1 期王鑫, 耿希刚, 谭云鹤, 等.G CSF 动员干细胞系对大鼠心肌缺血再灌注损伤的早期影响 31 犮狅狀狋狉狅犾犵狉狅狌狆 ( 犘 <0.05)24 犺犪犳狋犲狉狅狆犲狉犪狋犻狅狀, 犪狀犱狋犺犲狊犲狉狌犿犾犲狏犲犾狅犳犞犈犌犉狑犪狊犺犻犵犺犲狉犻狀犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀犵狉狅狌狆狋犺犪狀犻

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1 第 35 卷第 1 期 2014 年 1 月西安交通大学学报 ( 医学版 ) 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犡犻犪狀犑犻犪狅狋狅狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔 ( 犕犲犱犻犮犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊 ) 犞狅犾.35 犖狅.1 犑犪狀.2014 犌犆犛犉动员干细胞系对大鼠心肌缺血再灌注损伤的早期影响王鑫 1,2, 耿希刚 1, 谭云鹤 3, 潘龙毅 2, 徐涛 2, 钟守平 2, 李广顺 2 (1. 西安交通大学医学院第一附属医院心血管外科, 陕西西安 ;2. 西安市中心医院心胸外科, 陕西西安 ;3. 西安市中心医院泌尿外科, 陕西西安 ) 摘要 : 目的探讨粒细胞集落刺激因子 (G CSF) 预处理动员干细胞系对大鼠心肌缺血再灌注损伤的早期影响及其可能机制方法 SD 大鼠 30 只随机分 3 组 :1 假手术组 ;2 对照组 ;3 动员组动员组造模前注射 G CSF1 周后行血清学检测 ;3 组造模后 24h 分别检测心肌酶谱指标 (CK CKMB CTnI), 同时应用 ELISA 法观察血管内皮生长因子 (VEGF) 在术后 24h 的表达 ; 采集各组组织标本分别行组织学检测并运用 RT PCR 法检测各组 CD34 Sca 1 Bcl 2 及 CTnI 的表达最后针对动员组选取 G CSF 注射前造模前及造模后 24h 三个时间点检测 CD34 与 Sca 1 的表达结果经 G CSF 动员后动员组白细胞较其他两组升高 [(14.80±1.21) 10 9 /L (7.45±0.80) 10 9 /L (6.96± 0.89) 10 9 /L, 犘 <0.05); 造模后 24h, 动员组心肌酶谱指标较对照组下降 ( 犘 <0.05); 动员组 VEGF 表达较其他两组升高 [(66.95±8.28)pg/mL (39.45±9.68)pg/mL (47.86±5.45)pg/mL, 犘 <0.05] RT PCR 检测半定量分析结果显示, 动员组 CD34 Bcl 2 较其他两组表达增加 ( 犘 <0.05); 动员组 Sca 1 较假手术组表达增高 ( 犘 <0.05); 动员组与假手术组 CTnI 表达没有统计学差异 ( 犘 =0.37), 但两者较对照组 CTnI 表达降低 ( 犘 <0.05) 动员组在 3 个时间点检测结果显示, 造模前及造模后 24h 的 CD34 及 Sca 1 表达较注射前高 ( 犘 <0.05) 结论 G CSF 预处理可以动员干细胞系, 其对大鼠心肌缺血再灌注损伤的早期有一定的保护作用, 从而改善大鼠的心脏功能关键词 : 粒细胞刺激因子 ; 心肌缺血再灌注 ; 血管内皮生长因子 ; 干细胞中图分类号 :R654.2 文献标志码 :A 文章编号 : (2014) 犇犗犐 : /jdyxb 