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1 38 中 西医 结 合学 报 007 年 5 月 第 5 卷第 3 期 Jo urn al o f C hin ese In te g r at ive Me dicin e Ma y 007 V ol 5 N o 3 三七总皂苷对大鼠脑缺血 再灌注 后白细胞 介素 1β 和 其相 关因 子及 半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶表达的影响 1 唐映红 张淑萍 梁燕 邓常清 1 湖南中医药大学药学院药理学教研室 湖南 长沙 41008 湖南中医药大学病理生理学实验室 湖南 长沙 410007 目的 研究三七总皂苷 Pana x notog inseng sap onins P N S 对大 鼠 脑缺 血 再 灌注 后 白细 胞 介素 1β i nte r leukin 1β IL 1β 白细胞介素 1 受体 Ⅰ 型 in terleuk in 1 recept o r t ype Ⅰ I L 1 R Ⅰ 白细胞介 素 1 受体 拮 抗剂 in ter leukin 1 recep to r antag onist I L 1ra 细 胞 间 黏 附 分 子 1 inter cellu la r adhesio n m olecu le 1 I CA M 1 和半胱氨酸天冬氨酸特异 性蛋 白酶 cy steinyl aspa r tate specific pr otease caspase 1 3 8 m R N A 表达的影响 方法 采用颈内动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血 再灌 注模型 在 脑缺 血前 5 min 和脑 缺血 后 1 h 分别 腹 腔注射给药 1 次 在脑缺血 h 再 灌注 h 后 以逆 转录 聚 合酶 链反 应测 定缺 血 脑组 织 IL 1β I L 1R Ⅰ I L 1r a I CA M 1 和 casp ase 1 3 8 m R N A 的表达 结果 在脑缺血 h 再灌注 h 后 模型组脑组织 IL 1β IL 1R Ⅰ I L 1r a I C A M 1 和 caspase 1 3 8 m R N A 表达较假手术组均增强 P 0 05 或 P 0 01 P N S 组脑组织 I L 1β I L 1r a 和 IL 1 R Ⅰ 表达低于模型组 高于假手术组 与模型组和假手术组相比 差异均无 统计 学意义 P 0 05 P N S 组脑组 织 cas pase 3 表 达 低于模型组 P 0 05 但 P N S 对 I C A M 1 caspase 1 和 caspase 8 表达无明显影响 结论 P N S 可抑制 caspase 3 的表达 同时对脑缺血后 I L 1β 及其相关炎症因子的表达有一定抑制作用 从 而 对缺血性脑损伤发挥保护作用 关键词 脑缺血 再灌注 白细胞介素 1β 白细胞介素 1 白细胞介素 1 受体 半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋 白酶 逆转录聚合酶链反应 大鼠 中图分类号 R743 文献标识码 A 文章编号 167 1977 007 03 038 05 Effects of Panax notoginseng saponins on mrna expressions of interleu kin 1β its correlative factors and cysteinyl aspartate specific protease after cerebral ischemia reperfusion in rats Ying hong TANG Shu ping ZHANG Yan LIANG Chang qing DENG 1 1 Dep ar tment of Pha rmacolog y College o f Pha rmacy H una n U nive rsit y of T ra ditio nal C hinese M edicine Cha ngsh a H unan Province 41008 C hina Labo ra to ry of Pat ho physiolo gy H unan University of T raditional C hinese M edicine Ch angs ha H una n P rovince 410007 China Objective To investigate the effects of Panax notog inseng saponins PNS on mrna expressions of interleukin 1β IL 1β interleukin 1 receptor type Ⅰ IL 1R Ⅰ interleukin 1 receptor antagonist IL 1ra intercellular adhesion