐犑, 犛犆犎犚犈犝犚犛犕犠, 犲狋犪犾. 犜犺犲狉犲 狀犪犾犮犲犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪 犪狊狊狅犮犻犪狋犲犱犪狀狋犻犵犲狀犌 250 犲狀犮狅犱犲狊犪犺狌犿犪狀犾犲狌犽狅犮狔狋犲犪狀狋犻犵犲狀 ( 犎犔犃 ) 犃 2.1 狉犲狊狋狉犻犮狋犲犱犲狆犻狋狅狆犲狉犲犮狅犵狀犻狕犲犱犫狔犮狔狋狅狋狅狓犻犮犜犾狔犿狆犺狅犮狔狋犲狊 [ 犑 ]. 犆犪狀犮犲狉犚犲狊,1999,59(21): [7] 犅犔犈犝犕犈犚犐, 犜犐犈犕犈犛犛犈犖犇犕, 犗犗犛犜犈犚犠犐犑犓 犠犃犓犓犃犑犆, 犲狋犪犾. 犘狉犲犾犻犿犻狀犪狉狔犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狆犪狋犻犲狀狋狊狑犻狋犺狆狉狅犵狉犲狊犻狏犲狉犲狀犪犾犮犲犾犮犪狉犮犻 狀狅犿犪狏犪犮犮犻狀犪狋犲犱狑犻狋犺犆犃 9 狆犲狆狋犻犱犲 狆狌犾狊犲犱犿犪狋狌狉犲犱犲狀犱狉犻狋犻犮犮犲犾狊 [ 犑 ]. 犑犐犿犿狌狀狅狋犺犲狉,2007,30(1): [8] 犞犃犖犘犎, 犑犗犖犐犃犝犛, 犞犃犖犛犌. 犞犪犮犮犻狀犲狋犺犲狉犪狆狔犻狀狆犪狋犻犲狀狋狊狑犻狋犺狉犲狀犪犾犮犲犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪 [ 犑 ]. 犈狌狉犝狉狅犾,2009,55(6): [9] 犆犔犃犈犛犛犗犖犕犎. 犠犺狔犮狌狉狉犲狀狋狆犲狆狋犻犱犲 犫犪狊犲犱犮犪狀犮犲狉狏犪犮犮犻狀犲狊犳犪犻犾 : 犾犲狊狊狅狀狊犳狉狅犿狋犺犲狋犺狉犲犲犈狊?[ 犑 ]. 犐犿犿狌狀狅狋犺犲狉犪狆狔,2009,1 (4): [10] 犓犐犕犅犚, 犢犃犖犌犈犓, 犓犐犕犇犢, 犲狋犪犾. 犌犲狀犲狉犪狋犻狅狀狅犳犪狀狋犻 狋狌犿狅狌狉犻犿犿狌狀犲狉犲狊狆狅狀狊犲狌狊犻狀犵犱犲狀犱狉犻狋犻犮犮犲犾狊狆狌犾狊犲犱狑犻狋犺犮犪狉 犫狅狀犻犮犪狀犺狔犱狉犪狊犲犐犡 犪犮犻狀犲狋狅犫犪犮狋犲狉犫犪狌犿犪狀狀犻狅狌狋犲狉犿犲犿犫狉犪狀犲狆狉狅狋犲犻狀犪犳狌狊犻狅狀狆狉狅狋犲犻狀狊犪犵犪犻狀狊狋狉犲狀犪犾犮犲犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪 [ 犑 ]. 犆犾犻狀犈狓狆犐犿犿狌狀狅犾,2012,167(1): [11] 犛犝犈犓犃犖犈犛, 犖犐犛犎犐犜犃犖犐犕, 犖犗犌犝犆犎犐犕, 犲狋犪犾. 犘犺犪狊犲犐狋狉犻犪犾狅犳狆犲狉狊狅狀犪犾犻狕犲犱狆犲狆狋犻犱犲狏犪犮犮犻狀犪狋犻狅狀犳狅狉犮狔狋狅犽犻狀犲 狉犲犳狉犪犮狋狅狉狔犿犲狋犪狊狋犪狋犻犮狉犲狀犪犾犮犲犾犮犪狉犮犻狀狅犿犪狆犪狋犻犲狀狋狊 [ 犑 ]. 犆犪狀犮犲狉犛犮犻,2007, 98(12): [12] 犝犈犕犝犚犃犎, 犉犝犑犐犕犗犜犗犓, 犜犃犖犃犓犃犕, 犲狋犪犾. 犃狆犺犪狊犲犐狋狉犻犪犾狅犳狏犪犮犮犻狀犪狋犻狅狀狅犳犆犃 9 犱犲狉犻狏犲犱狆犲狆狋犻犱犲狊犳狅狉犎犔犃 犪 24 狆狅狊犻 狋犻狏犲狆犪狋犻犲狀狋狊狑犻狋犺犮狔狋狅犽犻狀犲 狉犲犳狉犪犮狋狅狉狔犿犲狋犪狊狋犪狋犻犮狉犲狀犪犾犮犲犾犮犪狉 犮犻狀狅犿犪 [ 犑 ]. 犆犾犻狀犆犪狀犮犲狉犚犲狊,2006,12(6): [13] 犅犗犚犐犛犗犞犃犌, 犅犗犚犛犆犎犝犓犗犞犃犠犗, 犕犈犣犝犔犈犌, 犲狋犪犾. 犛狆犪狋犻犪犾狊狋狉狌犮狋狌狉犲犪狀犱犻狀狊犲狉狋犻狅狀犮犪狆犪犮犻狋狔狅犳犻犿犿狌狀狅犱狅犿犻狀犪狀狋狉犲 犵犻狅狀狅犳犺犲狆犪狋犻狋犻狊犅犮狅狉犲犪狀狋犻犵犲狀 [ 犑 ]. 犐狀狋犲狉狏犻狉狅犾狅犵狔,1996,39(1/ 2): [14] 犛犆犎犗犜犛犃犈犚犜犕, 犇犈犉犕, 犉犐犈犚犛犠, 犲狋犪犾. 犝狀犻狏犲狉狊犪犾犕 2 犲犮狋狅犱狅犿犪犻狀 犫犪狊犲犱犻狀犳犾狌犲狀狕犪犪狏犪犮犮犻狀犲狊 : 狆狉犲犮犾犻狀犻犮犪犾犪狀犱犮犾犻狀犻犮犪犾犱犲狏犲犾狅狆犿犲狀狋狊 [ 犑 ]. 犈狓狆犲狉狋犚犲狏犞犪犮犮犻狀犲狊,2009,8(4): [15] 犌犚犈犌犛犗犖犃犔, 犗犔犐犞犈犐犚犃犌, 犗犜犎犗犚犗犆, 犲狋犪犾. 犘犺犪狊犲犐狋狉犻犪犾狅犳犪狀犪犾犺狔犱狉狅犵犲犾犪犱犼狌狏犪狀狋犲犱犺犲狆犪狋犻狋犻狊犅犮狅狉犲狏犻狉狌狊 犾犻犽犲狆犪狉 狋犻犮犾犲犮狅狀狋犪犻狀犻狀犵犲狆犻狋狅狆犲狊狅犳狆犾犪狊犿狅犱犻狌犿犳犪犾犮犻狆犪狉狌犿犮犻狉犮狌犿狊 狆狅狉狅狕狅犻狋犲狆狉狅狋犲犻狀 [ 犑 ]. 犘犔狅犛犗狀犲,2008,3(2): 犲 [16] 冯改丰, 胡海涛, 李月英, 等. 重组基因犮 犃 β 犮的构建及其表达蛋白的免疫原性分析 [ 犑 ]. 细胞与分子免疫学杂志,2005,21(5): [17] 段小艺, 王健生, 郭佑民, 等. 犈犌犉犚狏 Ⅲ/ 犘犈犘 3 犮犇犖犃与犎犅犮犃犵重组基因原核表达载体的构建 表达与免疫分析 [ 犑 ]. 细胞与分子免疫学杂志,2007,23(1): ( 编辑卓选鹏 )
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1 21 1990 犽狀狅狑 犾犲犱犵犲犲犮狅狀狅犿狔 21 1999 6 13 2 1999 8 240 10 3 2003 3 5 1 1 3 3 3 6 9 12 12 14 18 21 23 33 41 41 41 47 51 2 51 55 59 59 61 67 69 73 73 73 75 82 84 84 95 98 102 108 108 108 111 115 116 117 119
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西班牙文学简史
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BuletinofSoiland WaterConservation Vol.38,No.3 Jun.,2018 M A (+ 1, ' 1, 1,B # 1, 2, 1 (1.#c/ ^.(FTU^,#c ` ;2. `5 TU+,,#c ` ) -.:
383 20186 BuletinofSoiland WaterConservation Vol.38,No.3 Jun.,2018 M A (+ 1, ' 1, 1,B # 1, 2, 1 (1.#c/ ^.(FTU^,#c ` 315100;2. `5 TU+,,#c ` 315100) -.:[# ] ( 犛狌犪犲犱犪狊犪犾狊犪 ).UP 5 6. T U. 8 9 % X L PQ 0, G.
前 言 本标准的附录 A 为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准由中华人民共和国上海出入境检验检疫局负责起草 本标准主要起草人 : 倪昕路 韩丽 周瑶 郭德华 朱坚 本标准系首次发布的检验检疫行业标准 Ⅰ
