68 犫犲犪狀狑犻犾狋狏犻狉狌狊 (BBWV) 是危害蚕豆的主要病毒, 该病毒为豇豆花叶病毒科犆狅犿狅狏犻狉犻犱犪犲蚕豆病毒属 犉犪犫犪狏犻狉狌狊的典型种, 其基因组由 2 条单链 RNA 分子组成, 分别是 6.0kb 的 RNA1 和 3.6kb 的 RNA2 BBWV 有 2 种血清型, 依据
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- 达 宗政
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1 犘犾犪狀狋犘狉狅狋犲犮狋犻狅狀 蚕豆萎蔫病毒 2 号安徽分离物全基因组序列测定与分析 严丹侃 1, 郑红英 2, 张海珊 1, 沈艳 1, 顾江涛 1, 章东方 1, 燕飞 2 摘要 (1. 安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所, 合肥 ; 2. 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所, 杭州 ) 利用酶联免疫和 RT PCR 技术对采自安徽地区的蚕豆病株进行检测, 确定其病原为蚕豆萎蔫病毒 2 号 犅狉狅犪犱犫犲犪狀狑犻犾狋狏犻狉狌狊 2(BBWV2) 为明确 BBWV2 安徽分离物 (BBWV2 AH) 的分类地位, 克隆了该分离物的全基因组序列, 分析了其基因组特征 结果表明,BBWV2 AH RNA1 全长为 5944bp (GenBank 登录号 : KY606992), 含有 1 个 ORF;BBWV2 AH RNA2 全长 3587bp(GenBank 登录号 :KY606993), 含有 1 个 ORF 全序列核苷酸和氨基酸相似性分析显示,BBWV2 AH RNA1 与 BBWV2 其他分离物的核苷酸 氨基酸相似性分别为 78.4%~96% 和 87.1%~99%;BBWV2 AH RNA2 与 BBWV2 其他分离物的核苷酸 氨基酸相似性分别为 76.8% ~95.5% 和 88.2%~98.3% 全基因组核苷酸序列系统发育分析显示,BBWV2 AH RNA1 与中国的 BBWV2 Hu nanrna1 的亲缘关系最近, 而 BBWV2 AH RNA2 与韩国的多个分离物聚集在一起, 再与中国的分离物 BBWV2 B935 形成一个分支 关键词蚕豆萎蔫病毒 2 号 ; 安徽分离物 ; 基因组 ; 序列分析 中图分类号 : S 文献标识码 : A 犇犗犐 : /j.zwbh 犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳犮狅犿狆犾犲狋犲犵犲狀狅犿犻犮狊犲狇狌犲狀犮犲狅犳犅狉狅犪犱犫犲犪狀狑犻犾狋狏犻狉狌狊 2 犃狀犺狌犻犻狊狅犾犪狋犲 犢犃犖犇犪狀犽犪狀 1, 犣犎犈犖犌 2 犎狅狀犵狔犻狀犵, 犣犎犃犖犌犎犪犻狊犺犪狀 1, 犛犎犈犖犢犪狀 1, 犌犝犑犻犪狀犵狋犪狅 1, 1 犣犎犃犖犌犇狅狀犵犳犪狀犵, 2 犢犃犖犉犲犻 (1. 犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳犘犾犪狀狋犘狉狅狋犲犮狋犻狅狀犪狀犱犃犵狉狅 犘狉狅犱狌犮狋狊犛犪犳犲狋狔, 犃狀犺狌犻犃犮犪犱犲犿狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊, 犎犲犳犲犻 , 犆犺犻狀犪 ; 2. 犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳犞犻狉狅犾狅犵狔犪狀犱犅犻狅狋犲犮犺狀狅犾狅犵狔, 犣犺犲犼犻犪狀犵犃犮犪犱犲犿狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊, 犎犪狀犵狕犺狅狌 , 犆犺犻狀犪 ) 犃犫狊狋狉犪犮狋犅犅犠犞 2 狑犪狊犱犲狋犲犮狋犲犱犳狉狅犿犫狉狅犪犱犫犲犪狀狆犾犪狀狋狊犻狀犃狀犺狌犻犘狉狅狏犻狀犮犲犫狔犇犃犛 犈犔犐犛犃犪狀犱犚犜 犘犆犚. 犜狅犳狌狉 狋犺犲狉犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狕犲狋犺犲犅犅犠犞 2 犃狀犺狌犻犻狊狅犾犪狋犲 ( 犅犅犠犞 2 犃犎 ), 犮狅犿狆犾犲狋犲狀狌犮犾犲狅狋犻犱犲狊犲狇狌犲狀犮犲狅犳犅犅犠犞 2 犃犎狑犪狊犱犲 狋犲狉犿犻狀犲犱. 犛犲狇狌犲狀犮犲犪狀犪犾狔狊犻狊狊狌犵犵犲狊狋犲犱狋犺犪狋犅犅犠犞 2 犃犎犚犖犃 1 狑犪狊犮狅犿狆狉犻狊犲犱狅犳 5944 狀狌犮犾犲狅狋犻犱犲狊, 犲狀犮狅犱犻狀犵狅狀犲犗犚犉 ( 犌犲狀犅犪狀犽犪犮犮犲狊犻狅狀狀狅. 犓犢 ); 犅犅犠犞 2 犃犎犚犖犃 2 狑犪狊犮狅犿狆狉犻狊犲犱狅犳 3587 狀狌犮犾犲狅狋犻犱犲狊, 犪犾狊狅犲狀犮狅犱犻狀犵狅狀犲犗犚犉 ( 犌犲狀犅犪狀犽犪犮犮犲狊犻狅狀狀狅. 犓犢 ). 犜犺犲犮狅犿狆犪狉犻狊狅狀狅犳狀狌犮犾犲狅狋犻犱犲狊犲狇狌犲狀犮犲狊狊狌犵犵犲狊狋犲犱狋犺犪狋犚犖犃 1 犪狀犱犚犖犃 2 狅犳犅犅犠犞 2 犃犎狊犺犪狉犲犱 78.4%-96% 犪狀犱 76.8%-95.5% 狀狌犮犾犲狅狋犻犱犲狊犲狇狌犲狀犮犲犻犱犲狀狋犻狋狔狑犻狋犺狋犺狅狊犲狅犳狅狋犺犲狉犅犅犠犞 2 犻狊狅犾犪狋犲狊, 狉犲狊狆犲犮狋犻狏犲犾狔. 犉狌狉狋犺犲狉犿狅狉犲, 狋犺犲犮狅犿狆犪狉犻狊狅狀狅犳犪犿犻狀狅犪犮犻犱狊犲狇狌犲狀犮犲狊狊狌犵犵犲狊狋犲犱狋犺犪狋犚犖犃 1 犪狀犱犚犖犃 2 狅犳犅犅犠犞 2 犃犎狊犺犪狉犲犱 87.1%-99% 犪狀犱 88.2%-98.3% 犪犿犻狀狅犪犮犻犱狊犲狇狌犲狀犮犲犻犱犲狀狋犻狋狔狑犻狋犺狋犺狅狊犲狅犳狅狋犺犲狉犅犅犠犞 2 犻狊狅犾犪狋犲狊, 狉犲狊狆犲犮狋犻狏犲犾狔. 犘犺狔犾狅犵犲狀犲狋犻犮犪狀犪犾狔狊犻狊犫犪狊犲犱狅狀狀狌犮犾犲狅狋犻犱犲狊犲狇狌犲狀犮犲狊狊犺狅狑犲犱狋犺犪狋犚犖犃 1 狅犳犅犅犠犞 2 犃犎犻狊狅犾犪狋犲狑犪狊犿狅狊狋犮犾狅狊犲犾狔狉犲犾犪狋犲犱狋狅犅犅犠犞 2 犎狌狀犪狀犻狊狅犾犪狋犲, 狑犺犻犾犲犚犖犃 2 狅犳犅犅犠犞 2 犃犎犳狅狉犿犲犱犪狀犻狀犱犲狆犲狀犱 犲狀狋犫狉犪狀犮犺狑犻狋犺狊犲狏犲狉犪犾犓狅狉犲犪狀犻狊狅犾犪狋犲狊, 犪狀犱狑犪狊狋犺犲狀犮犾狅狊犲犾狔狉犲犾犪狋犲犱狋狅犅犅犠犞 2 犅 935 犳狉狅犿犆犺犻狀犪. 犓犲狔狑狅狉犱狊犅狉狅犪犱犫犲犪狀狑犻犾狋狏犻狉狌狊 2; 犃狀犺狌犻犻狊狅犾犪狋犲 ; 犮狅犿狆犾犲狋犲犵犲狀狅犿犲 ; 狊犲狇狌犲狀犮犲犪狀犪犾狔狊犻狊 蚕豆是我国重要的经济作物, 据 FAO 统计, 我国 2014 年蚕豆收获面积为 92.5 万 hm 2, 总产量为 万 t, 是世界蚕豆生产第一大国, 产量占世界蚕豆总产量的 36.7% [1] 蚕豆萎蔫病毒犅狉狅犪犱 收稿日期 : 修订日期 : 基金项目 : 公益性行业 ( 农业 ) 科研专项 ( ); 安徽省农业科学院学科建设项目 (17A1125); 安徽省蔬菜产业技术体系 通信作者 E mail:dfzhang2002@163.com;fei.yan@mail.zaas.ac.cn