犈犪狉犾狔犲犳犳犲犮狋狊狅犳狊狋犲犿犮犲犾犾犻狀犲狊犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀狑犻狋犺犌犆犛犉狅狀犿狔狅犮犪狉犱犻犪犾犻狊犮犺犲犿犻犪狉犲狆犲狉犳狌狊犻狅狀犻狀犼狌狉狔犻狀狉犪狋狊 WANG Xin 1,2,GENG Xi gang 1,TAN Yun he 3,PAN Long yi 2, XU Tao 2,ZHONGShou ping 2,LIGuang shun 2 (1.DepartmentofCardiovascularSurgery,theFirstAfiliatedHospital, MedicalSchoolofXi anjiaotonguniversity,xi an710061;2.departmentof Cardio thoracicsurgery,xi ancentralhospital,xi an710003; 3.DepartmentofUrology,Xi ancentralhospital,xi an710003,china) 犃犅犛犜犚犃犆犜 :Objective 犜狅犲狓狆犾狅狉犲犲犪狉犾狔犲犳犳犲犮狋狊犪狀犱狆狅狊犻犫犾犲犿犲犮犺犪狀犻狊犿狅犳狊狋犲犿犮犲犾犾犻狀犲狊犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀狑犻狋犺犵狉犪狀狌犾狅犮狔狋犲犮狅犾狅狀狔狊狋犻犿狌犾犪狋犻狀犵犳犪犮狋狅狉 ( 犌犆犛犉 ) 狅狀犿狔狅犮犪狉犱犻犪犾犻狊犮犺犲犿犻犪狉犲狆犲狉犳狌狊犻狅狀犻狀犼狌狉狔犻狀狉犪狋狊.Methods 犃狋狅狋犪犾狅犳 30 犛狆狉犪犵狌犲犇犪狑犾犲狔狉犪狋狊狑犲狉犲狉犪狀犱狅犿犾狔犱犻狏犻犱犲犱犻狀狋狅狊犺犪犿犵狉狅狌狆, 犮狅狀狋狉狅犾犵狉狅狌狆犪狀犱犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀犵狉狅狌狆. 犛犲狉狅犾狅犵犻犮犪犾狋犲狊狋狑犪狊狆犲狉犳狅狉犿犲犱 7 犱犪犳狋犲狉犌犆犛犉狑犪狊犻狀犼犲犮狋犲犱犻狀犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀犵狉狅狌狆. 犜犺犲犿狔狅犮犪狉犱犻犪犾犲狀狕狔犿犲犻狀犱犲狓犲狊 ( 犆犓, 犆犓犕犅犪狀犱犆犜狀犐 ) 狑犲狉犲犱犲狋犲犮狋犲犱犪狀犱狋犺犲狊犲狉狌犿犾犲狏犲犾狅犳犞犈犌犉狑犪狊狅犫狊犲狉狏犲犱犫狔犈犔犐犛犃犻狀狋犺犲狋犺狉犲犲犵狉狅狌狆狊 24 犺犪犳狋犲狉犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀. 犜犻狊狌犲狊犪犿狆犾犲狊犻狀犪犾狑犲狉犲犮狅犾犲犮狋犲犱犪狀犱犆犇 34, 犛犮犪 1, 犆犜狀犐, 犪狀犱犅犮犾 2 犲狓狆狉犲狊犻狅狀狊狑犲狉犲犱犲狋犲犮狋犲犱 24 犺犪犳狋犲狉狅狆犲狉犪狋犻狅狀犫狔犚犜犘犆犚犪狊犪狔. 犉犻狀犪犾狔, 犆犇 34 犪狀犱犛犮犪 1 犲狓狆狉犲狊犻狅狀狊犻狀犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀犵狉狅狌狆狑犲狉犲犪狀犪犾狔狕犲犱犪狋狋犺狉犲犲狋犻犿犲狆狅犻狀狋狊 ( 犫犲犳狅狉犲犌犆犛犉犻狀犼犲犮狋犻狅狀,24 犺犫犲犳狅狉犲犪狀犱犪犳狋犲狉犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀 ).Results 犕狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀狑犻狋犺犌犆犛犉犻狀犮狉犲犪狊犲犱狋犺犲犾犲狏犲犾狅犳犠犅犆犻狀犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀犵狉狅狌狆 [(14.80±1.21) 10 9 / 犔狏狊.