1 介绍 NRL 为开展献血者人类免疫缺陷病毒 (HIV) 乙型肝炎病毒(HBV) 和丙型肝炎病毒 (HCV) 血液筛查的实验室每年发放 3 次多标记的血液筛查血清学检测室间质评 (EQAS) 血清盘 NRL 使用 Oneworld Accuracy Collaboration 开发和运营的在线信息

Size: px

Start display at page:

Download "1 介绍 NRL 为开展献血者人类免疫缺陷病毒 (HIV) 乙型肝炎病毒(HBV) 和丙型肝炎病毒 (HCV) 血液筛查的实验室每年发放 3 次多标记的血液筛查血清学检测室间质评 (EQAS) 血清盘 NRL 使用 Oneworld Accuracy Collaboration 开发和运营的在线信息"

臣些侯
7 years ago
Views:

1 多标记血液筛查血清学检测室间质评结果报告项目代码 :MMBS4320 样品批号 : NRL: NATA 认证号 14253,ISO 认可 ; 世界卫生组织 (WHO)HIV 和艾滋病以及其他血液传播感染性疾病诊断和实验室支持合作中心本报告由 Kathy Smeh 编写, 伍晓菲翻译 2014 年 8 月 25 日起发布 NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘

2 1 介绍 NRL 为开展献血者人类免疫缺陷病毒 (HIV) 乙型肝炎病毒(HBV) 和丙型肝炎病毒 (HCV) 血液筛查的实验室每年发放 3 次多标记的血液筛查血清学检测室间质评 (EQAS) 血清盘 NRL 使用 Oneworld Accuracy Collaboration 开发和运营的在线信息系统 OASYS 管理 NRL EQAS 所有 NRL EQAS 参评实验室拥有唯一且保密的代码, 仅有参评实验室自己 NRL 和 Oneworld Accuracy Collaboration 知晓本报告将汇报和讨论多标记血液筛查血清学 EQAS 的结果, 血清盘批号 : 本血清盘的主要目的是 : 考核参评实验室正确报告 HBV HCV 和 / 或 HIV 血清反应性的能力 ; 检测交叉污染的可能性 ; 考核参评实验室检测 HIV 早期感染的能力 1.1 版权本报告中的任何信息和资料的知识产权属于 NRL, 在未得到 NRL 的书面允许前, 本报告和其内容不可以被全部或部分复制以用于任何用途, 也不可以用于任何形式的广告或商业推广 2 方法 2.1 样品的组成制备和发放项目代码为 MMBS4320 的多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘包含 20 个血浆样品样品来自于非洲澳大利亚东南亚地区和西太平洋地区的献血者 ( 附录 A) 样品 A B C D E F H I J L M N O P 和 Q 为混合样品每一个混合样品取自同一国家来源, 具有相同的抗体和抗原谱的至少两种以上样品混合而成 NRL EQAS 的样品根据广泛验证过的 NRL 操作指南进行储存和运输, 以确保样品在质评期间的稳定性所有的样品根据 NRL 规定的流程进行操作, 以确保均一性, 并在分装前使用 0.2μm 的滤膜过滤使用了一系列的试剂和方法测试样品以确定样品的反应性 ( 附录 A) 2.2 结果评价 NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘

3 2.2.1 定性评价参评实验室报告的检测结果和样品状态与相应的参考结果 ( 附录 A) 进行比较当使用快速检测法或凝集法检测样品时, 没有具体检测数值, 参评实验室提供的样品的反应性或无反应性状态视为检测结果与参考结果不一致的结果称为不正常的结果统计学分析应用 Tukey s 离群值过滤法挑出显著离群的结果离群结果是指用数值表示的检测结果与其他使用相同检测方法的参评实验室针对同一样品报告的检测结果有统计学差异的检测数据有时候,EQAS 的统计者可能会人工标记出一些结果作为离群结果, 从而使这部分结果不参与统计分析这种情况仅出现于当这些结果可能影响统计分析而出现错误偏差的时候, 例如, 当结果来自错误的样品时样品拖带污染样品操作和报告指南中要求参评实验室按样品编号顺序检测这些样品当样品出现以下结果时,NRL 推测样品在检测过程中可能出现了拖带污染 : 反应性, 但信号值显著低于其他反应性样品, 或, 但出现较高信号值被标记为离群值 3 结果有 103 家参评实验室报告了多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘的检测结果到结果上传截止日期为止, 未收到参评实验室 CRQ0358 MOHTT027 和 NRL0857 上传的检测结果参评实验室 NRL0343 和 NRL0990 报告使用了过期的试剂 NRL 不推荐使用过期的试剂检测样品, 并强烈建议参评实验室在使用前先确认试剂的有效期 3.1 结果概况各参评实验室应该关注自己实验室的特别报告, 以了解自身的离群结果和 / 或不正常结果 ( 分别标记为和 ) 参评实验室应参考附录 B 出现离群结果和 / 或不正常结果的一般原因解答另外, 这些结果也会进一步在第 4 部分 ( 讨论 ) 中阐述 NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘

4 本次质评活动中所有检测方法情况的总结列在参评统计报告 ( 定性或定量 ) 中该报告能提供本次质评活动中所有检测方法使用情况的比较信息参评实验室对呈现在最终报告和 / 或实验室特别报告中的数据分析和评论有任何疑问可进行咨询咨询程序详见用户指南另外, 下列参评实验室应参考第 4 部分的结果讨论对他们提交的结果进行检查 : 检测 HIV 样品 Q 和 S 的参评实验室 4 讨论 4.1 一般情况选择了错误的分析方法参评实验室 CITIC0008 CITIC0052 CITIC0058 CITIC0070 NRL0702 NRL0949 NRL0953 和 NRL0954 报告了错误分析方法的检测结果这些参评实验室报告的错误分析方法的检测结果被认为是离群值, 相应的结果解释被认为是不正常的而未进行统计分析在以下讨论中, 报告的错误分析方法的数据将被归类到他们应该属于的正确的分析方法中进行分析各参评实验室有责任在每次质评活动开始前核对 OASYS 中实验室的分析方法是否正确, 有需要时进行更改关于如何在 OASYS 中增加修改或删除分析方法的资料可以在用户指 -OASYS 主页 ( 中获得设置了错误的检测信息参评实验室 CITIC0057 NRL0309 和 NRL0702 没有设置他们详细的检测信息关于如何在 OASYS 中设置详细的检测信息可以参考用户指南在章节中对参评实验室 CITIC0057 进行了进一步讨论检测结果和 / 或结果解释报告错误参评实验室 NRL0994 报告了多个样品 ( 包括样品 Q) 使用 Alere Determine HIV-1/2 Rapid Test 方法的检测结果和结果解释, 并注明他们未完成检测这些说明被理解为他们并没有使用 Alere 方法检测, 其结果解释是来自于使用 Abbott ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo CMIA 的检测检测结果和结果解释都是方法特异性的参评实验室不能用一种方法检测的结果报告成另外一种方法的检测结果 4.2 检测 NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘

5 4.2.1 样品 Q 血清盘样品 Q 是一个抗 -HIV 和 HIV-P24 抗原阳性的样品 ( 表 A1 和 A2) 该样品是将重组 HIV-1 P24 抗原加入抗 -HIV 和 HIV-P24 抗原的人血浆混合而成参考 HIV-1 P24 抗原 WHO 国际标准品 90/636 进行定量, 样品 HIV-1 P24 抗原浓度为 ~21IU/mL 或 ~2000pg/mL 没有参评实验室使用仅检测 HIV-1 P24 抗原的方法检测样品 Q 参评实验室共使用了 11 种不同的能同时检测抗 -HIV 和 HIV-P24 抗原的方法检测了样品 Q: Abbott ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo CMIA; Abbott PRISM HIV Ag/Ab Combo ChLIA; biomerieux VIDAS HIV DUO Ultra ELFA; Bio-Rad Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab EIA; biomerieux Vironostika HIV Ag/Ab ELISA; DiaSorin Murex HIV Ag/Ab Combination EIA; InTec ADVANCED HIV Ag/Ab ELISA; Kewei Diagnostic Kit for Antigen and Antibody to HIV (ELISA); Livzon/LiZhu HIV Ag/Ab ELISA; Siemens Enzygnost HIV Integral II EIA 和 Wantai Screening HIV (1+2) Ag&Ab ELISA. 使用能同时检测抗 -HIV 和 HIV-P24 抗原方法检测样品 Q 的参评实验室中, 下列参评实验室没有报告与参考结果一致的检测结果或结果解释 : 参评实验室 CITIC0057 使用 Wantai Screening HIV (1+2) Ag&Ab ELISA 检测样品 Q 该参评实验室报告了一个检测结果 (S/Co 0.06) 和相应的结果解释其他 19 家使用相同方法检测样品 Q 的参评实验室报告的结果范围是 S/Co , 报告样品为反应性其中 2 家使用相同方法检测样品 Q 的参评实验室报告的试剂批号与参评实验室 CITIC0057 相同, 报告为反应性检测结果 (S/Co 6.59 和 19) 进一步的调查发现, 该参评实验室未正确设置检测信息, 仅报告了获得的部分检测结果该参评实验室检测了样品 Q 两次 : 初筛为一个反应性检测结果 (S/Co 1.05), 随后复孔复检结果为两个检测结果尽管不会改变所报告的结果解释, 但参评实验室报告自己所有的检测结果是非常重要的建议参评实验室 CITIC0057 检查他们的检测过程以了解为什么样品 Q 的检测结果值低 NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘