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 2326 2009 食品及油脂中反式脂肪酸含量的检测傅立叶变换红外光谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋狉犪狀狊犳犪狋狔犪犮犻犱狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犪狀犱狅犻犾狊 犉犜犐犚犿犲狋犺狅犱 2009 07 07 发布 2010 01 16 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 前 言 本标准的附录 A 为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口
JournalofSoiland WaterConservation Vol.32No.1 Feb.,2018!"#$%&' 1, 2, 3, 1, 4, 5, 1 ( , :;, ; ( ),0 5 <-. 4, ;3
321 20182 JournalofSoiland WaterConservation Vol.32No.1 Feb.,2018!"#$%&' 1, 2, 3, 1, 4, 5, 1 (1. 23 4,567089 :;, 100083; 2. 23 ( ),0 5 4,?@ 750021; 4.A-2
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1 2003 9 1 1 1 1 2 3 7 12 12 13 14 17 21 21 23 29 29 29 30 33 34 36 37 39 42 47 2 47 50 51 52 53 54 57 57 59 63 63 72 79 79 85 87 88 88 89 91 94 99 103 103 109 123 134 134 136 140 143 143 3 143 144 146
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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 进出口化妆品中氢溴酸右美沙芬的测定液相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犱犲狓狋狉狅犿犲狋犺狅狉狆犺犪狀犺狔犱狉狅犿犻犱犲犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犔犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔犿
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口化妆品中氢溴酸右美沙芬的测定液相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犱犲狓狋狉狅犿犲狋犺狅狉狆犺犪狀犺狔犱狉狅犿犻犱犲犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犔犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔犿犲狋犺狅犱 2009 02 20 发布 2009 09 01 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 前 言 本标准的附录
JournalofSoiland WaterConservation Vol.31No.6 Dec.,2017 I C+, - +\ > 1, 2,Z 1,2 (1. ]"8 G 9, ; ) 01: #$ZL ]&' O
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316 201712 JournalofSoiland WaterConservation Vol.31No.6 Dec.,2017 I C+, - +\ > 1, 2,Z 1,2 (1. ]"8 G 9, 110000;2. G(?@ABCDE, 123000) 01: #$ZL ]&' O \," G 5 ] O! 5,N> 0 5,5 10,10 20,20 40cm \ W 2 O M
前 言 本标准的附录 A 附录 B 和附录 C 为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位 : 中华人民共和国山西出入境检验检疫局 本标准主要起草人 : 薛平 连庚寅 宋欢 苑利 杜利君 潘雅丽 宋洁 康杰 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准 Ⅰ
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 2115 2008 进出口食品和饲料中总氮及粗蛋白的检测方法杜马斯燃烧法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲狋狅狋犪犾狀犻狋狉狅犵犲狀犮狅狀狋犲狀狋犪狀犱犮犪犾犮狌犾犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犮狉狌犱犲狆狉狅狋犲犻狀犮狅狀狋犲狀狋犻狀犳狅狅犱犪狀犱犳犲犲犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犆狅犿犫狌狊狋犻狅狀犪犮犮狅狉犱犻狀犵狋狅狋犺犲犇狌犿犪狊狆狉犻狀犮犻狆犾犲
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前 言 本标准的附录 A 附录 B 和附录 C 为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位 : 中华人民共和国山西出入境检验检疫局 本标准主要起草人 : 薛平 连庚寅 宋欢 苑利 杜利君 潘雅丽 宋洁 康杰 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准 Ⅰ
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 2115 2008 进出口食品和饲料中总氮及粗蛋白的检测方法杜马斯燃烧法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲狋狅狋犪犾狀犻狋狉狅犵犲狀犮狅狀狋犲狀狋犪狀犱犮犪犾犮狌犾犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犮狉狌犱犲狆狉狅狋犲犻狀犮狅狀狋犲狀狋犻狀犳狅狅犱犪狀犱犳犲犲犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犆狅犿犫狌狊狋犻狅狀犪犮犮狅狉犱犻狀犵狋狅狋犺犲犇狌犿犪狊狆狉犻狀犮犻狆犾犲
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(CIP) /() ;. :,2005.5 ISBN7 80668 929 X Ⅰ... Ⅱ.1 2... Ⅲ. Ⅳ.TS976.15 49 CIP (2005)038150 [] (George S Clason) ( 813) :64515005 :64515005 ( 811) :64515012 :64844088 890 1240 1/32 7.625 20 20055 1 20055 1