(7.45±0.80) 10 9 / 犔犪狀犱 (6.96±0.89) 10 9 / 犔, 犘 <0.05]. 犜犺犲犿狔狅犮犪狉犱犻犪犾犲狀狕狔犿犲犻狀犱犲狓犲狊狑犲狉犲犾狅狑犲狉犻狀犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀犵狉狅狌狆狋犺犪狀犻狀收稿日期 : 修回日期 : 通讯作者 : 耿希刚, 教授, 主任医师, 博士生导师. 犈犿犪犻犾 : 犮狅犿作者简介 : 王鑫 (1976 ), 男 ( 回族 ), 主治医师, 在职硕士研究生. 研究方向 : 心脏外科相关的心肌缺血再灌注损伤. 犈犿犪犻犾 : 犮狅犿网络出版时间 : 网络出版地址 : 犺狋狆 :// 狑狑狑. 犮狀犽犻. 狀犲狋 / 犽犮犿狊 / 犱犲狋犪犻犾 / 犚犺狋犿犾

2 1 期王鑫, 耿希刚, 谭云鹤, 等.G CSF 动员干细胞系对大鼠心肌缺血再灌注损伤的早期影响 31 犮狅狀狋狉狅犾犵狉狅狌狆 ( 犘 <0.05)24 犺犪犳狋犲狉狅狆犲狉犪狋犻狅狀, 犪狀犱狋犺犲狊犲狉狌犿犾犲狏犲犾狅犳犞犈犌犉狑犪狊犺犻犵犺犲狉犻狀犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀犵狉狅狌狆狋犺犪狀犻狀狋犺犲狅狋犺犲狉犵狉狅狌狆狊 [(66.95±8.28) 狆犵 / 犿犔狏狊.(39.45±9.68) 狆犵 / 犿犔犪狀犱 (47.86±5.45) 狆犵 / 犿犔, 犘 <0.05]. 犚犜犘犆犚犪狊犪狔狊犺狅狑犲犱狋犺犪狋犺犻犵犺犲狉犲狓狆狉犲狊犻狅狀狊狅犳犆犇 34 犪狀犱犅犮犾 2 犻狀犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀犵狉狅狌狆狋犺犪狀犻狀狋犺犲狅狋犺犲狉犵狉狅狌狆狊 ( 犘 < 0.05). 犛犮犪 1 犺犪犱犪犺犻犵犺犲狉犲狓狆狉犲狊犲犱犻狀犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀犵狉狅狌狆狋犺犪狀犻狀狊犺犪犿犵狉狅狌狆 ( 犘 <0.05). 犆犜狀犐犲狓狆狉犲狊犻狅狀犱犻犱狀狅狋犱犻犳犳犲狉狊犻犵狀犻犳犻犮犪狀狋犾狔犫犲狋狑犲犲狀犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀犵狉狅狌狆犪狀犱狊犺犪犿犵狉狅狌狆 ( 犘 =0.37). 犎狅狑犲狏犲狉, 犆犜狀犐犺犪犱犪犺犻犵犺犲狉犲狓狆狉犲狊犻狅狀狋犺犪狀犻狀狋犺犲狅狋犺犲狉犵狉狅狌狆狊 ( 犘 <0.05). 犐狀犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀犵狉狅狌狆, 犆犇 34 犪狀犱犛犮犪 1 犺犪犱犺犻犵犺犲狉犲狓狆狉犲狊犻狅狀狊 24 犺犫犲犳狅狉犲犪狀犱犪犳狋犲狉犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀狋犺犪狀犫犲犳狅狉犲犌犆犛犉犻狀犼犲犮狋犻狅狀 ( 犘 <0.05).Conclusion 犌犆犛犉狆狉犲狋狉犲犪狋犿犲狀狋犮犪狀犿狅犫犻犾犻狕犲狊狋犲犿犮犲犾犾犻狀犲狊, 狑犺犻犮犺犺犪狊犪犮犲狉狋犪犻狀狆狉狅狋犲犮狋犻狏犲犲犳犳犲犮狋狅狀犲犪狉犾狔狊狋犪犵犲犿狔狅犮犪狉犱犻犪犾犻狊犮犺犲犿犻犪狉犲狆犲狉犳狌狊犻狅狀犻狀犼狌狉狔犻狀狉犪狋狊犪狀犱狋犺狌狊犻犿狆狉狅狏犲狉犪狋犺犲犪狉狋犳狌狀犮狋犻狅狀. 