第20章 自身抗体检测及应用1.doc

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1 安 徽 理 工 大 学 医 学 院 School of Medicine 教 案 首 页 第 次 课 授 课 时 间 年 月 日 教 案 完 成 时 间 : 年 月 日 课 程 名 称 免 疫 学 检 验 年 级 专 业 层 次 医 学 检 验 ( 本 科 ) 教 师 许 礼 发 专 业 技 术 职 务 副 教 授 授 课 方 式 ( 大 小 ) 大 学 时 3 授 课 题 目 ( 章 节 ) 自 身 抗 体 检 测 及 应 用 基 本 教 材 或 主 要 参 考 书 教 学 目 的 和 要 求 : 了 解 : 自 身 免 疫 自 身 免 疫 性 疾 病 自 身 抗 体 的 基 本 概 念 熟 悉 : 抗 核 抗 体 的 几 种 主 要 荧 光 模 型, 常 规 检 测 的 自 身 抗 体 与 临 床 疾 病 诊 断 的 关 系 掌 握 : 抗 核 抗 体 检 测 的 常 用 方 法 的 特 点, 总 抗 核 抗 体 检 测 和 抗 ENA 抗 体 谱 检 测 的 临 床 意 义, 抗 中 性 粒 细 胞 胞 浆 抗 体 检 测 及 意 义, 自 身 抗 体 检 测 的 临 床 应 用 原 则 大 体 内 容 与 时 间 安 排, 教 学 方 法 : 第 一 节 自 身 抗 体 特 性 第 二 节 常 见 自 身 抗 体 检 测 第 三 节 自 身 抗 体 检 测 的 临 床 应 用 0.5 学 时 2 学 时 0.5 学 时 教 学 重 点 :1. 常 见 的 自 身 抗 体 检 测 2. 自 身 抗 体 检 测 的 临 床 应 用 及 意 义 教 学 难 点 : 不 同 疾 病 中 各 种 自 身 抗 体 的 检 测 及 其 意 义 教 研 室 审 阅 意 见 : ( 教 研 室 主 任 签 名 ) 年 月 日

2 第 二 十 章 自 身 抗 体 检 测 及 应 用 自 身 免 疫 : 指 机 体 免 疫 系 统 受 某 些 内 因 外 因 或 遗 传 等 因 素 作 用, 产 生 针 对 自 身 正 常 或 变 性 的 组 织 器 官 细 胞 蛋 白 质 或 酶 类 等 自 身 抗 原 发 生 的 免 疫 应 答 反 应, 出 现 自 身 抗 体 或 自 身 致 敏 淋 巴 细 胞 的 现 象 自 身 免 疫 性 疾 病 : 自 身 免 疫 导 致 组 织 器 官 损 伤 或 功 能 障 碍 所 致 疾 病 自 身 抗 体 : 自 身 免 疫 性 疾 病 患 者 血 循 环 中 针 对 自 身 组 织 器 官 细 胞 及 细 胞 内 成 分 的 抗 体, 称 为 自 身 抗 体 第 一 节 自 身 抗 体 的 特 性 1. 自 身 免 疫 性 疾 病 都 伴 有 特 征 性 的 自 身 抗 体 谱 ; 2. 自 身 抗 体 是 某 些 自 身 免 疫 性 疾 病 标 记 性 抗 体 或 特 异 性 抗 体 ; 3. 自 身 抗 体 与 疾 病 的 活 动 性 有 相 关 性 ; 4. 自 身 抗 体 参 与 了 免 疫 病 理 性 损 伤 第 二 节 常 见 自 身 抗 体 的 检 测 自 身 抗 体 的 种 类 很 多, 临 床 检 测 中 最 常 见 的 自 身 抗 体 有 类 风 湿 因 子 抗 核 抗 体 抗 可 提 取 性 核 抗 原 抗 体 谱 抗 各 种 组 织 细 胞 抗 体 和 抗 受 体 抗 体 等 一 类 风 湿 因 子 ( 一 ) 定 义 类 风 湿 因 子 (RF) 是 一 种 抗 人 或 动 物 IgG 分 子 Fc 片 段 抗 原 决 定 簇 的 抗 体, 是 以 变 性 IgG 为 靶 抗 原 的 自 身 抗 体 ( 二 ) 分 类 常 见 的 RF 有 IgM 型 IgG IgA 型 和 IgE 型,IgM 型 RF 被 认 为 是 RF 的 主 要 类 型 ( 三 ) 检 测 方 法 1. 胶 乳 颗 粒 凝 集 实 验 : 为 定 性 或 以 滴 度 半 定 量 2. 速 率 散 射 比 浊 法 : 自 动 化 程 度 高, 能 定 量 分 析, 测 定 结 果 准 确 性 和 敏 感 性 均 高 于 胶 乳 凝 集 实 验 3. ELISA 法 ELISA 检 测 法 可 测 定 不 同 Ig 类 型 的 RF ( 四 ) 临 床 应 用 1