26 (130) 27 (133) 28 (136) 29 (140) (143) 30 (143) 31 (147) 32 (152) 33 (159) 34 (164) 35 (167) 36 (170) 37 (176) 2005 ( ) (181) (183)
(001) (003) 1 (003) 2 (007) 3 (012) 4 (017) 5 (021) 6 (026) 7 (031) (037) 8 (037) 9 (044) 10 (053) 11 (059) 12 (065) 13 (068) (073) 14 (073) 15 (078) 16 (084) 17 (090) 18 (095) (099) 19 (099) 20 (103)
前 言 本标准按照 GB/T 给出的规则起草 本标准代替 SN 出口肉及肉制品中甲萘威残留量检验方法 本标准与 SN 相比, 主要技术变化如下 : 样品净化方法采用全自动凝胶渗透色谱净化方法替代原有的液液分配法 ; 测定采用柱后衍生液相色谱 荧光检
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 0122 2011 代替 SN0122 1992 进出口肉及肉制品中甲萘威残留量检验方法液相色谱 柱后衍生荧光检测法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犮犪狉犫犪狉狔犾狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犿犲犪狋犪狀犱犿犲犪狋狆狉狅犱狌犮狋狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱 犲狓狆狅狉狋 犎犘犔犆 犳犾狌狅狉犲狊犮犲犱犲狋犲犮狋狅狉狑犻狋犺狆狅狊狋犮狅犾狌犿狀犱犲狉犻狏犪狋犻狅狀
中学第二教材：高中语文：选修：语言规范与创新：配套江苏版教材
(1 ) (1 ) (18) : (18) (28) (28) (40) (40) (52) (52) (63) (63) (63) (72) (72) (77) (77) (85) (85) (92) (92) (101) 1 ,,,,,,,400,, 1300,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, 1., : :,,,,,,,,, :(1),,,, (2),, (3) (4), :,, 2.
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25 3 2017 5 Vol.25 No.3 ACTA AGRESTIA SINICA May. 2017 犱狅犻 :10.11733/j.issn.1007 0435.2017.03.003 A F6!"#, $,%&', (6 7 7 \ ` V@, 6 730000) #$: 8 I N 9
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前 言 本标准按照 GB/T 给出的规则起草 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位 : 中华人民共和国山东出入境检验检疫局 中华人民共和国陕西出入境检验检疫局 中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局 本标准主要起草人 : 王建华 汤志旭 孙忠松 王艳丽 王松 李
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 2646 2010 进出口食品中吡螨胺残留量检测方法气相色谱 质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犲犫狌犳犲狀狆狔狉犪犱狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犌犆 犕犛犿犲狋犺狅犱 2010 11 01 发布 2011 05 01 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 前 言 本标准按照 GB/T1.1
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Unit3 WHEN IGROW UP 乐学单元 亲爱的同学们, 每个人都有梦想, 每个人都对未来从事的职业有一种期待, 你梦想的职业是什么呢? 我们常听到的职业有医生 护士 消防员 警察 飞行员和宇航员 那么他们都做哪些具体的工作呢? 你了解吗? 在这个单元, 他们中的一些代表会走近你, 并告诉你他们的日常生活 让我们赶快一起去看看吧 还有, 当你了解他们的具体工作后, 你是否还坚持你的梦想职业,
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前 言 本标准的附录 A 附录 B 和附录 C 均为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位 : 中华人民共和国湖南出入境检验检疫局 本标准主要起草人 : 颜鸿飞 张莹 孙菲 胡宇东 黄志强 付善良 李拥军 王美玲 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准 Ⅰ
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 动物源食品中乙氧喹啉残留量的测定方法高效液相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犲狋犺狅狓狔狇狌犻狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀 犎犘犔犆犿犲狋犺狅犱 2010 03 02 发布 2010 09 16 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 前 言 本标准的附录 A 附录 B 和附录 C 均为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口
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前 言 本标准的附录 A 和附录 B 均为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位 : 中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局 中华人民共和国重庆出入境检验检疫局 中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局 本标准主要起草人 : 刘永 杨长志 王国民 康庆贺 林维宣 李贤良 吴