犓犈犢犠犗犚犇犛 : 犵狉犪狀狌犾狅犮狔狋犲犮狅犾狅狀狔狊狋犻犿狌犾犪狋犻狀犵犳犪犮狋狅狉 ( 犌犆犛犉 ); 犿狔狅犮犪狉犱犻犪犾犻狊犮犺犲犿犻犪狉犲狆犲狉犳狌狊犻狅狀 ; 狏犪狊犮狌犾犪狉犲狀犱狅狋犺犲犾犻犪犾犵狉狅狑狋犺犳犪犮狋狅狉 ( 犞犈犌犉 ); 狊狋犲犿犮犲犾体外循环的建立保障了心脏外科手术的顺利进行, 而由此导致的心肌细胞短暂缺血及缺血再灌注损伤成为研究的重要课题近年来, 干细胞移植应用于心肌损伤的治疗成为热点, 但因异体移植存在风 [1] 险, 动员自体干细胞迁移治疗则成为可行的办法本研究就是利用粒细胞集落刺激因子 (granulocyte colonystimulatingfactor,g CSF) 动员干细胞系, 探讨其对心肌缺血再灌注损伤的早期影响 1 材料与方法 1.1 动物药品及试剂 SD 大鼠 30 只 ( 西安交通大学医学院实验动物中心 ); 重组人粒细胞集落刺激因子 ( 瑞白, 齐鲁制药厂 ); 大鼠血管内皮生长因子 (VEGF)ELISA 试剂盒 ( 武汉博士德生物工程有限公司 );RNA 提取试剂盒 (Fast200, 上海飞捷生物技术有限公司 );cdna 逆转录试剂盒 ( 美国 MBI 公司 ); 2 PCRmix( 西安润德生物技术公司 );100bpDNA laddermarker( 广州东盛生物技术公司 ) 1.2 方法动物分组及造模 30 只 SD 大鼠, 体质量 (270±30)g, 随机分为 : 假手术组 (8 只 ) 对照组 (11 只 ) 及动员组 (11 只 ) 造模前 1 周, 给予动员组大鼠腹腔注射 G CSF50μg/(kg d) [2], 共 7d 造模参 [3] 照张新宁等报道的方法假手术组 : 行开胸手术后于左冠脉前降支穿过缝线不结扎对照组 : 行开胸手术后于左冠脉前降支穿过缝线并做活结结扎,30min 后再去除结扎线灌注 120 min 动员组 : 于手术前 1 周给予连续腹腔注射 7d, 之后处理同对照组造模后 24h 各组最终存活大鼠数量均为 8 只血液标本的采集动员组 G CSF 动员 7d 后采集各组血常规指标 ; 建模后 24h 采集各组心肌酶谱指标采集的标本后置入全自动血生化分析仪, 记录所得数据并统计分析组织标本的制备麻醉后处死大鼠, 立即取出心脏 1 组织切片 : 用 PBS 液冲洗, 浸入固定液, 石蜡常规包埋并切片,HE 染色后光学显微镜下观察 2RT PCR: 用经 DEPC 处理的 PBS 液反复冲洗干净, 用 RNA 酶灭活的刀剪取心前区缺血再灌注区域, 立即置入 -80 液氮保存 ELISA 法检测血清 VEGF 造模后 24h 采取各组大鼠外周血 300μL,5000r/min 离心 30min, 吸取表面血清并保存在 -20 冰箱按照试剂盒说明进行操作, 在 492nm 处获得相应吸光度值 ( 犃 ) 并统计 RT PCR 法检测目的基因本实验共包含两部分, 第一部分为组间比较 : 各组 Sca 1 CD34 CT ni Bcl 2 基因在造模后 24h 的表达情况 ; 第二部分为组内比较 : 即动员组中 CD34 及 Sca 1 基因在注射前造模前造模后 24h 不同时间点的表达情况按试剂盒说明提取组织标本 RNA, 并得到 cdna 产物, 按照 94 变性 3min, 进入循环 :94 30s,Tm30s, 72 30s 目的基因共 35 个循环, 内参 20 个循环 72 延伸 10 min 其中目的基因 CD34(5 TTC CCGAAAGACTCTGATTG 3,5 ACCATTCTC CGTGTAATAAGG 3 ;145bp;Tm:62 ) Sca 1 (5 GGCAGCAGACACAGATACG 