molecule 1 ICAM 1 cysteinyl aspartate specific protease 1 caspase 1 caspase 3 and caspase 8 after cerebral ischemia reperfusion in rats Methods Focal cerebral ischemia reperfusion in rats was induced by the method of nylon monofilament via the internal carotid artery PNS was administered intraperitoneally respectively five minutes before cerebral ischemia and twelve hours after cerebral ischemia After cerebral ischemia for two hours followed by reperfusion for twenty two hours the mrna expressions of IL 1β IL 1R Ⅰ IL 1ra ICAM 1 caspase 1 caspase 3 and caspase 8 in brain tissue were determined by reverse transcription polymerase chain reaction assay 基金项目 国家自然科学基金资助项目 N o 3017113 Co rrespondence Yin g ho ng T A NG A ssociate Profes sor Tel 0731 845838 E mail ty ho ng 6 yaho o com cn

2 中 西医 结合 学 报 007 年 5 月 第 5 卷 第 3 期 Jo urn al o f C hi nese In t eg r a tiv e M edicin e M ay 007 V o l 5 N o 3 3 9 Results After cerebral ischemia for two hours followed by reperfusion for twenty two hours the mrna expression levels of IL 1β IL 1R Ⅰ IL 1ra ICAM 1 caspase 1 caspase 3 and caspase 8 in brain tissue in the untreated group were obviously elevated as compared to those in the sham operation group P 0 05 or P 0 01 The mrna expression levels of IL 1β IL 1R Ⅰ IL 1ra in brain tissue in the PNS group were lower than those in the untreated group but higher than those in the sham operation group and without statistical differences as compared to those in the sham operation group and in the untreated group P 0 05 The mrna expression level of caspase 3 in brain tissue in the PNS group was significantly lower than that in the untreated group P 0 05 but PNS had no effect on the mrna expression levels of ICAM 1 caspase 1 and caspase 8 in brain tissue Conclusion PNS can inhibit the mrna expression of caspase 3 slightly inhibit the mrna expressions of IL 1β and i ts correlative inflammatory factors in brain tissue The protective effects of PNS on cerebral injury induced by ischemia reperfusion may be related to inhibiting the mrna expressions of caspase 3 IL 1β and its correlative inflammatory factors in brain tissue Keywords brain ischemia reperfusion interleukin 1β interleukin 1 receptor