3 1. 高 滴 度 RF 阳 性 支 持 对 早 期 RA 的 诊 断 2.RA 患 者 RF 的 滴 度 与 患 者 的 临 床 表 现 呈 正 相 关 3.RF 还 可 在 SLE 进 行 性 全 身 性 硬 化 症 等 自 身 免 疫 性 疾 病 患 者 和 部 分 老 年 人 中 RF 的 阳 性 率 可 达 28.9% --50% 4.RF 对 RA 患 者 并 不 具 有 严 格 特 异 性,RF 阳 性 不 能 作 为 诊 断 RA 的 唯 一 标 准 5. 在 多 种 疾 病 中 可 有 RF 阳 性, 滴 度 均 较 低 (<40IU/mI), 随 着 RF 滴 度 增 加,RF 对 RA 的 诊 断 特 异 性 增 高 IgM 型 RF: 在 RA 患 者 血 清 中 IgM 型 RF 效 价 >80IU/ml 并 伴 有 严 重 关 节 功 能 障 碍 时, 通 常 提 示 患 者 预 后 不 良 IgG 型 RF: 在 RA 患 者 血 清 或 滑 膜 液 中 IgG 型 RF 的 出 现 与 患 者 的 滑 膜 炎 血 管 炎 和 关 节 的 症 状 密 切 相 关, 此 RF 常 伴 随 高 滴 度 的 IgM 型 RF 在 同 一 RA 患 者 血 清 或 滑 膜 液 中 出 现 IgA 型 RF:10% 的 RA 患 者 血 清 或 滑 膜 液 中 可 检 出 IgA 型 RF,IgA 型 RF 是 RA 临 床 活 动 的 一 项 指 标,IgA 型 RF 阳 性 与 患 者 关 节 炎 症 状 的 严 重 程 度 以 及 骨 质 破 坏 有 显 著 的 相 关 性 IgE 型 RF: 在 关 节 液 胸 水 中 高 于 同 一 病 人 的 血 清 水 平 RF 阴 性 不 能 排 除 RA 的 诊 断, 有 部 分 RA 患 者 可 一 直 呈 血 清 RF 阴 性, 这 类 患 者 关 节 滑 膜 炎 轻 微, 很 少 发 展 为 关 节 外 的 类 风 湿 疾 病 二 抗 核 抗 体 ( 一 ) 定 义 : 抗 核 抗 体 (ANA) 是 一 组 将 自 身 真 核 细 胞 的 各 种 细 胞 核 成 分 作 为 靶 抗 原 的 自 身 抗 体 的 总 称 ANA 的 性 质 主 要 是 IgG, 也 有 IgM IgA 和 IgD ( 二 ) 分 类 : 按 细 胞 内 分 子 理 化 特 性 与 抗 原 分 布 部 位 将 ANA 分 为 以 下 四 大 类 : 抗 DNA 抗 体 抗 组 蛋 白 抗 体 抗 非 组 蛋 白 抗 体 抗 核 仁 抗 体 在 临 床 检 测 中 ANA 的 命 名 通 常 按 以 下 三 种 方 式 进 行 : 1. 根 据 抗 原 的 化 学 名 称 命 名 : 如 抗 dsdna 抗 RNP 抗 DNP 抗 体 2. 以 第 一 位 检 出 该 抗 体 的 患 者 命 名 : 如 抗 Sm 抗 Ro 抗 La 抗 体 2

