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夫宗蓬
7 years ago
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1 中华高血压杂志年月第卷第期 -.&),+)/0)1),/ 论著阿托伐他汀对肾性高血压大鼠心肌肥厚及活性氧信号通路的影响方伟进李瑞芳曹珊珊宋莹李艳王建刚河南科技大学药理学与分子生物学重点实验室河南洛阳摘要目的观察阿托伐他汀对肾性高血压大鼠心肌活性氧生成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶 /3& 氧化酶及活化蛋白表达的影响探讨阿托伐他汀抑制心肌肥厚的作用机制方法用两肾两夹法建立高血压模型共! 只分! 组每组只假手术对照组组模型组两肾两夹组 6 组两肾两夹 D 阿托伐他汀高剂量组 - 组两肾两夹 D 阿托伐他汀低剂量组 3 组两肾两夹 D 坎地沙坦组组术后周进行药物处理给药周后颈动脉插管至左心室测定主动脉压及左心室内压并观察左心室质量指数 ;2 形态学变化心室肌超氧阴离子的生成 )+),1+ 检测左心室 /3& 氧化酶亚基 / 及的表达情况结果与组比较 6 组大鼠左心室收缩末压 % % 比 %%! ;2 % % 比 % % '' 心室肌中的生成!%#% 比 %% 明显升高均 % 与 6 组比较 -3 组大鼠 ;2%% %#% 比 % %''%! 心室肌中的生成!%%!%% 比!%#%% 明显减弱组大鼠左心室收缩末压 % % 比 % % % ;2%% 比 % %''%! 心室肌中的生成!%% 比!%#%% 明显降低与组比较 6 组大鼠 / 及的蛋白表达明显增加 % 与 6 组比较 -3 组左心室 / 及蛋白表达均明显降低 % 结论阿托伐他汀能明显抑制两肾两夹肾性高血压大鼠左心室和 / 的表达减少的生成同时可下调转录因子的表达该作用可能与其抑制心肌肥厚的作用有关关键词肾性高血压阿托伐他汀心肌肥厚还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶活化蛋白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基金项目河南科技大学创新能力培育基金项目 -A 通信作者李瑞芳,*'

氧生成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶 /3& 氧化酶及活化蛋白表达的影响探讨阿托伐他汀抑制心肌肥厚的作用机制方法用两肾两夹法建立高血压模型共! 只分!

