源苑园 中国肿瘤生物治疗杂志 第员猿卷 体系参照说明书 杂杂栽砸圆 杂杂栽砸缘和 β 鄄葬糟贼蚤灶孕悦砸反应参数 : 怨源益预变性缘皂蚤灶, 怨源益变性源园泽, 缘缘益退火源园泽, 苑圆益延伸员皂蚤灶, 共猿园个循环, 最后苑圆益延伸缘皂蚤灶 杂杂栽砸员 杂杂栽砸猿和杂杂栽砸源退火温度设为缘苑益 孕

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1 摇摇摇 第员猿卷摇第远期圆园园远年摇员圆月 中国肿瘤生物治疗杂志悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则 灾燥造援员猿晕燥援远摇摇摇摇摇阅藻糟援圆园园远摇 源远怨 [ 文章编号 ] 摇员园园苑鄄猿愿缘载 ( 圆园园远 ) 园远鄄园源远怨鄄园圆 短篇论著 孕酮调节人非小细胞肺癌粤缘源怨细胞生长抑素受体亚型的表达 孕则燥早藻泽贼藻则燥灶藻则藻早怎造葬贼藻泽藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣杂杂栽砸泽怎遭贼赠责藻泽蚤灶澡怎皂葬灶灶燥灶鄄泽皂葬造造糟藻造造造怎灶早糟葬灶糟藻则粤缘源怨糟藻造造泽孙美丽, 王秀问, 魏军民 ( 山东大学齐鲁医院肿瘤防治中心, 济南摇圆缘园园员圆 ) [ 摘要 ] 摇目的 : 探讨人非小细胞肺癌细胞粤缘源怨中孕酮对生长抑素受体 ( 泽燥皂葬贼燥泽贼葬贼蚤灶则藻糟藻责贼藻则, 杂杂栽砸 ) 表达的调节 方法 : 免疫组化法测定粤缘源怨细胞孕激素受体的表达, 砸栽鄄孕悦砸检测孕酮作用前后杂杂栽砸亚型皂砸晕粤的表达 结果 : 粤缘源怨细胞表达孕激素受体, 同时表达生长抑素受体亚型杂杂栽砸圆 杂杂栽砸员 杂杂栽砸源和杂杂栽砸缘皂砸晕粤, 不表达杂杂栽砸猿皂砸晕粤 不同浓度的孕酮作用粤缘源怨细胞圆源澡后, 杂杂栽砸各亚型皂砸晕粤表达普遍上调 ( 孕约园援园缘 ); 员园灶皂燥造辕蕴组及员园园园灶皂燥造辕蕴组细胞出现了杂杂栽砸猿皂砸晕粤的表达 延长员园灶皂燥造辕蕴孕酮作用时间至源愿澡, 杂杂栽砸猿与杂杂栽砸缘皂砸晕粤表达继续上调 ( 孕约园援园缘 ) 结论 : 孕酮上调粤缘源怨细胞杂杂栽砸各亚型皂砸晕粤的表达, 尤其是杂杂栽砸猿与杂杂栽砸缘皂砸晕粤 ; 调节作用与孕酮的作用时间和浓度有关 [ 关键词 ] 摇非小细胞肺癌 ; 生长抑素受体 ; 孕激素 [ 中图分类号 ] 摇砸苑猿源援圆摇摇摇摇 [ 文献标识码 ] 摇粤 摇摇生长抑素是由神经内分泌细胞和炎症细胞分泌的一种多肽 在肿瘤细胞中, 生长抑素不仅可以产生直接抗肿瘤作用, 亦可以通过抑制血管内皮生长因子等 [ 员间接作用产生抗肿瘤作用 ] 生长抑素受体( 泽燥皂葬鄄贼燥泽贼葬贼蚤灶则藻糟藻责贼燥则, 杂杂栽砸 ) 自员怨怨圆年杂杂栽砸员和杂杂栽砸圆被克隆成功至今, 已确认杂杂栽砸有缘种不同的分子亚型, 杂杂栽砸员耀耀耀耀耀耀缘 杂杂栽砸在人非小细胞肺癌 ( 灶燥灶鄄泽皂葬造造糟藻造造 [ 圆鄄猿造怎灶早糟葬灶糟藻则, 晕杂悦蕴悦 ) 的表达明显高于正常组织 ] 亚洲人晕杂悦蕴悦组织中, 孕激素受体 ( 责则燥早藻泽贼藻则燥灶藻则藻糟藻责鄄贼燥则, 孕砸 ) 表达率约为源远援缘豫, 在女性腺癌患者中表达率 [ 源尤其高 ] [ 缘鄄远 ] 有研究表明, 杂杂栽砸的表达与孕砸的表达具有相关性 孕激素对杂杂栽砸表达的调节作用尚不明确 本研究观察晕杂悦蕴悦细胞株粤缘源怨细胞中, 孕酮对 杂杂栽砸亚型表达的调节作用 员摇 员援员摇 材料与方法 主要试剂和仪器 砸孕酝陨员远源园培养液 ( 美国郧蚤遭糟燥遭则造公司 ); 小牛血清 ( 杭州四季青公司 ); 栽则蚤扎燥造试剂 阅耘孕悦购自上海生工生物工程技术服务有限公司 ; 砸栽鄄孕悦砸试剂盒 阅晕粤酝葬则噪藻则阅蕴圆园园园购自栽葬噪葬则葬公司 ; 杂杂栽砸员耀耀耀耀耀耀缘及 β 鄄葬糟贼蚤灶 引物由上海英骏生物技术有限公司合成 ; 即用型杂粤月悦 免疫组化染色试剂盒 蓝色阅粤月显色试剂盒 砸葬遭遭蚤贼粤灶贼蚤鄄孕则燥早藻泽贼藻则燥灶藻则藻糟藻责贼燥则均购自武汉博士德有限公司 ; 孕酮购自浙江仙琚制药股份有限公司 ( 批号 : 园源员员园缘 ) 悦韵圆细胞培养箱 ( 晕灾圆缘园园耘, 美国 ) 净化工作台 ( 苏净集团安泰公司 ) 超低温冰柜 ( 酝阅云鄄哉缘园愿远宰, 日本 ) 阅晕粤扩增仪 ( 孕栽悦鄄员缘园, 美国 ) 水平式凝胶电泳仪 ( 北京六一仪器厂 ) 捷达愿园员专业数码凝胶图像采集与分析系统 ( 江苏省捷达科技发展有限公司 ) 员援圆摇 细胞培养及细胞用药 人晕杂悦蕴悦细胞株粤缘源怨引自中科院上海细胞生物研究所, 用含员园豫小牛血清的员远源园培养液, 置于含 缘豫悦韵圆 猿苑益培养箱中培养, 待细胞布满培养瓶时, 用园援园缘豫的胰蛋白酶 ( 含园援园圆豫耘阅栽粤 ) 消化为单细胞悬液后传代, 圆耀耀耀耀耀耀猿次辕周 取粤缘源怨细胞分成猿个剂量组, 加入孕酮, 使猿组终浓度分别为园援员 员园 员园园园灶皂燥造辕蕴, 培养圆源澡后以 砸栽鄄孕悦砸法检测杂杂栽砸各亚型皂砸晕粤的表达 员援猿摇 免疫组化法检测孕激素受体的表达 向培养皿中加入消毒处理过的小玻片, 接种粤缘源怨 细胞, 常规培养圆源澡 取出细胞爬片, 源豫甲醛固定猿园皂蚤灶, 蒸馏水洗猿次, 干燥后冰冻保存, 用作免疫组化 免疫组化具体方法参照免疫组化试剂盒说明 ; 在进行操作前, 先用园援员豫栽则蚤贼燥灶载鄄员园园预处理细胞爬片员园皂蚤灶 员援源摇 砸栽鄄孕悦砸法检测杂杂栽砸皂砸晕粤的表达 杂杂栽砸员耀耀耀耀耀耀缘各引物序列设计参照文献, 并于 郧藻灶月葬灶噪上核对无误 粤缘源怨细胞传代, 培养圆源澡 向培养瓶中加入不同浓度的孕酮, 培养圆源澡 源愿澡 分别远收取不同药物浓度作用的细胞员伊员园个, 生理盐水冲洗圆遍, 原愿园益冰冻保存 取已收取的冻存细胞, 栽则鄄蚤扎燥造提取总砸晕粤 ( 具体步骤按产品说明书进行 ) 砸栽反应体系参照说明书, 反应条件 : 室温员园皂蚤灶, 源圆益员澡, 怨怨益缘皂蚤灶灭活粤酝灾逆转录酶 孕悦砸反应 [ 基金项目 ] 摇山东省科技计划项目基金资助 ( 圆园园源郧郧猿圆园圆园员苑 ) [ 作者简介 ] 摇孙美丽 ( 员怨愿园鄄 ), 女, 山东威海人, 硕士在读, 主要从事 摇摇摇摇肿瘤内科学研究 [ 通讯作者 ] 摇王秀问, 耘原皂葬蚤造 : 憎葬灶早曾憎员圆岳赠葬澡燥燥援糟燥皂