4 以 相 关 疾 病 命 名 : 如 抗 SSA 抗 SSB 抗 体 ( 三 ) 检 测 方 法 间 接 免 疫 荧 光 法 又 称 为 荧 光 抗 体 法 或 荧 光 染 色 法 : ( 四 ) 常 见 的 ANA 荧 光 图 形 及 临 床 意 义 1. 均 质 性 (homogeneous,h) 细 胞 核 均 匀 着 染 荧 光, 有 些 核 仁 部 位 不 着 色, 分 裂 期 细 胞 染 色 体 可 被 染 色 出 现 荧 光 2. 斑 点 型 (speckled,s) 细 胞 核 内 出 现 颗 粒 状 荧 光, 分 裂 期 细 胞 染 色 体 无 荧 光 显 色 3. 核 膜 型 (membranous,m) 又 称 周 边 型 (rim), 荧 光 着 色 主 要 显 示 在 细 胞 核 的 周 边 形 成 荧 光 环, 或 在 均 一 的 荧 光 背 景 上 核 周 边 荧 光 增 强 ; 分 裂 期 细 胞 染 色 体 区 出 现 荧 光 着 色 4. 核 仁 型 (nuclear,n) 荧 光 着 色 主 要 在 核 仁 区, 分 裂 期 细 胞 染 色 体 无 荧 光 着 色 相 关 抗 体 是 抗 核 仁 特 异 的 低 分 子 量 RNA, 抗 RNA 聚 合 酶 1 抗 U3RNP 抗 PM Scl ( 五 ) 抗 双 链 DNA 抗 体 的 检 测 方 法 检 测 抗 dsdna 抗 体 最 特 异 和 最 敏 感 的 方 法 是 用 马 疫 锥 虫 或 绿 蝇 短 膜 虫 作 为 抗 原 基 质 进 行 间 接 免 疫 荧 光 检 测 三 抗 ENA 抗 体 谱 ( 一 ) 定 义 ENA(extractable nuclear antigens) 是 可 提 取 核 抗 原 的 总 称,ENA 抗 原 可 用 盐 水 或 磷 酸 盐 缓 冲 液 从 细 胞 核 中 被 提 取 ENA 属 非 组 蛋 白 的 核 蛋 白, 为 酸 性 蛋 白 抗 原, 是 由 许 多 小 分 子 RNA( 约 100~ 215 个 核 苷 酸 ) 与 各 自 对 应 的 特 定 蛋 白 质 组 成 的 核 糖 核 蛋 白 颗 粒, 该 组 成 使 其 各 自 的 抗 原 性 得 以 增 强, 分 子 中 不 含 DNA ENA 抗 原 中 主 要 包 括 Sm RNP SSA SSB Jo l Scl-70 抗 原, 这 些 抗 原 除 有 各 自 的 抗 原 特 异 性 外, 尚 可 因 与 蛋 白 质 组 成 后 的 分 子 量 大 小 各 不 相 同 而 在 电 泳 后 被 分 成 不 同 分 子 量 的 条 带 不 同 的 自 身 免 疫 性 疾 病 可 产 生 不 同 的 抗 ENA 抗 体 根 据 ENA 抗 原 分 子 量 及 抗 原 特 性 不 同, 可 用 不 同 的 免 疫 方 法 对 这 些 自 身 抗 体 进 行 检 测 不 同 特 性 的 抗 ENA 抗 体 在 各 种 自 身 免 疫 性 疾 病 中 的 阳 性 率 有 明 显 差 异, 有 些 有 很 高 的 特 异 性 对 其 进 一 步 检 测, 在 协 助 诊 断 和 鉴 别 诊 断 自 身 免 疫 性 疾 病 方 面 具 有 重 要 的 临 床 意 义 3