3,5 CCGAC CACCTCCTCTTCC 3 ;175bp;Tm:60 ) Bcl 2(5 GCAGAGATGTCCAGTCAG 3,5 GCCATATA GTTCCACAAAGG 3 ;273bp;Tm:60 ) CTnI(5 GCCAACTACCGAGCCTATGC 3,5 CTTCAAA GCCCAGCCCATCC 3 ;205bp;Tm:62 ) 及内参 GAPDH(5 ATGGTGAAGGTCGGTGTGAACG 3, 5 CGCTCCTGGAAGATGGTGATGG 3 ;233 bp, Tm:60 ) 1.3 统计学处理应用 SPSS13.0 软件进行统计分析计量资料以均数 ± 标准差表示, 组间差异比较采用方差分析并行方差齐性检验, 多组数据两两之间比较采用 LSD 检验以犘 <0.05 为差异有统计学意义

3 32 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 35 卷 2 结果动员组较其他两组有所升高 ( 犘 <0.05), 而假手术组与对照组则没有统计学差异 ( 犘 =0.322) 其他指标 2.1 血清学指标 HGB( 犉 =1.876, 犘 =0.178) RBC( 犉 =0.081, 犘 = 血常规检测结果 WBC 值经方差分析 ( 犉 = 0.923) 以及 PLT( 犉 =0.142, 犘 =0.868)3 组之间没 , 犘 <0.05)3 组之间存在统计学差异其中, 有统计学差异 ( 表 1) 表 1 动员组犌犆犛犉动员 7 犱后各组血常规指标的比较 Tab.1 Bloodroutinetestresultsineachgroup ( 狀 =8, 珔狓 ± 狊 ) 组别 HGB(g/L) RBC( /L) WBC( 10 9 /L) PLT( 10 9 /L) 假手术组 ± ± ± ±74.94 对照组 ± ± ± ±99.51 动员组 ± ± ± ± 与假手术组及对照组比较, 犘 < 心肌酶谱的检测结果建模后 24h 各组心肌酶谱相关指标数据如表 2 所示 3 组间 3 个指标方差分析的结果 CK: 犉 = , 犘 <0.01;CK MB: 犉 = , 犘 <0.01;CTnI: 犉 = , 犘 <0.01, 说明这 3 个指标在 3 组间均存在统计学差异进一步两两比较显示, 动员组及对照组各个指标较假手术组增高 ( 犘 <0.05); 但动员组较对照组各心肌酶谱指标是降低的 ( 犘 <0.05) 表 2 建模后 24 犺各组心肌酶谱检测指标的比较 Tab.2 Themyocardialenzymeindexesineachgroup( 珔狓 ± 狊 ) 组别 CK CK MB CTnI 假手术组 ± ± ±0.04 对照组 ± ± ±1.63 动员组 ± ± ±0.76 狀 =8; 与假手术组比较, 犘 <0.05; 与对照组比较, 犘 < 组织切片结果由图 1 可见, 正常的心肌组织结构为条索状平滑肌构成, 细胞核细胞质结合紧密, 胞质染色均匀 ( 图 A) 对照组( 图 B) 心肌细胞整体肿胀, 胞质出现裂纹, 胞质松散 ; 细胞核与胞质出现分离, 甚至部分细胞核出现溶解 ; 心肌纤维之间的联系出现断裂动员组 ( 图 C) 较对照组胞质松散相对减少, 核质连接较为紧密, 且胞质近细胞核处染色均匀 2.3 各组犞犈犌犉的表达情况假手术组对照组动员组 VEGF 的表达分别为 :(39.45±9.68)pg/mL (47.86±5.45)pg/mL (66.95±8.28)pg/mL, 经方差分析,3 组间 VEGF 的表达存在统计学差异 ( 犉 = , 犘 <0.01) 进一步两两比较, 动员组较假手术组对照组 VEGF 含量高 ( 犘 <0.05), 而假手术组对照组之间尚不能肯定有统计学差异 ( 犘 =0.048) 图 1 各组大鼠心肌组织的变化 Fig.1Changesofratmyocardialtissues(HE, 400) A: 假手术组 ;B: 对照组 ;C: 动员组 2.4 犚犜犘犆犚检测结果 RT PCR 比较 3 组之间各项指标的表达由图 2 可以看出, 对照组及动员组各目的基因均较假手术组表达增高运用凝胶分析软件 Labworks 进行半定量分析, 选取累计吸光度 ( 犐犃 ) 值为指标, 统计结果如表 3 所示 3 组间目的基因经方差分析差异有统计学意义 CD34: 犉 =43.26, 犘 <0.01;Sca 1: 犉 = 26.33, 犘 <0.01;CTnI: 犉 =14.56, 犘 <0.01;Bcl 2: 犉 =216.91, 犘 <0.01 进一步两两比较得知 :CD34 在假手术组对照组之间没有统计学差异 ( 犘 = 0.565), 而动员组较假手术组对照组表达增高 ( 犘 < 0.05);CTnI 在对照组表达较假手术组动员组降低 ( 犘 <0.05), 但假手术组动员组两组之间没有统计学差异 ( 犘 =0.37);Sca 1 在动员组及对照组较假手术组表达增高 ( 犘 <0.05), 而 Bcl 2 在动员组较对照组表达增高 ( 犘 <0.05)

4 1 期王鑫, 耿希刚, 谭云鹤, 等.G CSF 动员干细胞系对大鼠心肌缺血再灌注损伤的早期影响 33 图 3 犚犜犘犆犚检测动员组犆犇 34 犛犮犪 1 不同时间点的表达 Fig.3 TheexpressionofCD34andSca 1in mobilization group 表 4 动员组组内犆犇 34 犛犮犪 1 的累计吸光度均值的比较 Tab.4 Theaverage 犐犃 valueofcd34andsca 1inmobiliza tiongroup ( 珔狓 ± 狊 ) 基因注射前造模前造模后 24h 图 2 犚犜犘犆犚检测各组相关目的基因的表达 Fig.2 Theexpressionoftargetgenesineachgroup (RT PCR) 表 3 各组目的基因累计吸光度平均值的比较 Tab.3 Theaverage 犐犃 valueoftargetgenesineachgroup 目的基因假手术组对照组动员组 ( 珔狓 ± 狊 ) CD ± ± ± Sca ± ± ±34.31 CTnI ± ± ± Bcl ± ± ± 与假手术组比较, 犘 <0.05; 与对照组比较, 犘 < G CSF 动员后动员组 CD34 Sca 1 在不同时间点的变化动员组 CD34 和 Sca 1 在 3 个时间点均有所表达 ( 图 3) 半定量分析结果显示, 两种目的基因在 3 个时间点的表达均有统计学差异 CD34: 犉 = , 犘 <0.05;Sca 1: 犉 =22.205, 犘 <0.05 两两比较得知 :CD34 在注射前的表达最低 ( 犘 <0.05) 而其他两个检测时间没有统计学差异 ( 犘 >0.05); 而 Sca 1 在造模后 24h 的表达最高 ( 犘 <0.05), 注射前与造模前的 IOD 值经统计学分析后 ( 犘 =0.055), 尚不能认为两者的表达存在差异 ( 表 4) 3 讨论心肌缺血再灌注损伤的治疗可以通过血管再生 CD ± ± ± Sca ± ± ± 与注射前比较, 犘 <0.05; 犘 <0.05 增加局部灌注减少细胞坏死的途径, 这其中就包括血管内皮生长因子 (VEGF) 缺氧诱导因子 1α(HIF 