interleukin 1 caspase reverse transcription polymerase chain reaction rats T ang Y H Zhan g SP Lia ng Y D eng CQ J C hi n In te gr Med Zho ng X i Y i J ie H e X ue B ao 007 5 3 38 33 R eceived M ay 4 006 publish ed o nlin e M ay 15 007 F ree full tex t PDF is availa ble at w w w jcimjo urn al com 脑缺血再灌注既 可 挽救 濒临 梗死 的细 胞 又 可 乙锭及溴酚蓝等均为进口分装 氯仿 异丙醇和无水 加重细胞损伤 导致 神经 细胞 死 亡 研究 发 现炎 症 乙醇均为国产分析纯产品 反应在缺血后的继发 性 脑损 伤中 具有 重要 作 用 它 1 1 4 1 可引起血流改 变 水肿 等 最终 导致 神 经元 死 亡 脑缺血再灌注后的细 胞 死亡 除急 性坏 死外 还会 出 现细胞凋亡 凋亡 主要 发 生在 缺血 半暗 区 研究 主要 仪 器 480 型 P CR 基 因 扩 增仪 美 国 P E 公司 产 品 3K 18 高 速冷 冻 离 心 机 德 国 Sig ma 公司产品 DY CP 33 A 水 平 电 泳 槽 北 京 六 一 仪 器 厂产 品 D U 640 核 酸 蛋 白 分 析 仪 美 国 Beckman 表明半 胱 氨 酸 天 冬 氨 酸 特 异 性 蛋 白 酶 cystei nyl C oulter 产品 马头牌 C PS 型 双极 电凝器 上 海医 用 亡起关键作 用 凋亡 的 最 后 实 施 是 通 过 caspase 激 U V P 公司产品 aspar tate specific pr ot ease casp ase 对神经 细胞 凋 3 活而实现的 三 七 是人 参属 植物 传统 用于 止 血 激光仪器厂产品 Labw ork 3 0 图像分析软 件 美 国 1 实验方法 化瘀 消肿止痛 近年研究发现其主要药效组分三七 1 1 总皂 苷 Pana x notogi nsen g sa po nins P N S 对 脑 随机分为 3 组 即假 手术 组 生 理盐 水 模 型组 生 缺血再 灌 注有 明 显 的 保 护 作 用 4 5 为 此 本 研 究 从炎症因子 与 细 胞 凋 亡 调 控 机 制 的 casepase 环 节 探讨 P N S 对脑缺血再灌注损伤的保护作用 1 材料与方法 1 1 1 1 1 大鼠按性别 体质量分层 理盐水 P N S 5 m g k g 组 给 药方式 为腹 腔注 射 给药 给 药体 积为 10 ml kg 造 模前 禁食 1 h 自 由饮水 缺血前 5 min 第 1 次给药 然后根据 Lo nga 6 等 的方法 改良 采 用左 侧颈内 动脉 单尼龙 线线 栓 法制备大鼠大脑中动脉阻塞 middle cerebral a r ter y 材料 动物 动物分组 给药 SD 大鼠 清 洁 级 雌雄 各半 体质 量 70 30 g 由湖 南省 卫 生防 疫 站 实验 动 物中 心 提 供 occlu sion MC A O 局 灶 性 脑 缺 血模 型 腹 腔 注 射 10 水合氯醛 0 35 g k g 麻 醉 保 留自 主 呼吸 仰 卧位固定 取颈正中切口 分离暴露左侧颈总动脉 颈外动脉 颈内动脉及翼腭动脉 结扎翼腭动脉 在 P N S 丽珠集团利民 制药厂 批号 z z 距颈总动脉叉 1 cm 处结扎颈外动脉 并于颈外动脉 通注射液 70 mg ml 用时以生理盐水配成质量浓 动脉夹夹闭左颈总动 脉 提 起颈 外动 脉游 离 端使 其 1 1 药物 580 粤卫药准 字 1994 第 801313 号 商 品名 血 栓 度为 5 m g ml 结扎处远心 端 用 电 凝 器 灼 断 之 使 颈 外 动 脉 游 离 与颈内动脉成一直线 于颈 外动 脉结 扎处 近 心端 约 T rizol 核 酸提 取 液 Gi bco BRL 0 5 c m 处 剪 一 切 口 将 尼 龙 线 长 5 cm 直 径 tion polymerase chain reaction RT PCR 试 剂 盒 微阻力感 停 止 18 ± m m 固定 线 栓 阻 闭 h 1 1 3 主要试 剂 公司产品 逆转 录 聚 合 酶 链 反 应 reverse transcrip RN A PCR Kit Ver 3 0 DN A 分子量标准 marker DL000 大连 宝 生物 有 限 公 司 产 品 琼 脂 糖 溴 化 0 6 m m 经颈外动 脉切 口 向颈 内 动脉 插 入至 有 轻 后拔出线栓 进行缺血后再灌注 缝合切口 并于术 后 1 h 同前 给药 1 次 假手 术 组 大鼠 只 暴露 和 分