5 ( 二 ) 抗 ENA 抗 体 的 检 测 1. 方 法 早 期 常 用 的 方 法 有 双 向 免 疫 扩 散 (ID) 对 流 免 疫 电 (CIE), 但 敏 感 度 和 特 异 性 较 低 ; 目 前 常 用 的 方 法 有 免 疫 印 迹 技 术 (IBT) 和 斑 点 酶 免 疫 技 术 (dot-elisa) 2. 原 理 是 从 小 牛 或 兔 胸 腺 提 取 的 ENA 抗 原, 经 SDS 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 (SDS- PAGE), 按 分 子 量 大 小 分 离 成 区 带, 经 参 照 对 应 分 子 量 标 准 物 质 确 定 每 一 抗 原 区 带 的 分 子 量 然 后 将 各 抗 原 区 带 转 印 至 硝 酸 纤 维 膜 上 制 成 抗 原 吸 附 载 体 膜 将 待 检 血 清 加 在 已 切 成 细 条 的 硝 酸 纤 维 膜 上, 待 检 血 清 中 存 在 的 抗 ENA 抗 体 分 别 与 硝 酸 纤 维 膜 上 的 相 应 抗 原 区 带 结 合, 当 再 加 入 酶 标 记 抗 人 IgG 抗 体 后 形 成 抗 原 - 抗 体 - 酶 标 记 抗 体 复 合 物, 再 加 入 酶 的 底 物, 出 现 显 色 反 应, 凡 有 抗 ENA 抗 体 与 膜 上 抗 原 结 合 的 位 置, 均 会 因 酶 促 反 应 而 显 色 ( 三 ) 抗 ENA 抗 体 的 临 床 意 义 1. 抗 Sm 抗 体 :SLE 的 标 志 性 抗 体,30%--40%SLE 患 者 抗 Sm 抗 体 阳 性, 不 与 SLE 的 活 动 性 有 关 抗 Sm 抗 体 对 早 期 不 典 型 的 SLE 或 治 疗 的 回 顾 性 诊 断 有 大 的 帮 助 2. 抗 核 RNP(nRNP) 抗 体 :MCTD 的 重 要 血 清 学 依 据, 检 出 率 高 大 95%, 活 动 期 或 缓 解 期 高 低 度 抗 核 RNP 抗 体 可 持 续 存 在 其 他 自 身 免 疫 性 疾 病 也 可 有 低 滴 度 的 抗 核 RNP 抗 体 存 在 3. 抗 SSA/Ro 抗 体 和 抗 SSB/La 抗 体 : 抗 SSA/Ro 抗 体 和 抗 SSB/La 抗 体 是 SS 患 者 最 常 见 自 身 抗 体 4. 抗 Jo 1 抗 体 : 抗 体 最 常 见 于 多 发 性 肌 炎 (polymyositis,pm), 故 又 称 为 PM-1 抗 体 5. 抗 Scl-70 抗 体 : 抗 Scl-70 抗 体 几 乎 仅 在 进 行 性 系 统 性 硬 皮 病 (PSS) 故 该 抗 体 是 PSS 的 特 征 抗 体 四 抗 中 性 粒 细 胞 胞 质 抗 体 ( 一 ) 定 义 抗 中 性 粒 细 胞 胞 质 抗 体 (ANCA) 是 一 组 以 人 中 性 粒 细 胞 胞 质 成 分 为 靶 抗 原, 与 临 4