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口动物源性食品中乌洛托品残留量的检测方法液相色谱 质谱 / 质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狌狉狅狋狉狅狆犻狀犲狉犲狊犻犱狌犲犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳狊狅犳 犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犔犆 犕犛 / 犕犛犿犲狋犺狅犱 2008 11 18 发布 2009 06 01 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 前
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前 言 本标准的附录 A 为规范性附录, 附录 B 和附录 C 为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准由中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局 中华人民共和国浙江出入境检验检疫局 中国检验检疫科学研究院 中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局负责起草 本标准主要起草人 : 林维
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口动物源性食品中糖皮质激素类兽药残留量的检测方法液相色谱 质谱 / 质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犵犾狌犮狅犮狅狉狋犻犮狅狊狋犲狉狅犻犱狊狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳狊狅犳 犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犔犆 犕犛 / 犕犛犿犲狋犺狅犱 2008 11 18 发布 2009 06 01 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
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批发零售业实用英语对话及词汇手册
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标准分享网 免费下载 中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 进出口动物源食品中 14 种 β 内酰 胺类抗生素残留量检测方法 液相色谱 质谱 / 质谱法 SN/T 中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街 16 号 邮政编码 : 网址 www
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口动物源食品中 14 种 β 内酰胺类抗生素残留量检测方法液相色谱 质谱 / 质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳 14 犫犲狋犪 犾犪犮狋犪犿犪狀狋犻犫犻狅狋犻犮狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犲狓狆狅狉狋犪狀犱犻犿狆狅狉狋 犔犆 犕犛 / 犕犛犿犲狋犺狅犱 2008 04 29 发布 2008 11 01 实施
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134 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 部位位于左侧者占 50.8%, 略高于右侧的 49.2%; 原发象限中, 外上象限比例最高, 占 47.5%, 乳晕区最低, 占 3.5%; 肿瘤孤立结节的比例占 87.6%; 病理类型中浸润性导管癌比例最高, 占 83.7%%, 小叶原位癌最
第 34 卷第 1 期 2013 年 1 月 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻 犪狀犑犻犪狅狋狅狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ) 犞狅犾.34 犖狅.1 犑犪狀.2013 经验交流 不同年龄段女性乳腺癌患者临床病理特征的回顾性分析 周灿 1, 王珂 1, 何建军 1, 王现兵 2, 任予 1, 汤小江 1, 陈武科 1 (1. 西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤外科,
犐犆犛 犆 50 犠犛 / 犜 !"#$%&' 犘犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲犵狌犻犱犲犾犻狀犲犳狅狉犫犪犮狋犲狉犻犪犾犮狌犾狋狌狉犲狅犳犾狅狑犲狉狉犲狊狆犻狉犪狋狅狉狔狋狉犪犮狋犻狀犳犲犮狋犻狅狀狊 ()*+,-.
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胱抑素 C 水平的测定在 2 型糖尿病肾功能评价中的应用 刘传勇, 古东海, 周丽华, 等 814 临床研究 综 16SrRNAPCR 基因测序鉴定临床标本军团菌 宣瑞红, 王娟, 胡朝晖, 等 816 核酸扩增检测技术在血液筛查中的应用 张健, 谢秀华, 黄呈辉, 等 818 胱抑素 C 测定评价
国际检验医学杂志 INTERNATIONALJOURNALOFLABORATORY MEDICINE 月刊 1980 年 1 月创刊第 31 卷第 8 期 2010 年 8 月 30 日出版 主 主 管 重庆市卫生局 办 重庆市卫生信息中心 ( 重庆市药品集中采购服务中心 ) 编辑 出版 总编 国际检验医学杂志编辑委员会 重庆市卫生信息中心 府伟灵 执行总编 徐永柱 编辑部主任 杨庆华 通讯地址 5
1 期赵艳秋, 刘杰, 刘瑞青, 等. 肺腺癌组织学亚型与 EGFR 突变及临床特征的关系 95 =0.012), 犫狌狋犿犻狓犲犱犿狌犮犻狀狅狌狊犅犃犆犮狅犿狆狅狀犲狀狋狊犺犪犱犪犾狅狑犲狉犈犌犉犚犿狌狋犪狋犻狅狀 (13.3% 狏狊.53.3%, =0.004). 犜犺犲狆狉犲狊犲狀犮犲狅犳狆犪
第 35 卷第 1 期 2014 年 1 月 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻 犪狀犑犻犪狅狋狅狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ) 犞狅犾.35 犖狅.1 犑犪狀.2014 肺腺癌组织学亚型与犈犌犉犚突变及临床特征的关系 赵艳秋 1, 刘杰 1, 刘瑞青 2, 张建波 1, 孙晓楠 1, 王喻 1, 李醒亚 3 (1. 郑州大学附属肿瘤医院 /
