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1 SARS (WHO) 3 12 (atypical pneumonia) WHO (Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS) 3 22 SARS 3 NJEM Lancet BC (BC Cancer Agency's Genome Sciences Centre) WHO (Coronavirus) (SARS) (SARS Coronavirus, SARS-CoV) 8 PCR 9 5 Genebank 11 BJ01 CUHK-W1 CUHK-Su10 HKU Tor2 Urbani SIN (Genome Institute of Singapore) Lübeck (Institute of Biochemistry, University of Lübeck) SARS 14 SARS ( SARS

2 SARS CMBI 15 SARS SARS (SARS-Cov) (Order: Nidovirales), (Family: Coronaviridae) (Genus: Coronavirus) RNA [(+)sense, ssrna Virus] nm (envelope) ('club-shaped' peplomers) (crown) 1 - Coronavirus 1. Department of Microbiology, University of Leicester 16 S (Spike Protein) M (Membrane Protein) E (Envelope Protein) HE (Haemagglutinin-esterase) S

3 - M (budding) E (N Nucleocapsid Protein) RNA(Genomic RNA) RNA 27-31kb RNA RNA RNA 5` (methylated cap) 3` PolyA mrna RNA 3 RNA RNA (Viral RNA

4 polymerase) RNA RNA RNA (sub-genomic RNA) mrna RNA mrna RNA (discontinuous transcription) transcription regulating sequences TSR RNA mrna RNA (assembly) 3. Department of Microbiology, University of Leicester SARS 3 22 (African Green Monkey Kidney

5 Cells, Vero E6) 3 WHO SARS 4-6,19 (Coronavirus) SARS 4 12 British Columbia Cancer Agency s Genome Sciences Centre SARS (Accession Number: AY274119) SARS 5 9 GeneBank SARS 11 1 NCBI Tor2 SARS (AC: NC_004718) AC / TOR2 AY bp Canada Urbani AY bp U.S BJ01 AY bp China HKU AY bp HongKong CUHK-W1 AY bp HongKong CUHK-Su10 AY bp HongKong isolate SIN2500 AY bp Singapore isolate SIN2677 AY bp Singapore isolate SIN2679 AY bp Singapore isolate SIN2748 AY bp Singapore isolate SIN2774 AY bp Singapore SARS USCCDC BCCA Urbani/Tor2/BJ01 SARS

6 SARS HE [HE(-)-Coronavirus] 5 RNA S E M N HE USCDC USCDC Urbani

7 5. BCCA Tor2 6. BJ (Open Reading Frame, ORF) (Predicted Unknown Protein, PUP) USCDC Urbani BJ01 5 PUP Tor2 9 ORF 1 s2m motif 4 26 Genebank NCBI 20 Tor2 ( 2)

8 Predicted Unknown ORF Start-End AA length Urbani Corresponding BJ01 Corresponding Orf3 25,268 26, X1 PUP1 Orf4 25,689 26, X2 PUP2 Orf7 27,074 27, X3 PUP3 Orf8 27,273 27, X4 PUP4 Orf9 27,638 27, N/A N/A Orf10 27,779 27, N/A N/A Orf11 27,864 28, X5 N/A Orf13 28,130 28, N/A PUP5 Orf14 28,583 28, N/A N/A 2. Tor2 / Urbani /BJ01 ORF 5 (UTR) ORF UCUAAAC TRS orf1a S X1( Tor2 ORF3 ) M X4 Tor2 ORF8X5( Tor2 ORF9) N 8 TRS AAACGAAC ORF TRS ( 3 ) ORF

9 3. SARS 3 s2m motif SARS 11 BJ01 7 palindromes 140 (hairpin) BJ / SARS CoV SARS (Phylogenetic) SARS SARS SARS SARS Coronavirus SARS 4 9 SARS S S SARS BJ01

10 5 S ( 7) 7. SARS (CMBI Modified, May 1,2003) BJ01/Urbani/Tor2/CUHK/HKU (substitution) % (non-synonymous substitution) (ORF) (nt) (%) RNA polymerase S protein M protein PUP PUP Non-ORF 1

