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1 猪 繁 殖 与 呼 吸 障 碍 综 合 征 Porcine Reproductive And Respiratory Syndrome 薛 景 山 副 总 经 理 首 席 技 术 代 表 研 究 员 中 牧 实 业 股 份 有 限 公 司

2 猪 繁 殖 与 呼 吸 障 碍 综 合 征 (prrs) 简 介 历 史 1987 在 美 国 首 次 被 认 定, 由 于 病 原 琢 磨 不 透, 曾 被 称 为 神 秘 猪 病 ; 年 冬 季 出 现 在 西 欧, 并 迅 速 流 行, 并 有 蓝 耳 病 猪 流 行 性 流 产 与 呼 吸 系 统 综 合 征 等 多 种 名 称 目 前 国 际 统 一 名 称 为 猪 繁 殖 与 呼 吸 障 碍 综 合 征 (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)

3 PRRS 简 介 病 原 学 最 近 的 分 类 为 网 巢 病 毒 目 Nidovirales 动 脉 炎 病 毒 科 Arteriviridae 动 脉 炎 病 毒 属 Arterivirus, 单 股 正 链 RNA, 约 15kb 病 毒 直 径 50 70nm 三 种 主 要 结 构 蛋 白 : 核 壳 蛋 白 N, 膜 蛋 白 M 和 包 膜 糖 蛋 白 E 另 外 三 种 较 少 的 糖 蛋 白 是 G4,G3 和 G2 根 据 基 因 序 列 分 析,PRRSV 分 为 两 个 基 因 型, 北 美 洲 型 (VR2332) 和 欧 洲 型 (LV), 二 者 基 因 同 源 性 60%

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6 PRRS 简 介 PRRSV 的 变 异 PRRSV 在 合 成 时 容 易 错 误, 产 生 点 突 变 缺 失 添 加 和 毒 株 间 的 基 因 重 组 ; 我 国 高 致 病 性 蓝 耳 病 的 变 异 点 是 NSP2 基 因 上 30 个 氨 基 酸 的 缺 失 我 国 高 致 病 性 蓝 耳 病 毒 株 (NVDC JXA1) 序 列 与 美 洲 型 (VR 2332 株 ) 和 欧 洲 型 (LV 株 ) 的 序 列 同 源 性 分 别 达 到 % 和 63.4% 64.5%, 与 2002 年 的 国 内 株 (HB 1SH) 同 源 性 达 97.1% 98.2%, 说 明 我 国 高 致 病 性 蓝 耳 病 更 可 能 是 自 身 变 异 产 生 的 新 毒 株.

7 PRRS 简 介 PRRSV 的 抵 抗 力 对 自 然 抵 抗 力 弱 20 :1 6 天 ;4 :7 天 90% 活 力 丧 失 ;37 :3 24 小 时 ;56 :6 20 分 钟 对 消 毒 剂 的 敏 感 性 几 乎 对 各 种 消 毒 剂 都 敏 感

8 PRRS 简 介 地 理 分 布 世 界 主 要 生 猪 产 地 都 有 发 生 目 前 确 认 无 PRRS 的 国 家 仅 有 澳 大 利 亚 新 西 兰 瑞 士 和 瑞 典

9 PRRS 简 介 主 要 临 床 特 征 (1) 随 猪 的 大 小 不 同 而 不 同 感 染 的 新 生 猪 主 要 表 现 呼 吸 困 难, 结 膜 炎, 发 热, 被 毛 粗 糙, 厌 食, 腹 泻, 震 颤, 皮 肤 红 斑, 眼 睑 水 肿, 死 亡 率 可 能 会 较 高 ; 断 奶 仔 猪 和 架 子 猪 主 要 表 现 发 热, 肺 炎, 发 育 迟 缓, 如 并 发 细 菌 感 染 则 死 亡 率 增 加 ; 成 年 猪 种 公 猪 和 种 母 猪, 及 后 备 母 猪 经 常 发 生 亚 临 床 感 染, 如 短 暂 发 热 和 食 欲 不 振 ;

10 PRRS 简 介 主 要 临 床 特 征 (2) 成 年 猪 也 有 死 亡 的 报 道, 最 近 的 高 致 病 毒 株 被 称 为 母 猪 流 产 与 死 亡 综 合 征 ; 繁 殖 障 碍 与 病 毒 感 染 的 成 因 关 系 已 经 很 明 确, 实 验 室 可 以 复 制 出 繁 殖 障 碍 的 发 生 妊 娠 后 期 感 染 可 造 成 流 产, 胎 儿 干 尸 化, 死 胎, 出 生 后 死 亡 的 弱 胎 等, 目 前 还 不 清 楚 妊 娠 早 期 感 染 是 否 会 引 起 繁 殖 障 碍 ; 不 同 的 毒 株 对 繁 殖 的 毒 力 影 响 不 同, 有 的 毒 株 经 胎 盘 传 播 但 对 胎 儿 没 什 么 影 响