1. (1 ) 2. (3 ) 3. (6 ) 4. (9 ) 5. (12) (14) (16) 6. 7. 8. 9. 10. (18) (21) (25) (28) (31) (34) (37) 11. (39) 12. (41) 13. 14. (45) (48) 15. (51) (54) (57) 16. (60) 17. (64) 18. (68) 1 19. (71) 20. (75)
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B53A B4 ( B ) Vol.53 No.4 2014B7C JournalofXiamenUniversity (NaturalScience) Jul.2014 doi:10.6043/j.issn.0438 0479.2014.04.028 34 3< 5, 6 犚犖犃 / 犇犖犃 J*!,, 2 (WX @ ) @T, DY@ 2., WX 361102) MN: \Z \ 23 4(
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809 DOI:10.13350/j.cjpb.180802 ' ()*+,-./(0 F, GH,I+J ( G,HD I JKX32 L D/ W, GMN750021) @ OR G-. 0. ], @M G-. 0 P,FG ].@, QR I ` OR FG]3OR, FG @M,?@ ST U:
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366! 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犘犪狋犺狅犵犲狀犅犻狅犾狅犵狔 b Mar.2019, Vol.14,No.3 DOI: /j.cjpb , BC - M,, 2,) (0 a( Y0 6 a( Y, M' V0, 6 26 H W, ),
366 DOI:10.13350/j.cjpb.190326 +, BC - M,, 2,) (0 a( Y0 6 a( Y, M' V0, 6 26 H W, 200025),T6 =& 26 P 6, ",T6,T6,,O @, A,M D ) B 69 PW 6,,E W SB #$I O)9 + 9PW,T6 A, 3:, A,T6, +, +,T6; A; R383.2!"#$ A %&
5 期李文娟, 席悦, 张巧俊, 等. 大鼠丘脑背内侧核神经元在帕金森病状态下电活动的变化 615 帕金森病 (Parkinson sdisease,pd) 是一种神经系统退行性病变, 常伴有认知障碍 睡眠障碍 嗅觉功能障碍 抑郁及自主神经功能紊乱等非运动系统症状 研究显示, 丘脑背内侧核 (med
第 34 卷第 5 期 2013 年 9 月 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻 犪狀犑犻犪狅狋狅狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ) 犞狅犾.34 犖狅.5 犛犲狆.2013 大鼠丘脑背内侧核神经元在帕金森病状态下电活动的变化 李文娟, 席悦, 张巧俊, 惠艳娉, 薛丽, 张欢, 张李娜, 袁海峰 ( 西安交通大学医学院第二附属医院脑病科, 陕西西安
20 犆犺犻狀犲狊犲犑狅狌狉狀犪犾狅犳犈狓狆犾狅狊犻狏犲狊牔犘狉狅狆犲犾犪狀狋狊 HTPB PBX "< ( KLM,MNO,>, ( 0 J 4 ), ) : 1 / HTPB$ PBX ;? Y,> <' +, [/ Y? K 4567,,PBX Y
20 犆犺犻狀犲狊犲犑狅狌狉狀犪犾狅犳犈狓狆犾狅狊犻狏犲狊牔犘狉狅狆犲犾犪狀狋狊 201410 HTPB PBX "< ( KLM,MNO,>, ( 0 J 4 ), 1 621900) : 1 / HTPB$ PBX ;? Y,> S?@
安 徽 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 ２０１６ 年 ３５６ 极 犃犵 犃犵犆犾电极为参比电极 纳米氧化铜 硫堇 玻碳电极为工作电极的三电极体系中进行循环伏安实验 使用钛基纳米氧化铜电极作阳极 恒电流电解浓度为 １０犿犵 犿犔 含有 ０ １犕 硫酸钠的对硝基苯酚溶液 在电 解经过不同时间
第 39 卷 4 期 2016 年 7 月 安徽师范大学学报 ( 自然科学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犃狀犺狌犻犖狅狉犿犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犖犪狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲 ) 犞狅犾.39 犖狅.4 犑狌犾.2016 犇犗犐 :10.14182/ 犑. 犮狀犽犻.1001-2443.2016.04.009 纳米氧化铜对硝基苯酚的电化学氧化及降解作用徐白露, 张唤, 杨周生 ( 安徽师范大学环境科学与工程学院,
156 控制算法 ( 即模糊逻辑或神经网络 ) 这两种方式来研 [1] 究泊车. 犑犪犿犻犾设计出一种泊车辅助器 可帮助驾驶员方便安全地泊车 但在实现泊车的全自动方面有待改进. 文献 [2-3] 分别基于模糊逻辑控制进行泊车系统研究 逻辑控制依赖于人的操作知识 因此 [4] 需要大量的泊车实验. 刘
![156 控制算法 ( 即模糊逻辑或神经网络 ) 这两种方式来研 [1] 究泊车. 犑犪犿犻犾设计出一种泊车辅助器 可帮助驾驶员方便安全地泊车 但在实现泊车的全自动方面有待改进. 文献 [2-3] 分别基于模糊逻辑控制进行泊车系统研究 逻辑控制依赖于人的操作知识 因此 [4] 需要大量的泊车实验. 刘](/thumbs/52/29734531.jpg "156 控制算法 ( 即模糊逻辑或神经网络 ) 这两种方式来研 [1] 究泊车. 犑犪犿犻犾设计出一种泊车辅助器 可帮助驾驶员方便安全地泊车 但在实现泊车的全自动方面有待改进. 文献 [2-3] 分别基于模糊逻辑控制进行泊车系统研究 逻辑控制依赖于人的操作知识 因此 [4] 需要大量的泊车实验. 刘")
上海理工大学学报 第 37 卷 第 2 期 犑. 犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔狅犳犛犺犪狀犵犺犪犻犳狅狉犛犮犻犲狀犮犲犪狀犱犜犲犮犺狀狅犾狅犵狔 犞狅犾.37 犖狅.2 2015 文章编号 :1007-6735(2015)02-0155-04 犇犗犐 :10.13255/ 犼. 犮狀犽犻. 犼狌狊狊狋.2015.02.011 基于模糊算法垂直泊车转向控制策略的研究 王友楠 方祖华 孙鍴 王康 徐宏兵 ( 上海师范大学信息与机电工程学院
1320 例血培养结果分析 赵苏瑛, 李岷, 李克涓 1102 综 慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝的临床观察 邓建平, 陈云鹏 1104 济南市部分体检人群血尿酸水平的现况分析 杜敏, 尹承华 1106 精神分裂症患者血清中 IL 6 IL 10 与 TNF α 检测的临床意义 陈茜 1108 不同
