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1 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 1 国 家 863 项 目 进 展 害 虫 抗 药 性 治 理 策 略 多 位 点 杀 虫 毒 素 的 研 究 刘 波 朱 育 菁 阮 传 清 林 抗 美 冒 乃 和 ( 福 建 省 农 科 院 生 物 技 术 中 心 农 业 环 保 技 术 研 究 室, 福 州 353) 摘 要 : 害 虫 对 杀 虫 剂 产 生 抗 药 性, 降 低 了 农 药 使 用 效 率, 增 大 了 农 药 用 量, 污 染 了 环 境 害 虫 抗 药 性 可 分 为 单 一 抗 性 多 重 抗 性 交 互 抗 性 害 虫 抗 药 性 由 遗 传 因 素 生 态 因 素 和 操 作 因 素 决 定, 三 种 因 素 作 用 不 当 都 能 引 起 害 虫 抗 性 的 发 生 农 药 有 效 成 分 作 用 于 害 虫 的 特 定 位 点, 害 虫 对 农 药 抗 药 性 就 是 克 服 农 药 位 点 作 用, 使 之 失 效 钝 化, 保 持 农 药 作 用 位 点 敏 感 性 是 减 缓 害 虫 抗 药 性 的 有 效 方 法 每 一 种 农 药 对 害 虫 都 有 一 个 主 要 作 用 位 点, 每 一 种 害 虫 都 存 在 多 个 农 药 作 用 位 点 多 位 点 杀 虫 毒 素 的 研 究 是 克 服 害 虫 抗 药 性 的 有 效 途 径 将 Bt 的 杀 虫 毒 素 进 行 酶 切 改 造, 形 成 带 末 端 氨 基 的 原 毒 素, 将 阿 维 菌 素 的 羟 基 进 行 激 活 衍 生 化, 形 成 带 羧 基 的 杀 虫 毒 素 衍 生 物, 最 后 利 用 氨 基 - 羧 基 偶 联 剂 (EDC) 进 行 藕 合, 实 现 两 种 生 物 毒 素 的 结 构 改 造 和 生 化 结 合 BtA 解 决 了 生 物 农 药 杀 虫 谱 窄 和 杀 虫 速 率 慢 的 弱 点 关 键 词 : 抗 药 性 多 位 点 杀 虫 毒 素 BtA Control strategy of insect pest resistance to insecticides --research on multiple toxins insecticide LIU Bo, ZHU Yujing, RUAN Chuanqing, LIN Kangmei (Laboratory of Agricultural Environment Protection, Biotechnology Center, FAAS, Fuzhou 353, China) Abstract: The present paper dealt with control strategy of insect pest resistance to insecticides: research on multiple toxins insecticide. The development and mechanism of pest resistance to insecticides were discussed. The multiple toxins insecticide was introduced to overcome pest resistances to insecticides. Conjugation of δ-endotoxin from Bacillus thuringiensis with abamectin produced by Streptomyces avermitilis was carried out to form a new type of biocide BtA based on "Germany-China Scientific Cooperation" research for control of agricultural insect pest. The strategy for biochemical linkage was designed as conjugating an amino group in B.t. protoxin with a carboxyl group in carboxylated abamectin under the treatment of conjugator EDC [1-Ethyl-3- (3-dime- thylaminopropyl carbodiimide Hydrochloride)]. The formation of B.t. protoxin was processed by solubilizing B.t. crystal in 25 mm dithiothreitol (DTT) at 37 C for 2 h. The carboxylated abamectin was formed by carboxylating the NaH-activated abamectin with 1 mg/ml butyric anhydride at 111 C in a water circumfluent condensation device for 2 h. The conjugating reaction system consisted of 5 mg/ml B.t. protoxin, 1 mg/ml carboxylated abamectin and mg/ml EDC was successfully conducted