11 BJ01/Urbani/Tor2/CUHK/HKU SARS RNA ORF SARS RNA RNA RNA SARS HIV SARS S (3/4) S T SARS SARS SARS SARS 13 BJ SARS SARS SARS (Phylogenetic)

12 3 Group Group1 2 Group3 (Avian infectious bronchitis virus, IBV) SARS SARS (USCDC) SARS CoV SARS CoV (Phylogenetic Analyses) Genebank 17 RNA 12 USCDC USCDC 11 SARS CoV Group 3 Group 4 SARS CoV S orf1a 24

13 8. USCDC SARS SARS SARS CoV

14 ORF 1. RNA SARS CoV RNA kb (putative protein) 27 ( 4400 ) ORF orf1a ,398 nt /orf1b(13,398 21,485 nt) ( SARS ) -1 (frame shift) ORF RNA (PLP pro ) 3CL pro 10 3CL pro SARS 28 Lübeck (Institute of Biochemistry, University of Lübeck) SARS (leader) -AG SARS

15 9. SARS 3CL pro AG S (Spike Protein) S (domain ) N, C,S Spike S1 S2 ( 10.) 10. S

16 S1 S2 N helix, M Helix, C Helix S1 S2 S2 S SARS S 1256 putative spike protein 29 GLOBE (globular domain) S S (, N 1) S, , , Helix S2 N/M/C helix SingalP N 1-13 SARS CoV S SARS S (CMBI) 3. N Nucleocapsid Protein N N Genomic RNA murine hepative

17 virus N RNA SARS N 423 SARS-CoV N Motif SARS N aa SRXX RNA SARS N RNA Motif N KKKKTDEAQPLPQRQKK / KTFPPTEPKKDKKKKTD) 12 N RNA N 12. N

18 4. M (Membrane Protein) E (Envelope Protein) M S SARS M , C 121 (Nucleocapsid) 11 SARS E 76 SingalP TMpred TMHMM C SARS ORF 11 SARS S S1 S1 S1 S2 S1 S2 S2 3 (N Helix, M Helix C Helix) S1 S2, PH,S1 S2 S1 S S Carcinoembryonic Antigen-Cell Adhesion Molecules(CEACAMs) (pleiotropic family), SARS virus CEACAMs SARS virus African Green Monkey Kidney (Vero E6) Cells 39 Vero E6 CEACAMs

19 CEACAM1-1L 13 N-terminal IgV-like domain SARS CoV S 13. CEACAMs (Ludwig MaximiliansUniversity) N-terminal IgV-like domain 3 ( carcinoembryonic antigen CEACAM7 transmembrane carcinoembryonic antigen BGPb) Caveolin / kda (caveolae) endocytosis 41 HCV 42 HIV 43 Caveolin Motif 44 DNAsis SARS 40 Caveolin SARS Caveolin Caveolin-1

20 Cavelin SARS SARS Caveolin Caveolin Rosuvastatin Filipin III Pulldown Caveolin SARS SARS SARS SARS 1. SARS SARS 5 putative uncharacterized protein 1~5 SARS-CoV SARS SARS 5

21 2. SARS N C 3. SARS SARS 5 (ALI, Acute Lung Injury) ( 14) Invasion & Replication Virus invasion Virus replication Relative novel structure proteins Five putative uncharacterized proteins Hyperactive Immune? super antigens? Excess immune reaction Endothelial damage Barrier disruption Alveolar collapse Lung Injury Acute lung injury 14. SARS CMBI 4. SARS SARS SARS-Cov

22 ( HCV) SARS (1) Virus binding and internalization (2) Cytoplasmic release and uncoating (3) Internal ribosomal entry site (IRES)-mediate d translation (4) Polyprotein processing (5) RNA replication (6) packaging and assembly (7) Virion maturation (8) Virion release. 15. SARS (CMBI Modified) 16 Virus invasion Immune Suppressor x Excess immune reaction Cell apoptosis Inflame factor release Cell death IL-1b TNF-a IL-6 IL-8 MCPs x Proteases inhibitor Inflame cells accumulated Excess release of proteases 16. (CMBI)