6 参评实验室 NRL0949 报告使用 Siemens Enzygnost HIV Integral II EIA 检测, 报告了一个仅稍高于 cut-off 值 (S/Co 1.05) 的检测结果和一个相应的结果解释其他 4 家使用相同方法检测样品 Q 的参评实验室报告的结果范围是 S/Co 建议参评实验室 NRL0949 调查他们的检测过程以了解为什么得到的检测结果值低参评实验室 NRL0986 NRL0989 和 NRL0997 使用 Abbott ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo CMIA 检测报告样品 Q 为反应性检测结果, 但报告样品的结果解释为不确定根据该方法厂家的使用说明 (IFU), S/Co 值 1.00 考虑为反应性一个样品的结果解释是方法特异性的, 例如该样品的检测结果解释应是特定方法下的结果解释与参考结果不一致的结果解释被认为是不正常的在使用仅检测抗 -HIV 方法检测样品 Q 的参评实验室中, 下列参评实验室没有报告与参考结果一致的检测结果和结果解释 : 参评实验室 CITIC0036 使用 Wantai Screening HIV 1+2 ELISA 检测, 报告样品 Q 为一个反应性检测结果 (S/Co 1) 和相应的反应性结果解释联系了参评实验室并确认他们报告了正确的分析方法, 但参评实验室在进行结果报告时数据输入错误参评实验室检测样品 Q 得到的是一个检测结果 (S/Co 0.96), 根据所用检测方法的 IFU 应报告一个结果解释参评实验室 NRL0993 和 NRL0994 均使用 Alere Determine HIV-1/2 Rapid Test 检测, 报告样品 Q 为反应性关于参评实验室的进一步讨论请参考章节参评实验室 NRL0986 使用 Alere Determine HIV-1/2 Rapid Test 检测, 报告样品 Q 为, 但相应的结果解释为不确定与参考结果不一致的结果解释被认为是不正常的样品 S 血清盘样品 S 是一个抗 -HIV HIV-P24 抗原和 HIV-1 RNA 阳性的样品 ( 表 A1 和 A2) 样品 S 来自一个献血者的血浆, 不是人工制造的样品, 为一个 HIV 感染早期 ( 在出现可检测的抗体之前的 ) 献血者样品 S 放入血清盘中是为了教育目的, 因此参评实验室报告的检测结果没有进行统计分析, 其结果解释也未进行评估参评实验室共使用了 9 种不同的能同时检测抗 -HIV 和 HIV-1 p24 抗原的分析方法 : NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘

7 Abbott ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo CMIA; Abbott PRISM HIV Ag/Ab Combo ChLIA; biomerieux Vironostika HIV Ag/Ab ELISA; Bio-Rad Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab EIA; DiaSorin Murex HIV Ag/Ab Combination EIA; InTec ADVANCED HIV Ag/Ab ELISA; Kewei Diagnostic Kit for Antigen and Antibody to HIV (ELISA); Livzon/LiZhu HIV Ag/Ab ELISA 和 Wantai Screening HIV (1+2) Ag&Ab ELISA. 上述分析方法中仅有一种方法使用的参评实验室报告了反应性检测结果 : 22 家使用 Bio-Rad Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab EIA 检测的参评实验室中有 8 家 (36%) 报告样品 S 为反应性参评实验室使用 Bio-Rad Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab EIA 检测报告样品 S 的反应性检测结果范围是 S/Co , 检测结果范围是 S/Co 没有参评实验室使用仅检测 HIV-1 P24 抗原的分析方法检测样品 S 第 4 代分析方法 ( 能同时检测抗 -HIV 和 HIV-1 P24 抗原 ) 比仅检测抗 -HIV 的分析方法检出 HIV 感染的时间更早第 4 代试剂能在 HIV 感染后 ~17 天检出反应性样品污染参评实验室 CITIC0008 CITIC0018 CITIC0036 NRL0947 NRL0948 和 NRL0954 均报告了样品的反应性检测结果, 可能是由于样品污染造成 1 Wians Jr, F. H., Moore, H. A, Briscoe, D et al (2011). Evaluation of four qualitative third-generation HIV antibody assays and the fourth-generation Abbott HIV Ag/Ab Combo Test. LABMEDICINE; 42 (9), NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘

8 5 致谢对本报告有任何评论或疑问, 或在血液筛查血清学检测工作中有何问题, 请与 Kathy Smeh 联系, 电话 : , 电邮 :kathy@nrl.gov.au NRL 感谢为 NRL EQAS 提供样品的同事 NRL EQAS 的许多工作可能会被转包, 感谢分包商保证了 NRL EQAS 的质量我们感谢所有参评实验室的合作 NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘

9 附录 A 表 A1. 多标记血液筛查血清学检测 EQAS 样品组成样品标识样品来源样品种类 MMBS4320 A 西太平洋地区献血者混合血浆 B 非洲献血者混合血浆 C 东南亚地区献血者混合血浆 D 非洲献血者混合血浆 E 非洲献血者混合血浆 F 东南亚地区献血者混合血浆 G 澳大利亚献血者血浆 H 非洲献血者混合血浆 I 东南亚地区献血者混合血浆 J 非洲献血者混合血浆 K 澳大利亚献血者血浆 L 澳大利亚献血者混合血浆 M 澳大利亚献血者混合血浆 N 西太平洋地区献血者混合血浆 O 非洲献血者混合血浆 P 西太平洋地区献血者混合血浆 Q 澳大利亚献血者 ( 血浆 ) 混合血浆稀释重组 HIV-1 P24 抗原 (~21IU/mL 或 ~2000pg/mL) R 澳大利亚献血者血浆 S 西太平洋地区献血者血浆 T 澳大利亚献血者血浆 NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘

10 表 A2. 多标记血液筛查 HBV 血清学 EQAS 样品特性样品标识 MMBS4320 biomerieux VIDAS HBsAg Ultra ELFA ( 长流程 ) 结果解释 biomerieux VIDAS Confirma % 抑制率 A B 反应性 C D E F G H 反应性 I J K L 反应性 M 反应性 N O P Q R S T 注 : HBsAg 乙型肝炎病毒表面抗原 Anti-HBc Total 乙型肝炎病毒核心抗体总抗体 NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘

11 表 A3. 多标记血液筛查 HCV 血清学 EQAS 样品特性样品标识 Abbott ARCHITECT HCV Ag CMIA # MMBS4320 检测结果 (fmol/l ) DiaSorin Murex anti-hcv (version 4.0) EIA Bio-Rad MONOLISA anti-hcv Plus V i 2 结果解释结果解释结果解释 MP Di HCV BLOT WB 注 :# 该项目是外包检测的其他项目均由 NRL 检测 fmol/l, 当 3.00 时为反应性 A 反应性反应性反应性 B 0.00 C 0.00 D 反应性反应性反应性 E 0.00 F 反应性反应性反应性 G 0.00 H 0.00 I 反应性反应性反应性 J 0.00 K 0.00 L 0.00 M 0.00 N 反应性反应性反应性 O 2.49 P 反应性反应性反应性 Q 0.00 R 0.00 S 0.00 T 1.49 NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘

12 表 A4. 多标记血液筛查 HIV 血清学 EQAS 样品特性样品标识 DiaSorin Murex HIV-1.2.O EIA Bio-Rad Genscreen HIV-1 Ag EIA Bio-Rad Genscreen HIV-1 Ag Confirmatory Assay NRL In-house HIV-1 WB MMBS4320 结果解释结果解释抑制率 % 结果解释结果解释 A B C 反应性阳性 D E 反应性阳性 F G H I J 反应性阳性 K L M N O 反应性阳性 P Q 反应性阳性 R S 反应性阳性 T NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘

13 附录 B 表 B1. 出现离群结果和 / 或不正常结果的一般原因解答错误种类可能的原因样品混淆两份或更多的样品相互混淆, 结果导致每份样品都出现离群或不正常结果样品混淆可能出现在样品接收的时候, 也可能出现在检测过程中数据抄录常见的数据抄录错误包括 : - 两个或更多样品结果混淆 ; - 输入不正确的结果 ; - 在 Digital PT 里选择了错误的试剂或试剂版本 ; - 将数值输在错误的地方 ( 如 :OD 值输在 S/Co 值的地方 ); - 小数点使用了逗号而不是点 ; - 选择了不正确的结果解释为避免这类错误, 推荐所有人工抄录或输入 OASYS 的数据都应由第 2 位工作人员复核不适当的检测策略 - 样品免疫印迹检测 : 由于样品可能出现非特异性反应而报告为可疑或不必要的假反应性结果, 筛查检测为的样品不应该实施免疫印迹分析只有筛查为反应性的样品才应该实施免疫印迹分析 - 当抗原检测阳性时未对样品开展中和试验 : 不开展中和试验可能会导致报告假反应性结果推荐所有筛查试验反应性的样品都要进行中和试验, 以及开展其他检测以区分真阳性和假反应性 - 使用简单的灵敏度不够的 HBsAg 快速试验 : 简单的 HBsAg 快速试验通常没有 EIA 或仪器检测方法灵敏, 这通常对 HBsAg 低水平的样品出现假结果不正常的血清学状态这部分内容仅适用于肝炎标记物检测的 HEMP 血清盘 (HCV 部分 ) HIV 和 HTLV 血清学检测 EQAS 项目 - 不正确的数据输入 : 当开展血清学筛查时, 参评实验室往往使用包括筛查补充试验和 / 或确认试验在内的多种检测组合的策略样品最终的血清学状态 ( 最终解释 ) 为阳性, 或无法下结论 / 不确定则应由所有检测结果 ( 筛查, 补充和确认 ) 综合考虑决定只使用一种方法检测样品的参评实验室如果检测结果为反应性, 应该参考其他试验的结果以区分真阳性和假反应性当在 DigitalPT 中报告最终结果解释时, 对于那些希望对样品作更进一步的试验, 而不报告样品血清学状态 / 最终结果解释的参评实验室, 在上传数据时应该这样选择 : Serology Status Do not select any option Refer for Further Testing Do not select any option Select problem code Would not report a status based on these results. 否则, 参评实验室将在 Serology Status 中选择该样品合适的血清学状态, 并且在 Refer for Further Testing 中选择 No NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘

14 表 B1. 出现离群结果和 / 或不正常结果的一般原因解答 ( 续 ) 错误种类由随机误差所致的离群和 / 或不正常的检测结果由系统误差所致的离群和 / 或不正常的检测结果可能的原因零星的被确定为离群和 / 或不正常的检测结果通常被认为是随机误差所致, 可能的原因包括 : - 样品混匀不充分, 特别是冻存过后的样品 ; - 移液问题 ; - 洗板不充分或不一致 ; - 抄录错误 ; - 样品混淆 ; - 交叉污染或拖带污染一系列检测结果被认为是离群和 / 或不正常结果可能是由于系统问题所致系统问题可能由以下因素引起 : - 试剂污染, 过期或批间差异大 ; - 仪器出问题或故障 ; - 洗板不充分 ; - 读结果时使用了不正确的波长 ; - 孵育时间过长 / 短, 或温度过高 / 低 ; - 检测前未充分的混匀 / 离心 ; - 不正确的储存试剂盒和 / 或试剂 NRL EQAS: 多标记血液筛查血清学 EQAS 血清盘