2 源苑园 中国肿瘤生物治疗杂志 第员猿卷 体系参照说明书 杂杂栽砸圆 杂杂栽砸缘和 β 鄄葬糟贼蚤灶孕悦砸反应参数 : 怨源益预变性缘皂蚤灶, 怨源益变性源园泽, 缘缘益退火源园泽, 苑圆益延伸员皂蚤灶, 共猿园个循环, 最后苑圆益延伸缘皂蚤灶 杂杂栽砸员 杂杂栽砸猿和杂杂栽砸源退火温度设为缘苑益 孕悦砸产物用圆园早辕蕴琼脂糖凝胶电泳, 捷达愿园员专业数码凝胶图像采集与分析系统进行灰度扫描, 用目的条带与内参照 β 鄄葬糟贼蚤灶的灰度积分比值代表各受体亚型皂砸晕粤相对表达水平 重复猿次独立的砸栽鄄孕悦砸过程 员援缘摇统计学处理采用杂孕杂杂员园援园软件进行统计分析, 数值的比较采用贼检验, 孕约园援园缘有统计学意义 性 ; 这种调节作用具有受体亚型特异性, 以杂杂栽砸猿和杂杂栽砸缘较显著 员园灶皂燥造辕蕴及员园园园灶皂燥造辕蕴孕酮使粤缘源怨细胞中原本不表达的杂杂栽砸猿皂砸晕粤出现了表达 ; 延长药物作用时间, 杂杂栽砸猿皂砸晕粤 杂杂栽砸缘皂砸晕粤的表达持续上升 ( 孕约园援园缘 ) 杂杂栽砸基因的启动子中含有激 [ 员园素反应元件 ] 作为一种核受体反应元件, 孕酮可能通过与激素反应元件结合后, 启动了杂杂栽砸亚型的皂砸鄄晕粤表达 圆摇 结果与讨论 肺癌是当今世界上对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤, 约有愿园豫的病例是晕杂悦蕴悦 目前晕杂悦蕴悦的靶向治疗已成为世界关注的焦点, 生长抑素在晕杂悦蕴悦 [ 愿 ] 中的靶向治疗作用日益受到重视 晕燥则泽葬等应用包括生长抑素 类视黄醇 褪黑激素 维生素阅 溴麦角环肽和环磷酰胺的综合治疗, 使晚期晕杂悦蕴悦患者的存活率和生活质量有效提高 激素可以调节杂杂栽砸亚型的表达, 包括糖皮质激素 雌激素 甲状腺素 胰岛素 睾 [ 怨丸酮等 ] 目前尚未见孕酮调节杂杂栽砸亚型表达的报道 本研究中, 免疫组化结果显示细胞核与细胞质内为阳性的紫蓝色颗粒, 表明粤缘源怨细胞表达孕砸 ( 图员 ) [ 源 ] 这一研究结果同陨泽澡蚤遭葬泽澡蚤等的研究结果相同 砸栽鄄孕悦砸结果显示粤缘源怨细胞表达杂杂栽砸员 杂杂栽砸圆 杂杂栽砸源和 杂杂栽砸缘皂砸晕粤 各亚型表达的量依次为杂杂栽砸圆皂砸晕粤跃杂杂栽砸员皂砸晕粤越杂杂栽砸源皂砸晕粤跃杂杂栽砸缘皂砸晕粤, 实验中未发现杂杂栽砸猿皂砸晕粤的表达 孕酮作用圆源澡后, 园郾员灶皂燥造辕蕴组粤缘源怨细胞未发现杂杂栽砸猿皂砸晕粤的表达, 员园灶皂燥造辕蕴 员园园园灶皂燥造辕蕴组细胞均出现了杂杂栽砸猿皂砸鄄晕粤的表达 ; 与对照组相比, 不同浓度孕酮作用后, 粤缘源怨细胞杂杂栽砸各亚型皂砸晕粤表达普遍上调 ( 孕均约园援园缘, 其中部分孕约园援园员 ); 与园援员灶皂燥造辕蕴组相比, 员园灶皂燥造辕蕴孕酮对杂杂栽砸缘皂砸晕粤表达的上调有统计学意义 ( 孕约园郾园缘 ); 与员园灶皂燥造辕蕴组相比, 员园园园灶皂燥造辕蕴孕酮对杂杂栽砸各亚型皂砸晕粤表达的调节作用不明显 ( 图圆 ) 员园灶皂燥造辕蕴孕酮处理粤缘源怨细胞圆源澡和源愿澡后, 与对照组相比杂杂栽砸各亚型皂砸晕粤表达上调均有统计学意义 ( 孕约园援园缘, 孕约园援园员 ); 源愿澡组与圆源澡组相比, 杂杂栽砸猿皂砸晕粤与杂杂栽砸缘皂砸晕粤表达继续上调 ( 孕约园郾园缘 )( 图 猿 ) 摇摇上述结果表明, 孕酮上调杂杂栽砸各亚型皂砸晕粤在 粤缘源怨细胞中的表达, 与药物浓度和作用时间都有相关 图员摇孕激素受体在粤缘源怨细胞中的表达 ( 阅粤月染色伊圆园园 ) 图圆摇不同浓度孕酮作用圆源澡对粤缘源怨细胞杂杂栽砸亚型皂砸晕粤表达的影响 孕约园援园缘, 孕约园援园员与对照组比较 ; 孕约园援园缘, 孕约园援园员与园援员灶皂燥造辕蕴组比较图猿摇孕酮作用圆源澡和源愿澡对粤缘源怨细胞杂杂栽砸亚型皂砸晕粤表达的影响 孕约园援园缘, 孕约园援园员与对照组比较 ; ( 下转第源苑源页 ) 孕约园援园缘与圆源澡组比较

3 摇摇摇 第员猿卷摇第远期圆园园远年摇员圆月 中国肿瘤生物治疗杂志悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则 灾燥造援员猿晕燥援远摇摇摇摇摇阅藻糟援圆园园远摇 源苑员 [ 文章编号 ] 摇员园园苑鄄猿愿缘载 ( 圆园园远 ) 园远鄄园源苑员鄄园源 综述 人猿缘型及员员型腺病毒的研究进展 砸藻泽藻葬则糟澡责则燥早则藻泽泽蚤灶澡怎皂葬灶葬凿藻灶燥增蚤则怎泽贼赠责藻猿缘葬灶凿员员 陈东锋综述 ; 石文芳, 钱其军审阅 ( 浙江理工大学生命科学院新元医学生物技术研究所, 浙江摇猿员园园员愿 ) [ 摘摇要 ] 摇人猿缘型 ( 粤凿猿缘 ) 和员员型 ( 粤凿员员 ) 腺病毒同属于月圆亚群, 病毒受体均为悦阅源远分子, 粤凿猿缘和粤凿员员的中和抗体在不同地区不同人种的阳性率都比较低, 且对肿瘤细胞 造血干细胞 树突状细胞等一些传统的缘型和圆型腺病毒嗜性较低的细胞有较高的感染效率, 而且转移基因的表达水平较高, 提示粤凿员员和粤凿猿缘是一类具有良好开发潜力的肿瘤基因治疗载体 目前, 开发利用粤凿猿缘或粤凿员员主要有三种形式 : 嵌合型腺病毒载体 复制缺陷的猿缘型或员员型腺病毒载体和嵌合型的猿缘型或员员型 早怎贼造藻泽泽 腺病毒载体 这些载体的体外疗效较好, 但体内疗效不理想, 原因主要是病毒颗粒在从注射部位到达靶组织会被多重屏障所拦截 因此, 深入研究粤凿猿缘和粤凿员员感染细胞的过程和机制, 有助于将它们应用于包括肿瘤在内多种重大疾病的基因治疗 [ 关键词 ] 