23 11 SARS SARS SARS SARS SARS ( ) 1. WHO WHO issues a global alert about cases of atypical pneumonia. March 12, WHO China joins WHO collaborative network. March 28, WHO SARS virus isolated, new diagnostic test producing reliable results. March 22, J S M Peiris, S T Lai, L L M Poon etc, Coronavirus as a possible cause of severe acute respiratory syndrome. Lancet, Published online April 8, Christian Drosten, Stephan Günther, Wolfgang Preiser etc,identification of a Novel Coronavirus in Patients with Severe Acute Respiratory Syndrome. NEJM, published at on April 10, Thomas G. Ksiazek, Dean Erdman, Cynthia Goldsmith etc,a Novel Coronavirus Associated with Severe Acute Respiratory Syndrome. NEJM, published at on April 10, British Columbia Cancer Agency s Genome Sciences Centre, SARS Coronavirus Genome WHO Coronavirus never before seen in humans is the cause of SARS. April.16,

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25 26. The Preliminary Analysis of SARS Coronavirus Proteins' Sequences II. Lei shi,ming Lu,Qipeng Zhang,Wei Rui. CMBI May 1, The Preliminary Analysis of SARS Coronavirus Proteins' Sequences III. Wei Rui, Qipeng Zhang, Lei Shi, Ming Lu. CMBI May 1, Tertiary Structure Prediction of SARS Coronavirus Proteins' Partial Sequence. Wei Rui, Qipeng Zhang, Lei Shi, Ming Lu. CMBI May 9, Preliminarily Analyze the structure and function of the putative spike protein of SARS virus. Lei shi,qipeng Zhang,Ming Lu,Wei Rui. CMBI May 1, Preliminary analyse of the structure and function of the putative nucleocapsid protein. Lei shi, Qipeng Zhang, Wei Rui, Ming Lu. CMBI May 4, Searching the possible binding site of the SARS N protein and SARS RNA. Lei shi, Qipeng Zhang, Wei Rui, Ming Lu. CMBI May 9, Nuclear targeting sequence in SARS virus nucleocapsid protein. Lei shi, Qipeng Zhang, Wei Rui, Ming Lu. CMBI May 9, Krueger DK, Kelly SM, Lewicki DN etc, Variations in disparate regions of the murine coronavirus spike protein impact the initiation of membrane fusion. J Virol 2001 Mar;75(6): Gallagher TM, Buchmeier MJ, Coronavirus spike proteins in viral entry and pathogenesis. Virology 2001 Jan 20;279(2): Nelson GW, Stohlman SA, Tahara SM, High affinity interaction between nucleocapsid protein and leader/intergenic sequence of mouse hepatitis virus RNA. J Gen Virol 2000 Jan;81(Pt 1): Chen H, Wurm T, Britton P, Brooks G etc, Interaction of the coronavirus nucleoprotein with nucleolar antigens and the host cell. J Virol 2002 May;76(10): Skubitz KM, Campbell KD, Skubitz AP. Synthetic peptides from the N-domains of CEACAMs activate neutrophils. J Pept Res Dec;58(6): Krueger DK, Kelly SM, Lewicki DN etc. Variations in Disparate Regions of the Murine Coronavirus Spike Protein Impact the Initiation of Membrane Fusion. J Virol Mar 15; 75(6): The Potential Proteins Which Induce SARS Virus Entering Host. Qipeng Zhang, Wei Rui, Lei Shi, Ming Lu. CMBI May 9, SARS Caveolin May 7, Razani B, Lisanti MP. Caveolins and caveolae: molecular and functional relationships. Exp Cell Res Nov 15;271(1):36-44

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270 2

270 2 270 ISSN 0255-6162 GPN 2006900031 270 92 6 20 161-2 0226531318 http://www.nlfd.gov.tw Severe Acute Respiratory Syndrome SARS 1 270 2 270 3 270 4 270 SARS Complete Genome Length (bp) GenBank Notation BCCA

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