2 中华高血压杂志年月第卷第期 -.&),+)/0)1),/ % -4 3 ', 5),)'*+4),))44+))4+14,),) %%0 % % % +);2%% 0% %''%!4+)')),+,+) * 0)+,,)!%%0!%#%% ',5),)'*+,)4)4 -,)4+',+),+)),)* /4 ',6 5),)'*+,))4 % 5)+),+)),)*+))*+0)+,, /4-3',5),) 4),))4,),1,)4+',6 % +, )),)* )*+0)+,, 4/4),))+)')),+* ;44+)),)*+)+,,+*+, 5+,1+)++1+*,4),+, ()*)),+)+,0++-,4),+,/3&4)+0),+) 高血压发展到一定程度会导致心脏重构心肌肥厚是其重要的病理表现随着对高血压发病机制的深入研究人们逐渐发现心肌肥厚是独立于血压之外的一种危险因素近年来的研究证实还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶 /3& 氧化酶催化亚基 / 家族在心肌肥厚的发病过程起着重要作用且可以激活转录因子活化蛋白 +0),+) 协同加速心肌肥厚的致病过程但多限于体外实验在动物体内 /3& 氧化酶是否通过调控参与心肌肥厚的发病过程尚未有研究阿!# 托伐他汀的非降脂作用近年来倍受关注有研究表 # 明阿托伐他汀可以抑制心肌肥厚但其具体治疗机制目前还不清楚本文以阿托伐他汀作为抑制心肌肥厚的药物观察肾性高血压时 /3& 氧化酶催化亚基 / 调节亚基及转录因子的表达情况及阿托伐他汀的调节作用材料与方法. 主要试剂及两肾两夹法高血压模型制备阿托伐他汀钙片北京嘉林药业批号 &! 多克隆抗体 /-9 单克隆抗体 , 公司兔抗羊二抗 8+-, 公司羊抗兔二抗北京中杉金桥蛋白电泳电转仪美国 64 公司 6; 生物机能实验系统成都泰盟科技公司 8 可见光分光光度仪上海棱光技术有限公司机械匀浆器德国 ( 公司两肾两夹模型制作方法参考有关文献腹腔注射戊巴比妥钠溶液!'' 麻醉大鼠俯卧位固定沿背部后正中线切开皮肤棉签钝性分离双侧皮下浅筋膜小心游离出左右肾动脉将一内径为 % 的钛合金夹呈水平方向套在左右肾动脉上向腹腔内注入 %!; 青霉素 7 万 =; 关闭腹腔开口假手术组只游离动脉不缩窄继续培养周后选取收缩压 # % 的大鼠用作高血压大鼠动物分组及给药实验动物清洁级健康雄性 8,')35)83 大鼠河南科技大学实验动物中心提供! 只体质量 ' 合格证号 8-( 鄂分组术后周依据血压标准将模型随机分为! 组每组只假手术对照组组以同等生理盐水灌胃两肾两夹组 6 组以同等生理盐水灌胃两肾两夹 D 阿托伐他汀高剂量组 - 组给予阿托伐他汀 ''4 两肾两夹 D 阿托伐他汀低剂量组给予阿托伐他汀!''4 两肾两夹 D 坎地沙坦组组给予坎地沙坦 ''4 各组均灌胃周每周测体质量按体质量来调整用药量有创测压左心室质量指数 )2,)(*( '&-3 的测定有创测压方法参照文献中的方法进行腹腔注射戊巴比妥钠!'' 仰卧固定大鼠颈中部开口分离右颈动脉近心端夹闭远心端用手术线结扎三通管分别连结插管肝素生理盐水压力传感器将右颈动脉开一小口将插管插入血管直到主动脉弓此时显示主动脉压记录波形读取数值继续深入插管稍有突破感此时插管已进入左心室显示为左心室内压记录波形读取数值以室内压最大上升下降速率 44+ 作为反应心脏功能的指标血流动力学参数检测结束后迅速打开胸腔用生理盐水冲洗心脏取出心脏分剪出左心室用电子天秤称量左心室质量与体质量的比值作为 ;2 大鼠左心室常规苏木素伊红染色在血流动力学参数检测完成后打开胸腔取出心脏放入多聚甲醛固定液中固定后经流水冲洗脱水透明石蜡包埋切片等一系列过程后进行常规苏木素伊红染色切片厚度为! 光镜下观察后拍照共聚焦显微镜检测大鼠左心室肌中超氧阴离子 5 4 产生二氢乙啶是一种氧化荧光染料能被氧化成红色荧光物质溴化乙啶用于的测定将大鼠处死后取出心脏分剪出左心室各组大鼠左心室肌被冰冻切成的切片与 ;

%#%% ',5),)'*+,)4)4 -,)4+',+),+)),)* /4 ',6 5),)'*+,))4 % 5)+),+)),)*+))*+0)+,, /4-3',5),) 4),))4,),1,)4+',6 % +,0++ 1++)),)* )*+0)+,, 4/4),))+)')),+* ;44+)),)*+)+,,+*+, 5+,1+)++1+*,4),+,