摇人员员型腺病毒 ; 人猿缘型腺病毒 ; 肿瘤基因治疗 ; 载体 [ 中图分类号 ] 摇砸苑猿园摇摇摇摇 [ 文献标识码 ] 摇粤 摇摇人腺病毒已发现缘员种血清型, 分为粤 月 悦 阅 耘 云六个亚群, 其中月亚群又包括月员和月圆两个小亚群 目前广泛应用于各种重大疾病临床前治疗和临床治疗研究的粤凿缘和 粤凿圆属于悦亚群, 但是这类以悦粤砸为受体的腺病毒存在如下问题 :( 员 ) 对靶细胞感染效率不高 ;( 圆 ) 在体内会引起严重毒副作用 ;( 猿 ) 人体内广泛存在缘型腺病毒的中和抗体 ( 灾晕粤遭泽 ), 导致病毒在体内很快被免疫系统清除 ;( 源 ) 病毒对细胞的感染效率依赖于细胞表面悦粤砸受体的表达水平, 而造血系统细胞 骨骼肌细胞 干细胞 树突状细胞 原代肿瘤细胞等重要细胞表面悦粤砸表达量很低 这些问题限制了 粤凿缘和粤凿圆的广泛应用 [ 员鄄圆 ] 垣研究发现, 粤凿猿缘和粤凿员员对悦阅猿源细胞 淋巴细胞 单核细胞 月细胞 栽细胞 树突状细胞 骨骼肌细胞 间充质干细胞和原代癌细胞等重要细胞有很高的感染效率, 且细胞毒性较低 因此, 粤凿猿缘和粤凿员员有可能被开发成有效的肿瘤基因治疗载体 员摇 员援员摇 人员员型及猿缘型腺病毒的性质 人员员型及猿缘型腺病毒的基因组 粤凿猿缘最初是从肾移植患者的肾脏和肺脏中分离得到的 其基因组全长猿源苑怨源遭责, 共有源苑个开放阅读框 ( 韵砸云泽 ), 包括早期 ( 耘员, 圆, 猿, 源 ) 和晚期 ( 蕴员, 圆, 猿, 源, 缘 ) 腺病毒家族的保守区域以及员源个编码未知腺病毒基因的 韵砸云泽 [ 猿 ] 根据基因组的细微差别, 粤凿员员分为粤凿员员葬和 粤凿员员责两种 用于基因治疗载体的多是粤凿员员责 粤凿员员责基因组全长猿源苑怨源遭责, 包括猿愿个韵砸云泽, 郧悦含量源愿援怨豫 粤凿员员责 [ 源与粤凿猿缘的基因组序列有怨愿豫的同源性 ], 与粤凿缘基因组序列有缘苑豫的同源性, 并且比粤凿缘的基因组短员员源员遭责 粤凿员员责与粤凿缘基因都包括源个早期区, 其中耘圆月和陨灾葬圆的氨基酸序列与粤凿缘有高度的同源性, 耘员 耘圆粤 耘猿 耘源 蛋白 陨载和云蚤遭藻则与粤凿缘有较大差异 [ 缘 ] 员援圆摇 人员员型及猿缘型腺病毒的受体 人猿缘型 员员型 员源型和猿源型腺病毒同属于月圆亚群, 受 [ 远体均为悦阅源远 ] 但有实验显示, 粤凿员员和粤凿猿缘可能存在另 一种感染细胞的受体 杂贼燥灶藻等发现, 利用粤凿缘辕员员责鄄悦酝灾鄄郧云孕和粤凿缘辕猿缘鄄悦酝灾鄄郧云孕分别感染粤缘源怨和匀藻造葬细胞 ( 均表达悦阅源远 ), 粤凿缘辕员员责鄄悦酝灾鄄郧云孕的感染效率均比粤凿缘辕猿缘鄄悦酝灾鄄郧云孕高, 而同时用这两种载体去感染悦匀韵鄄悦圆细胞 ( 表达悦阅源远 ), 效率几乎一样 另外, 抗血清实验显示, 粤凿员员责云蚤鄄遭藻则的噪灶燥遭区能完全抑制粤凿猿缘与粤缘源怨细胞的结合, 而 粤凿猿缘云蚤遭藻则的噪灶燥遭区并不能完全抑制粤凿员员责与粤缘源怨细胞的 [ 愿结合 ] [ 怨 ] 再怎等发现分别用粤凿缘 粤凿缘辕员员和粤凿缘辕猿缘感染员员 种食道癌细胞和远种口腔癌细胞, 粤凿缘辕员员和粤凿缘辕猿缘对所有肿瘤细胞的感染效率均比粤凿缘要高很多, 而且粤凿缘辕员员和 粤凿缘辕猿缘的感染效率不依赖于悦阅源远或悦阅愿园辕愿远的表达水平 因此推测可能有其他的受体参与调节粤凿员员和粤凿猿缘对细胞的感染 员援猿摇 人员员型及猿缘型腺病毒的中和抗体 粤凿猿缘和粤凿员员中和抗体 ( 灾晕粤遭泽 ) 的阳性率在各地区普遍 [ 员园 ] 较低, 而且即使阳性, 抗体的含量也很低 晕憎葬灶藻早遭等对缘 型和猿缘型腺病毒的灾晕粤遭泽在不同地区的阳性率分析发现, 在冈比亚 南非 美国, 缘型腺病毒灾晕粤遭泽的阳性率分别是愿源援远苑豫 苑怨援愿苑豫和猿苑援园园豫, 抗体的含量或高或低 ; 但是猿缘型腺病毒灾晕粤遭泽的阳性率分别是圆援远远豫 员远郾怨愿豫和远郾猿猿豫, 且抗 [ 基金项目 ] 摇国家高新技术发展规划 ( 愿远猿计划 ) 项目 ( 晕燥援圆园园猿粤粤摇摇摇摇圆员远园猿园 ); 浙江省自然科学基金重点项目 ( 晕燥援在圆园缘远员远 ) [ 作者简介 ] 摇陈东锋 ( 员怨愿员鄄 ), 男, 河南南阳人, 在读硕士研究生, 现 摇摇摇摇从事肿瘤基因治疗肿瘤的研究 [ 通讯作者 ] 摇钱其军, 耘鄄皂葬蚤造 : 择蚤葬灶择躁岳员远猿援糟燥皂

4 源苑圆 中国肿瘤生物治疗杂志 第员猿卷 体含量都很低 杂贼燥灶藻等研究发现粤凿缘的灾晕粤遭泽在健康人 乳腺癌病人以及宫颈癌病人体内的表达量均比粤凿员员灾晕粤遭泽 要高 因此, 粤凿猿缘和粤凿员员的免疫原性较低, 可在血液内较稳定存在, 有利于作为基因转移载体的应用 圆摇 粤凿员员和粤凿猿缘在基因治疗方面的应用 目前, 猿缘型和员员型腺病毒主要有三种应用形式 : 嵌合型腺病毒载体 复制缺陷的猿缘型或员员型腺病毒载体和嵌合型的猿缘型或员员型 早怎贼造藻泽泽 腺病毒载体 圆援员摇 嵌合型的腺病毒载体 腺病毒的组织嗜向性主要由其云蚤遭藻则决定 因此, 将 粤凿缘云蚤遭藻则的噪灶燥遭和杂澡葬枣贼替换为粤凿猿缘或粤凿员员云蚤遭藻则的噪灶燥遭 和泽澡葬枣贼构建而成的嵌合型腺病毒载体粤凿缘辕猿缘或粤凿缘辕员员仍具有粤凿猿缘或粤凿员员的感染特性, 能有效感染低表达悦粤砸的细胞 嵌合型的腺病毒载体对造血细胞 白血病细胞 间充质干细胞 ( 澡酝杂悦 ) 和树突状细胞 ( 阅悦泽 ) 有很高的感染效率, [ 员 ] 而且基因表达水平也很高 杂贼藻糟澡藻则等构建的耘员辕耘猿剔除的嵌合型载体粤凿缘辕员员鄄悦酝灾鄄郧云孕, 在酝韵陨越员园园园时, 对 垣悦阅猿源细胞的感染效率为苑园豫, 即使酝韵陨越源园园园, 粤凿缘鄄悦酝灾鄄垣 [ 员员 ] 郧云孕对悦阅猿源细胞的感染效率也仅为圆园豫 晕蚤造泽泽燥灶等 体外研究发现, 在酝韵陨越员园园时, 粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕感染原代急性骨髓瘤白血病 ( 悦酝蕴 ) 细胞和急性月淋巴白血病 ( 悦蕴蕴 ) 细胞的效率为远怨豫耀耀耀耀耀耀愿远豫, 而粤凿缘鄄郧云孕则只有不到圆园豫的感染 [ 员圆 ] 效率 酝蚤扎怎早怎糟澡蚤等发现, 在酝韵陨越猿园园时, 粤凿缘辕猿缘介导 [ 员猿 ] 澡酝杂悦的转基因活性是传统粤凿缘的员猿园倍 阅藻造责澡蚤灶藻等报道, 粤凿缘辕猿缘对阅悦泽的基因转移和表达效率要比传统的粤凿缘 高员园园倍 此外, 嵌合型的腺病毒载体对原代肿瘤细胞也有 [ 员源 ] 较高的感染效率 酝蚤扎怎早怎糟澡蚤等深入分析比较粤凿缘辕猿缘与传统粤凿缘载体对多种人肿瘤细胞的转染效率, 结果发现, 对于悦粤砸 ( 垣 ) 的肿瘤细胞, 两种载体转基因表达水平相近, 但对于悦粤砸 ( 原 ) 的肿瘤细胞, 粤凿缘辕猿缘介导的荧光酶表达水平是后者的员园园倍以上 尽管凿缘辕猿缘或粤凿缘辕员员可以高效感染许多重要细胞, 但是它并不能逃脱体内针对粤凿缘的免疫反应的攻击, 因为病毒的六邻体是粤凿缘中和抗体的主要攻击 [ 员缘靶 ] 圆援圆摇 复制缺陷的猿缘型或员员型腺病毒载体 复制缺陷型的猿缘型或员员型腺病毒载体, 即全长猿缘型或员员型腺病毒载体的构建方法与缘型和圆型复制缺陷型的腺病毒载体一样, 病毒的耘员区被剔除 复制缺陷型的全长 猿缘型或员员型腺病毒载体, 体外实验疗效较好, 对肿瘤细胞感 [ 员远 ] 染效率及转基因表达水平都比较高 杂葬噪怎则葬蚤等构建的全长复制缺陷型猿缘型腺病毒粤凿猿缘对许多悦粤砸表达阴性的细胞如蕴晕源源源 蕴晕在猿园愿 运缘远圆和哉怨猿苑等的感染效率比粤凿缘高 很多, 与粤凿缘辕猿缘的感染效率差不多或者更高 杂贼燥灶藻等用 粤凿缘鄄悦酝灾鄄郧云孕 粤凿缘辕员员鄄悦酝灾鄄郧云孕和粤凿员员鄄悦酝灾鄄郧云孕分别感垣染悦阅猿源细胞和未成熟的树突状细胞 ( 阅悦泽 ) 在酝韵陨越垣源园园园时, 只有约圆园豫的悦阅猿源细胞被粤凿缘鄄悦酝灾鄄郧云孕感染, 垣而粤凿缘辕员员鄄悦酝灾鄄郧云孕和粤凿员员鄄悦酝灾鄄郧云孕对悦阅猿源细胞的感 染效率分别是愿猿豫和缘员豫 当酝韵陨越缘园园园园时, 粤凿缘鄄悦酝灾鄄郧云孕, 粤凿缘辕员员鄄悦酝灾鄄郧云孕和粤凿员员鄄悦酝灾鄄郧云孕对未成熟阅悦泽的感染效率分别是员园豫 远猿豫和苑愿豫 这些结果表明在体外, 垣粤凿员员比粤凿缘对悦阅猿源细胞和阅悦泽有更高的感染效率, 并且 垣粤凿员员与粤凿缘辕员员对悦阅猿源细胞的感染存在明显的差异 但是复制缺陷的全长猿缘型或员员型腺病毒载体的体内实验疗效较低, 病毒在体内很快被清除, 转基因表达水平不高 [ 员远 ] 杂葬噪怎则葬蚤等尾静脉注射小鼠源愿澡后, 发现粤凿猿缘蕴和粤凿缘辕猿缘蕴携带的荧光素酶在肝脏 脾脏 肾脏 心脏和肺脏的表达水平均低于粤凿缘蕴 可能是悦阅源远在上述组织器官内表达量较低, 也可能是粤凿猿缘蕴和粤凿缘辕猿缘蕴不能充分到达这些器官 注射员澡后, 约缘苑豫的粤凿猿缘蕴和几乎员园园豫的粤凿缘蕴聚集到小鼠的肝脏, 但源愿澡后, 几乎所有的粤凿猿缘蕴从肝脏消失, 而 还有约源缘豫的粤凿缘蕴存在于肝脏 杂贼燥灶藻等将粤凿缘 粤凿缘辕员员 和粤凿员员尾静脉注射表达悦阅源远的转基因小鼠, 猿园皂蚤灶后, 在肝脏发现了此三种病毒 苑圆澡后, 还可以在肝脏中观察到微量的粤凿缘和粤凿缘辕员员, 但是已完全观察不到粤凿员员 出现以上结果可能是病毒在肝内迅速被运怎责枣枣藻则细胞吞噬清除或者是 [ 员苑 ] 粤凿猿缘和粤凿员员对肝脏的吞噬性较低 杂澡葬赠葬噪澡皂藻贼燥增等研究发现, 介导粤凿缘辕猿缘蕴通过内吞作用进入靶细胞的受体与 粤凿缘作用不同, 粤凿缘辕猿缘蕴内吞后在细胞内形成晚期内涵体辕 溶酶体到达核周围, 并且其中一部分内涵体会重新返回到细胞表面, 而没有脱颗粒进入细胞核 这可以部分解释粤凿猿缘蕴 和粤凿缘辕猿缘蕴在包括肝脏在内的一些器官中表达量较低的原因, 同时表明粤凿猿缘与受体的作用方式不同于粤凿缘 此外, [ 员远 ] 粤凿猿缘与粤凿缘辕猿缘感染细胞的过程稍有不同 杂葬噪怎则葬蚤等报道静脉注射粤凿缘辕猿缘蕴和粤凿猿缘蕴到小鼠体内, 粤凿缘辕猿缘蕴的荧光素酶在肝脏 脾脏和心脏的表达水平比粤凿猿缘蕴要高 但是 垣粤凿猿缘蕴对悦阅猿源细胞有更高的转染效率 可能是云蚤遭藻则与病毒的其它壳体蛋白如五邻体基座和六邻体共同介导了病毒垣的感染, 而粤凿猿缘蕴的五邻体基座可能包含对悦阅猿源细胞有更高嗜性的砸郧阅序列 他们发现在存在源园园 μ 早辕皂造这种与 垣悦阅猿源细胞有较高嗜性的砸郧阅肽段的情况下, 粤凿缘辕猿缘蕴和 粤凿猿缘蕴的荧光素酶的表达水平均会降低缘园豫耀耀耀耀耀耀远园豫, 因为 砸郧阅肽段会与这两种病毒竞争性结合介导病毒进入细胞的整联蛋白 圆援猿摇 嵌合型猿缘型或员员型 早怎贼造藻泽泽 腺病毒载体 嵌合型猿缘型 ( 粤凿缘辕猿缘 ) 或员员型 ( 粤凿缘辕员员 ) 早怎贼造藻泽泽 腺病毒载体的构建方法与传统 早怎贼造藻泽泽 腺病毒的构建方法一样, 区别在于辅助病毒是嵌合的复制缺陷型粤凿缘云猿缘或 粤凿缘云员员 因此, 它们与粤凿缘辕猿缘或粤凿缘辕员员具有相同的受体和细胞感染范围, 但 粤凿缘辕猿缘或 粤凿缘辕员员最大的优点是转 [ 员愿 ] 移基因表达持久, 细胞毒性低 月葬造葬皂燥贼蚤泽等报道, 在酝韵陨越员园时, 用 粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕和粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕分别感染运缘远圆细胞, 圆凿后, 运缘远圆细胞的郧云孕表达水平接近, 分别为远源豫和 远圆豫, 但是 粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕感染的运缘远圆细胞内病毒粒子数降到缘缘豫, 总的病毒粒子数降到远愿豫, 而粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕感染的 运缘远圆细胞内病毒粒子数降到员圆豫, 总的病毒粒子数却升到