at room temperature for 24 h. The significant differences were found among the pure abamectin, the carboxylated abamectin and the conjugated BtA by means of UV-photo absorptions recorded in the characterized points of 354, 438, 518, 6 nm wavelength (P<.1). LT 5 of the conjugated BtA to the 3 rd instar larva of Plutella xylostella (L.) (Lep., Plutellidae) was ug a.i./ml, about 62 and 76% of that caused by the B.t. protoxin and the caxboxylated abamectin, respectively. The conjugated BtA caused 87.14% mortalities in larva P. xylostella, 93.75% in adult Myzus persicae (Sulzer) (Hom., Aphididae) and 89.33% in adult Phyllotreta vittata Fabricius (Col., Chrysomelidae) as compared to 48.33% by the B.t. crystal only in P. xylostella. The symptoms caused by conjugated BtA in the 3 rd instar P. xylostella were black color in the head part and white-yellow in the abdomen of dead larvae, which differed from the black color or the white-yellow all along the body caused by either the B.t. crystal or the abamectin, respectively. It was concluded that the conjugated BtA biocide had broader host spectrum and faster killing speed than B.t. crystal or abamectin functioned alone in control of the agricultural pests. Key word:pest resistance; Multiple-toxin biocide; BtA 作 者 简 介 : 刘 波 (1957-), 男, 研 究 员, 博 士, 从 事 生 物 技 术 生 物 防 治 网 络 测 报 昆 虫 生 理 生 态

2 2 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 1 害 虫 抗 药 性 的 产 生 农 作 物 生 长 过 程 受 到 许 多 害 虫 的 危 害, 农 药 的 使 用 仍 然 是 防 治 害 虫 的 重 要 手 段 [1] 在 害 虫 防 治 过 程, 致 死 浓 度 的 农 药 施 用, 使 95% 以 上 的 害 虫 得 到 控 制, 由 于 害 虫 个 体 差 异, 对 农 药 敏 感 的 害 虫 被 杀 死, 对 农 药 具 有 耐 受 能 力 的 害 虫 生 存 下 来, 产 生 了 对 农 药 的 适 应 性, 害 虫 对 农 药 的 适 应 性 导 致 害 虫 对 农 药 的 抗 药 性 农 药 的 施 用 相 当 于 人 为 地 对 害 虫 种 群 施 加 一 种 环 境 选 择 压 力, 不 断 地 选 择 那 些 抗 药 性 强 的 害 虫, 于 是 随 着 农 药 施 用 次 数 的 增 加 害 虫 对 农 药 的 抗 药 性 不 断 加 强 [2] 据 报 道, 小 菜 蛾 (Plutella xylostella ) 对 氯 氢 菊 酯 的 抗 性 达 1 倍 (Shelton et al 1996), 对 阿 维 菌 素 的 抗 性 达 4 倍 (Iqbal and Wright 1997), 美 国 康 乃 尔 大 学 学 者 用 Bt-Cry1C 转 基 因 花 菜 饲 养 小 菜 蛾,26 代 后 对 Bt-Cry1C 转 基 因 花 菜 的 抗 性 达 124 倍 [3] 2 害 虫 抗 药 性 的 发 展 198 年 有 428 种 节 肢 动 物 对 一 种 或 一 种 以 上 杀 虫 剂 或 杀 螨 剂 有 抗 药 性, 其 中 6% 以 上 与 农 业 活 动 密 切 相 关 在 农 作 物 的 植 物 病 原 体 中, 已 知 15 种 对 农 药 有 抗 药 性 估 计 有 5 种 杂 草 对 除 草 剂 有 抗 药 性 具 抗 药 性 的 428 种 节 肢 动 物 中, 仅 有 2 种 具 有 经 济 利 用 价 值, 因 而 节 肢 动 物 抗 药 性 不 仅 危 害 农 业 生 产, 而 且 影 响 生 态 平 衡 随 着 新 的 杀 虫 剂 使 用 量 不 断 增 加 和 使 用 范 围 不 断 扩 大, 越 来 越 多 的 害 虫 对 农 药 产 生 了 抗 药 性 1938 年 报 导 杀 虫 剂 抗 药 性 的 案 例 数 目 