2 68 犫犲犪狀狑犻犾狋狏犻狉狌狊 (BBWV) 是危害蚕豆的主要病毒, 该病毒为豇豆花叶病毒科犆狅犿狅狏犻狉犻犱犪犲蚕豆病毒属 犉犪犫犪狏犻狉狌狊的典型种, 其基因组由 2 条单链 RNA 分子组成, 分别是 6.0kb 的 RNA1 和 3.6kb 的 RNA2 BBWV 有 2 种血清型, 依据血清型差异将其区分为 2 个种, 即 BBWV1 和 BBWV2 [2] 我国尚未见到 BBWV1 发生报道, 而 BBWV2 则普遍发生 BBWV2 通过汁液摩擦或蚜虫以非持 [34] 久性方式传播, 不仅能侵染豆类作物 蔬菜 烟 [57] 草 花卉和中草药, 还能侵染葡萄等多种木本植物, 引起花叶 矮化 萎蔫和植株枯死, 造成严重危 [8] [9] 害 周雪平等测定了 BBWV2 中国分离物 (B935) 的全基因序列, 并对其基因表达及蛋白功能进行了 [10] 深入分析 牛颜冰等对山西太谷范村蔬菜种植基地的青椒病害进行调查, 明确青椒病毒病病原为 BBWV2, 并获得 BBWV2 青椒分离物 (BBWV2 Ca) [11] 的基因组全序列 王晓燕完成侵染一串红的 BB WV2 分离物 S4 的分子鉴定和基因组测定, 明确其与已报道的 BBWV2 辣椒分离物 XJP1 1 和番茄分离物 XJ14 3a 的序列差异 本研究对侵染安徽蚕豆的病毒分离物 BBWV2 进行了鉴定, 报道了 BB WV2 安徽蚕豆分离物 (BBWV2 AH) 的基因组全序 2018 列, 并与已报道的 BBWV2 分离物进行系统进化关系分析, 为研究 BBWV2 的基因遗传和变异提供理论依据 1 材料与方法 1.1 材料病毒病样 :2016 年 3 月, 蚕豆病样采集于安徽省长丰县岗集镇安徽省农业科学院岗集试验基地, 保存于 -70 冰箱中备用 主要试剂 :MiniBESTPlantRNA Extraction Kit 和 PrimeScript TM OneStep RT PCR Kit 购自 TaKaRa 公司, 克隆载体 pucm T 和琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒等购自上海生工生物工程有限公司, 蚕豆萎蔫病毒检测试剂盒 (DAS ELISA) 购自美国 Agdia 公司 引物 : 用于 BBWV2 AH 全基因组序列扩增的 10 对引物 ( 表 1) 参考牛颜冰等 [7] 和 Hae Ryun Kwa [1213] 的报道 引物委托生工生物工程 ( 上海 ) 股份有限公司合成 病毒 RNA: 使用 MiniBEST PlantRNA Ex tractionkit 提取 100mg 蚕豆叶片的总 RNA, 保存于 -80 备用 表 1 犅犅犠犞 2 犃犎基因组序列扩增引物 犜犪犫犾犲 1 犘狉犻犿犲狉狊犳狅狉犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犅犅犠犞 2 犃犎犵犲狀狅犿犲狊犲狇狌犲狀犮犲引物 Primer 引物序列 (5 3 )Primersequence 位置 Position BBWV2LCP F BBWV2LCP R GGCTTGATGGAGGAAGATG TTGACCAAGCATGTACCTC BBWV21 1u BBWV21 1r AAACAAACAGCTTTCGTTCCG CTGAAATAGCTGCCATAGCAG BBWV21 2f BBWV21 2r TTTGCAGCGTGGATGCC CTTGTAGCCTGACCAAAAAGG RNA 1 BBWV2(RNA1) F2 BBWV2(RNA1) R2 BBWV2(RNA1) F3 BBWV2(RNA1) R3 SGCAGATTGGTTATSWGAR ACCGTGAGRCCCACWAR MGRCGAAGRCACGCAGTRRT AAGCACACTTGTGTYCTMACAT BBWV2(RNA1) F4 BBWV2(RNA1) R4 CAAAGTGATRTKCCTAAYC CCRTCAAAYCTGCTGTAA BBWV2(RNA1) F5 BBWV2(RNA1) R5 CGSCTWGATCGTGGTCC TTCCCTCACTACTGAAATTTACTC BBWV2(RNA2) 1F BBWV2(RNA2) 1R CAAACAGCTTTCGTTCCGAA AAGCCATCTGCCACCAATTC RNA 2 BBWV2(RNA2) 2F BBWV2(RNA2) 1d BBWV2(RNA2) 2u BBWV2(RNA2) 2r GCCATGTCAGGTGCTGGA CGCATRGTYTCYGTRGCWGA TACAAYTTRCCTGGRCCTAGC CATGTTCCCAACCTTTTCAATGT BBWV2(RNA2) 3u BBWV2(RNA2) 3d ATTYTRGATTTTACYCTYATGAG AGGTCATGGAACCCATTTTAATGG
3 44 卷第 1 期严丹侃等 : 蚕豆萎蔫病毒 2 号安徽分离物全基因组序列测定与分析 方法蚕豆萎蔫病毒检测试剂盒 (DAS ELISA) 检测参照说明书进行 BBWV2 AH 全基因组序列的 RT PCR 扩增 : 以 BBWV2 AH 侵染发病的蚕豆叶片组织总 RNA 测序, 序列比对结果显示为蚕豆萎蔫病毒 2 号外壳蛋白大亚基基因 (LCP) 为模板, 按照 PrimeScript TM OneStepRT PCR Kit 说明书, 以蚕豆萎蔫病毒外壳蛋白大亚基基因引物和覆盖 BBWV2 全基因组序列的 RNA1 的 6 对引物和 RNA2 的 4 对引物进行 PCR 扩增 ( 表 1) 在 1 TAE 电泳缓冲液中, 经 1% 琼脂糖电泳分离 PCR 产物 BBWV2 AH 全基因组序列的克隆和测序 : 使用 UNIQ 10 柱式 DNA 胶回收试剂盒回收 PCR 产物并纯化, 再与 pucm T 载体连接, 转化入大肠杆菌 DH5α 后培养, 每个片段选取多个克隆进行鉴定, 将阳性克隆委托生工生物工程 ( 上海 ) 股份有限公司测序, 每个片段通过比对选择 3 个测序结果相同的序列作为最终测序结果, 拼接测序结果, 获得 BB WV2 AH 全基因组序列 BBWV2 AH 全基因组序列分析 : 从 GenBank 中获得 BBWV2 其他 39 个分离物全基因组序列, 