3 中华高血压杂志年月第卷第期 -.&),+)/0)1),/ 的二氢乙啶在避光孵育之后放在共聚焦显微镜下检测荧光物质强度此外设立 /3& 氧化酶抑制剂 4)))43 组加入 ;3 后观察荧光强度大鼠左心室 6&7)% 检测 )+),1+ 检测的心肌组织取材部位为左心室沿房室环剪去大血管心房及右心室游离壁将余下的室间隔左心室游离壁作为检测指标取各组大鼠左心室 ' 加入三去污裂解液 ; 至匀浆器冰上间歇匀浆裂解分装于 %! ; 管中下 F 离心! 取上清定量每个胶孔取上样量 ' 经阴离子去污剂十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳凝胶电泳分离蛋白电转至聚偏氟乙烯膜上脱脂奶粉室温封闭一抗过夜加辣根过氧化酶标记二抗室温最后进行 -; 化学发光法显色统计学方法计量数据以均数标准差 0 表示应用 888% 分析软件进行统计分析多组间比较采用单因素方差分析组间两两比较采用 ;83 检验以 %! 为差异有统计学意义结果阿托伐他汀对大鼠血压及的影响与组比较术后周 6 组大鼠主动脉收缩压,+ +,),)8 主动脉舒张压,+4+,),)3 左心室收缩末压 )*+0)+,, )4+,),);8 以及左心室舒张末压 )*+0)+,,)44+,),);3 明显升高 %!D44+ 和 44+ 明显减少 %! 经阿托伐他汀治疗周后 44+ 明显上升 %!83;8;3 降低但差异无统计学意义 %! 见表表阿托伐他汀对大鼠血压及 ;2 的影响 0 组别 8 3 ;8 ;3 D ;2 ''!!!! 6! # - # 1 1 # #! 1 # 1! # 3 #! 1 # 1 # 1! # #!!! 注组假手术对照组 6 组两肾两夹组 - 组两肾两夹 D 阿托伐他汀高剂量组 3 组两肾两夹 D 阿托伐他汀低剂量组组两肾两夹 D 坎地沙坦组 8 主动脉收缩压 3 主动脉舒张压 ;8 左心室收缩末压 ;3 左心室舒张末压 D44+ 室内压最大上升速率 44+ 室内压最大下降速率 ;2 左心室质量指数与组比较! 与 6 组比较! 与组比较 1! 与组比较 6 组 ;2 明显增加 %! 经阿托伐他汀治疗后 -3 组 ;2 明显低于 6 组 %! 与组比较 -3 组 ;2 差异无统计学意义 %! 见表阿托伐他汀对大鼠心肌形态学的影响病理切片染色显示组心肌细胞排列整齐心肌细胞大小正常术后周 6 组大鼠出现心肌细胞肥大并且心肌细胞排列紊乱细胞核发生增大畸形等改变经阿托伐他汀和坎地沙坦治疗后心肌细胞上述形态得到明显改善见图注假手术对照组 6 两肾两夹组 - 两肾两夹 D 阿托伐他汀高剂量组 3 两肾两夹 D 阿托伐他汀低剂量组两肾两夹 D 坎地沙坦组由图可见 6 组大鼠心肌细胞肥大心肌纤维排列紊乱胞核增大畸形等改变图阿托伐他汀对大鼠心室肌组织形态学的影响 & 染色 F 阿托伐他汀对大鼠左心室中 4 5 产生的影响应用共聚焦显微镜测定心室肌中浓度与组比较 6 组大鼠心室肌中生成明显增加 % 与 6 组比较 -3 组大鼠的生成明显减

心房及右心室游离壁将余下的室间隔左心室游离壁作为检测指标取各组大鼠左心室 ' 加入三去污裂解液 ; 至匀浆器冰上间歇匀浆裂解分装于 %! ; 管中下 F 离心!