3 330 Jo urn al o f C hin ese In te g r at ive Me dicin e Ma y 007 V ol 5 N o 3 中 西医 结 合学 报 007 年 5 月 第 5 卷第 3 期 离颈总动脉 颈外 动脉 颈内 动脉 和翼 腭动 脉 不 闭 塞大脑中动脉 其他 操作 与模 型 组相 同 模 型成 功 的判 断 标 准 动 物 手 术 清 醒 后 有 明 显 同侧 H orne r 征及对侧偏瘫体征 不能完全伸展右前肢 行走时向 右侧倾倒或转圈 不成功者予以剔除 各组大鼠均 10 R N A PCR 缓 冲 液 μl dn T Ps 4 种 底 物 各 10 m mol L μl R N A 酶抑制物 40 U μl 0 5 μ l 鸟成髓细胞性 白 血病 病 毒 逆转 录 酶 5 U μl 1 μ l Olig o d T 随 机 引 物 5 pm ol μ l 1 μl 补 去 R N A 酶水至总体积 0 μl 逆 转录条件 为 45 30 min 在再灌注 h 后麻醉 断头 分离 左侧缺血 脑组织 99 5 min 5 5 min 取逆转录产物置 30 保存 脑 组 织 I L 1β 及 相 关 因子 casp ase mr N A 次加入 5 P CR 缓 冲液 10 μ l 上 下游 引物 各 0 5 μl 液氮速冻 再移入 70 冰箱保存 1 表达的测定 1 1 引物设 计 由 Gene Bank 数据 库中查 得 各目的基因的 cd N A 序列 采 用软件 进行 设计 引 1 4 取逆 转录产 物 10 μl 依 聚合酶 链反 应 浓度皆为 50 pmol μ l T a g D N A 聚合 酶 0 5 μ l 加灭菌纯水至 50 μl 混匀 进行 PCR 反应 以下 是 P CR 反应条件 I L 1β 先 94 变性 4 min 接94 物由上海生 工 生物 工 程公 司 合 成 白 细 胞 介素 1β 45 s 53 45 s 7 45 s 30 个循环 结束前 7 tcaaatctcac 3 14 33 bp 下游 5 accactt g tt g 45 s 55 45 s 7 45 s 30 个循环 结束前 7 长 333 bp 白 细 胞 介 素 1 受 体 Ⅰ 型 i nte rleukin 1 45 s 58 45 s 7 45 s 30 个循环 结束前 7 cacaga gg gaact 3 306 35 bp 下 游 5 at gaacg 45 s 57 45 s 7 45 s 30 个循环 结束前 7 片断长 37 bp 白 细 胞 介 素 1 受 体 拮 抗 剂 i nter 45 s 57 45 s 7 45 s 30 个循环 结束前 7 5 gcat tt gcgaag tg g tt gt a 3 1 36 1 345 bp 下 45 s 56 45 s 7 45 s 30 个循环 结束前 7 的互补序 列 扩 增 片 断 长 488 bp 细 胞 间 黏 附 分 45 s 61 45 s 7 45 s 33 个循环 结束前 7 引 物 上 游 5 ct gtc gg t gctcag g tatcca 3 101 45 s 55 45 s 7 45 s 30 个循环 结束前 7 509 bp 的互补序列 扩 增片 断长 409 bp caspase 1 5 in terleuki n 1 bet a I L 1β 引物 上游 5 catccagct gcttat gt t 3 57 546 bp 的互 补 序 列 扩 增 片 断 recep to r type Ⅰ I L 1 R Ⅰ 引 物 上 游 5 t gaaga g gatag cgataaaa 3 658 677 bp 的 互 补序 列 扩 增 leukin 1 recep to r an tag o nis t IL 1ra 引 物 上 游 游 5 ctaaga gccaaa gag g gt gc 3 1 794 1 813 bp 子 1 in tercellular adhesion m olecu le 1 IC A M 1 11 bp 下 游 5 t g gcg gctca gt gtctcatt 3 490 1 引 物 上 游 5 ataaat g gatt gct gg atg a 3 64 83 bp 下 游 5 a gacgt gt acg agt g g gt gt 3 469 延伸 10 min IL 1 R Ⅰ 先 94 变性4 min 接 94 延伸 10 mi n I L 1ra 先 94 变 性 4 min 接 94 延伸 10 min I C A M 1 先 94 变性 4 min 接 94 延伸 10 min caspase 1 先 94 变性 4 min 接94 延伸 10 min caspase 3 先94 变性 4 min 接 94 延伸 10 min caspase 8 先 94 变性 4 min 接94 延伸 10 min β actin 先 94 变性 4 min 接 94 延伸 10 min 电泳 及 分析 P CR 反 应结 束 后 分 别 取 P CR 产物 10 μl 上 样于 琼 脂糖 凝 胶 含溴 化 乙 锭 0 5 μg m l 0 5 T ris 硼 酸缓冲 液 100 V 电 泳 