以同属的广藿香轻型花叶病毒犘犪狋犮犺狅狌犾犻犿犻犾犱犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊 (PatMMV) [1415] 和蚕豆萎蔫病毒 1 号犅狉狅犪犱犫犲犪狀狑犻犾狋狏犻狉狌狊 1(BBWV1) [16] 为外群, 根据其基因组 RNA1 和 RNA2 序列, 使用 DNAstar 软件中的 MegAlign 进行开放阅读框及非编码区序列比对分析, 使用 MEGA6.0 [17] 进行系统发育树分析, 采用邻位相接聚类分析法分别构建系统发育树, 用 1000 次重复的自展检验评价系统发育树拓扑结构的可靠性 2 结果与分析 2.1 蚕豆萎蔫病毒及其外壳蛋白大亚基基因 ( 犔犆犘 ) 的检测 使用蚕豆萎蔫病毒检测试剂盒 (DAS ELISA) 对采集自安徽的蚕豆病株叶片和健康叶片进行检测 病株叶片检测结果呈现黄色, 为阳性, 表明其中含有蚕豆萎蔫病毒 ; 而健康叶片检测结果为透明, 为阴性, 表明不含蚕豆萎蔫病毒 使用 BBWV2 的外壳蛋白大亚基基因 (largecoatprotein,lcp) 引物 BBWV2LCP F 和 BBWV2LCP R 从蚕豆病株叶片中可扩增出约 1200bp 的条带, 而健康蚕豆叶片未扩增出条带 ( 图 1), 对扩增得到的条带进行克隆后 图 1 犅犅犠犞 2 特异性引物犚犜 犘犆犚检测 犉犻犵.1 犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犅犅犠犞 2 狌狊犻狀犵狊狆犲犮犻犪犾狆狉犻犿犲狉狊犫狔犚犜 犘犆犚 2.2 犅犅犠犞 2 犃犎基因组全序列的克隆与测定 BBWV2 AH RNA1 的克隆为明确 BBWV2 安徽分离物 BBWV2 AH 的分类地位, 以提取的蚕豆病株叶片 RNA 为模板, 分别以 BBWV21 1u/BBWV21 1r BBWV21 2f/BBWV21 2r BBWV2(RNA1) F2/BBWV2(RNA1) R2 BBWV2 (RNA1) F3/BBWV2(RNA1) R3 BBWV2(RNA1) F4/BBWV2(RNA1) R4 和 BBWV2(RNA1) F5/BB WV2(RNA1) R5 为引物进行 BBWV2 AH RNA1 克隆 对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳, 分别得到大小为 bp 和 1767bp 的目的片段 ( 图 2), 测序后进行序列拼接, 获得 BBWV2 AH RNA1 全长为 5944bp, 含有 1 个 ORF, 始于 216bp, 终止于 5828bp, 编码 1870 个氨基酸 图 2 犅犅犠犞 2 犃犎犚犖犃 1 基因组 6 个片段的扩增结果 犉犻犵.2 犃犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀狉犲狊狌犾狋狊狅犳狊犻狓犳狉犪犵犿犲狀狋狊狅犳犅犅犠犞 2 犃犎犚犖犃 1 犵犲狀狅犿犲
4 BBWV2 AH RNA2 的克隆以蚕豆病株叶片总 RNA 为模板, 分别以 BBWV2 (RNA2) 1F/BBWV2(RNA2) 1R BBWV2(RNA2) 2F/BBWV2(RNA2) 1d BBWV2(RNA2) 2u/BBWV2 (RNA2) 2r 和 BBWV2(RNA2) 3u/BBWV2(RNA2) 3d 为引物进行 PCR 扩增 扩增产物经 1% 琼脂糖凝胶电泳检测分别得到大小为 bp 和 1136 bp 的目的片段 ( 图 3), 测序后序列拼接分析表明 BBWV2 AH RNA2 全长 3587bp, 含有 1 个 ORF, 始于 209bp, 终止于 3406bp, 编码 1065 个氨基酸 图 3 犅犅犠犞 2 犃犎犚犖犃 2 全基因组 4 个片段的扩增结果 犉犻犵.3 犃犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀狉犲狊狌犾狋狊狅犳犳狅狌狉犳狉犪犵犿犲狀狋狊狅犳犅犅犠犞 2 犃犎犚犖犃 2 犵犲狀狅犿犲 犅犅犠犞 2 犃犎分离物基因组序列分析利用 DNAStar 软件对 BBWV2 AHRNA1(KY60692) 全序列与来自韩国 中国 日本 新加坡和菲律宾的 39 个 BBWV 分离物进行核苷酸序列 氨基酸序列同源性分析 BBWV2 AH RNA1 与 BBWV2 其他分离物核苷酸同源性为 78.4%~96%, 氨基酸同源性为 87.1%~99% 与来自中国湖南的分离物 BB WV2 HunanRNA1(KJ ) 核苷酸 氨基酸同源性均为最高 ; 与外群 PatMMV Philippines 分离物 RNA1(NC003975) 核苷酸 氨基酸同源性为 89.3% 和 95.7%; 与 BBWV1 Ben 分离物 RNA1(AY781171) 核苷酸 氨基酸同源性分别为 64.4% 和 60.6%( 表 2) 将 BBWV2 AH RNA2(KY606993) 与来自中国 韩国 日本 新加坡和菲律宾的 18 种分离物进行核苷酸序列 氨基酸序列同源性分析 BBWV2 AH RNA2 与 BBWV2 其他分离物核苷酸同源性为 76.8% ~95.5% 氨基酸同源性为 88.2%~98.3% 与韩国 BBWV2 RP4 分离物 RNA2 (JX ) 核苷酸同源性最高 与中国分离物 BBWV2 B935RNA2 (AJ132844) 和韩国分离物 BBWV2 RP5 RNA2 (JX ) 氨基酸同源性最高 ; 与外群 PatM MV Philippines 分离物的 RNA2(NC003974) 核苷酸 氨基酸同源性为 83.9% 和 91.9%; 与 BBWV1 Ben 分离物 RNA2(AY781172) 的核苷酸 氨基酸同源性分别为 56.2% 和 58.3%( 表 2) 分离物 Isolate 表 2 犅犅犠犞 2 犃犎与其他相关分离物核苷酸和氨基酸序列相似性比对 犜犪犫犾犲 2 犖狌犮犾犲狅狋犻犱犲犪狀犱犪犿犻狀狅犪犮犻犱狊犲狇狌犲狀犮犲犻犱犲狀狋犻狋犻犲狊犫犲狋狑犲犲狀犅犅犠犞 2 犃犎犪狀犱狅狋犺犲狉狉犲犾犪狋犲犱犻狊狅犾犪狋犲狊 寄主 Host 国家 Country RNA1 登录号 RNA1 accessionno. 核苷酸同源性 /% Nucleotide RNA2 登录号 核苷酸同源性 /% RNA2 Nucleotide accessionno. MB7 犞犻犮犻犪犳犪犫犪 日本 AB AB IP 犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿 日本 AB AB IA 犌犲狀狋犻犪狀犪 spp. 