4 . 2=6. 中华高血压杂志!121 年 22 月第 1 卷第 22 期!E, ' 4F8+-A D A4)!G.HA%IA D121!J. (/1G./22 少% 72&)# 组能明显减少左心室 L1 g. 的生成! 但差异无统计学意义%图 1&)2&%. +Y Q<[能使两 ( /! 阿托伐他汀对大鼠左心室中 ;*;57Q VRW 蛋白表达的影响! 与 Z 组比较! T 组大鼠左心室 GZQ% <&8 肾两夹组大鼠的左心室中 L1 g. 生成减少% 72&) 氧化酶的调节亚基 -6=-,.^ 与催化亚基 GL_6 的蛋白表达明显增多 %! % 72&,与 T 组相比较! Q* #组大鼠心室肌中 -6=-,.^*GL_6 的蛋白表达降低!其中 Q 两组比较!差异无统计学意义%!# 73&! #两组比较!降低 -6=-,.^*GL_6 表达差异无统计学意义 %!# 73&!见图!) /%! 阿托伐他汀对大鼠左心室中.I! 蛋白表达的影响! 与 Z 组比较! T 组大鼠左心室Z< 2的蛋白表达增多%! % 72&,与 T 组比较!# 组大鼠左心室中 Z< 2的蛋白表达明显下降 % 72&! Q 组虽能降低 Z< 2的表达!但与 T 组比较!差异无统计学意义%!# 73&) # 组降低 Z< 2 更明显!但组间比较!差异无统计学意义!见图 6) #! 讨! 论本研究发现阿托伐他汀治疗 6 周!两肾两夹大鼠的 YJP[下降!NR<+R %&^升高!说明阿托伐他汀可以抑制心肌肥厚*改善心功能!但血压改变不明显) 同时!实验结果显示!阿托伐他汀能够明显降低两肾两夹大鼠的活性氧生成!因此本研究从氧化应激角度出发! Z 组假手术对照组, T 组两肾两夹组, E 组两肾两夹 h!! 注对其抑制心肌肥厚的机制进行了研究) 肾性高血压发展过程中伴随活性氧产生增多!出阿托伐他汀高剂量组, Q 组两肾两夹 h 阿托伐他汀低剂量组, # 组两肾两夹 h 坎地沙坦组)Q<[还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸现氧化应激状态) 而活性氧的主要来源是血管 '( %磷酸&氧化酶抑制剂) 图! 阿托伐他汀对大鼠心室肌中 L1 g. 产生的影响% :2& GZQ% <&8氧化酶 6!它包含催化亚基和调节亚基!催化亚基包括一类称为 GL_ 的异构体蛋白!是转移电子 *I* ( ' 4蛋白的内参照)Z 组假手术对照组, T 组两肾两夹组, E 组两肾两夹 h 阿托伐他汀高剂量组, Q 组两肾两夹 h 阿托伐他汀!! 注 / 低剂量组, # 组两肾两夹 h 坎地沙坦组)同样试验重复! 次后得到相似结果) 图 #! 阿托伐他汀对大鼠左心室 -6=-,.^ * GL_6 蛋白表达的影响% :2&

#两组比较!降低 -6=-,.^*GL_6 表达差异无统计学意义 %!# 73&!见图!) /%! 阿托伐他汀对大鼠左心室中.I! 蛋白表达的影响! 与 Z 组比较! T 组大鼠左心室Z< 2的蛋白表达增多%! % 72&,与 T 组比较!# 组大鼠左心室中 Z< 2的蛋白表达明显下降 % 72&! Q 组虽能降低 Z< 2的表达!