为 7 种, 1948 为 14 种,1956 为 69 种,197 为 224 种,1976 为 364 种,198 为 428 种,1984 为 447 种,7-8 年 代 害 虫 抗 药 性 增 长 最 快 [4] 以 上 数 据 说 明 了 在 世 界 范 围 内 害 虫 对 杀 虫 剂 产 生 抗 药 性 的 严 重 性 当 新 的 农 药, 特 别 是 杀 虫 剂 被 发 现 被 使 用, 害 虫 就 会 产 生 新 的 抗 药 性, 对 付 同 样 规 模 虫 害 就 必 须 增 大 农 药 用 量 对 于 不 同 农 药 而 言, 加 大 到 两 倍 用 量 才 能 达 到 原 效 果 所 需 时 间 不 同, 时 间 短 代 表 害 虫 产 生 抗 药 性 快 依 使 用 新 农 药 品 种 先 后 为 序, 示 出 必 须 加 大 两 倍 用 量 才 能 达 到 同 样 除 虫 效 果 所 需 时 间 ( 表 1) 表 中 数 据 说 明, 引 进 农 药 品 种 越 迟 此 时 间 越 短 [4] 害 虫 越 来 越 容 易 产 生 抗 药 性, 似 乎 它 们 的 抗 药 能 力 已 经 训 练 有 素 了 表 1 两 倍 用 量 达 同 样 效 果 所 需 时 间 杀 虫 剂 种 类 加 大 农 药 两 倍 用 量 平 均 所 须 时 间 ( 年 ) 滴 滴 涕 / 甲 氧 滴 滴 涕 6.3 林 丹 / 狄 氏 剂 5. 有 机 磷 4. 氨 基 甲 酸 酯 2.5 合 成 除 虫 菊 酯 2. [5] 3 害 虫 抗 药 性 的 类 型 害 虫 抗 药 性 可 分 为 单 一 抗 性 多 重 抗 性 交 互 抗 性 单 一 抗 性 指 害 虫 对 一 种 农 药 产 生 抗 性, 多 重 抗 性 指 害 虫 对 多 种 农 药 产 生 抗 性, 交 互 抗 性 指 害 虫 因 对 某 农 药 产 生 抗 性 而 增 强 对 另 一 种 农 药 的 抗 性 如 害 虫 对 滴 滴 涕 和 拟 除 虫 菊 酯 产 生 抗 药 性, 所 以 曾 估 计 到 对 广 泛 使 用 滴 滴 涕 所 产 生 的 抗 药 性, 同 样 也 能 使 后 来 合 成 的 拟 除 虫 菊 酯 失 效, 这 是 因 为 许 多 害 虫 存 在 着 抗 性 基 因, 对 各 类 农 药 的 抗 性 表 达 趋 同, 使 害 虫 对 一 类 或 几 类 农 药 的 交 叉 和 多 重 抗 药 性 现 象 越 来 越 多, 降 低 了 农 药 使 用 效 率 [5] 4 害 虫 抗 药 性 的 机 理 害 虫 抗 药 性 由 遗 传 因 素 生 态 因 素 和 操 作 因 素 决 定 遗 传 因 素 对 害 虫 抗 药 性 的 作 用 表 现 为 代 谢 抗 性 和 靶 标 抗 性, 前 者 作 用 于 酯 酶 谷 胱 甘 肽 S- 转 移 酶 P45 基 因 等, 后 者 作 用 于 乙 酰 胆 碱 酯 酶 钠 通 道 γ- 氨 基 丁 酸 受 体 氯 离 子 通 道 等 生 态 因 素 对 害 虫 抗 药 性 的 作 用 表 现 为 害 虫 时 空 种 群 异 质 性, 包 括 生 态 抵 抗 力 生 态 嗜 好 性 生 态 迁 移 力 等 操 作 因 素 对 害 虫 抗 药 性 的 作 用 表 现 为 农 药 的 施 用 方 法 施 用 浓 度 施 用 频 次 施 用 品 种 等 三 种 因 素 作 用 不 当 都 能 引 起 害 虫 抗 性 的 发 生 5 害 虫 抗 药 性 的 位 点 农 药 对 害 虫 的 作 用 可 分 为 胃 毒 触 杀 内 吸 熏 蒸 等 类 型, 无 论 那 种 类 型, 都 是 农 药 的 有 效 成 分 作 用 于 害 虫 的 特 定 位 点, 如 Bt 的 伴 胞 晶 体 作 用 于 害 虫 中 肠 上 皮 细 胞 进 而 达 到 杀 虫 效 果 阿 维 菌 素 是 十 六 员 环 内 酯 衍 生 物, 通 过 抑 制 Y 氨 基 丁 酸 (GABA) 受 体, 从 而 使 神 经 传 导 受 阻 来 达 到 的 杀 虫 效 果 害 虫 对 农 药 抗 药 性 就 是 克 服 农 药 位 点 作 用, 使 之 失 效 钝 化 [2] 6 害 虫 抗 药 性 的 克 服 害 虫 抗 药 性 的 克 服 实 质 上 是 使 农 药 作 用 位 点 保 持 足 够 的 敏 感 性, 在 应 用 上, 农 药 轮 换 施 用 农 药 混 配 施 用 增 加 农 药 对 害 虫 的 接 触 面 积 培 育 害 虫 的 敏 感 品 系 增 加 生 态 多 样 性 以 增 加 害 虫 的 多 样 性 等 等, 都 是 保 持 农 药 作 用 位 点 敏 感 性, 减 缓 害 虫 抗 药 性 的 有 效 方 法 [2] 7 多 位 点 杀 虫 毒 素 的 研 究 每 一 种 农 药 对 害 虫 都 有 一 个 主 要 作 用 位 点, 每 一 种 害 虫 都 存 在 多 个 农 药 作 用 位 点 目 前 农 药 大 多 数 为 单 剂, 即 单 一 的 作 用 位 点, 害 虫 在 生 长 过 程 对 单 一 作 用 位 点 的 克 服 比 多 个 作 用 位 点 容 易 理 论 上 讲, 如 果 害 虫 对 单 一 农 药 ( 一 个 位 点 ) 抗 性 产 生 的 时 间 为 5 年, 那 么 害 虫 对 两 个 作 用 位 点 的 复 合 农 药 抗 性 产 生 时 间 为 25 年 农 药 复 合 对 于 延 缓 害 虫 的 抗 药 性 具 有 重 要 意 义 两 个 以 上 作 用 位 点 的 农 药 称 之 为 多 位 点 杀 虫 毒 素, 多 位 点 杀 虫 毒 素 