国际检验医学杂志 INTERNATIONALJOURNALOFLABORATORY MEDICINE 月刊 1980 年 1 月创刊第 31 卷第 10 期 2010 年 10 月 30 日出版 主 主 管 重庆市卫生局 办 重庆市卫生信息中心 ( 重庆市药品集中采购服务中心 ) 编辑 出版 总编 国际检验医学杂志编辑委员会 重庆市卫生信息中心 府伟灵 执行总编 徐永柱 编辑部主任 杨庆华 通讯地址
JournalofSoiland WaterConservation Vol.32No.5 Oct.,2018 KZ[ Y\]^ "_`a P O 1,<) 2,3,4,*73 2,3,4,+ 1,2,3,4,E 9 5 (1.? Q3 45 ;,? 71210
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325 201810 JournalofSoiland WaterConservation Vol.32No.5 Oct.,2018 KZ[%@,;3@Y\]^ "_`ap O 1,
8, : OCT 1933,2( 狉 + 狀狕 ) 狕,, 犐 ( 犽 ) : 犐 ( 犽 )= 犛 ( 犽 ) 狘犈 Rexp(i2 犽狉 )+ 犪 ( 狕 )exp[i2 犽 ( 狉 + 狀狕 )]d 2 狕狘, (1) - 犛 ( 犽 ), CCD λ, 犽,,,, CCD 犐 ( 犽 ),,
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1932 19 tionoftheoralcavitytissue. 犓犲狔狑狅狉犱狊 :OpticalCoherenceTomography (OCT);spectral domain;parotidgland;histopathology 1 (Optical Coherence Tomography OCT) [1],,, [2], 20 90,OCT, D.Huang J.G.Fujimoto
中国汉族人群中白色念珠菌的 25SrDNA 基因分型及耐药性分析 刘刚, 卢光 667 糖化血红蛋白及糖化血清蛋白在妊娠糖尿病筛选诊断中的价值评估 易向民, 李庆丰, 郭惠琼 670 糖尿病患者血清 β 羟丁酸与血清酮体粉剂半定量法检测间的关系及价值研究 王传发 673 临床研究 综 亲属肾移植患者
国际检验医学杂志 INTERNATIONALJOURNALOFLABORATORY MEDICINE 月刊 1980 年 1 月创刊第 31 卷第 7 期 2010 年 7 月 30 日出版 主 主 管 重庆市卫生局 办 重庆市卫生信息中心 ( 重庆市药品集中采购服务中心 ) 编辑 出版 总编 国际检验医学杂志编辑委员会 重庆市卫生信息中心 府伟灵 执行总编 徐永柱 编辑部主任 杨庆华 通讯地址 5
中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 进出口食品中生物苄呋菊酯 氟丙菊酯 联苯菊酯等 28 种农药残留量的检测方法气相色谱 质谱法 SN/T 中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街 16 号邮政编码 : 网址 电话 :
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 2151 2008 进出口食品中生物苄呋菊酯 氟丙菊酯 联苯菊酯等 28 种农药残留量的检测方法气相色谱 质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狆犲狊狋犻犮犻犱犲狊狉犲狊犻犱狌犲狅犳 28 犽犻狀犱狊狅犳犻狀犮犾狌犱犻狀犵犫犻狅狉犲狊犿犲狋犺狉犻狀 犪犮狉犻狀犪狋犺狉犻狀 犫犻犳犲狀狋犺狉犻狀犻狀犳狅狅犱犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犌犪狊犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔
2017,26(10): 犃犮狋犪犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犲犅狅狉犲犪犾犻 狅犮犮犻犱犲狀狋犪犾犻狊犛犻狀犻犮犪 doi: /j.issn : :htp://kns.cnki.net/kcms/detail/
2017,26(10):1492 1498 犃犮狋犪犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犲犅狅狉犲犪犾犻 狅犮犮犻犱犲狀狋犪犾犻狊犛犻狀犻犮犪 doi:10.7606/j.issn.1004 1389.2017.10.011 :2017 10 18 :htp://kns.cnki.net/kcms/detail/61.1220.s.20171018.1733.022.html 1,2,3, 1,2,3, 1,2,3,
670 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤 我国胃癌每 [1] 年死亡人数居恶性肿瘤的首位 胃癌起病隐匿, 早期无明显特异症状, 一旦发现已属中晚期 目前胃癌的主要治疗手段仍为手术及化疗, 但很难得到根治, 且均存在较大副作用 因此, 寻找治疗胃癌新的药物和
![670 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤 我国胃癌每 [1] 年死亡人数居恶性肿瘤的首位 胃癌起病隐匿, 早期无明显特异症状, 一旦发现已属中晚期 目前胃癌的主要治疗手段仍为手术及化疗, 但很难得到根治, 且均存在较大副作用 因此, 寻找治疗胃癌新的药物和](/thumbs/91/106824580.jpg "670 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤 我国胃癌每 [1] 年死亡人数居恶性肿瘤的首位 胃癌起病隐匿, 早期无明显特异症状, 一旦发现已属中晚期 目前胃癌的主要治疗手段仍为手术及化疗, 但很难得到根治, 且均存在较大副作用 因此, 寻找治疗胃癌新的药物和")
第 34 卷第 5 期 2013 年 9 月 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻 犪狀犑犻犪狅狋狅狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ) 犞狅犾.34 犖狅.5 犛犲狆.2013 散癖平胃方剂对人胃癌细胞株增殖和凋亡的影响 姜炅 1, 董蕾 1, 秦斌 1, 郭晓燕 1, 王新阳 2, 李红 1 ( 西安交通大学医学院 :1. 第二附属医院消化科, 陕西西安
,2018,38(11): 犃犮狋犪犅狅狋. 犅狅狉犲犪犾. 犗犮犮犻犱犲狀狋. 犛犻狀. : (2018) 犱狅犻 : /j.issn "#$%&"' ' # ()*+, 1,2,3,4
,2018,38(11):2053-2059 犃犮狋犪犅狅狋. 犅狅狉犲犪犾. 犗犮犮犻犱犲狀狋. 犛犻狀. :10004025(2018)11205307 犱狅犻 :10.7606/j.issn.10004025.2018.11.2053 "#$%&"''# ()*+, 1,2,3,4, 1,2,3,4, 4,5, 1,2,4 (1!G HI,J 810016;2!"HI,J 810016;3!G