5 陈东锋等援人猿缘型及员员型腺病毒的研究进展 源苑猿 圆苑远豫 ; 源凿后, 粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕诱导的郧云孕表达降到源园豫, 细胞内病毒的粒子数低于员园豫, 总的病毒粒子数降到缘援圆豫, 然而粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕诱导的郧云孕表达已低于缘豫, 细胞内病毒粒子数不到员豫, 总的病毒粒子数却仍然达到缘圆豫 由此可以看出郧云孕的表达水平与粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕病毒粒子在细胞内的数量随时间的变化是不一致的 在高病毒基因拷贝的情况下, 粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕的基因表达水平却明显下降, 推测是基因沉默导致的 在两种病毒载体中, 郧云孕都是由悦酝灾启动子控制的, 因此可能是粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕携带的病毒基因组中的某些结构参与诱导了郧云孕基因的表达沉默, 导致粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕 诱导的基因表达迅速下降 相反 粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕在细胞内存活的时间较长, 而且本身不携带病毒基因组, 因此在体外条件下, 粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕比粤凿缘辕猿缘鄄郧云孕能更加持久的转基因表 [ 员 ] 达 杂贼藻糟澡藻则等发现, 在不同的酝韵陨条件下, 腺病毒对匀耘蕴 细胞 ( 人红白血病细胞系 ) 酝燥苑藻细胞 ( 婴儿巨核细胞白血病垣细胞系 ) 和悦阅猿源细胞的感染效率及毒性均比粤凿缘辕员员要低 尽管, 空壳腺病毒感染效率较高, 毒性较低, 但是对 粤凿缘辕猿缘 粤凿缘辕员员 粤凿猿缘和 粤凿员员的研究开发仍比较少 这是因为目前对粤凿猿缘和粤凿员员与细胞之间的作用机制还不是很清楚, 生产 无肠 腺病毒载体的细胞系也不是很理想, 辅助病毒的污染率还很高 猿摇 展望 人猿缘型和员员型腺病毒载体与传统的悦组腺病毒载体相比, 有诸多的优点 : 血清中中和抗体的阳性率较低 ; 与粤凿缘 无免疫交叉反应, 粤凿员员和粤凿猿缘之间也没有交叉免疫反 [ 员怨应 ] ; 感染细胞不依赖悦粤砸受体, 对包括造血干细胞和原代肿瘤细胞在内的许多重要细胞都有较高感染效率 ; 肝脏毒性低, 免疫副作用小 因此, 开发粤凿员员和粤凿猿缘为肿瘤等重大疾病的疫苗载体将是粤凿员员和粤凿猿缘的另一研究方向 此外, 由于粤凿猿缘和粤凿员员可高效转染多数干细胞和肿瘤细胞, 因此开发利用粤凿猿缘和粤凿员员靶向杀灭肿瘤干细胞, 实现彻底杀灭肿瘤的目的, 也将是研究的热点 但是, 粤凿猿缘和粤凿员员载体的体内实验, 尤其是在静脉注射时, 疗效并不令人满意 这主要是因为病毒颗粒在从注射部位到达靶组织的过程中被多重屏障所拦截 :( 员 ) 病毒在随血液运动的过程中, 失活或被降解 ;( 圆 ) 一部分病毒与正常细胞及组织 ( 非靶向 ) 发生非特异性黏附并被吸收 ;( 猿 ) 网状内皮系统 ( 如肝脏的运怎责枣枣藻则细胞 ) 对病毒有吞噬作用 ;( 源 ) 激活的抗体和辕或补体系统会中和一部分病毒 ;( 缘 ) 病毒不能有效穿透内皮屏障及在实体肿瘤中弥散, 进入肿瘤内部表达 肿瘤组织内部存在 天然屏障, 如正常纤维或坏死组织都会影响载体在肿瘤细胞间的弥散 相信, 随着对粤凿猿缘和粤凿员员感染细胞的过程和机制深入研究, 对粤凿猿缘和粤凿员员的不断开发改进, 最终必将实现从实验研究到临床应用的质的跨越, 为广大患者造福 [ 参考文献 ] [ 员 ] 摇杂贼藻糟澡藻则匀, 杂澡葬赠葬噪澡皂藻贼燥增阅酝, 栽葬皂葬贼燥赠葬灶灶燥责燥怎造燥泽郧, 藻贼葬造援粤 糟葬责泽蚤凿鄄皂燥凿蚤枣蚤藻凿葬凿藻灶燥增蚤则怎泽增藻糟贼燥则凿藻增燥蚤凿燥枣葬造造增蚤则葬造早藻灶藻泽 : 粤泽鄄泽藻泽泽皂藻灶贼燥枣贼则葬灶泽凿怎糟贼蚤燥灶葬灶凿贼燥曾蚤糟蚤贼赠蚤灶澡怎皂葬灶澡藻皂葬贼燥责燥蚤藻贼蚤糟糟藻造造泽 [ 允 ] 援酝燥造栽澡藻则, 圆园园员, 源 ( 员 ): 猿远鄄源源援 [ 圆 ] 摇杂藻早藻则皂葬灶粤, 蕴蚤灶凿皂葬灶运, 酝藻蚤再云, 藻贼葬造援粤凿藻灶燥增蚤则怎泽贼赠责藻泽员员责葬灶凿猿缘葬贼贼葬糟澡贼燥葬灶凿蚤灶枣藻糟贼责则蚤皂葬则赠造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽葬灶凿皂燥灶燥糟赠贼藻泽, 遭怎贼澡藻曾燥灶藻曾责则藻泽泽蚤燥灶蚤灶栽鄄糟藻造造泽则藻择怎蚤则藻泽责则蚤燥则葬糟贼蚤增葬贼蚤燥灶 [ 允 ] 援灾蚤则燥造燥早赠, 圆园园远, 猿源怨 ( 员 ): 怨远鄄员员员援 [ 猿 ] 摇郧葬燥宰, 砸燥遭遭蚤灶泽孕阅, 郧葬皂遭燥贼贼燥粤, 藻贼葬造援匀怎皂葬灶葬凿藻灶燥增蚤则怎泽贼赠责藻猿缘 : 晕怎糟造藻燥贼蚤凿藻泽藻择怎藻灶糟藻葬灶凿增藻糟贼燥则凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 [ 允 ] 援郧藻灶藻栽澡藻则, 圆园园猿, 员园 ( 圆猿 ): 员怨源员鄄员怨源怨援 [ 源 ] 摇杂贼燥灶藻阅, 云怎则贼澡皂葬灶灶粤, 杂葬灶凿蚤早灾, 藻贼葬造援栽澡藻糟燥皂责造藻贼藻灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻泽藻择怎藻灶糟藻, 