日本 AB AB K 犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿 韩国 AF AF B935 犞犻犮犻犪犳犪犫犪 中国 AF AJ XJ14 3 犔狔犮狅狆犲狉狊犻犮狅狀犲狊犮狌犾犲狀狋狌犿 中国 FN HQ RP1 犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿 韩国 JX JX RP2 犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿 韩国 JX JX RP3 犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿 韩国 JX JX RP4 犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿 韩国 JX JX RP5 犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿 韩国 JX JX RP6 犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿 韩国 JX JX RP7 犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿 韩国 JX JX BB2 犞犻犮犻犪犳犪犫犪 韩国 KC KC BB5 犞犻犮犻犪犳犪犫犪 韩国 KC KC BB9 犞犻犮犻犪犳犪犫犪 韩国 KC KC GP2 犆. 犪狀狀狌狌犿 var. 犵狌犾狅狊狌犿 韩国 KC KC GP4 犆. 犪狀狀狌狌犿 var. 犵狌犾狅狊狌犿 韩国 KC KC GP5 犆. 犪狀狀狌狌犿 var. 犵狌犾狅狊狌犿 韩国 KC KC P2 犘犻狊狌犿狊犪狋犻狏狌犿 韩国 KC KC P3 犘犻狊狌犿狊犪狋犻狏狌犿 韩国 KC KC PAP1 犆. 犪狀狀狌狌犿 var. 犵狌犾狅狊狌犿 韩国 KC KC PAP2 犆. 犪狀狀狌狌犿 var. 犵狌犾狅狊狌犿 韩国 KC KC
5 44 卷第 1 期严丹侃等 : 蚕豆萎蔫病毒 2 号安徽分离物全基因组序列测定与分析 71 分离物 Isolate 寄主 Host 国家 Country RNA1 登录号 RNA1 accessionno. 续表 2 犜犪犫犾犲 2( 犆狅狀狋犻狀狌犲犱 ) 核苷酸同源性 /% Nucleotide RNA2 登录号 RNA2 accessionno. 核苷酸同源性 /% Nucleotide PAP3 犆. 犪狀狀狌狌犿 var. 犵狌犾狅狊狌犿 韩国 KC KC SP1 犛狆犻狀犪犮犻犪狅犾犲狉犪犮犲犪 韩国 KC KC SP2 犛狆犻狀犪犮犻犪狅犾犲狉犪犮犲犪 韩国 KC KC SP 犛狆犻狀犪犮犻犪狅犾犲狉犪犮犲犪 韩国 KC KC XJP1 1 Tomato 中国 KC HQ Ca 犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿 中国 KF KF SG1 犇犻狅狊犮狅狉犲犪狅狆狆狅狊犻狋犪 中国 KJ KJ hunan Chili 中国 KJ KJ LS2 犔犲狅狀狌狉狌狊狊犻犫犻狉犻犮狌狊 韩国 KM KM DO 犇犻狅狊犮狅狉犲犪狅狆狆狅狊犻狋犪 韩国 KT KT RP1 犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿 韩国 KT KT BBWV BRI 犇犻狅狊犮狅狉犲犪狅狆狆狅狊犻狋犻犳狅犾犻犪 韩国 KU KU SN 犌狔狀狌狉犪狆狉狅犮狌犿犫犲狀狊 韩国 KX KX ME 犕犲犵犪狊犽犲狆犪狊犿犪犲狉狔狋犺狉狅犮犺犾犪犿狔狊 新加坡 NC NC PatMMVa 犘狅犵狅狊狋犲犿狅狀狆犪狋犮犺狅狌犾犻 日本 NC NC BBWV1 犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿 西班牙 AY AY 图 4 基于犅犅犠犞 2 犃犎犚犖犃 1 全长基因组序列的犅犅犠犞 2 分离物系统进化关系 犉犻犵.4 犘犺狔犾狅犵犲狀犲狋犻犮狉犲犾犪狋犻狅狀狊犺犻狆狊狅犳犅犅犠犞 2 犃犎犚犖犃 1 狑犻狋犺狅狋犺犲狉犻狊狅犾犪狋犲狊犫犪狊犲犱狅狀犵犲狀狅犿犲狊犲狇狌犲狀犮犲狊
6 犅犅犠犞 2 犃犎与其他分离物系统进化分析为研究 BBWV2 AH 的起源与进化关系, 以同属的 BBWV1 Ben 和 PatMMV Philippines 为外群, 分别构建该分离物与已报道的 BBWV2 分离物的 RNA1 和 RNA2 核苷酸序列系统进化树 ( 图 4~5) 从进化树上可以看出,BBWV2 AH RNA1 与中国的 BBWV2 Hunan 的亲缘关系最近, 并与中国的分离物 BBWV2 B935 BBWV2 SG1 BBWV2 XJP1 1 BBWV2 Ca 和 BBWV2 XJ14 3, 韩国的分离物 BB WV2 LS2 BBWV2 DO BBWV2 BBWV BRI BB WV2 SN BBWV2 K BBWV2 RP3 BBWV2 BB5 BBWV2 P2 BBWV2 P3 和日本的分离物 BBWV2 MB7 BBWV2 IA 聚集成一个大支 而韩国的其他分离物和新加坡的 BBWV2 ME 分离物成一大支 以上两支与西班牙的 BBWV1 Ben 分离物亲缘关系较远 ( 图 4) 图 5 基于犅犅犠犞 2 犃犎犚犖犃 2 全长基因组序列的犅犅犠犞 2 分离物系统进化关系 犉犻犵.5 犘犺狔犾狅犵犲狀犲狋犻犮狉犲犾犪狋犻狅狀狊犺犻狆狊狅犳犅犅犠犞 2 犃犎犚犖犃 2 狑犻狋犺狅狋犺犲狉犻狊狅犾犪狋犲狊犫犪狊犲犱狅狀犵犲狀狅犿犲狊犲狇狌犲狀犮犲狊 从构建的 BBWV2RNA2 系统进化树 ( 图 5) 可以看出 BBWV2 AH 分离物与韩国的分离物 BB WV2 RP1(JX183222) BBWV2 RP1(KT380023) BBWV2 RP2 BBWV2 GP2 BBWV2 GP4 BB WV2 GP5 BBWV2 RP5 BBWV2 SP1 BBWV2 SP2 BBWV2 RP6 BBWV2 BB9 BBWV2 RP3 BB WV2 RP4 BBWV2 BB5 BBWV2 PAP3 BBWV2 PAP2 BBWV2 PAP1 BBWV2 P2 BBWV2 P3 BBWV2 SP 以及中国的分离物 BBWV2 B935 形成一个独立分支, 亲缘关系最近 该分支再与韩国的分离物 BBWV2 K BBWV2 SN BBWV2 DO BB WV2 BBWV BRI, 中国的分离物 BBWV2 XJ14 3