6 床 多 种 小 血 管 炎 性 疾 病 密 切 相 关 的 自 身 抗 体 抗 体 可 表 达 为 IgG IgM 或 IgA ANCA 最 早 于 1982 年 在 坏 死 性 肾 小 球 肾 炎 患 者 血 清 中 发 现, 现 已 证 实 该 抗 体 是 系 统 性 血 管 炎 的 血 清 标 志 性 抗 体, 对 血 管 炎 的 诊 断 分 类 及 预 后 具 有 较 为 重 要 的 意 义 ( 二 ) 分 型 主 要 的 ANCA 有 二 型 : 胞 质 型 (cytoplasmic,canca) 和 核 周 型 (perinuclear, panca) ( 三 )ANCA 的 检 测 方 法 ANCA 的 检 测 可 分 为 总 ANCA 和 特 异 性 ANCA 检 测 两 种 总 ANCA 检 测 通 常 采 用 IIF, 特 异 性 ANCA 检 测 最 常 用 的 是 ELISA 法. ( 四 )ANCA 的 临 床 应 用 1.ANCA 被 认 为 是 原 发 性 小 血 管 炎 的 特 异 性 血 清 标 志 物 2.ANCA 的 检 测 可 大 大 提 高 肾 血 管 炎 的 早 期 诊 断 3.ANCA 阳 性 相 关 的 疾 病 还 有 继 发 性 血 管 炎 非 血 管 炎 性 疾 病 ( 如 肺 部 炎 性 疾 病 ) 炎 性 溃 疡 (IBD) RA SLE 自 身 免 疫 性 肝 脏 疾 病 等 五 抗 心 磷 脂 抗 体 ( 一 ) 定 义 抗 磷 脂 抗 体 ( APLA) 是 针 对 一 组 含 有 磷 脂 结 构 抗 原 物 质 的 自 身 抗 体 这 些 抗 体 主 要 包 括 抗 心 磷 脂 抗 体 ( ACLA), 抗 磷 脂 酸 抗 体 (APAA) 和 抗 磷 脂 酰 丝 氨 酸 抗 体 等 二 ) 抗 心 磷 脂 抗 体 的 检 测 最 常 用 ELISA 法 进 行 检 测 ( 三 ) 抗 心 磷 脂 抗 体 的 临 床 应 用 1.ACL 抗 体 阳 性 或 持 续 升 高 与 患 者 的 动 静 脉 血 栓 形 成 血 小 板 减 少 反 复 自 发 性 流 产 及 神 经 系 统 损 伤 为 特 征 的 多 系 统 受 累 的 抗 磷 脂 综 合 征 ( APS) 密 切 相 关 2.ACL 抗 体 在 SLE 患 者 中 阳 性 检 出 率 很 高 六 抗 平 滑 肌 抗 体 5

7 抗 平 滑 肌 抗 体 ( ASMA) 是 自 身 免 疫 性 肝 炎 的 血 清 学 标 志 抗 体 该 抗 体 的 检 测 有 助 于 自 身 免 疫 性 肝 炎 原 发 性 胆 汁 性 肝 硬 化 的 诊 断 及 与 其 他 肝 脏 疾 病 的 鉴 别 诊 断 ( 二 ) 检 测 方 法 ASMA 的 检 测 主 要 采 用 间 接 免 疫 荧 光 分 析 七 抗 角 蛋 白 抗 体 抗 角 蛋 白 抗 体 ( AKA) 又 称 为 抗 丝 集 蛋 白 抗 体 (AFA) 或 抗 角 质 层 抗 体 (ASCA) AKA 主 要 见 于 类 风 湿 性 关 节 炎 患 者, 其 阳 性 率 为 30%-55%, 特 异 性 可 达 95%~99 % 在 非 类 风 湿 性 关 节 炎 的 自 身 免 疫 病 患 者,AKA 的 阳 性 检 出 率 极 低 AKA 与 RF 在 诊 断 RA 时 具 有 显 著 的 相 关 性 由 于 AKA 的 出 现 常 可 先 于 疾 病 的 临 床 表 现, 因 此 AKA 对 于 早 期 诊 断 RA 具 有 重 要 的 临 床 意 义 ( 二 ) 检 测 方 法 AKA 的 检 测 常 采 用 间 接 免 疫 荧 光 分 析 法 八 抗 乙 酰 胆 碱 受 体 抗 体 抗 乙 酰 胆 碱 受 体 ( AchR) 是 重 症 肌 无 力 ( MG) 患 者 的 标 志 性 自 身 抗 体, 约 90% 的 MG 患 者 抗 AchR 抗 体 阳 性 抗 AchR 抗 体 可 与 患 者 横 纹 肌 细 胞 的 乙 酰 胆 碱 受 体 结 合, 引 起 运 动 终 板 的 破 坏, 使 神 经 肌 肉 间 的 信 号 传 导 发 生 障 碍, 导 致 患 者 肌 肉 运 动 无 力,( 二 ) 检 测 方 法 抗 AchR 抗 体 检 测 常 用 ELISA 法 进 行 九 抗 骨 骼 肌 抗 体 横 纹 肌 抗 体 StrAb 抗 骨 骼 肌 抗 体 (ASMA) 最 常 见 于 成 年 型 重 症 肌 无 力 患 者, AMSA 与 抗 AchR 抗 体 的 联 合 检 测 对 MG 的 诊 断 及 鉴 别 诊 断 具 有 更 高 的 临 床 价 值 ( 二 ) 检 测 方 法 常 用 间 接 免 疫 荧 光 分 析 十 抗 胰 岛 细 胞 抗 体 6