11 PRRS 简 介 主 要 临 床 特 征 (3) PRRSV 对 呼 吸 系 统 感 染 的 重 要 性 还 了 解 的 不 多 单 独 的 PRRSV 感 染 很 难 复 制 出 明 显 呼 吸 系 统 疾 病, 也 不 能 表 现 出 对 细 菌 易 感 性 的 增 加 该 病 毒 可 以 使 继 发 感 染 更 严 重, 但 机 理 还 不 清 楚 我 国 高 致 病 性 蓝 耳 病 主 要 表 现 为 发 病 率 高 ( 可 达 100%), 死 亡 率 高 ( 可 达 50% 以 上 ), 流 产 率 高 ( 可 达 30% 以 上 ) 育 肥 猪 也 可 发 病 并 死 亡

12 PRRS 简 介 危 害 直 接 危 害 间 接 危 害 : 毒 株 不 同 感 染 阶 段 不 同, 对 动 物 免 疫 系 统 的 破 坏 不 同

13 PRRS 爆 发 对 猪 瘟 免 疫 合 格 率 的 相 关 观 察 ( 佘 永 建 等 2002, 四 川, 种 猪 场 ) 日 期 检 测 头 数 方 法 猪 瘟 免 疫 合 格 率 IHA 100%(100/100) 爆 发 PRRS IHA 31.7%(67/211) 全 群 紧 急 预 防 HCLV IHA 83.3%(50/60) < > 返 回 退 出

14 人 工 感 染 PRRS 等 病 毒 猪,HCLV 免 疫, HCV 攻 毒 后, 体 内 带 毒 情 况 检 测 ( 宁 宜 宝 2003) 人 工 感 染 组 别 数 量 HCLV 免 疫 HCV 攻 毒 扑 杀 后 抗 原 阳 性 猪 HCV PRRSV PRRS 蓝 耳 /3 3/3 PRV PRV( 伪 狂 ) /3 2/3 PPV PPV( 细 小 ) /3 1/3 三 种 混 合 感 染 /3 2/3 3/3 2/3 未 感 染 病 毒 免 疫 对 照 /4 ( ) 未 免 对 照 4 + 4/4 < > 返 回 退 出

15 国 内 近 期 猪 病 料 PRRSV 检 测 结 果 作 者 省 份 年 份 检 测 方 法 PRRSV 阳 性 率 华 中 农 大 全 国 2002 PCR 50.29%(1934/3864) 卫 秀 余 全 国 2004 PCR 58.1%(283/487) 备 注 全 国 送 检 样 品 全 国 送 检 样 品 初 步 推 测, 国 内 约 80% 以 上 猪 场 感 染 PRRS < > 返 回 退 出

16 PRRS 的 诊 断 农 业 部 三 指 标 临 床 指 标 : 体 温 41 以 上, 眼 结 膜 炎 眼 睑 水 肿 ; 呼 吸 道 症 状 ; 后 躯 无 力, 共 济 失 调 ; 仔 猪 发 病 100% 死 亡 50%, 成 年 猪 也 可 发 病 病 理 指 标 : 脾 脏 坏 死 灶, 显 微 镜 下 为 出 血 性 梗 死 ; 肾 脏 土 黄 色, 表 面 出 血 点 或 斑, 皮 下 扁 桃 体 心 脏 膀 胱 肝 脏 和 肠 道 出 血 点 或 斑, 显 微 镜 下 肾 间 质 炎, 心 肝 和 膀 胱 出 血 性 渗 出 性 炎 症 ; 部 分 有 肠 道 出 血 溃 疡 和 坏 死 病 原 学 指 标 : 病 毒 分 离 与 鉴 定 ;HP PRRSV 的 PCR

17 PRRS 的 诊 断 病 理 变 化 (OIE) 与 PRRSV 感 染 一 致 的 肉 眼 病 变 和 微 观 病 变 一 般 发 生 在 新 生 仔 猪 和 保 育 猪 上 大 一 点 的 猪 病 变 类 似, 但 不 够 特 征 肉 眼 病 变 往 往 程 度 不 同, 肺 脏 病 变 从 看 不 到 明 显 病 变 到 弥 散 性 硬 化, 由 于 常 并 发 细 菌 感 染 往 往 会 变 的 比 较 复 杂 小 猪 常 发 生 淋 巴 结 明 显 肿 大 胎 儿 病 变 表 现 为 脉 管 炎 心 肌 炎 和 脑 炎, 但 不 尽 一 致