7 44 卷第 1 期严丹侃等 : 蚕豆萎蔫病毒 2 号安徽分离物全基因组序列测定与分析 73 BBWV2 Hunan BBWV2 SG1 和日本的分离物 BB WV2 IA BBWV2 MB7 形成一个大支 其他的分离物形成另一大支, 与 BBWV2 AH 亲缘关系相对较远 以上两个分支均与西班牙的 BBWV1 Ben 分离物亲缘关系最远 3 讨论 BBWV2 寄主范围广, 在蚕豆 辣椒 番茄等上均有发生, 是我国豆科作物和一些重要蔬菜作物上的主要病毒病 蚕豆被病毒侵染后往往出现花叶 矮化 萎蔫直至枯死等症状, 导致生长受阻, 产量和品质下降 作者通过酶联免疫和外壳蛋白大亚基基因的 RT PCR 法对田间具有明显矮缩 萎蔫症状的蚕豆进行了检测, 发现了蚕豆萎蔫病毒 2 号存在, 并克隆 测定了 BBWV2 安徽分离物 (BBWV2 AH) 全基因组序列 为进一步明确 BBWV2 AH 的分类地位和系统发育关系, 将 BBWV2 AH RNA1 与 39 个不同来源的 BBWV2 进行核苷酸序列 氨基酸序列同源性比较分析 结果表明, 我们从蚕豆上鉴定的 BBWV2 AH 分离物的 RNA1 与湖南的辣椒分离物 BBWV2 Hunan 核苷酸 氨基酸同源性均为最高, 而 RNA2 则与韩国辣椒分离物 BBWV2 RP4 的核苷酸同源性最高 与中国蚕豆分离物 BBWV2 B935 和韩国辣椒分离物 BBWV2 RP5 的氨基酸同源性最高 进一步将获得的安徽分离物 BBWV2 AH 全基因组序列和 39 个蚕豆病毒属分离物进行系统发育分析, 发现 BBWV2 AH RNA1 与中国的 BBWV2 Hunan RNA1 的亲缘关系最近, 而 BBWV2 AH RNA2 与韩国的多个分离物聚集在一起, 再与中国的分离物 BBWV2 B935 形成一个分支, 与序列同源性分析结果基本一致 BBWV 分离物 RNA1 和 RNA2 在系统进化关系及聚类分析中表现的差异是否与该病毒在田间容易通过蚜虫在不同种类的寄主植物间传播相关? 该病毒在长期的进化过程中是否通过重组或重排以适应多种不同寄主植物并扩展其寄主范围等问题还需要进一步研究 本研究测定了 BBWV2 安徽分离物 (BBWV2 AH) 全基因组序列, 分析了其与已报道的 BBWV2 其他分离物的序列差异和系统发育关系, 发现了 BB WV2RNA1 和 RNA2 与其他分离物聚类分析时的差异, 为揭示该病毒的基因组进化方式提供了信息 参考文献 [1] 周俊玲, 张蕙杰. 世界蚕豆生产及贸易形势分析 [J]. 世界农业,2016(11): [2] MURPHYFA,FAUQUETCM,BISHOPDHL,etal.Vi rustaxonomy:classificationandnomenclatureofviruses.sixth reportoftheinternationalcommiteeontaxonomyofviruses [M].AcademicPress,1999. [3] 周雪平, 余永杰, 刘勇, 等. 侵染豌豆和蚕豆的蚕豆萎蔫病毒研究 [J]. 浙江农业大学学报,1995,21(3): [4] 戚益军, 周雪平, 李德葆. 侵染大豆的蚕豆萎蔫病毒研究 [J]. 应用与环境生物学报,1999,5(1): [5] 周颖, 张瑞, 郭颂, 等. 北京地区地黄花叶病病原的分子鉴定 [J]. 植物保护学报,2010,37(5): [6] 匡云波, 陈满足, 陆伊荣, 等. 太子参芜菁花叶病毒和蚕豆萎蔫病毒的双重 RT PCR 检测 [J]. 园艺学报,2017,44(4): [7] 寇丽莎, 赵慧琪, 王德富, 等. 药用植物柴胡病毒病病原物的分子鉴定 [J]. 病毒学报,2017,33(4): [8] EDWARDSONJR,CHRISTIERG.Fabaviruses[M] CRC HandbookofvirusesinfectionlegumesBocaRaton,FL:CRC Press,1991: [9] 周雪平, 戚益军, 李凡, 等. 蚕豆萎蔫病毒 2 中国分离物全基因组结构及可能的基因表达方式 [J]. 生物物理与生物化学学报,2001,33(1): [10] 牛颜冰, 赵欣, 赵慧琪, 等. 蚕豆萎蔫病毒 2 号山西分离株的全基因组序列测定与分析 [J]. 中国生物化学与分子生物学报,2014,30(9): [11] 王晓燕. 侵染一串红的蚕豆萎蔫病毒 2 号的分子鉴定 [D]. 石河子 : 石河子大学,2014. [12]KWAK H R,KIM M K,NAM M,etal.Geneticcomposi tionsof 犅狉狅犪犱犫犲犪狀狑犻犾狋狏犻狉狌狊 2infectingredpepperinKorea [J].PlantPathologyJournal,2013,29(3):274. [13]KWAK HR,KIM MK,LEEYJ,etal.Molecularcharacter izationandvariationofthe 犅狉狅犪犱犫犲犪狀狑犻犾狋狏犻狉狌狊 2isolates basedonanalysesofcompletegenomesequences[j].plantpa thologyjournal,2013,29(4): [14]IKEGAMI M,KAWASHIMA H,NATSUAKIT,etal. Completenucleotidesequenceofthegenomeorganizationof RNA2of 犘犪狋犮犺狅狌犾犻犿犻犾犱犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊,anewfabavirus[J]. ArchivesofVirology,1998,143: [15]IKEGAMIM,ONOBORIY,SUGIMURA N,etal.Complete nucleotidesequenceandthegenomeorganizationof 犘犪狋犮犺狅狌犾犻犿犻犾犱犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊 RNA1[J].Intervirology,2001,44: [16]KOBAYASHIY O,KOBAYASHIA,NAKANO M,etal. Analysisofgeneticrelationsbetween 犅狉狅犪犱犫犲犪狀狑犻犾狋狏犻狉狌狊 1 and 犅狉狅犪犱犫犲犪狀狑犻犾狋狏犻狉狌狊 2[J].JournalofGeneralPlantPa thology,2003,69: [17]TAMURAK,STECHERG,PETERSOND,etal.MEGA6: Molecularevolutionarygeneticsanalysisversion6.0 [J].Mo lecularbiologyandevolution,2003,30: ( 责任编辑 : 田?)