488 bp 的互补序列 扩 增片 断长 45 bp caspase 90 min 紫外灯下观察 以凝胶成像分析系 统拍照 505 bp 下 游 5 cactcccag tcat tcctt ta 3 858 软件分析 测 定其相对光密度 计算 各因子与β acti n 3 引 物 上 游 5 aa gccgaaactct tcatcat 3 486 877 bp的互补序列 扩增片断长 39 bp caspase 8 对凝胶中的特异性条 带 进行 扫描 用 凝胶 图 像分 析 的光密度比值作为半定量指标 引 物 上 游 5 cct ttctcctccctctg acc 3 10 1 3 46 bp 的互补序列 扩增片断长 361 bp β 肌动蛋 差分析 组间两 两比 较 方差 齐 用 L SD 检 验 方 差 不 统 计学 方法 数 据以 x ± s 表 示 运用 SP SS 11 bp 下 游 5 gca gcctctg aaata gcacc 3 443 1 0 统计 软 件进 行 统计 多组 间 比 较用 单 因 素 方 白 β acti n 引物 上游 5 ttcca gccttccttcct g g 3 下 齐时用 Dunnet t s T3 检验 游 5 tt gcgctca g gag ga gcaat 3 扩增片断长 6 bp 1 总 R N A 提取 取 冻存 脑组 织 置 研钵 中 加液氮研碎 按 1 10 比例 W V 加入 T rizol 核 酸 2 1 结 果 IL 1β 及相关 因子 m R N A 表达 水平 脑缺 血 提取液 制成匀 浆液 按 操作 说明提 取总 R N A 测 定 h 再 灌 注 h 后 模 型 组 I L 1β I L 1R Ⅰ IL 1ra 0之间 纯度大于 90 0 05 或 P 0 01 P N S 组 I L 1β IL 1R Ⅰ IL 1ra 其纯度和 含 量 提 取 的 总 R N A A 6 0 A 8 0 在 1 7 1 3 逆转录反应 于 0 μ l 反 应 体 系 中 取 1 μg总 R N A 依次 加 入 M g Cl 5 m m ol L 4 μ l 和 I CA M 1 m RN A 表 达 较 假 手 术 组 均 增 强 P mr N A 表达较 模 型 组 分 别 降 低 31 6 17 和 38 3 但与模型组和假手术组相比 差异无统计学

4 中西医结合学报 2007 年 5 月第 5 卷第 3 期 Journ al o f C hinese Int egra tiv e M edicin e, M ay 2007 ; V o l.5, N o 意义 ( P > ) ; ICA M 1 mr NA 表达较假手术组明显升高 ( P < 0.05), 但与模型组比较接近 见图 1 表 caspase mrn A 表达水平模型组 caspase mrn A 表达较假手术组均明显增强 ( P < 0.05) PN S 组 caspase 1 mrn A 表达较模型组略有降低, 但差异无统计学意义 ( P > 0.05) ;PNS 组 caspase 3 mrna 表达较模型组明显降低 ( P < 0.05), 但与假手术组相比, 差异无统计学意义 ( P > 0.05) ;PNS 组 caspase 8 mrna 表达较假手术组明显升高 ( P < 0.05), 但与模型组比较无明显差异 ( P > 0.05) 见图 1 表 2 图 1 各目的基因电泳图谱 Figure 1 Target genes atlas M : Mar ker ; 1 : Sham o p era tion group ;2 : U ntreat ed g roup ;3 : P N S group. 表 1 各组 IL 1β 及相关因子 mrna 表达水平 Table 1 mrna expression levels of IL 1β and its correlative factors in brain tissue in three groups ( x ± s ) Group I L 1β IL 1 R Ⅰ I L 1ra I C A M 1 Sh am op era ti on 0.31 ± 0.10 (5) 0.30 ± 0.28 (5) 0.39 ± 0.11 (5) 0.54 ± 0.17 (6) U ntreat ed 0.76 ± 0.41 (4) 0.64 ± 0.21 (4) 0.81 ± 0.23 (5) 1.03 ± 0.23 (4) P NS 0.52 ± 0.24 (6) 0.53 ± 0.37 (5) 0.50 ± 0.44 (6) 0.87 ± 0.12 (5) P < 0.05, P < 0.01, vs sh am op era ti on group. S ampl e num ber i n each gro up is giv en in p arentheses. 