的 研 究 是 克 服 害 虫 抗 药 性 的 有 效 途 径 形 成 多 位 点 杀 虫 毒 素 方 法 有 化 合 藕 合 混 合 [2] 化 合 是 指 两 种 物 质 生 成 一 种 物 质 的 过 程, 产 生 了 不 同 于 参 与 物 的 新 物 质 特 性, 使 得 作 用 位 点 发 生 变 化, 如 对 N- 甲 基 氨 基 甲 酸 酯 的 高 效 高 毒 化 合 物 的 N 原 子 上 引 入 含 硫 基 团, 产 生 丁 硫 克 百 威 等, 结 果 既 保 留 了 母 体 化 合 物 对 害 虫 高 效 的 特 点, 又 降 低 了 对 哺 乳 动 物 的 毒 性 藕 合 是 两 种 物 质 通 过 介 质 结 合, 生 成 一 种 新 的 物 质 联 合 体 的 过 程, 同 时 保 持 着 参 与 物 各 自 固 有 的 特 性, 产 生 多 个 作 用 位 点 藕 合 技 术 包 括 了 物 理 藕 合 (physical conjugation) 和 化 学 藕 合 (chemical conjugation), 利 用 物 理 介 质 ( 如 轻 质 碳 酸

3 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 3 钙 ) 带 电 荷 等 物 理 特 性 吸 附 毒 素, 定 义 为 物 理 藕 合 (Kostarelos et al 1999), 作 者 用 该 技 术 设 计 的 物 理 藕 合 装 置 获 国 家 专 利 (ZL ), 研 究 的 产 品 多 位 点 物 理 藕 合 生 物 杀 虫 剂 申 请 国 家 专 利, 实 审 公 开 号 为 CN A 以 化 学 介 质 ( 如 偶 联 剂 EDC) 将 毒 素 连 接, 定 义 为 化 学 藕 合 Hermanson 1996), 作 者 对 化 学 藕 合 技 术 申 报 了 国 家 专 利, 在 国 际 学 报 上 已 发 表 论 文 5 篇 利 用 藕 合 技 术 进 行 Bt 和 Abmectin 的 藕 合, 能 极 大 地 提 高 杀 虫 效 果 [6-12] 混 合 是 化 学 性 质 相 似 物 理 性 质 相 近 的 两 种 物 质 的 简 单 复 合, 不 改 变 参 与 物 的 理 化 性 质, 提 供 多 个 作 用 位 点, 提 高 杀 虫 效 果, 如 大 多 数 农 药 的 复 配 混 合 与 物 理 藕 合 的 差 异 在 于, 前 者 要 求 参 与 物 的 化 学 性 质 相 似 和 物 理 性 质 相 近, 后 者 仅 利 用 参 与 物 的 物 理 电 荷 特 性, 不 要 求 剂 型 相 同,pH 相 似 等 特 性 [13-22] 8 多 位 点 杀 虫 毒 素 BtA 的 研 究 8.1 多 位 点 杀 虫 毒 素 BtA 藕 合 原 理 多 位 点 生 物 杀 虫 剂 BtA 的 研 究 基 于 多 位 点 杀 虫 毒 素 的 理 论, 将 Bt 的 杀 虫 毒 素 进 行 酶 切 改 造, 形 成 带 末 端 氨 基 的 原 毒 素, 将 阿 维 菌 素 上 的 羟 基 进 行 激 活 衍 生 化, 形 成 带 羧 基 的 杀 虫 毒 素 衍 生 物, 最 后 利 用 氨 基 - 羧 基 偶 联 剂 (EDC) 进 行 藕 合 (conjugation), 实 现 两 种 生 物 毒 素 的 结 构 改 造 和 生 化 结 合 ( 图 1) 解 决 了 生 物 农 药 杀 虫 谱 窄 和 杀 虫 速 率 慢 的 弱 点 从 BtA 杀 死 的 小 菜 蛾 死 亡 症 状 上 看, 伴 胞 晶 体 和 原 毒 素 使 小 菜 蛾 的 死 亡 症 状 表 现 为 黑 色, 阿 维 菌 素 和 阿 维 菌 素 衍 生 物 使 小 菜 蛾 的 死 亡 症 状 表 现 为 黄 色,BtA 化 学 藕 合 物 使 小 菜 蛾 的 死 亡 症 状 表 现 为 头 部 黑 色, 腹 部 黄 色 ( 图 2) 8.2 多 位 点 杀 虫 毒 素 BtA 藕 合 检 测 B.t. 伴 胞 晶 体 的 降 解 物 - 原 毒 素, 在 28 nm 波 长 处 有 一 吸 收 峰 ( 图 3-A) 这 一 毒 素 作 为 BtA 藕 合 的 毒 蛋 白 材 料 阿 维 菌 素 在 245nm 波 长 处 有 一 吸 收 峰, 为 其 特 征 峰 ( 图 3-B) 阿 维 菌 素 加 入 NaH 激 活 后, 在 354-6nm 波 长 范 围 内 出 现 吸 收 峰 激 活 后 的 阿 维 菌 素 进 一 步 加 入 丁 二 酸 酐 进 行 衍 生 化 反 应 形 成 的 阿 维 菌 素 衍 生 物, 在 nm 波 长 范 围 内 有 较 大 的 变 化 ( 图 3-C) 在 阿 维 菌 素 激 活 和 衍 生 化 反 应 过 程 中, 阿 维 菌 素 的 特 征 峰 基 本 保 持 不 变, 保 证 了 阿 维 菌 素 的 生 物 活 性 将 伴 胞 晶 体 处 理 后 的 原 毒 素 阿 维 菌 素 衍 生 物 和 碳 化 二 亚 胺 类 偶 联 剂 EDC 进 行 藕 合 反 应, 生 成 BtA 藕 合 物, 在 nm 波 长 之 间, 吸 收 峰 发 生 了 较 大 的 变 化, 阿 维 菌 素 的 特 征 峰 基 本 不 变, 形 成 了 左 边 为 阿 维 菌 素 特 征 峰, 右 边 为 原 毒 素 藕 合 峰 的 BtA 藕 合 物 的 波 形 特 征 ( 图 3-D) 液 相 色 谱 检 测 表 明, 原 毒 素 靠 左,BtA 居 中, 阿 维 菌 素 靠 右 ( 图 4) 8.3 提 高 杀 虫 