早藻灶燥皂藻燥则早葬灶蚤扎葬贼蚤燥灶, 葬灶凿燥则蚤早蚤灶燥枣澡怎皂葬灶葬凿藻灶燥增蚤则怎泽贼赠责藻员员 [ 允 ] 援灾蚤则燥造燥早赠, 圆园园猿, 猿园怨 ( 员 ): 员缘圆鄄员远缘援 [ 缘 ] 摇酝藻蚤再云, 杂噪燥早允, 蕴蚤灶凿皂葬灶运, 藻贼葬造援悦燥皂责葬则葬贼蚤增藻葬灶葬造赠泽蚤泽燥枣贼澡藻早藻灶燥皂藻燥则早葬灶蚤扎葬贼蚤燥灶燥枣澡怎皂葬灶葬凿藻灶燥增蚤则怎泽员员, 葬皂藻皂遭藻则燥枣贼澡藻澡怎鄄皂葬灶葬凿藻灶燥增蚤则怎泽泽责藻糟蚤藻泽月, 葬灶凿贼澡藻糟燥皂皂燥灶造赠怎泽藻凿澡怎皂葬灶葬凿藻灶燥鄄增蚤则怎泽缘增藻糟贼燥则, 葬皂藻皂遭藻则燥枣泽责藻糟蚤藻泽悦 [ 允 ] 援允郧藻灶灾蚤则燥造, 圆园园猿, 愿源 ( 愿 ): 圆园远员鄄圆园苑员援 [ 远 ] 摇郧葬早早葬则粤, 杂澡葬赠葬噪澡皂藻贼燥增阅酝, 蕴蚤藻遭藻则粤, 藻贼葬造援悦阅源远蚤泽葬糟藻造造怎造葬则则藻糟藻责贼燥则枣燥则早则燥怎责月葬凿藻灶燥增蚤则怎泽藻泽 [ 允 ] 援晕葬贼酝藻凿, 圆园园猿, 怨 ( 员员 ): 员源园愿鄄员源员圆援 摇杂贼燥灶藻阅, 晕蚤杂, 蕴蚤在再, 藻贼葬造援阅藻增藻造燥责皂藻灶贼葬灶凿葬泽泽藻泽泽皂藻灶贼燥枣澡怎鄄皂葬灶葬凿藻灶燥增蚤则怎泽贼赠责藻员员葬泽葬早藻灶藻贼则葬灶泽枣藻则增藻糟贼燥则 [ 允 ] 援允灾蚤则燥造, 圆园园缘, 苑怨 ( 愿 ): 缘园怨园鄄缘员园源援 [ 愿 ] 摇酝藻蚤, 再云, 蕴蚤灶凿皂葬灶运, 宰葬凿藻造造郧援匀怎皂葬灶葬凿藻灶燥增蚤则怎泽藻泽燥枣泽怎遭早藻灶鄄藻则葬月, 悦, 葬灶凿耘憎蚤贼澡增葬则蚤燥怎泽贼则燥责蚤泽皂泽凿蚤枣枣藻则蚤灶遭燥贼澡遭蚤灶凿蚤灶早贼燥葬灶凿则藻责造蚤糟葬贼蚤燥灶蚤灶贼澡藻藻责蚤贼澡藻造蚤葬造粤缘源怨葬灶凿圆怨猿糟藻造造泽 [ 允 ] 援灾蚤则燥造燥早赠, 圆园园圆, 圆怨缘 ( 员 ): 猿园鄄源猿援 [ 怨 ] 摇蕴蚤灶早再, 栽葬噪藻灶燥遭怎匀, 杂澡蚤皂燥扎葬贼燥韵, 藻贼葬造援陨灶糟则藻葬泽藻凿蚤灶枣藻糟贼蚤增蚤贼赠燥枣葬凿藻灶燥增蚤则怎泽贼赠责藻缘遭藻葬则蚤灶早贼赠责藻员员燥则贼赠责藻猿缘枣蚤遭藻则泽贼燥澡怎皂葬灶藻鄄泽燥责澡葬早藻葬造葬灶凿燥则葬造糟葬则糟蚤灶燥皂葬糟藻造造泽 [ 允 ] 援韵灶糟燥造砸藻责, 圆园园缘, 员源 ( 源员 ): 愿猿员鄄愿猿缘援 [ 员园 ] 晕憎葬灶藻早遭耘, 灾葬则凿葬泽耘, 郧葬燥宰, 藻贼葬造援孕则藻增葬造藻灶糟藻燥枣灶藻怎贼则葬造蚤扎蚤灶早葬灶贼蚤遭燥凿蚤藻泽贼燥葬凿藻灶燥增蚤则葬造泽藻则燥贼赠责藻泽缘葬灶凿猿缘蚤灶贼澡藻葬凿怎造贼责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽燥枣贼澡藻郧葬皂遭蚤葬, 杂燥怎贼澡粤枣则蚤糟葬, 葬灶凿贼澡藻哉灶蚤贼藻凿杂贼葬贼藻泽 [ 允 ] 援悦造蚤灶阅蚤鄄葬早灶蕴葬遭陨皂皂怎灶燥造, 圆园园源, 员员 ( 圆 ) 援猿缘员鄄猿缘苑援 [ 员员 ] 晕蚤造泽泽燥灶酝, 蕴躁怎灶早遭藻则早允, 云葬灶载, 藻贼葬造援阅藻增藻造燥责皂藻灶贼燥枣葬灶葬凿藻灶燥增蚤鄄则葬造增藻糟贼燥则泽赠泽贼藻皂憎蚤贼澡葬凿藻灶燥增蚤则怎泽泽藻则燥贼赠责藻猿缘贼则燥责蚤泽皂 ; 藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼贼则葬灶鄄泽蚤藻灶贼早藻灶藻贼则葬灶泽枣藻则蚤灶贼燥责则蚤皂葬则赠皂葬造蚤早灶葬灶贼澡藻皂葬贼燥责燥蚤藻贼蚤糟糟藻造造泽 [ 允 ] 援允郧藻灶藻酝藻凿, 圆园园源, 远 ( 远 ): 远猿员鄄远源员援 [ 员圆 ] 酝蚤扎怎早怎糟澡蚤匀, 杂葬泽葬噪蚤栽, 匀葬赠葬噪葬憎葬栽, 藻贼葬造援云蚤遭藻则鄄皂燥凿蚤枣蚤藻凿葬凿藻灶燥鄄增蚤则怎泽增藻糟贼燥则泽皂藻凿蚤葬贼藻藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼早藻灶藻贼则葬灶泽枣藻则蚤灶贼燥怎灶凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼藻凿葬灶凿葬凿蚤责燥早藻灶蚤糟鄄凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼藻凿澡怎皂葬灶皂藻泽藻灶糟澡赠皂葬造泽贼藻皂糟藻造造泽 [ 允 ] 援月蚤燥鄄糟澡藻皂月蚤燥责澡赠泽砸藻泽悦燥皂皂怎灶, 圆园园缘, 猿猿圆 ( 源 ): 员员园员鄄员员园远援 [ 员猿 ] 阅藻造责澡蚤灶藻砸, 酝藻灶扎燥允耘援杂怎贼皂怎造造藻则酝, 藻贼葬造援匀蚤早澡造赠藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼贼则葬灶泽鄄凿怎糟贼蚤燥灶燥枣澡怎皂葬灶皂燥灶燥糟赠贼藻鄄凿藻则蚤增藻凿凿藻灶凿则蚤贼蚤糟糟藻造造泽憎蚤贼澡泽怎遭早则燥怎责月枣蚤遭藻则鄄皂燥凿蚤枣蚤藻凿葬凿藻灶燥增蚤则怎泽增藻糟贼燥则泽藻灶澡葬灶糟藻泽贼则葬灶泽早藻灶藻鄄藻灶糟燥凿藻凿葬灶贼蚤鄄早藻灶责则藻泽藻灶贼葬贼蚤燥灶贼燥糟赠贼燥贼燥曾蚤糟栽糟藻造造泽 [ 允 ] 援允陨皂皂怎灶燥造, 圆园园员, 员远远 ( 愿 ): 缘圆猿远鄄缘圆源源援 [ 员源 ] 酝蚤扎怎早怎糟澡蚤匀, 匀葬赠葬噪葬憎葬栽援粤凿藻灶燥增蚤则怎泽增藻糟贼燥则泽糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早糟澡蚤皂藻则蚤糟贼赠责藻缘葬灶凿贼赠责藻猿缘枣蚤遭藻则责则燥贼藻蚤灶泽藻曾澡蚤遭蚤贼葬造贼藻则藻凿葬灶凿藻曾责葬灶凿藻凿贼则燥责鄄蚤泽皂葬灶凿蚤灶糟则藻葬泽藻贼澡藻泽蚤扎藻造蚤皂蚤贼燥枣枣燥则藻蚤早灶早藻灶藻泽 [ 允 ] 援郧藻灶藻, 圆园园圆,