表 2 各组 caspase mrna 表达水平 Table 2 mrna expression levels of caspase 1,caspase 3 and caspase 8 in brain tissue in three groups ( x ± s ) m R N A e xpressio n le vels Group Cas pase 1 Casp ase 3 Casp ase 8 Sh am op era ti on 0.85 ± 0.25 (5) 1.06 ± 0.09 (4) 0.25 ± 0.30 (4) U ntreat ed 1.38 ± 0.31 (4) 1.32 ± 0.16 (4) 0.63 ± 0.24 (5) P NS 1.10 ± 0.24 (5) 1.06 ± 0.25 (4) 0.66 ± 0.16 (6) P < 0.05, vs sh am o peration group ; P < 0.05, vs untrea ted gro up. S ample num ber in each group is giv en in p are nth eses. 3 讨论 以往对脑缺血再灌注损伤机制的研究主要集中 在氧自由基 兴奋性氨基酸和细胞内钙超载等方面 近年来, 发现其与炎症反应和细胞凋亡也有着密切 的关系, 而且各机制之间又存在着网络联系 脑缺 血损伤后在受损区有大量细胞因子的表达和炎细胞 [ 7 ] 的浸润, 通过炎症反应一方面引起神经保护作用,

5 332 中西医结合学报 2007 年 5 月第 5 卷第 3 期 Journ al o f C hin ese Inte grat ive Medicin e, Ma y 2007 ; V ol.5, N o.3 另一方面炎症因子的过度表达又可加重脑组织损 伤 缺血后短时间内即可发生炎症反应, 尤其在再 灌注中更加明显 I L 1 是免疫和炎症反应中的重要 因子, 其中起主要作用的是 I L 1β I L 1β 能够通过 诱导白细胞黏附, 介导白细胞向缺血脑组织浸润, 从 [ 8 ] 而引起脑组织炎症反应, 导致脑组织进一步损伤 脑细胞上存在 I L 1β 两种受体 I L 1R Ⅰ 和 IL 1 R Ⅱ, I L 1β 主要通过与 I L 1R Ⅰ 结合, 通过信号传导途径 引起炎症反应 脑缺血后 I L 1R Ⅰ 表达升高, 高表达 [ 9 ] 的 I L 1R Ⅰ 能够加重脑缺血后神经损伤 I L 1ra 是存在于体内天然的抑制 I L 1 活性的抑制剂, 它具 有神经保护作用, 在体内和体外实验中都能抑制 IL [ 1 0 ] 1β 的作用 脑缺血损伤时, 在诱导 I L 1β 表达的 同时,IL 1ra 表达也明显升高, 这是机体的反应性变 化, 是由于缺血诱导脑组织表达 IL 1ra 以对抗 I L 1β 的作用 ICA M 1 是免疫球蛋白超家族黏附分子中 的一员, 能够促进白细胞进一步黏附 激活及浸润, [ 1 1 ] 从而加重炎症反应 凋亡的发生是一个复杂的 由 caspase 家族成员 介导的蛋白酶级联反应过程, 脑缺血再灌注时, 多种 caspase 在神经元凋亡中起重要作用 根据 caspase 在其级联反应中的作用位置分为在上游调控其他 caspase 活化的启动 caspase 效应 caspase 和炎性 caspase caspase 1 为炎性 cas pase, 脑缺血后 24 h 开始明显增加 caspase 3 在细胞凋亡中具有中心效 应, 凋亡的最后实施通过 caspase 3 激活而实现, 是 [ 1 2 ] 凋亡促进剂 caspase 8 是凋亡实施的启动蛋白, 当凋亡信号激活 caspase 8 蛋白后, 使无活性的 caspase 8 前体蛋白自我水解活化, 形成活性 caspase 8, 激活其他的 caspase, 扩增死亡信号发放, [ 1 3 ] 从而引发致死性的蛋白分解级联反应 本研究表明, 模型组的炎症相关因子和 caspase 较假手术组皆有不同程度升高, 说明脑缺血再 灌注损伤能够激发炎症反应和细胞凋亡的发生 这 些因子相互影响, 在脑损伤中起到加重炎症反应和 神经元损伤的作用 P N S 组中 I L 1β IL 1 R Ⅰ I L 1ra 较模型组有降低趋势, 尤其是 I L 1β I L 1ra 的降低幅度大, 提示 P N S 可能抑制脑缺血后炎症因 子的表达, 从而可能减轻脑缺血再灌注后的炎症反 应, 减轻脑缺血性损伤 同时,PN S 对细胞凋亡的关 键调控因子 cas pase 3 的表达具有抑制作用, 表明 PN S 可能通过抑制凋亡促进因子的表达对抗神经元 凋亡, 减轻神经元损伤 REFERENCES 1 Stanimirovic D, Sat oh K. Inflammatory mediat ors of cere bral endo thelium :a role in ischemic brain inflamma tion.brain Pathol.2000 ;10 (1) : Charriaut Marlang ue C, M argaill I, Represa A, et al. Apopt osis and necrosis after reversible focal