速 率 伴 胞 晶 体 生 测 达 到 1% 死 亡 率 的 时 间 为 48 小 时, 当 降 解 成 原 毒 素, 较 伴 胞 晶 体 缩 短 了 12 小 时 用 未 经 处 理 的 阿 维 菌 素 生 测 达 到 1% 死 亡 率 的 时 间 为 39 小 时, 经 激 活 和 衍 生 化 后 阿 维 菌 素 衍 生 物, 死 亡 时 间 较 阿 维 菌 素 缩 短 了 9 小 时 BtA 化 学 藕 合 物 生 测 达 到 1% 死 亡 率 的 时 间 为 24 小 时, 较 伴 胞 晶 体 缩 短 24 小 时, 较 阿 维 菌 素 缩 短 15 小 时 BtA 化 学 藕 合 物 比 伴 胞 晶 体 原 毒 素 阿 维 菌 素 阿 维 菌 素 衍 生 物 的 杀 虫 速 度 皆 提 高 6-24 小 时 ( 表 2) 8.4 扩 大 杀 虫 谱 试 验 结 果 表 明 :Bt 的 杀 虫 谱 仅 为 鳞 翅 目 害 虫, 阿 维 菌 素 和 BtA 可 以 防 治 鳞 翅 目 同 翅 目 鞘 翅 目 害 虫, 但 是 BtA 的 杀 虫 速 率 高 于 阿 维 菌 素 ( 表 3) 8.5 降 低 对 天 敌 的 毒 性 试 验 结 果 表 明 :BtA 对 小 菜 蛾 具 有 较 高 的 毒 力, 对 其 捕 食 性 天 敌 捕 食 螨 草 间 小 黑 蛛 花 蝽 七 星 瓢 虫 毒 力 较 低 : 对 照 农 药 对 小 菜 蛾 毒 力 低, 对 其 捕 食 性 天 敌 捕 食 螨 草 间 小 黑 蛛 花 蝽 七 星 瓢 虫 毒 力 较 高 ( 表 4) 图 1 BtA 藕 合 (Conjugation) 策 略 图 2 小 菜 蛾 死 亡 症 状 比 较

4 4 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 原 毒 素 阿 维 菌 素 12 1 VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA37\BTA.D) 原 毒 素 BtA 阿 维 菌 素 A- 衍 生 物 BtA mi 图 3 紫 外 分 光 检 测 图 4 液 相 色 谱 检 测 表 2 BtA 化 学 藕 合 过 程 阶 段 产 物 的 生 物 测 定 阶 段 产 物 有 效 成 分 浓 度 (mg/l) 供 试 虫 数 (n) 校 正 死 亡 率 (%) 死 亡 时 间 (h) 伴 胞 晶 体 A 原 毒 素 B 阿 维 菌 素 C 阿 维 菌 素 衍 生 物 D BtA 化 学 藕 合 物 5( 阿 维 菌 素 ) 1( 原 毒 素 ) E 清 水 对 照 9. - 表 3 伴 胞 晶 体 (Bt) 阿 维 菌 素 BtA 对 小 菜 蛾 (Plutella xylostella) 桃 蚜 (Myzus persicae) 跳 甲 (Phyllotreta vittata) 毒 力 测 定 供 试 物 浓 度 (ug a.i. Plutella xylostella Myzus persicae Phyllotreta vittata /ml) n 死 亡 率 (%) n 死 亡 率 (%) n 死 亡 率 (%) 伴 胞 晶 体 (Bt-crystal) ±4.23 a ±. a ±. a 阿 维 菌 素 (Abamectin) ±6.18 b ±6.26b ±6.28 b BtA 藕 合 物 ±8.64 c ±7.94c ±9.36 c 对 照 ( 清 水 ) ±. d ±.a ±. a 处 理 BtA 阿 维 菌 素 联 苯 菊 酯 敌 敌 畏 巴 单 氯 氢 菊 酯 清 水 对 照 表 4 BtA 和 市 售 农 药 对 小 菜 蛾 (Plutella xylostella) 及 其 捕 食 性 天 敌 毒 力 测 定 死 亡 率 (%) 小 菜 蛾 捕 食 螨, 草 间 小 黑 蛛 花 蝽 七 星 瓢 虫 ± 2.3 a ± 1.82 a ±.89 a ± 1.12 a 6. ± 1.22 a 78. ± 1.67 b ± 4.31 b ± 4.43 b 22. ± 3.71 b ± 1.96 b ± 3.54 b ± 2.9 c 55.1 ± 3.11 c 16. ± 1.97 c ± 1.29 c 5.68 ± 1.98 c 7. ± 4.21 b 6. ± 2.35 d ± 3.12 d 28. ± 2.5 d ± 4.75 d ± 3.18 c 46. ± 2.7 b ± 2.27 b ± 1.27 b ± 3.34 e ± 5.37 d ± 5.82 e 81.3 ± 4.35 e ± 4.13 e 参 考 文 献 1 刘 波, 冒 乃 和. 德 国 农 药 审 批 制 度 与 农 药 危 害 的 风 险 防 范 [J]. 世 界 农 药.23,25(2): 刘 波, 苑 宝 玲,C.SENGONGCA. 高 效 生 物 杀 虫 剂 藕 合 技 术 的 研 究 [J]. 中 国 生 物 防 治.2,12( 增 刊 ): 赵 等. 害 虫 的 抗 药 性 [J]. 农 药 市 场 信 息.22,(19):3 4 张 国 洲. 害 虫 抗 药 性 及 其 治 理. 安 徽 农 业 科 学.22,3(4) : 唐 振 华, 吴 士 雄. 昆 虫 抗 药 性 的 遗 传 与 进 化 [M]. 