104 安徽师范大学学报 ( 自然科学版 ) 2017 年 = 狋 1 犛犔 ( 狋, 狇, 狇 ) 犱狋 (6) 狋 0 考虑时间和坐标的无穷小变换狋 = 狋 +εξ0( 狋, 狇, 狇 ) 狇 狊 ( 狋 )= 狇狊 ( 狋 )+εξ 狊 ( 狋, 狇, 狇 ) ( 7) 本文利用求和约定, 式
第 40 卷 2 期 2017 年 3 月 安徽师范大学学报 ( 自然科学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犃狀犺狌犻犖狅狉犿犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犖犪狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲 ) 犇犗犐 :10.14182/ 犑. 犮狀犽犻.1001-2443.2017.02.001 推广到多维系统的钱德拉塞卡方法丁光涛 ( 安徽师范大学物理与电子信息学院, 安徽芜湖 24100) 摘要 : 将钱德拉塞卡等提出的构造拉格朗日函数方法从一维系统推广到多维系统,
1 期王鑫, 耿希刚, 谭云鹤, 等.G CSF 动员干细胞系对大鼠心肌缺血再灌注损伤的早期影响 31 犮狅狀狋狉狅犾犵狉狅狌狆 ( 犘 <0.05)24 犺犪犳狋犲狉狅狆犲狉犪狋犻狅狀, 犪狀犱狋犺犲狊犲狉狌犿犾犲狏犲犾狅犳犞犈犌犉狑犪狊犺犻犵犺犲狉犻狀犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀犵狉狅狌狆狋犺犪狀犻
第 35 卷第 1 期 2014 年 1 月 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻 犪狀犑犻犪狅狋狅狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ) 犞狅犾.35 犖狅.1 犑犪狀.2014 犌 犆犛犉动员干细胞系对大鼠心肌缺血再灌注损伤的早期影响 王鑫 1,2, 耿希刚 1, 谭云鹤 3, 潘龙毅 2, 徐涛 2, 钟守平 2, 李广顺 2 (1. 西安交通大学医学院第一附属医院心血管外科,
6E./0, : 9 GHI5JPQ9STUVW&XY 1167 L -1.Therootvigorofseed wasinhibitedsignificantlyonlyathigh NaClconcentration(>150 mmol L -1 ),theseedcouldrecoverger
,017,37(6):1166-1174 犃犮狋犪犅狅狋. 犅狅狉犲犪犾. 犗犮犮犻犱犲狀狋. 犛犻狀. :1000 405(017)06 1166 09 犱狅犻 :10.7606/j.issn.1000 405.017.06.1166 "#$%&' () $*+,-./01,,,,,,! ( >,?@A BC345678=56()DE, B 010019) :FGHI5JKLM, NO (5 ~
6Z., A D 6 J ; P A ; [9] Z. A \ A?7, J P MN F. Z.AJ J 6 675AB 8`.Z.J L 68 1, 5 Z. 1,N 5 Z. A [10 11] ;1 A,. Z.A G H 0 1 A,5 56P 3,U 5 6 Z.
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431 0141 ACTAPHOTONICASINICA Vol.43No.1 December014 犱狅犻 :10.3788/gzxb014431.100 ZemaxR 01A56Z.J + ( 8, 1003) :. EFW #'6EI % ;; ; T W # = > ' ^ % ; ;J*W #=>' S66E, 3
2018,27(5): 犃犮狋犪犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犲犅狅狉犲犪犾犻 狅犮犮犻犱犲狀狋犪犾犻狊犛犻狀犻犮犪 doi: /j.issn : :htp://kns.cnki.net/kcms/detail/61.
2018,27(5):658 666 犃犮狋犪犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犲犅狅狉犲犪犾犻 狅犮犮犻犱犲狀狋犪犾犻狊犛犻狀犻犮犪 doi:10.7606/j.issn.1004 1389.2018.05.007 :2018 05 09 :htp://kns.cnki.net/kcms/detail/61.1220.s.20180509.1603.014.html!",,,, (# ?=@ "#AB
39 2 Vol.39No ActaEcologiaeAnimalisDomastici Feb.2018 MRSA! "#$%&' MLST 1, 1, 1, 2, 1, 3, 1 (1., ;2.!"#$ %&',!" ; 3. () *+,-./0,1
39 2 Vol.39No.2 20182 ActaEcologiaeAnimalisDomastici Feb.2018 MRSA! "#$%&' MLST 1, 1, 1, 2, 1, 3, 1 (1., 832003;2.!"#$ %&',!" 843000; 3. () *+,-./0,1 *+ 730046) [ (]!"#$%&' () MRSA *+,-./ -.01,23456789:"
JOURNALOFXI ANJIAOTONG UNIVERSITY Vol.46 No.10 Oct.2012 犖犪犽犪犵犪犿犻 犿, ( )-/*<= ) : Nakagami 犿!"#$%&' # (#$)*+,-./0(EPA
46 0 00 JOURNALOFXI ANJIAOTONG UNIVERSITY Vol.46 No.0 Oct.0 犖犪犽犪犵犪犿犻 犿, )-/*?@AB-C.DE,7007, ) : Nakagami 犿!"#$%&' # #$)*+,-./0EPA) -.,34567+89:;.SER) -./0?/@ 8ASER @B,CD!E " A A5FGH, IJKGH
610 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 izingfactor,edhf) 介导 其中,NO 和 PGI 2 通常在较大血管发挥主要的扩张血管作用, 而 EDHF 通 [2] 常在中小血管中发挥作用 EDHF 的本质及其信号通路目前并不完全清楚, 但在 EDHF 介导的血管舒张过程中