1α) [4] 等也可动员干细胞到外周血, 利用归巢促进 [5] 其向损伤的心肌细胞迁移, 从而修复细胞干细胞动员可通过外界因素的干预或者自身机体的代偿机制促使干细胞迁移, 从而使得外周血干细胞数量增 [6 7] 加本研究就是应用 G CSF 作为刺激因子, 探讨其对早期心肌缺血再灌注损伤的影响建模开始前, 我们先给予动员组连续 7dG CSF 注射, 结果动员组 [8] 的白细胞较其他两组均有统计学差异 ; 为进一步证实, 我们又从基因层面分析动员组 CD34 与 Sca 1 在注射前和注射后 7d 的表达, 结果显示 G CSF 注射后 CD34 [9] 与 Sca 1 表达是增高的, 从而证实 G CSF 确 [2] 实有动员干细胞的作用建模后 24h, 我们先采集血样分析心肌酶谱, 结果提示动员组较对照组心肌酶谱指标下降, 说明 G CSF 的干预可减少心肌细胞的凋亡而组间行 Bcl 2 [10] 表达的比较则证明 G CSF 的动员的确有抑制心肌细胞凋亡的作用, 从而减少了血清中的 CTnI 含量, 提高了其细胞中的含量 ( 动员组高于对照组表达量, 犘 <0.05) 由于 G CSF 有动员干细胞的作用, 我们检测了 CD34 与 Sca 1 在组间的表达结果发现,CD34 在假手术组及对照组间表达没有统计学

5 34 西安交通大学学报 ( 医学版 ) 第 35 卷差异其中对照组 IOD 值较假手术组高, 提示因局部组织损伤是可以引发自身代偿机制动员干细胞系的 ; 但动员组较其他两组 CD34 表达明显升高, 说明预注射细胞因子有明显的动员干细胞系作用, 而因损伤靠自身代偿动员干细胞系是需要一定时间的 ;Sca 1 是较为公认干细胞系细胞表面标志物的一个指标, 尽管本实验中半定量分析看出动员组及对照组 Sca 1 较假手术组有所增加, 提示有干细胞的动员, 但在表达增高的两组中, 动员组 Sca 1 表达量相对低, 考虑可能与实验样本量少,Sca 1 自身表达量低相关, 尚需加大样本量进一步验证 VEGF 的高表达是治疗组织损伤的一个途径, 它对内皮细胞的增殖迁移及血管重建有着 [11] 重要的意义而干细胞修复组织的形式中包含自 [12] 身分泌的细胞因子对损伤组织的影响, 这其中就包含 VEGF 我们发现动员组在 CD34 及 Sca 1 均高表达的同时,VEFG 的含量较其他两组也是明显增加的说明动员的干细胞系可能存在旁分泌修复作用 G CSF 不仅能动员干细胞系, 同时有报道发现 G [13] CSF 的刺激可提高 VEFG 水平因此, 可以推断,G CSF 的预动员对心肌缺血再灌注损伤的早期修复可能有双重保护作用, 但需进行更加深入的研究本研究初步证实了应用 G CSF 可提前动员机体内的干细胞系, 从而减轻心肌缺血再灌注早期的损伤程度, 进一步减少心室重构, 改善心功能参考文献 : [1] 犕犃犓犓犃犚犚犚, 犔犐犔犔犕, 犆犎犈犖犘犛. 犛狋犲犿犮犲犾狋犺犲狉犪狆狔犳狅狉犿狔狅犮犪狉犱犻犪犾狉犲狆犪犻狉 : 犐狊犻狋犪狉狉犺狔狋犺犿狅犵犲狀犻犮?[ 犑 ]. 犑犃犿犆狅犾犆犪狉犱犻狅犾, 2003,42(12): [2] 孙晓春, 蔡花, 吴乐乐. 犌犆犛犉动员大鼠外周血间质干细胞的初步实验研究 [ 犑 ]. 中国细胞生物学学报,2010,32(5): [3] 张新宁, 吕琪, 张永亮, 等. 大鼠心肌缺血再灌注模型建立方法的改进 [ 犑 ]. 武警医学院院报,2008,11(17): 犺狅犿犲狅狊狋犪狊犻狊犻狀犺犲犪犾狋犺犪狀犱犱犻狊犲犪狊犲 [ 犑 ]. 犘犲犱犻犪狋狉犚犲狊,2001,49 (5): [5] 犑犃犆犓犛犗犖犓犃, 犕犃犑犓犃犛犕, 犠犃犖犌犎犢, 犲狋犪犾. 