上 海 : 上 海 科 学 技 术 出 版 社,2 年 6 SENGONCA, C.; LIU, B., 22. Effects of BtA biocide on population dynamics of cabbage pests and their natural enemies from fields in southeastern China. J. Pest Science 75, LIU, B.; SENGONCA, C., 22. Investigations on side-effects of the mixed biocide BtA on different predators of Plutella xylostella (L.)(Lep., Plutellidae) in southeast China. J. Pest Science 75, LIU, B.; SENGONCA, C., 23a. Conjugation of δ-endotoxin from Bacillus thuringiensis with abamectin of Streptomyces avermitilis as a new type of biocide BtA in control of agricultural insect pests. J. Pest Science, 23,76(2): SENGONCA,C; LIU, B.,21.Influence of biocide BtA on the pupa and adult stages of Apanteles plutellae Kurd (Hym.,Braconidae) and its host,plutella xylostella(l.)(lep., Plutellidae).J. Pest Science, 74, SENGONCA, C.; LIU, B.; ZHU, Y. J., 21. Efficiency of the biocide BtA against vegetable pests of different arthropod orders in the south-eastern China. J. Pest Science, 74, Liu, B.; Sengongca, C.;Ge, C. B., 2a. Study on carbohydrate utilization of the strain LSZ948, Bacillus thuringiensis during fermentation. Chinese journal of biological control, 16 (suppl.), SENGONCA, C.; LIU, B., 23. Effects of BtA biocide on arthropod species abundance and diversity in the cabbage fields in the southeastern China. J. Fujian Agri. Sci., 23,18(2): LIU, B.;SENGONCA, C.; LIN, Y. Z.; LIN, G. X., 2b. Designation of computer-controlled fermentation system of Bacillus thuringiensis. Chinese journal of biological control, 16 (suppl.), (in Chinese) 14 LIU, B.; SENGONCA, C.; PENG, X. T., 2c. Effect of temperatures on the development of the diamondback moth, Plutella xylostella (L.). Chinese journal of biological control, 16 (suppl.), (in Chinese) 15 LIU, B.; SENGONGCA, C.; ZHU, Y. J.; LIN, G. X., 2d. Study on the strain LSZ948, Bacillus thuringiensis kustarki. Chinese journal of biological control, 16 (suppl.), 1-5. (in Chinese) ( 下 转 61 页 )

5 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 5 [ 试 验 简 报 ] 利 用 HPLC 测 定 不 同 保 存 时 间 对 Bt 晶 体 原 毒 素 分 解 的 影 响 朱 育 菁 刘 波 ( 福 建 省 农 科 院 生 物 技 术 中 心 农 业 环 保 技 术 研 究 室 ) 1 引 言 在 前 面 的 试 验 中 发 现, 利 用 高 效 液 相 色 谱 (HPLC) 检 测 24h 内 不 同 保 存 时 间 的 二 硫 苏 糖 醇 (DTT) 和 用 DTT 降 解 的 Bt 伴 胞 晶 体 原 毒 素, 其 检 测 结 果 会 有 很 大 的 变 化, 这 可 能 是 由 于 DTT 是 一 个 强 还 原 剂, 其 -SH 基 在 室 温 下 极 为 活 泼, SH 基 极 易 氧 化 重 新 生 成 -S-S- 键 它 在 与 晶 体 蛋 白 反 应 中, 二 硫 苏 糖 醇 形 成 一 个 含 分 子 内 二 硫 键 的 稳 定 六 元 环, 因 此 平 衡 向 右 方 移 动 但 还 原 蛋 白 不 稳 定,SH 基 也 极 易 氧 化 重 新 生 成 -S-S- 键 二 硫 苏 糖 醇 半 胱 氨 酸 残 基 本 研 究 的 目 的 是 利 用 高 压 液 相 色 谱 测 定 12h 内 不 同 保 存 时 间 的 原 毒 素 和 DTT, 在 其 反 应 稳 定 后, 确 定 原 