8 抗 胰 岛 细 胞 抗 体 ( APICA) 是 1 型 糖 尿 病 ( DMl) 患 者 中 最 常 见 的 自 身 抗 体 Ⅱ 型 糖 尿 病 (DM2) 患 者 如 出 现 APICA 阳 性, 提 示 有 可 能 发 生 DMl 健 康 正 常 人 该 抗 体 阳 性 检 出 率 约 在 1.8%--4.1%o. ( 二 ) 检 测 方 法 检 测 APICA 可 用 IIF 和 ELISA 等 方 法 第 三 节 自 身 抗 体 检 测 的 临 床 应 用 大 多 数 自 身 免 疫 病 患 者 血 清 中 可 测 到 高 效 价 的 自 身 抗 体, 有 些 自 身 抗 体 在 疾 病 中 的 作 用 尚 未 被 证 实, 但 其 与 疾 病 的 相 关 性 已 获 得 认 可 有 些 自 身 抗 体 的 检 测 已 纳 入 某 些 自 身 免 疫 性 疾 病 的 诊 断 标 准 中, 这 些 自 身 抗 体 的 检 测 对 自 身 免 疫 病 的 诊 断 和 鉴 别 诊 断 及 愈 后 评 估 具 有 重 要 的 临 床 意 义 随 着 对 自 身 抗 体 了 解 的 深 入, 临 床 应 用 越 来 越 广 泛, 加 之 免 疫 学 技 术 进 一 步 提 高, 自 身 抗 体 检 测 已 成 为 临 床 免 疫 检 测 的 一 项 重 要 实 验 室 指 标 一 自 身 抗 体 检 测 的 一 般 原 则 在 进 行 自 身 抗 体 检 测 时, 有 些 自 身 抗 体 在 自 身 免 疫 性 疾 病 中 的 敏 感 性 高, 特 异 性 不 强, 仅 具 有 筛 选 意 义 而 不 具 有 诊 断 价 值 二 实 验 室 方 法 的 选 择 及 结 果 的 确 认 对 于 自 身 抗 体 检 测, 应 首 选 间 接 免 疫 荧 光 分 析 法 作 为 理 想 的 筛 选 实 验 7

9 自 身 免 疫 自 身 免 疫 性 疾 病 自 身 抗 体 的 基 本 概 念 小 结 抗 核 抗 体 的 几 种 主 要 荧 光 模 型, 常 规 检 测 的 自 身 抗 体 与 临 床 疾 病 诊 断 的 关 系 抗 核 抗 体 检 测 的 常 用 方 法 的 特 点, 总 抗 核 抗 体 检 测 和 抗 ENA 抗 体 谱 检 测 的 临 床 意 义, 抗 中 性 粒 细 胞 胞 浆 抗 体 检 测 及 意 义, 自 身 抗 体 检 测 的 临 床 应 用 原 则 复 习 思 考 题, 作 业 题 实 施 情 况 及 分 析 1 授 课 时 结 合 典 型 病 例, 吸 引 学 生 们 得 注 意 力, 提 高 学 生 的 兴 趣, 加 深 印 象 2 按 时 完 成 教 学 任 务, 收 到 学 生 好 评 3 多 媒 体 教 学 以 其 新 颖 直 观 内 容 丰 富 及 灵 活 的 特 点 深 受 学 生 欢 迎, 教 学 效 果 良 好 4 课 堂 手 法 演 示 很 重 要, 为 学 生 在 课 后 的 互 练 中 打 下 良 好 基 础 5 由 于 课 堂 时 间 较 短, 因 此 教 学 中 务 必 做 到 重 点 突 出, 层 次 分 明, 讲 解 生 动 明 了 8

0 年 上 半 年 评 价 与 考 核 细 则 序 号 部 门 要 素 值 考 核 内 容 考 核 方 式 考 核 标 准 考 核 ( 扣 原 因 ) 考 评 得 3 安 全 生 产 目 30 无 同 等 责 任 以 上 道 路 交 通 亡 人 事 故 无 轻 伤 责 任 事 故 无 重 大 质 量

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