( ( (CIP ( /. 5 :,2014.1 ( ISBN978 7 5628 3719 0 Ⅰ.1... Ⅱ.1... Ⅲ.1 Ⅳ.1H314 CIP (2013263740 ( ( / / / / / : 130,200237 :(02164250306( (02164252710( :(02164252707 : 狆狉犲狊. 犲犮狌狊狋. 犲犱狌. 犮狀 / /787 犿犿 1092 犿犿
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西班牙文学简史
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前 言 本标准的附录 A 为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准由中华人民共和国上海出入境检验检疫局负责起草 本标准主要起草人 : 倪昕路 韩丽 周瑶 郭德华 朱坚 本标准系首次发布的检验检疫行业标准 Ⅰ
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 2326 2009 食品及油脂中反式脂肪酸含量的检测傅立叶变换红外光谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋狉犪狀狊犳犪狋狔犪犮犻犱狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犪狀犱狅犻犾狊 犉犜犐犚犿犲狋犺狅犱 2009 07 07 发布 2010 01 16 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 前 言 本标准的附录 A 为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口
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163 ( ) Vol.16 No.3 2016 5 JournalofNorthwestA&FUniversity(SocialScienceEdition) May 2016 : (, 401120)! ":! " # $ % &,' ( ) * +, -./ 01 + &, & 23 45,-+67 89:;,-,-,; < ) * = >? @ A " 6 7 B C D E + F,GH8A"67IJ,-
前 言 本标准的附录 A 附录 B 和附录 C 为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位 : 中华人民共和国山西出入境检验检疫局 本标准主要起草人 : 薛平 连庚寅 宋欢 苑利 杜利君 潘雅丽 宋洁 康杰 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准 Ⅰ
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 2115 2008 进出口食品和饲料中总氮及粗蛋白的检测方法杜马斯燃烧法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲狋狅狋犪犾狀犻狋狉狅犵犲狀犮狅狀狋犲狀狋犪狀犱犮犪犾犮狌犾犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犮狉狌犱犲狆狉狅狋犲犻狀犮狅狀狋犲狀狋犻狀犳狅狅犱犪狀犱犳犲犲犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犆狅犿犫狌狊狋犻狅狀犪犮犮狅狉犱犻狀犵狋狅狋犺犲犇狌犿犪狊狆狉犻狀犮犻狆犾犲
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 进出口化妆品中氢溴酸右美沙芬的测定液相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犱犲狓狋狉狅犿犲狋犺狅狉狆犺犪狀犺狔犱狉狅犿犻犱犲犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犔犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔犿
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口化妆品中氢溴酸右美沙芬的测定液相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犱犲狓狋狉狅犿犲狋犺狅狉狆犺犪狀犺狔犱狉狅犿犻犱犲犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犔犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔犿犲狋犺狅犱 2009 02 20 发布 2009 09 01 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 前 言 本标准的附录
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前 言 本标准的附录 A 附录 B 和附录 C 为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位 : 中华人民共和国山西出入境检验检疫局 本标准主要起草人 : 薛平 连庚寅 宋欢 苑利 杜利君 潘雅丽 宋洁 康杰 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准 Ⅰ
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 2115 2008 进出口食品和饲料中总氮及粗蛋白的检测方法杜马斯燃烧法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲狋狅狋犪犾狀犻狋狉狅犵犲狀犮狅狀狋犲狀狋犪狀犱犮犪犾犮狌犾犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犮狉狌犱犲狆狉狅狋犲犻狀犮狅狀狋犲狀狋犻狀犳狅狅犱犪狀犱犳犲犲犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犆狅犿犫狌狊狋犻狅狀犪犮犮狅狉犱犻狀犵狋狅狋犺犲犇狌犿犪狊狆狉犻狀犮犻狆犾犲
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前 言 本标准按照 GB/T 给出的规则起草 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位 : 中华人民共和国山东出入境检验检疫局 中华人民共和国陕西出入境检验检疫局 中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局 本标准主要起草人 : 王建华 汤志旭 孙忠松 王艳丽 王松 李
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 2646 2010 进出口食品中吡螨胺残留量检测方法气相色谱 质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犲犫狌犳犲狀狆狔狉犪犱狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犌犆 犕犛犿犲狋犺狅犱 2010 11 01 发布 2011 05 01 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 前 言 本标准按照 GB/T1.1
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BuletinofSoiland WaterConservation Vol.38,No.5 Oct.,2018 >O ) ( = X 8 /,6 + V -. 1,5 2,3,# 3 2, 2,8 4 (1. Z[ G, O ;2. Z[ (, O ;
385 201810 BuletinofSoiland WaterConservation Vol.38,No.5 Oct.,2018 >O ) ( =X 8 /,6 +V -. 1,5 2,3,# 3 2, 2,8 4 (1.Z[ G, O 730070;2.Z[ (, O 730070; 3.< CD, O 730000;4. Z( L) 0 G, L 430074). /:[]5 T ' ]!,^
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前 言 本标准按照 GB/T 给出的规则起草 本标准代替 SN 出口肉及肉制品中甲萘威残留量检验方法 本标准与 SN 相比, 主要技术变化如下 : 样品净化方法采用全自动凝胶渗透色谱净化方法替代原有的液液分配法 ; 测定采用柱后衍生液相色谱 荧光检
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 0122 2011 代替 SN0122 1992 进出口肉及肉制品中甲萘威残留量检验方法液相色谱 柱后衍生荧光检测法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犮犪狉犫犪狉狔犾狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犿犲犪狋犪狀犱犿犲犪狋狆狉狅犱狌犮狋狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱 犲狓狆狅狉狋 犎犘犔犆 犳犾狌狅狉犲狊犮犲犱犲狋犲犮狋狅狉狑犻狋犺狆狅狊狋犮狅犾狌犿狀犱犲狉犻狏犪狋犻狅狀
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犠狅狉犱狊犪狀犱犛犲狀狋犲狀犮犲狊词汇与句型注 : 带 部分为 三会 内容 ( 会听 会说 会认读 ), 其他为 四会 内容 ( 会听 会说 会认读 会默写 ); 句型中的画线部分为可替换的内容 犱狅犮狋狅狉医生犺犲犪狉狋心脏犺狅狊狆犻狋犪犾医院 犻犾生病的犿犲犱犻犮犻狀犲药狀狌狉狊犲护士 狊犺狅狋