6 檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻 源苑源 中国肿瘤生物治疗杂志 第员猿卷 圆愿缘 ( 员鄄圆 ): 远怨鄄苑苑援 [ 员缘 ] 郧葬造造允, 运葬泽泽鄄耘蚤泽造藻则粤, 蕴藻蚤灶憎葬灶凿蕴, 藻贼葬造援粤凿藻灶燥增蚤则怎泽贼赠责藻缘葬灶凿苑糟葬责泽蚤凿糟澡蚤皂藻则葬 : 云蚤遭藻则则藻责造葬糟藻皂藻灶贼葬造贼藻则泽则藻糟藻责贼燥则贼则燥责蚤泽皂憎蚤贼澡燥怎贼葬枣枣藻糟贼蚤灶早责则蚤皂葬则赠蚤皂皂怎灶藻灶藻怎贼则葬造蚤扎葬贼蚤燥灶藻责蚤贼燥责藻泽 [ 允 ] 援允灾蚤则燥造, 员怨怨远, 苑园 ( 源 ): 圆员员远鄄圆员圆猿援 [ 员远 ] 杂葬噪怎则葬蚤云, 酝蚤扎怎早怎糟澡蚤匀, 再葬皂葬早怎糟澡蚤栽, 藻贼葬造援悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶燥枣蚤灶增蚤贼则燥葬灶凿蚤灶增蚤增燥早藻灶藻贼则葬灶泽枣藻则责则燥责藻则贼蚤藻泽燥枣葬凿藻灶燥增蚤则怎泽泽藻则燥贼赠责藻猿缘增藻糟贼燥则 [ 允 ] 援酝燥造栽澡藻则, 圆园园猿, 愿 ( 缘 ): 愿员猿鄄愿圆员援 [ 员苑 ] 杂澡葬赠葬噪澡皂藻贼燥增阅酝, 蕴蚤在再, 栽藻则灶燥增燥蚤灾, 藻贼葬造援栽澡藻蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶遭藻鄄贼憎藻藻灶贼澡藻枣蚤遭藻则噪灶燥遭凿燥皂葬蚤灶葬灶凿贼澡藻糟藻造造怎造葬则葬贼贼葬糟澡皂藻灶贼则藻糟藻责贼燥则凿藻贼藻则皂蚤灶藻泽贼澡藻蚤灶贼则葬糟藻造造怎造葬则贼则葬枣枣蚤糟噪蚤灶早则燥怎贼藻燥枣葬凿藻灶燥增蚤则怎泽藻泽 [ 允 ] 援允灾蚤则燥造, 圆园园猿, 苑苑 ( 远 ): 猿苑员圆鄄猿苑圆猿援 [ 员愿 ] 月葬造葬皂燥贼蚤泽粤酝, 匀怎葬灶早运, 酝蚤贼葬灶蚤运援耘枣枣蚤糟蚤藻灶贼凿藻造蚤增藻则赠葬灶凿泽贼葬遭造藻早藻灶藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶蚤灶葬澡藻皂葬贼燥责燥蚤藻贼蚤糟糟藻造造造蚤灶藻怎泽蚤灶早葬糟澡蚤皂藻则蚤糟泽藻则燥鄄贼赠责藻猿缘枣蚤遭藻则责泽藻怎凿燥贼赠责藻凿澡藻造责藻则鄄凿藻责藻灶凿藻灶贼葬凿藻灶燥增蚤则葬造增藻糟贼燥则 [ 允 ] 援灾蚤则燥造燥早赠, 圆园园源, 猿圆源 ( 员 ): 圆圆怨鄄圆猿苑援 [ 员怨 ] 蕴藻皂糟噪藻则贼粤粤, 杂怎皂蚤凿葬杂酝, 匀燥造贼藻则皂葬灶蕴, 藻贼葬造援陨皂皂怎灶燥早藻灶蚤糟蚤贼赠燥枣澡藻贼藻则燥造燥早燥怎泽责则蚤皂藻鄄遭燥燥泽贼则藻早蚤皂藻灶泽蚤灶增燥造增蚤灶早则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼葬凿藻灶燥增蚤则怎泽泽藻则燥贼赠责藻员员 ( 粤凿员员 ) 葬灶凿葬凿猿缘增葬糟糟蚤灶藻增藻糟贼燥则泽蚤灶贼澡藻责则藻泽藻灶糟藻燥枣葬灶贼蚤鄄葬凿缘蚤皂皂怎灶蚤贼赠 [ 允 ] 援允灾蚤则燥造, 圆园园缘, 苑怨 ( 员缘 ): 怨远怨源鄄怨苑园员援 [ 收稿日期 ] 摇圆园园远原园愿原员猿 [ 修回日期 ] 摇圆园园远原员员原圆园 [ 本文编辑 ] 摇王摇莹 檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿 ( 下接第源苑园页 ) 孕酮对杂杂栽砸表达的调节作用提示了将孕激素与生长抑素联合应用治疗晕杂悦蕴悦的可能 一方面, 孕酮 [ 员, 源与奥曲肽本身具有抑制肿瘤生长的作用 ] ; 另一方面, 孕酮上调杂杂栽砸的表达, 尤其是杂杂栽砸猿和杂杂栽砸缘的上调, 增加了癌细胞中奥曲肽作用的靶点 众所周知, 在杂杂栽砸的五种亚型中, 杂杂栽砸圆 杂杂栽砸猿和杂杂栽砸缘同属一个亚家族, 它们与生长抑素类似物, 包括奥曲肽 兰瑞肽等具有高亲和性 ; 奥曲肽等可以通过与这三种受 [ 员体结合, 诱导细胞的凋亡 ] 目前尚需要进一步的实验来证明孕酮与奥曲肽等联合应用对晕杂悦蕴悦的抑制作用 总之, 晕杂悦蕴悦细胞株粤缘源怨表达孕砸和杂杂栽砸, 孕酮主要以时间依赖型的方式上调杂杂栽砸各亚型皂砸晕粤表达, 尤其是杂杂栽砸猿和杂杂栽砸缘 本研究结果提示 : 孕酮作用于晕杂悦蕴悦中, 可以上调杂杂栽砸各亚型表达, 增加生长抑素类似物作用的靶点, 孕酮联合生长抑素类似物有望成为晕杂悦蕴悦靶向治疗的新途径 [ 参考文献 ] [ 员 ] 摇阅葬泽早怎责贼葬孕援杂燥皂葬贼燥泽贼葬贼蚤灶葬灶葬造燥早怎藻泽 : 酝怎造贼蚤责造藻则燥造藻泽蚤灶糟藻造造怎造葬则责则燥鄄造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶, 灶藻燥责造葬泽蚤葬, 葬灶凿葬灶早蚤燥早藻灶藻泽蚤泽 [ 允 ] 援孕澡葬则皂葬糟燥造栽澡藻则, 圆园园源, 员园圆 ( 员 ): 远员鄄愿缘援 [ 圆 ] 摇酝藻灶凿葬再, 运葬澡灶阅援杂燥皂葬贼燥泽贼葬贼蚤灶则藻糟藻责贼燥则蚤皂葬早蚤灶早燥枣灶燥灶鄄泽皂葬造造怨怨皂糟藻造造造怎灶早糟葬灶糟藻则憎蚤贼澡栽糟凿藻责则藻燥贼蚤凿藻 [ 允 ] 援杂藻皂蚤灶晕怎糟造酝藻凿, 圆园园圆, 猿圆 ( 圆 ): 怨圆鄄怨远援 [ 猿 ] 摇韵鸳月赠则灶藻运允, 杂糟澡葬造造赠粤灾, 栽澡燥皂葬泽粤, 藻贼葬造援杂燥皂葬贼燥泽贼葬贼蚤灶, 蚤贼泽则藻鄄 糟藻责贼燥则泽葬灶凿葬灶葬造燥早泽, 蚤灶造怎灶早糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援悦澡藻皂燥贼澡藻则葬责赠, 圆园园员, 源苑 ( 杂怎责责造圆 ): 苑愿鄄员园愿援 [ 源 ] 摇陨泽澡蚤遭葬泽澡蚤匀, 杂怎扎怎噪蚤栽, 杂怎扎怎噪蚤杂, 藻贼葬造援孕则燥早藻泽贼藻则燥灶藻则藻糟藻责贼燥则蚤灶灶燥灶鄄泽皂葬造造糟藻造造造怎灶早糟葬灶糟藻则 : 粤责燥贼藻灶贼责则燥早灶燥泽贼蚤糟枣葬糟贼燥则葬灶凿责燥泽泽蚤遭造藻贼葬则早藻贼枣燥则藻灶凿燥糟则蚤灶藻贼澡藻则葬责赠 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则砸藻泽, 圆园园缘, 远缘 ( 员源 ): 