ischemia :an in situ DN A frag mentatio n analysis. J Cereb Blo od Flo w Metab.1996 ;16(2) : Pet tmann B, Henderson CE. Neuronal cell death. Neuron ; 20(4) : Liu JH, Ji FY, Wang T, et al. P ro tective effects o f Panax noto ginsen g sa po nins o n cerebral ischemia reper fusion injury in rats. Zho ng guo Lin C huang Shen Jing Ke Xue.2002 ; 10(1) :90. Chinese. 刘建辉, 冀风云, 王婷, 等. 三七总皂苷对脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究. 中国临床神经科学 ; 10(1) :90. 5 He W, Zhu ZP, Liu JX, et al. Study on therapeutic w indo w o f opportunity for Panax notoginseng saponins follow ing focal cerebral ischemia/reperfusion injury in ra ts.z ho ng Yao Cai.2004 ;27(1) :25 27.Chinese w ith a bstract in E nglish. 何蔚, 朱遵平, 刘建新, 等. 三七总皂苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有效治疗时间窗研究. 中药材 ; 27(1) : Lo ng a EZ, Weinstein PR, Ca rlson S, et al. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectom y in ra ts. Stro ke.1989 ; 20(1) : Basu A, Lazovic J, Kra dy J K, et al.interleukin 1 and the interleukin 1 ty pe 1 receptor are essential for the pro gressive neurodegeneration that ensues s ubsequent to a mild hypo xic/ischemic injury. J Cereb Blo od Flo w Metab.2005 ;25(1) : Sha rma BK, Ku mar K. Role of proinflammatory cyto kines in cerebral ischemia : a revie w. M etab Brain Dis ; 13(1) : Basu A, K rady J K, O'malley M,et al. The ty pe 1 inter leukin 1 receptor is essential fo r the efficient activation o f microglia and the induction of multiple proinflammatory mediato rs in res ponse to brain injury. J Neurosci ; 22(14) : Wang X, Baro ne FC, Aiyar N V, et al. Interleukin 1 rece pto r a nd receptor a ntag onist gene ex pression after focal stro ke in rats. Stro ke.1997 ;28(1) : Rothlein R. Overview of leukocyte adhesion. Neurology ; 49(5 s uppl 4) : S3 S4. 12 Srinivasula S M, Fernandes Alnemri T, Zangrilli J, et al. T he Ced 3/inte rleukin 1beta converting enzyme like ho molog Mch6 and the lamin cleaving enzyme Mch2alpha are substra tes for the apoptotic mediator CPP32. J Biol Chem ;271(43) : Matsushita K, W u Y, Qiu J, et al. Fas receptor and neuronal cell death after spinal cord ischemia. J Neurosci ; 20(18) :

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