Unit3 WHEN IGROW UP 乐学单元 亲爱的同学们, 每个人都有梦想, 每个人都对未来从事的职业有一种期待, 你梦想的职业是什么呢? 我们常听到的职业有医生 护士 消防员 警察 飞行员和宇航员 那么他们都做哪些具体的工作呢? 你了解吗? 在这个单元, 他们中的一些代表会走近你, 并告诉你他们的日常生活 让我们赶快一起去看看吧 还有, 当你了解他们的具体工作后, 你是否还坚持你的梦想职业,
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前 言 本标准的附录 A 附录 B 和附录 C 均为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位 : 中华人民共和国湖南出入境检验检疫局 本标准主要起草人 : 颜鸿飞 张莹 孙菲 胡宇东 黄志强 付善良 李拥军 王美玲 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准 Ⅰ
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 动物源食品中乙氧喹啉残留量的测定方法高效液相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犲狋犺狅狓狔狇狌犻狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀 犎犘犔犆犿犲狋犺狅犱 2010 03 02 发布 2010 09 16 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 前 言 本标准的附录 A 附录 B 和附录 C 均为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口
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316 201712 JournalofSoiland WaterConservation Vol.31No.6 Dec.,2017 * * /b-; ]^ $ - 1,. / 2,0 1 1, 3, 2 (1.2_8 1 G ; ]" # : X,17 210098; 2.?, - 213300;3.F GD! 9, - F 225007) 01: #$ Q 3 ' ; 45 \, PT ` Q
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中学第二教材：高中语文：选修：语言规范与创新：配套江苏版教材
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前 言 本标准的附录 A 和附录 B 均为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准起草单位 : 中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局 中华人民共和国重庆出入境检验检疫局 中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局 本标准主要起草人 : 刘永 杨长志 王国民 康庆贺 林维宣 李贤良 吴
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口动物源性食品中乌洛托品残留量的检测方法液相色谱 质谱 / 质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狌狉狅狋狉狅狆犻狀犲狉犲狊犻犱狌犲犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳狊狅犳 犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犔犆 犕犛 / 犕犛犿犲狋犺狅犱 2008 11 18 发布 2009 06 01 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 前
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前 言 本标准的附录 A 为规范性附录, 附录 B 和附录 C 为资料性附录 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本标准由中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局 中华人民共和国浙江出入境检验检疫局 中国检验检疫科学研究院 中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局负责起草 本标准主要起草人 : 林维
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口动物源性食品中糖皮质激素类兽药残留量的检测方法液相色谱 质谱 / 质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犵犾狌犮狅犮狅狉狋犻犮狅狊狋犲狉狅犻犱狊狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳狊狅犳 犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犔犆 犕犛 / 犕犛犿犲狋犺狅犱 2008 11 18 发布 2009 06 01 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
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标准分享网 免费下载 中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 进出口动物源食品中 14 种 β 内酰 胺类抗生素残留量检测方法 液相色谱 质谱 / 质谱法 SN/T 中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街 16 号 邮政编码 : 网址 www
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口动物源食品中 14 种 β 内酰胺类抗生素残留量检测方法液相色谱 质谱 / 质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳 14 犫犲狋犪 犾犪犮狋犪犿犪狀狋犻犫犻狅狋犻犮狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犲狓狆狅狉狋犪狀犱犻犿狆狅狉狋 犔犆 犕犛 / 犕犛犿犲狋犺狅犱 2008 04 29 发布 2008 11 01 实施
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批发零售业实用英语对话及词汇手册
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胱抑素 C 水平的测定在 2 型糖尿病肾功能评价中的应用 刘传勇, 古东海, 周丽华, 等 814 临床研究 综 16SrRNAPCR 基因测序鉴定临床标本军团菌 宣瑞红, 王娟, 胡朝晖, 等 816 核酸扩增检测技术在血液筛查中的应用 张健, 谢秀华, 黄呈辉, 等 818 胱抑素 C 测定评价
国际检验医学杂志 INTERNATIONALJOURNALOFLABORATORY MEDICINE 月刊 1980 年 1 月创刊第 31 卷第 8 期 2010 年 8 月 30 日出版 主 主 管 重庆市卫生局 办 重庆市卫生信息中心 ( 重庆市药品集中采购服务中心 ) 编辑 出版 总编 国际检验医学杂志编辑委员会 重庆市卫生信息中心 府伟灵 执行总编 徐永柱 编辑部主任 杨庆华 通讯地址 5
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156 控制算法 ( 即模糊逻辑或神经网络 ) 这两种方式来研 [1] 究泊车. 犑犪犿犻犾设计出一种泊车辅助器 可帮助驾驶员方便安全地泊车 但在实现泊车的全自动方面有待改进. 文献 [2-3] 分别基于模糊逻辑控制进行泊车系统研究 逻辑控制依赖于人的操作知识 因此 [4] 需要大量的泊车实验. 刘
![156 控制算法 ( 即模糊逻辑或神经网络 ) 这两种方式来研 [1] 究泊车. 犑犪犿犻犾设计出一种泊车辅助器 可帮助驾驶员方便安全地泊车 但在实现泊车的全自动方面有待改进. 文献 [2-3] 分别基于模糊逻辑控制进行泊车系统研究 逻辑控制依赖于人的操作知识 因此 [4] 需要大量的泊车实验. 刘](/thumbs/52/29734531.jpg "156 控制算法 ( 即模糊逻辑或神经网络 ) 这两种方式来研 [1] 究泊车. 犑犪犿犻犾设计出一种泊车辅助器 可帮助驾驶员方便安全地泊车 但在实现泊车的全自动方面有待改进. 文献 [2-3] 分别基于模糊逻辑控制进行泊车系统研究 逻辑控制依赖于人的操作知识 因此 [4] 需要大量的泊车实验. 刘")
上海理工大学学报 第 37 卷 第 2 期 犑. 犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔狅犳犛犺犪狀犵犺犪犻犳狅狉犛犮犻犲狀犮犲犪狀犱犜犲犮犺狀狅犾狅犵狔 犞狅犾.37 犖狅.2 2015 文章编号 :1007-6735(2015)02-0155-04 犇犗犐 :10.13255/ 犼. 犮狀犽犻. 犼狌狊狊狋.2015.02.011 基于模糊算法垂直泊车转向控制策略的研究 王友楠 方祖华 孙鍴 王康 徐宏兵 ( 上海师范大学信息与机电工程学院
中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 进出口食品中生物苄呋菊酯 氟丙菊酯 联苯菊酯等 28 种农药残留量的检测方法气相色谱 质谱法 SN/T 中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街 16 号邮政编码 : 网址 电话 :