远源缘园鄄远源缘愿援 [ 缘 ] 摇在藻灶早载, 再葬燥在援砸藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责遭藻贼憎藻藻灶藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣泽燥皂葬贼燥泽贼葬贼蚤灶则藻糟藻责贼燥则泽泽怎遭贼赠责藻圆皂砸晕粤葬灶凿藻泽贼则燥早藻灶葬灶凿责则燥早藻泽贼藻则燥灶藻则藻糟藻责贼燥则泽蚤灶遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则 [ 允 ] 援悦澡蚤灶酝藻凿允 ( 耘灶早造 ), 圆园园猿, 员员远 ( 员圆 ): 员愿缘园鄄员愿缘猿援 [ 远 ] 摇韵则造葬灶凿燥悦, 砸葬早早蚤悦悦, 月蚤葬灶糟澡蚤杂, 藻贼葬造援酝藻葬泽怎则藻皂藻灶贼燥枣泽燥皂葬鄄贼燥泽贼葬贼蚤灶则藻糟藻责贼燥则泽怎遭贼赠责藻圆皂砸晕粤蚤灶遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则葬灶凿糟燥则则藻泽责燥灶凿鄄蚤灶早灶燥则皂葬造贼蚤泽泽怎藻 [ 允 ] 援耘灶凿燥糟则砸藻造葬贼悦葬灶糟藻则, 圆园园源, 员员 ( 圆 ): 猿圆猿鄄猿猿圆援 摇云藻则燥灶藻阅, 粤则增蚤早燥酝, 杂藻皂蚤灶燥悦, 藻贼葬造援杂燥皂葬贼燥泽贼葬贼蚤灶葬灶凿凿燥责葬皂蚤灶藻则藻糟藻责贼燥则藻曾责则藻泽泽蚤燥灶蚤灶造怎灶早糟葬则糟蚤灶燥皂葬糟藻造造泽葬灶凿藻枣枣藻糟贼泽燥枣糟澡蚤皂藻则蚤糟泽燥皂葬贼燥泽贼葬贼蚤灶鄄凿燥责葬皂蚤灶藻皂燥造藻糟怎造藻泽燥灶糟藻造造责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶 [ 允 ] 援粤皂允孕澡赠泽蚤燥造耘灶凿燥糟则蚤灶燥造酝藻贼葬遭, 圆园园缘, 圆愿怨 ( 远 ): 耘员园源源鄄员园缘园援 [ 愿 ] 摇晕燥则泽葬粤, 酝葬则贼蚤灶燥灾援杂燥皂葬贼燥泽贼葬贼蚤灶, 则藻贼蚤灶燥蚤凿泽, 皂藻造葬贼燥灶蚤灶, 增蚤贼葬皂蚤灶阅, 遭则燥皂燥糟则蚤责贼蚤灶藻, 葬灶凿糟赠糟造燥责澡燥泽责澡葬皂蚤凿藻蚤灶葬凿增葬灶糟藻凿灶燥灶鄄泽皂葬造造鄄糟藻造造造怎灶早糟葬灶糟藻则责葬贼蚤藻灶贼泽憎蚤贼澡造燥憎责藻则枣燥则皂葬灶糟藻泽贼葬贼怎泽 [ 允 ] 援悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则砸葬凿蚤燥责澡葬则皂, 圆园园远, 圆员 ( 员 ): 远愿鄄苑猿援 [ 怨 ] 摇孕葬贼藻造再悦援杂燥皂葬贼燥泽贼葬贼蚤灶葬灶凿蚤贼泽则藻糟藻责贼燥则枣葬皂蚤造赠 [ 允 ] 援云则燥灶贼晕藻怎则燥鄄藻灶凿燥糟则蚤灶燥造, 员怨怨怨, 圆园 ( 猿 ): 员缘苑鄄员怨愿援 [ 员园 ] 韵造蚤葬泽郧, 灾蚤燥造造藻贼悦, 运怎泽泽藻则燥憎匀, 藻贼葬造援砸藻早怎造葬贼蚤燥灶葬灶凿枣怎灶糟贼蚤燥灶燥枣泽燥皂葬贼燥泽贼葬贼蚤灶则藻糟藻责贼燥则泽 [ 允 ] 援允晕藻怎则燥糟澡藻皂, 圆园园源, 愿怨 ( 缘 ): 员园缘苑鄄员园怨员援 [ 收稿日期 ] 摇圆园园远原员园原园愿 [ 修回日期 ] 摇圆园园远原员员原圆园 [ 本文编辑 ] 摇王摇莹 檻檻檻檻 摇 欢迎订阅 中国肿瘤生物治疗杂志 摇

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DWZZ1203.mps 摇 动物学杂志悦澡蚤灶藻泽藻允燥怎则灶葬造燥枣在燥燥造燥早赠摇圆园员圆袁源苑渊猿冤院远远耀苑圆 长白山自然保护区黑熊和棕熊种群数量动态分析 朴正吉摇朴龙国摇王卓聪摇罗玉梅摇王摇超摇睢亚橙 吉林省长白山科学研究院摇 安图县摇员猿猿远员猿 摘要院员怨愿远耀圆园员园年冬季采用路线调查方法袁对吉林省长白山国家级自然保护区阔叶红松林和针叶林中的黑熊渊哉则泽怎泽贼澡蚤遭藻贼葬灶怎泽冤及棕熊渊哉郾葬则糟贼燥泽冤的相对种群数量和幼年个体比例进行了长期调查遥调查面积圆分别为源万和猿万澡皂遥调查期间累计遇到黑熊远缘头次渊圆郾远头辕年冤尧棕熊源远头次渊员郾愿头辕年冤遥各年度黑熊和棕熊的数量变动很大袁总体呈下降趋势遥黑熊的数量较圆园世纪愿园年代下降了怨猿郾源豫袁幼体所占比率从员苑郾圆豫下降为园豫曰棕熊种群数量下降了猿愿郾愿豫袁幼体所占比率仅为苑郾员豫遥黑熊和棕熊的种群幼体所占比例极低袁说明长白山自然保护区黑熊和棕熊自然繁殖力很低袁圆种熊种群均处于极度濒危状态遥栖息地减少和盗猎可能是导致熊类数量急剧下降的主要因素遥关键词院黑熊曰棕熊曰种群数量曰长白山自然保护区中图分类号院匝怨缘愿摇文献标识码院粤摇文章编号院园圆缘园鄄猿圆远猿渊圆园员圆冤园猿鄄远远鄄园苑

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教育改革的新趋势袁试图构建政府与大学的新型法律关系遥在我国袁由于市场经济体制的建立和完善以及治理理论的兴起袁为政府与大学关系的变革提供了理论与实践的依据遥改变大学与政府之间的附属关系袁最大限度地减少政府对大学的日常干预袁赋予大学自我管理尧自我负责的权力机制袁成为了现代大学行政法人制度构建的主要目标遥 现代教育管理窑 2013 年第 10 期 专 题 譹訛 黄海群 渊厦门大学袁福建厦门 361005 冤 摘要院我国大学行政法人制度迄今尚未建立袁主要存在大学法人性质定位不明尧政府行政管理权力和大学行政法人权利边界不清尧教育法律调控机制尚未健全等现实境况遥现代大学行政法人制度应是现代大学制度建设的重要组成部分袁其构建的主要目标是改变大学与政府之间的附属关系袁减少政府对大学的不当干预袁赋予大学自我管理与负责的权力机制遥应以保障学术自由和大学自治权为前提袁明确界定我国大学行政法人地位袁真正落实大学办学自主权遥关键词院现代大学曰行政法人制度曰构建中图分类号院郧

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