犚犲犵犲狀犲狉犪狋犻狅狀狅犳犻狊犮犺犲犿犻犮犮犪狉犱犻犪犮犿狌狊犮犾犲犪狀犱狏犪狊犮狌犾犪狉犲狀犱狅狋犺犲犾犻狌犿犫狔犪犱狌犾狋狊狋犲犿犮犲犾 [ 犑 ]. 犑犆犾犻狀犐狀狏犲狊狋,2001,107(11): [6] 犇犈犐犖犇犔犈, 犣犃犚犝犅犃犕犕, 犅犚犝犖犖犈犚犛, 犲狋犪犾. 犌犆犛犉犪犱犿犻狀犻狊狋狉犪狋犻狅狀犪犳狋犲狉犿狔狅犮犪狉犱犻犪犾犻狀犳犪狉犮狋犻狅狀犻狀犿犻犮犲犪狋犲狀狌犪狋犲狊犾犪狋犲犻狊犮犺犲犿犻犮犮犪狉犱犻狅犿狔狅狆犪狋犺狔犫狔犲狀犺犪狀犮犲犱犪狉狋犲狉犻狅犵犲狀犲狊犻狊 [ 犑 ]. 犉犃犛犈犅犑,2006,20(7): [7] 犔犗犘犈犣犘犃, 犚犐犅犈犐犚犗犉犜, 犆犎犃犅犗犜犞, 犲狋犪犾. 犌犆犛犉狊狋犻犿狌犾犪狋犻狅狀狅犳犫狅狀犲犿犪狉狉狅狑犿犲狊犲狀犮犺狔犿犪犾狊狋狉狅犿犪犾犮犲犾狊狆狉狅犿狅狋犲狊犆犇 34 + 犮犲犾犿犻犵狉犪狋犻狅狀狏犻犪犪犕犕犘 2 犱犲狆犲狀犱犲狀狋犿犲犮犺犪狀犻狊犿 [ 犑 ]. 犛狋犲犿犆犲犾狊犇犲狏,2012,21(17): [8] 犇犝犎犚犛犈犖犝, 犞犐犔犔犈犞犃犔犑犔, 犅犗犢犇犑, 犲狋犪犾. 犈犳犳犲犮狋狅犳狉犲犮狅犿犫犻狀犪狀狋犺狌犿犪狀犵狉犪狀狌犾狅犮狔狋犲犮狅犾狅狀狔狊狋犻犿狌犾犪狋犻狀犵犳犪犮狋狅狉狅狀犺犲犿犪狋狅狆狅犻犲狋犻犮狆狉狅犵犲狀犻狋狅狉犮犲犾狊犻狀犮犪狀犮犲狉狆犪狋犻犲狀狋狊 [ 犑 ]. 犅犾狅狅犱, 1998,72(6): [9] 犖犐犈犖犃犅犈犚犆犃, 犘犈犜犣犛犆犎犕, 犓犔犈犐犖犈犎犇, 犲狋犪犾. 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犵狉犪狀狌犾狅犮狔狋犲犮狅犾狅狀狔狊狋犻犿狌犾犪狋犻狀犵犳犪犮狋狅狉狅狀犿狅犫犻犾犻狕犪狋犻狅狀狅犳犫狅狀犲犿犪狉狉狅狑犱犲狉犻狏犲犱狊狋犲犿犮犲犾狊犪犳狋犲狉犿狔狅犮犪狉犱犻犪犾犻狀犳犪狉犮狋犻狅狀犻狀犺狌犿犪狀狊 [ 犑 ]. 犖犪狋犆犾犻狀犘狉犪犮狋犆犪狉犱犻狅狏犪狊犮犕犲犱,2006,3 ( 犛狌狆狆犾 1): 犛 [10] 犎犃犚犃犇犃犕, 犙犐犖犢, 犜犃犓犃犖犗犎, 犲狋犪犾. 犌犆犛犉狆狉犲狏犲狀狋狊犮犪狉犱犻犪犮狉犲犿狅犱犲犾犻狀犵犪犳狋犲狉犿狔狅犮犪狉犱犻犪犾犻狀犳犪狉犮狋犻狅狀犫狔犪犮狋犻狏犪狋犻狀犵狋犺犲犑犪犽犛狋犪狋狆犪狋犺狑犪狔犻狀犮犪狉犱犻狅犿狔狅犮狔狋犲狊 [ 犑 ]. 犖犪狋犕犲犱,2005,11 (3): [11] 犣犎犃犖犌犣犌, 犣犎犃犖犌犔, 犑犐犃犖犌犙, 犲狋犪犾. 犞犈犌犉犲狀犺犪狀犮犲狊犪狀犵犻狅犵犲狀犲狊犻狊犪狀犱狆狉狅犿狅狋犲狊犫犾狅狅犱犫狉犪犻狀犫犪狉狉犻犲狉犾犲犪犽犪犵犲犻狀狋犺犲犻狊犮犺犲犿犻犮犫狉犪犻狀 [ 犑 ]. 犑犆犾犻狀犐狀狏犲狊狋,2000,106(7): [12] 犡犝犢犡, 犆犎犈犖犔, 犎犗犝犠犓, 犲狋犪犾. 犕犲狊犲狀犮犺狔犿犪犾狊狋犲犿犮犲犾狊狋狉犲犪狋犲犱狑犻狋犺狉犪狋狆犪狀犮狉犲犪狋犻犮犲狓狋狉犪犮狋狊犲犮狉犲狋犲犮狔狋狅犽犻狀犲狊狋犺犪狋犻犿狆狉狅狏犲狋犺犲犵犾狔犮狅犿犲狋犪犫狅犾犻狊犿狅犳犱犻犪犫犲狋犻犮狉犪狋狊 [ 犑 ]. 犜狉犪狀狊狆犾犪狀狋犘狉狅犮,2009,41(5): [13] 陈向东, 王东. 犌犆犛犉对大鼠脑缺血再灌注模型脑组织内犞犈犌犉表达的影响及脑保护作用 [ 犑 ]. 内蒙古医学杂志,2011,43(5): ( 编辑卓选鹏 ) [4] 犛犈犕犈犖犣犃犌犔. 犎狔狆狅狓犻犪犻狀犱狌犮犻犫犾犲犳犪犮狋狅狉 1: 犮狅狀狋狉狅犾狅犳狅狓狔犵犲狀

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