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖 / 犜 2151 2008 进出口食品中生物苄呋菊酯 氟丙菊酯 联苯菊酯等 28 种农药残留量的检测方法气相色谱 质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狆犲狊狋犻犮犻犱犲狊狉犲狊犻犱狌犲狅犳 28 犽犻狀犱狊狅犳犻狀犮犾狌犱犻狀犵犫犻狅狉犲狊犿犲狋犺狉犻狀 犪犮狉犻狀犪狋犺狉犻狀 犫犻犳犲狀狋犺狉犻狀犻狀犳狅狅犱犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋 犌犪狊犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔
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1320 例血培养结果分析 赵苏瑛, 李岷, 李克涓 1102 综 慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪肝的临床观察 邓建平, 陈云鹏 1104 济南市部分体检人群血尿酸水平的现况分析 杜敏, 尹承华 1106 精神分裂症患者血清中 IL 6 IL 10 与 TNF α 检测的临床意义 陈茜 1108 不同
国际检验医学杂志 INTERNATIONALJOURNALOFLABORATORY MEDICINE 月刊 1980 年 1 月创刊第 31 卷第 10 期 2010 年 10 月 30 日出版 主 主 管 重庆市卫生局 办 重庆市卫生信息中心 ( 重庆市药品集中采购服务中心 ) 编辑 出版 总编 国际检验医学杂志编辑委员会 重庆市卫生信息中心 府伟灵 执行总编 徐永柱 编辑部主任 杨庆华 通讯地址
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中国汉族人群中白色念珠菌的 25SrDNA 基因分型及耐药性分析 刘刚, 卢光 667 糖化血红蛋白及糖化血清蛋白在妊娠糖尿病筛选诊断中的价值评估 易向民, 李庆丰, 郭惠琼 670 糖尿病患者血清 β 羟丁酸与血清酮体粉剂半定量法检测间的关系及价值研究 王传发 673 临床研究 综 亲属肾移植患者
国际检验医学杂志 INTERNATIONALJOURNALOFLABORATORY MEDICINE 月刊 1980 年 1 月创刊第 31 卷第 7 期 2010 年 7 月 30 日出版 主 主 管 重庆市卫生局 办 重庆市卫生信息中心 ( 重庆市药品集中采购服务中心 ) 编辑 出版 总编 国际检验医学杂志编辑委员会 重庆市卫生信息中心 府伟灵 执行总编 徐永柱 编辑部主任 杨庆华 通讯地址 5
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新世纪英语丛书 英语四 六级考试词汇速记 ( 第 4 版 ) 主编刘宇慧陈晓明
新世纪英语丛书 英语四 六级考试词汇速记 ( 第 4 版 ) 主编刘宇慧陈晓明 图书在版编目 (CIP) 数据 英语四 六级考试词汇速记 / 刘宇慧, 陈晓明主编. 4 版. 上海 : 华东理工大学出版社,2014.1 犐犛犅犖 978 7 5628 3704 6 Ⅰ.1 英... Ⅱ.1 刘...2 陈... Ⅲ.1 大学英语水平考试词汇自学参考资料 Ⅳ.1 犎 313 中国版本图书馆犆犐犘数据核字
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第 6期王晓茜等 : 四川省德阳贫困农村糖尿病及代谢综合征的流行病学调查 157 糖尿病是一组以慢性血糖水平增高为主要特征的代谢性疾病, 可严重影响居民的生命健康和生存质量 为了推进中国糖尿病防治工作的进行 促进相关政策的落实 探讨适宜中国农村地区的糖尿病综合防治工作模式, 故对四川省经济相对不发达
实用临床医药杂志 156 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犆犾犻狀犻犮犪犾犕犲犱犻犮犻狀犲犻狀犘狉犪犮狋犻犮犲 2015 年第 19 卷第 6期 调查研究 四川省德阳贫困农村糖尿病及代谢综合征的流行病学调查 王晓茜 1, 鲁丹 1, 李胜勇 2, 周武强 3, 王森 1, 邓清容 1, 魏小燕 1, 刘娅 1 (1. 四川省德阳市人民医院内分泌科, 四川德阳,618000; 2. 四川省中江县人民医院医教科, 四川中江,618100;
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431 0141 ACTAPHOTONICASINICA Vol.43No.1 December014 犱狅犻 :10.3788/gzxb014431.100 ZemaxR 01A56Z.J + ( 8, 1003) :. EFW #'6EI % ;; ; T W # = > ' ^ % ; ;J*W #=>' S66E, 3
综 儿童与成人急性 B 淋巴细胞白血病的免疫分型特点 王雪华, 林少微, 焦晓阳, 等 954 假丝酵母菌对解脲脲原体检测的干扰分析 冯长海, 张莺莺, 康青青, 等 957 泌尿生殖道支原体检测结果及其药敏分析 陈伟红 959 心型脂肪酸结合蛋白在急性冠脉综合征早期诊断与危险分层中的应用探讨 凌侠
国际检验医学杂志 INTERNATIONALJOURNALOFLABORATORY MEDICINE 月刊 1980 年 1 月创刊第 31 卷第 9 期 2010 年 9 月 30 日出版 主 主 管 重庆市卫生局 办 重庆市卫生信息中心 ( 重庆市药品集中采购服务中心 ) 编辑 出版 总编 国际检验医学杂志编辑委员会 重庆市卫生信息中心 府伟灵 执行总编 徐永柱 编辑部主任 杨庆华 通讯地址 5
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1932 19 tionoftheoralcavitytissue. 犓犲狔狑狅狉犱狊 :OpticalCoherenceTomography (OCT);spectral domain;parotidgland;histopathology 1 (Optical Coherence Tomography OCT) [1],,, [2], 20 90,OCT, D.Huang J.G.Fujimoto
2013(5) 谢景欣, 等 : 负压二级生物安全实验室设计关键控制点分析 39 物安全柜可靠性的考虑, 希望室内呈负压洁净状态 目前, 越来越多的单位建造了负压状态的二级生物安全实验室 但由于缺乏相关标准规范, 许多建设与设计单位对负压实验室的设计理念含混不 [12] 清, 致使工程缺陷较多 本文
![2013(5) 谢景欣, 等 : 负压二级生物安全实验室设计关键控制点分析 39 物安全柜可靠性的考虑, 希望室内呈负压洁净状态 目前, 越来越多的单位建造了负压状态的二级生物安全实验室 但由于缺乏相关标准规范, 许多建设与设计单位对负压实验室的设计理念含混不 [12] 清, 致使工程缺陷较多 本文](/thumbs/51/27347415.jpg "2013(5) 谢景欣, 等 : 负压二级生物安全实验室设计关键控制点分析 39 物安全柜可靠性的考虑, 希望室内呈负压洁净状态 目前, 越来越多的单位建造了负压状态的二级生物安全实验室 但由于缺乏相关标准规范, 许多建设与设计单位对负压实验室的设计理念含混不 [12] 清, 致使工程缺陷较多 本文")
38 暖通空调犎犞牔犃犆 2013 年第 43 卷第 5 期科学实验室环境控制 负压二级生物安全实验室设计关键控制点分析 江苏省疾病预防控制中心谢景欣 王欢王建锋杨杰 摘要以两个负压二级生物安全实验室为例, 分析了实验室的功能分区与平面布局 通风空调方式 气流组织 送排风系统等关键控制点的设计 建议核心工作间 ( 动物室 ) 划分相对清洁侧和相对污染侧 ; 设置缓冲间 更衣室和准备间 ; 通风空调采用全空气直流系统
安 徽 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 ２０１６ 年 ３５６ 极 犃犵 犃犵犆犾电极为参比电极 纳米氧化铜 硫堇 玻碳电极为工作电极的三电极体系中进行循环伏安实验 使用钛基纳米氧化铜电极作阳极 恒电流电解浓度为 １０犿犵 犿犔 含有 ０ １犕 硫酸钠的对硝基苯酚溶液 在电 解经过不同时间
第 39 卷 4 期 2016 年 7 月 安徽师范大学学报 ( 自然科学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犃狀犺狌犻犖狅狉犿犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犖犪狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲 ) 犞狅犾.39 犖狅.4 犑狌犾.2016 犇犗犐 :10.14182/ 犑. 犮狀犽犻.1001-2443.2016.04.009 纳米氧化铜对硝基苯酚的电化学氧化及降解作用徐白露, 张唤, 杨周生 ( 安徽师范大学环境科学与工程学院,
宝鸡文理学院学报 ( 自然科学版 ) 征稿细则 (J.BaojiUniv.Arts& Sci.(Nat.Sci.Ed.)) 宝鸡文理学院学报 ( 自然科学版 ) (J.BaojiUniv.Arts & Sci.(Nat.Sci.Ed.)) 是由宝鸡文理学院主办的综合性自然科学学术季刊, 是中国高校特
BAOJIWENLIXUEYUAN XUEBAO ZIRAN KEXUEBAN ISSN10071261 CODENBWZKFL 宝鸡文理学院学报 犑犗犝犚犖犃犔犗犉犅犃犗犑犐犝犖犐犞犈犚犛犐犜犢犗犉犃犚犜犛犃犖犇犛犆犐犈犖犆犈犛 自然科学版 犖犪狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲犈犱犻狋犻狅狀 主管单位 主办单位 陕西省教育厅 宝鸡文理学院 中国高校特色科技期刊中国期刊方阵双效期刊中国核心期刊 ( 遴选 )