毒 素 反 应 体 系 中 的 原 毒 素 和 DTT 的 单 组 分 色 谱 图 2 材 料 与 方 法 Bt 菌 株 LSZ948 伴 胞 晶 体, 纯 度 95% 以 上 DTT 为 北 京 华 美 生 物 工 程 公 司 的 进 品 分 装 乙 腈 为 上 海 化 学 试 剂 研 究 所 生 产 的 色 谱 纯 高 效 液 相 色 谱 为 HP11, 色 谱 柱 为 C18 (4.mmX25mm, 内 径 5um) 色 谱 分 析 条 件 : 温 度 为 室 温, 流 动 相 A 为 加 纯 水,B 为 乙 腈 流 速 为 1.ml/min, 进 样 量 1ul 梯 度 条 件 为 2-8% 乙 腈 2min 内 检 测 波 长 为 254nm 取 1ml 浓 度 为 2mg/ml 的 晶 体, 加 入 4ml 含 1mmol/ml DTT 的.1mmol/L NaCO3-HCl(pH9.5) 缓 冲 液, 37 水 浴 1h 后,.2um 注 射 过 滤 器 过 滤, 取 上 清 液 作 为 样 品 以 含 1mmol/ml DTT 的.1mmol/L NaCO3-HCl(pH9.5) 缓 冲 液 晶 体 + 缓 冲 液 的 离 心 上 清 液 和 缓 冲 液 为 对 照, 分 别 于 反 应 后 h 进 行 测 定 3 结 果 与 分 析 试 验 结 果 见 表 1, 图 1- 图 18 在 水 浴 结 束 时 立 即 进 行 测 定 结 果 表 明,DTT 和 原 毒 素 都 出 现 4 个 峰,NaCO3-HCl 缓 冲 液 有 2 个 峰, 晶 体 + 缓 冲 液 的 离 心 上 清 液 有 3 个 峰, 可 见 晶 体 在 ph9.5 的 NaCO3-HCl 缓 冲 液 有 很 小 的 降 解 或 是 晶 体 在 保 存 中 自 身 有 轻 微 的 降 解, 而 用 DTT 可 引 起 晶 体 的 降 解 ( 图 7- 图 18) 原 毒 素 与 DTT 有 同 样 的 色 谱 峰, 这 可 能 是 由 于 经 过 1h 的 37 的 水 浴,DTT 尚 未 起 降 解 作 用, 其 色 谱 峰 应 是 DTT, 在 4 个 色 谱 峰 中 以 峰 II 最 高, 峰 III 次 之, 峰 I 和 峰 IV 应 是 缓 冲 液 的 色 谱 峰 在 24h 以 后 的 检 测 结 果 表 明,DTT 和 原 毒 素 的 4 个 色 谱 峰 的 保 留 时 间 都 缩 短 了 2-3min, 说 明 物 质 的 极 性 增 加 二 者 的 峰 II 的 高 度 开 始 下 降, 峰 III 的 高 度 开 始 上 升 DTT 在 48h 以 后 峰 III 成 为 最 高 峰, h 峰 III 趋 于 稳 定, 表 明 其 物 质 已 稳 定 原 毒 素 峰 III 的 峰 高 随 着 时 间 的 延 长 不 断 地 升 高, 呈 线 性 正 相 关, 方 程 为 y = x ,R 2 =.9973 表 1 不 同 保 留 时 间 原 毒 素 的 检 测 结 果 样 品 h 峰 号 保 留 时 间 面 积 高 度 DTT DTT 收 稿 日 期 : 作 者 简 介 : 朱 育 菁 (1972-), 女, 德 国 波 恩 大 学 博 士 生, 副 研 究 员

6 6 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) DTT 48 DTT 72 DTT 96 原 毒 素 原 毒 素 24 原 毒 素 48 原 毒 素 72 原 毒 素 96 Na2CO3 缓 冲 液 晶 体 + 缓 冲 液 上 清 液 h 峰 I 峰 II 峰 III 峰 IV h 峰 I 峰 II 峰 III 峰 IV 图 1 不 同 保 存 时 间 的 DTT 四 个 色 谱 峰 峰 高 的 变 化 图 2 不 同 保 存 时 间 的 原 毒 素 四 个 色 谱 峰 峰 高 的 变 化 h DTT 原 毒 素 h DTT 原 毒 素 图 3 DTT 和 原 毒 素 色 谱 峰 I 的 比 较 图 4 DTT 和 原 毒 素 色 谱 峰 II 的 比 较

7 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) h DTT 原 毒 素 h DTT 原 毒 素 图 5 DTT 和 原 毒 素 色 谱 峰 III 的 比 较 图 6 DTT 和 原 毒 素 色 谱 峰 IV 的 比 较 VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA225\BTA6.D) VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA225\BTA4.D) mi mi 图 7 DTT h 图 8 原 毒 素 h VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA226\BTA1.D) VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA226\BTA2.D) mi mi 图 9 DTT 24h 图 1 原 毒 素 24h VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA227\BTA4.D) VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA227\BTA1.D) mi 图 11 DTT 48h 图 12 原 毒 素 48h VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA227\BTA3.D) VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA228\BTA.D) mi mi mi 图 13 DTT 72h 图 14 原 毒 素 72h