5 中华高血压杂志年月第卷第期 -.&),+)/0)1),/! 本主题国内外已有的结论 /3& 氧化酶在心肌纤维化时活性增加其亚基在心肌和血管有不同程度高表达血管紧张素通过 / 通路激活阿托伐他汀可以抑制内源性活性氧产生抑制心肌细胞肥大本文的新发现新见解 /3& 氧化酶催化亚基 / 和调节亚基在肾性高血压所致心肌肥厚时高表达注活化蛋白 +1 为蛋白的内参照组假手术对照组 6 组两肾两夹组 - 组两肾两夹 D 阿托伐他汀高剂量组 3 组两肾两夹 D 阿托伐他汀低剂量组组两肾两夹 D 坎地沙坦组两肾两夹术后周各组大鼠左心室内的表达情况阿托伐他汀高剂量组和坎地沙坦能明显降低左心室中的表达阿托伐他汀抑制肾性高血压大鼠 / 和的表达及其来源的的生成同时抑制心肌肥厚参考文献图阿托伐他汀对大鼠左心室中蛋白表达的影响生成的部位以 / 在心血管中表达最多调节亚基中以最为重要在本研究结果显示两肾两夹组大鼠左心室中活性氧的生成明显增多处于明显的氧化应激状态用 3 干预后活性氧得到明显抑制 )+),1+ 检测结果也表明在两肾两夹组大鼠左心室中 / 的表达明显增高说明体内主要来源于 /3& 氧化酶并且 /3& 氧化酶及其来源的活性氧在肾性高血压大鼠心肌肥厚发生发展过程中起重要作用应用阿托伐他汀干预后发现阿托伐他汀不仅可以有效降低左心室内 / 的表达水平左心室内活性氧的生成也得到明显抑制氧化应激得到有效控制该结果提示 /3& 氧化酶可能是阿托伐他汀治疗心肌肥厚的重要作用靶点此外 4 等在体外实验中指出转录因子的激活存在于 / 参与的心肌肥厚发病过程中并且活性氧可能作为激活的信号分子但在体内实验中是否依然存在这种情况不太清楚因此本研究利用 )+),1+ 技术对各组大鼠左心室中的表达情况进行检测结果表明两肾两夹组大鼠左心室中的表达明显高于对照组阿托伐他汀治疗后表达减弱说明在体内的激活同样存在于 /3& 氧化酶参与的心肌肥厚过程中这与体外实验结果一致上述结果提示阿托伐他汀可能通过抑制 /3& 氧化酶的表达减少的生成在改善氧化应激的同时下调肥大因子的表达该机制可能参与了其抑制心肌肥厚的作用这对指导阿托伐他汀临床应用具有重要意义周四桂潘雪刁唐富天等依那普利对肾性与自发性高血压大鼠左心室及 782 表达的影响. 中国药理学通报 ## 4 /A'292)+/3&4)4,4,)4)'.&),+:) #!.()+,892)+/3&4)/ 9,,)*4+0)+,)+)*'),+.2)4 ))!!!#!!! /;))3)+/3&4))4 +)7:1)+4)4+0+*4)*1,1+.. 8/),!8)>()>)++0++&27-,)4+)1+,)),+)/84))4)+,+)+0)+ '+'+) 4)4,40,,)4)'4,) *).-,) ## #04,')-0),)++, (1)+,+1,4),+, #! ' 2;2)8;-' &)+*)+*,0++ )*+0)+,,+)+54))),+)0),+.&),+-,#! 曹珊珊李瑞芳方伟进等肾性高血压大鼠模型制作的改良方法. 河南科技大学学报 #!# 王平陈少锐王晓炜等丹参酮抑制肾性高血压大鼠氧化应激和心肌肥厚. 中华高血压杂志李瑞芳高洁乐康等非诺贝特治疗大鼠左心室肥厚. 中华高血压杂志 #!! 3),,)-7,+)(2)+-,+,)*+)/3 &4)1+ *,)*+0)+,,,)4)'4 *+4,00*+),,4*,+.-, ) # (),)4, 2)+))4)')) ''+5,)'+)+,),)),4+) 074 +,,+*+,.,!! 收稿日期责任编辑林东杰

和调节亚基在肾性高血压所致心肌肥厚时高表达注活化蛋白 +1 为蛋白的内参照组假手术对照组 6 组两肾两夹组 - 组两肾两夹 D 阿托伐他汀高剂量组 3 组两肾两夹 D 阿托伐他汀低剂量组组两肾两夹 D 坎地沙坦组两肾两夹术后周各

第期王兴涛等猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析病料毒株及细胞试剂引物设计提取及基因克隆及测序

第期王兴涛等猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析病料毒株及细胞试剂引物设计提取及基因克隆及测序河南农业科学王兴涛罗俊滕蔓樊剑鸣鄂巍禹斌刘力张改平利用技术对河南省某规模化猪场乙脑疑似病例的种猪精液进行分析从部分样本中扩增出与流行性乙型脑炎病毒基因和基因具有高度同源性的预期产物在日龄乳鼠脑内接种种猪

中 华 高 血 压 杂 志 年 月 第 卷 第 期 -.&),+)/0)1),/ % -4 3 ', 5),)'*+4),))44+))4+14,),) %%0 % % % +);2%% 0% %''%!4+)')),+,+) * 0)+,,)!%%0!%#%% ',5),)'*+,)4)4 -,)

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