18 PRRS 的 诊 断 病 理 变 化 (OIE) 显 微 病 变 常 发 生 在 肺 脏 和 淋 巴 组 织, 但 为 非 特 异 性 病 变 肺 脏 病 变 的 特 征 是 弥 漫 性 间 质 性 肺 炎, 表 现 为 肺 泡 间 单 核 细 胞 浸 润,2 型 肺 细 胞 肥 大 增 生, 明 显 的 炎 性 和 坏 死 性 肺 泡 浸 出 液 聚 集 淋 巴 结 表 现 淋 巴 滤 泡 增 生 坏 死 性 病 灶 淋 巴 滤 泡 中 有 碎 片 PRRSV 感 染 是 猪 间 质 性 肺 炎 的 传 染 因 子 与 猪 园 环 病 毒 2 型 相 关 的 断 奶 仔 猪 多 系 统 衰 竭 综 合 征 也 经 常 造 成 猪 间 质 性 肺 炎 和 淋 巴 结 炎

19 PRRS 的 诊 断 OIE 以 实 验 室 方 法 为 主, 病 原 学 和 血 清 学 方 法 病 原 学 方 法 : 免 疫 组 化 法 : 即 可 鉴 定 抗 原 又 可 观 察 组 织 病 变 免 疫 荧 光 法 : 同 上 原 位 杂 交 法 : 可 区 分 北 美 洲 和 欧 洲 基 因 型 RT PCR: 对 病 毒 核 酸 高 度 敏 感, 可 由 于 检 测 组 织 和 血 清 样 品 中 的 病 毒 巢 式 PCR: 同 上 复 合 引 物 PCR(Complex PCR): 可 区 分 北 美 洲 和 欧 洲 基 因 型

20 PRRS 的 诊 断 OIE 病 毒 的 分 离 与 鉴 定 : 是 最 可 靠 的 方 法, 但 也 是 病 原 学 中 最 困 难 的 方 法 主 要 困 难 是 : 肺 泡 巨 噬 细 胞 来 源 困 难 肺 泡 巨 噬 细 胞 也 有 敏 感 性 的 问 题, 需 要 多 批 混 合, 需 液 氮 保 存, 并 且 使 用 前 要 测 定 敏 感 性 猴 肾 细 胞 系 虽 然 用 于 疫 苗 生 产, 但 对 很 多 毒 株 敏 感 性, 特 别 是 欧 洲 型 毒 株, 在 没 有 肺 泡 巨 噬 细 胞 的 情 况 下 可 考 虑 使 用 时 间 长, 至 少 2 周

21 PRRS 的 诊 断 OIE 血 清 学 诊 断 方 法 : 免 疫 荧 光 法 (IFA) 免 疫 过 氧 化 物 酶 单 层 细 胞 法 (IPMA) 酶 联 免 役 吸 附 试 验 (ELISA) 上 述 三 方 法 是 OIE 推 荐 方 法, 都 有 很 好 的 敏 感 性 和 特 异 性 尽 管 会 有 个 体 出 现 非 特 异 性 反 应, 但 通 过 间 隔 2 3 周 重 复 测 定 则 可 排 除

22 PRRS 的 疫 苗 现 状 美 国 : 只 有 美 洲 型 疫 苗, 包 括 基 因 修 饰 弱 毒 疫 苗 和 灭 活 疫 苗 其 基 因 修 饰 弱 毒 疫 苗 分 针 对 繁 殖 型 呼 吸 型 和 繁 殖 + 呼 吸 三 种, 灭 活 疫 苗 主 要 针 对 繁 殖 型 ( 流 产 和 弱 胎 ) 欧 洲 : 有 美 洲 型 和 欧 洲 型 疫 苗, 都 是 基 因 修 饰 弱 毒 疫 苗 中 国 : 淘 汰 所 有 弱 毒 疫 苗, 采 用 高 致 病 性 毒 株 制 备 灭 活 疫 苗