![610 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 izingfactor,edhf) 介导 其中,NO 和 PGI 2 通常在较大血管发挥主要的扩张血管作用, 而 EDHF 通 [2] 常在中小血管中发挥作用 EDHF 的本质及其信号通路目前并不完全清楚, 但在 EDHF 介导的血管舒张过程中](/thumbs/92/107774145.jpg "610 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 izingfactor,edhf) 介导 其中,NO 和 PGI 2 通常在较大血管发挥主要的扩张血管作用, 而 EDHF 通 [2] 常在中小血管中发挥作用 EDHF 的本质及其信号通路目前并不完全清楚, 但在 EDHF 介导的血管舒张过程中")
第 34 卷第 5 期 2013 年 9 月 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻 犪狀犑犻犪狅狋狅狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ) 犞狅犾.34 犖狅.5 犛犲狆.2013 钙激活钾通道在高糖所致内皮源性超极化因子介导的内皮舒张功能障碍中的作用 赵丽梅, 王燕, 杨勇, 杨予白, 邓秀玲 ( 西安交通大学医学院生理学与病理生理学系, 陕西西安 710061)
1 期方萍, 吴晓明, 周筠, 等.CpG ODNs 对慢性哮喘小鼠气道重塑的影响及机制 59 支气管哮喘是一种 Th1/Th2 免疫反应失衡性疾病, 反复发作可导致气道重塑, 主要表现为上皮下胶原沉积 气道平滑肌增殖 黏液腺增生以及血管再生 [1 2] 等改变 Th2 细胞因子 IL 4 IL 5
![1 期方萍, 吴晓明, 周筠, 等.CpG ODNs 对慢性哮喘小鼠气道重塑的影响及机制 59 支气管哮喘是一种 Th1/Th2 免疫反应失衡性疾病, 反复发作可导致气道重塑, 主要表现为上皮下胶原沉积 气道平滑肌增殖 黏液腺增生以及血管再生 [1 2] 等改变 Th2 细胞因子 IL 4 IL 5](/thumbs/91/106270835.jpg "1 期方萍, 吴晓明, 周筠, 等.CpG ODNs 对慢性哮喘小鼠气道重塑的影响及机制 59 支气管哮喘是一种 Th1/Th2 免疫反应失衡性疾病, 反复发作可导致气道重塑, 主要表现为上皮下胶原沉积 气道平滑肌增殖 黏液腺增生以及血管再生 [1 2] 等改变 Th2 细胞因子 IL 4 IL 5")
第 34 卷第 1 期 2013 年 1 月 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻 犪狀犑犻犪狅狋狅狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ) 犞狅犾.34 犖狅.1 犑犪狀.2013 犆狆犌 犗犇犖狊对慢性哮喘小鼠气道重塑的影响及机制 方萍 1, 吴晓明 2, 周筠 3, 李满祥 1, 史红阳 1, 张永红 1, 卢家美 1, 张明 1 (1. 西安交通大学医学院第二附属医院呼吸内科,
JournalofSoiland WaterConservation Vol.33No.3 Jun.,2019 X T'% a ^#9 a 0 `G GQR - 1, \ 1, 1, B 1, - 1, 1,2 (1.b *aa,b ;2.b *aa, C6&'-
333 20196 JournalofSoiland WaterConservation Vol.33No.3 Jun.,2019 X T'% a ^#9 a 0 `G GQR - 1, \ 1, 1, B 1, - 1, 1,2 (1.b *aa,b8 350007;2.b *aa, C6&'- L,b8 350007) (: ZT H < (TC) (TN) =(TP)Q R D R, b 8
新世纪英语丛书 英语四 六级考试词汇速记 ( 第 4 版 ) 主编刘宇慧陈晓明
新世纪英语丛书 英语四 六级考试词汇速记 ( 第 4 版 ) 主编刘宇慧陈晓明 图书在版编目 (CIP) 数据 英语四 六级考试词汇速记 / 刘宇慧, 陈晓明主编. 4 版. 上海 : 华东理工大学出版社,2014.1 犐犛犅犖 978 7 5628 3704 6 Ⅰ.1 英... Ⅱ.1 刘...2 陈... Ⅲ.1 大学英语水平考试词汇自学参考资料 Ⅳ.1 犎 313 中国版本图书馆犆犐犘数据核字
,2018,38(1): 犃犮狋犪犅狅狋. 犅狅狉犲犪犾. 犗犮犮犻犱犲狀狋. 犛犻狀. : (2018) 犱狅犻 : /j.issn "# 犘狅犛犃犇 $%&',,,,, ( F,G H
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暋暋图书在版编目 (CIP) 数据播音主持快速入门十八招儿 / 赵秀环编著. 北京 : 中国传媒大学出版社, ISBN978 灢 7 灢 5657 灢 0136 灢 8 栺灡栙播 暋栻灡栙赵 暋栿. 栙播音 语言艺术暋栚广播节目 主持人 语言艺术暋栛电视节目 主持人 语言艺术桇灡栙 G2
暋暋图书在版编目 (CIP) 数据播音主持快速入门十八招儿 / 赵秀环编著. 北京 : 中国传媒大学出版社,2011.1 ISBN978 灢 7 灢 5657 灢 0136 灢 8 栺灡栙播 暋栻灡栙赵 暋栿. 栙播音 语言艺术暋栚广播节目 主持人 语言艺术暋栛电视节目 主持人 语言艺术桇灡栙 G222.2 中国版本图书馆 CIP 数据核字 (2010) 第 261459 号 暋暋播音主持快速入门十八招儿
774 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 后发性白内障 (aftercataract) 又称后囊膜混浊 (posteriorcapsularopacification,pco) 是白内障囊 [1] 外摘出术或超声乳化术后最常见并发症 多种调控因素参与了 PCO 的发生发展过程, 其中结
![774 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 后发性白内障 (aftercataract) 又称后囊膜混浊 (posteriorcapsularopacification,pco) 是白内障囊 [1] 外摘出术或超声乳化术后最常见并发症 多种调控因素参与了 PCO 的发生发展过程, 其中结](/thumbs/50/27055490.jpg "774 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 34 卷 后发性白内障 (aftercataract) 又称后囊膜混浊 (posteriorcapsularopacification,pco) 是白内障囊 [1] 外摘出术或超声乳化术后最常见并发症 多种调控因素参与了 PCO 的发生发展过程, 其中结")
第 34 卷第 6 期 2013 年 11 月 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻 犪狀犑犻犪狅狋狅狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ) 犞狅犾.34 犖狅.6 犖狅狏.2013 结缔组织生长因子在晶状体上皮细胞转分化和细胞外基质合成中的作用 马波, 裴澄, 康前雁, 秦莉, 张小玲, 崔丽臖 ( 西安交通大学医学院第一附属医院眼科, 陕西西安 710061)