23 PRRS 的 免 疫 及 存 在 的 问 题 OIE 疫 苗 能 控 制 感 染 吗? 无 论 弱 毒 疫 苗 还 是 灭 活 疫 苗 都 不 能, 但 对 已 经 面 临 PRRS 问 题 的 群 体 和 处 于 高 度 感 染 威 胁 的 群 体, 疫 苗 免 疫 还 是 有 很 大 的 实 际 意 义 弱 毒 疫 苗 存 在 什 么 问 题? 弱 毒 疫 苗 可 以 感 染 动 物, 在 体 内 繁 殖, 并 排 出 病 毒 传 播 病 毒 感 染 非 免 疫 动 物 有 可 能 造 成 疫 苗 毒 诱 导 的 繁 殖 障 碍 发 生 弱 毒 疫 苗 免 疫 的 种 公 猪 和 感 染 的 种 公 猪 都 会 通 过 精 液 排 毒, 并 且 精 子 的 形 态 和 功 能 都 会 发 生 变 化

24 PRRS 的 免 疫 及 存 在 的 问 题 OIE 弱 毒 疫 苗 适 用 范 围 PRRSV 阳 性 群 体, 用 于 3 周 龄 以 上 的 猪 以 减 轻 PRRS 的 损 害 ; 配 种 前 3 6 周 的 母 猪 和 后 备 母 猪 弱 毒 疫 苗 不 适 用 的 范 围 清 洁 群 体, 怀 孕 母 猪, 后 备 母 猪, 交 配 年 龄 的 种 公 猪

25 我 国 高 致 病 性 蓝 耳 病 疫 苗 适 用 范 围 农 业 部 3 周 龄 以 上 仔 猪,2ml/ 头 ; 母 猪, 怀 孕 40 日 内 进 行 初 次 免 疫, 间 隔 20 日 加 强 一 次, 以 后 每 6 个 月 一 次 ; 种 公 猪 初 次 接 种 与 母 猪 同 时 进 行, 间 隔 20 日 加 强 一 次, 以 后 每 6 个 月 一 次 副 反 应 : 减 食 呕 吐, 流 产? 实 验 室 效 力 :4/5 保 护, 田 间 效 力? 实 际 免 疫 持 续 期 : 无 数 据

26 PRRS 的 免 疫 与 感 染 的 关 系 OIE (1) 抗 体 水 平 与 感 染 的 关 系 猪 感 染 后 仍 能 保 持 4 6 周 的 病 毒 血 症 PRRSV 感 染 与 其 它 病 毒 感 染 的 不 同, 其 神 秘 点 就 是 病 毒 血 症 的 时 间 超 长, 并 具 有 传 播 的 能 力 尽 管 抗 体 的 抗 感 染 水 平 似 乎 很 有 限, 但 随 着 中 和 抗 体 的 增 加, 血 液 中 的 病 毒 滴 度 就 会 下 降 母 源 抗 体 可 否 抵 御 早 期 感 染 目 前 尚 不 清 楚, 血 清 阳 性 的 母 猪 所 产 仔 住 仔 猪 4 周 后 仍 可 查 出 病 毒 血 症, 但 有 母 源 抗 体 的 仔 猪 确 实 表 现 出 了 一 定 的 抗 病 力

27 PRRS 的 免 疫 与 感 染 的 关 系 OIE (2) 母 猪 二 次 感 染 还 会 发 病 吗? 康 复 猪 二 次 后, 一 般 不 会 再 次 表 现 繁 殖 障 碍 PRRSV 感 染 后 会 终 身 带 毒 吗? 病 毒 血 症 不 会 终 身 存 在,4 6 周 后 消 失, 而 淋 巴 结 仍 保 持 着 持 续 感 染 状 态, 但 似 乎 不 会 产 生 终 身 带 毒

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第 期 王 兴 涛 等 猪 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 种 猪 精 液 分 离 株 的 鉴 定 及 进 化 分 析 病 料 毒 株 及 细 胞 试 剂 引 物 设 计 提 取 及 基 因 克 隆 及 测 序

第 期 王 兴 涛 等 猪 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 种 猪 精 液 分 离 株 的 鉴 定 及 进 化 分 析 病 料 毒 株 及 细 胞 试 剂 引 物 设 计 提 取 及 基 因 克 隆 及 测 序 河 南 农 业 科 学 王 兴 涛 罗 俊 滕 蔓 樊 剑 鸣 鄂 巍 禹 斌 刘 力 张 改 平 利 用 技 术 对 河 南 省 某 规 模 化 猪 场 乙 脑 疑 似 病 例 的 种 猪 精 液 进 行 分 析 从 部 分 样 本 中 扩 增 出 与 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 基 因 和 基 因 具 有 高 度 同 源 性 的 预 期 产 物 在 日 龄 乳 鼠 脑 内 接 种 种 猪

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