8 8 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA31\BTA.D) VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA31\BTA1.D) m m 图 15 DTT 96h 图 16 原 毒 素 96h VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA225\BTA3.D) VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA225\BTA2.D) mi mi 图 17 Na2CO3 缓 冲 液 图 18 晶 体 + 缓 冲 液 的 上 清 液 4 小 结 与 讨 论 4.1 二 硫 苏 糖 醇 带 有 2 个 活 泼 的 -SH( 图 19), 在 室 温 下 可 以 生 成 -S-S- 键 ( 图 2), 在 Na 2CO3 缓 冲 液 中 可 与 Na2CO3 反 应, 生 成 二 硫 苏 糖 钠 和 H2CO3, 因 此 24h 后 DTT 的 色 谱 峰 的 保 留 时 间 都 缩 短, 表 明 物 质 已 全 部 发 生 变 化, 极 性 变 大, 并 且 峰 IV 的 高 度 在 上 升, 表 明 其 峰 II 可 能 是 图 2 的 物 质, 峰 III 是 图 21 的 物 质, 峰 IV 是 H2CO3 峰 III 和 峰 IV 高 度 上 升 是 由 于 DTT 与 Na2CO3 在 不 断 反 应 的 结 果 Na S Na 图 19 图 2 图 二 硫 苏 糖 醇 作 为 蛋 白 还 原 剂, 首 先 与 蛋 白 质 -S-S- 形 成 中 间 物, 反 应 终 了, 还 原 剂 被 氧 化 形 成 一 个 稳 定 的 六 环 化 合 物, 蛋 白 质 则 被 还 原 反 应 中, 二 硫 苏 糖 醇 形 成 一 个 含 分 子 内 二 硫 键 的 稳 定 六 元 环, 因 此 平 衡 向 右 方 移 动 但 还 原 蛋 白 不 稳 定,SH 基 极 易 氧 化 重 新 生 成 -S-S- 键 随 着 保 存 时 间 的 延 长, 峰 II 的 高 度 趋 于 稳 定, 峰 III 不 断 持 续 上 升, 峰 II 可 能 是 二 硫 苏 糖 醇 形 成 一 个 含 分 子 内 二 硫 键 的 稳 定 六 元 环, 峰 II 是 原 毒 素 5 参 考 文 献 ( 略 )

9 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 9 [ 试 验 简 报 ] 利 用 HPLC 检 测 多 位 点 生 物 杀 虫 毒 素 BtA 化 学 耦 合 过 程 朱 育 菁 刘 波 ( 福 建 省 农 科 院 生 物 技 术 中 心 农 业 环 保 技 术 研 究 室 ) 1 引 言 多 位 点 生 物 杀 虫 毒 素 BtA 的 化 学 藕 合 一 方 面 是 将 苏 云 金 芽 孢 杆 菌 (B.t.) 的 伴 胞 晶 体 用 DTT 进 行 降 解 改 造, 形 成 带 末 端 氨 基 的 原 毒 素, 另 一 方 面 将 放 线 菌 阿 维 菌 素 进 行 激 活 衍 生 化, 形 成 带 羧 基 的 阿 维 菌 素 衍 生 物, 最 后 利 用 氨 基 - 羧 基 偶 联 剂 EDC 行 藕 合, 实 现 单 体 双 生 物 毒 素 BtA 的 结 构 改 造 高 效 生 物 杀 虫 剂 BtA 的 研 究 成 功, 使 得 B.t. 杀 虫 谱 扩 大 为 五 个 目 ( 鳞 翅 目 同 翅 目 双 翅 目 鞘 翅 目 和 螨 类 ), 杀 虫 速 率 大 为 提 高, 保 持 了 无 公 害 的 特 性, 对 于 农 业 环 保 具 有 重 要 意 义 与 混 合 不 同 的 是, 在 BtA 的 化 学 藕 合 过 程, 不 仅 仅 是 将 两 种 物 质 B.t. 原 毒 素 和 阿 维 菌 素 简 单 地 混 合 在 一 起, 而 是 通 过 偶 联 剂 的 作 用 生 成 新 的 物 质 在 前 面 的 研 究 中, 已 利 用 紫 外 分 光 光 度 计 将 藕 合 过 程 的 产 物, 如 原 毒 素 阿 维 菌 素 阿 维 菌 素 钠 阿 维 菌 素 衍 生 物 BtA 化 学 藕 合 物 进 行 光 谱 分 析, 证 实 了 BtA 化 学 藕 合 过 程 的 物 质 特 性 发 生 了 变 化 光 谱 分 析 结 果 表 明 B.t. 伴 胞 晶 体 的 降 解 物 - 原 毒 素, 通 过 SDS- PAGE 电 泳 分 析, 原 毒 素 的 分 子 量 为 74KD, 在 28 nm 波 长 处 有 一 吸 收 峰 ( 图 1A) 阿 维 菌 素 在 245nm 波 长 处 有 一 吸 收 峰, 为 之 特 征 峰 ( 图 1B) 阿 维 菌 素 加 入 NaH 激 活 后, 在 354-6nm 波 长 范 围 内 出 现 吸 收 峰 激 活 后 的 阿 维 菌 素 进 一 步 加 入 丁 二 酸 酐 进 行 衍 生 化 反 应 形 成 的 阿 维 菌 素 衍 生 物 (Abamectin-COONa), 在 nm 波 长 范 围 内 有 较 大 的 变 化 ( 图 1C) 然 而, 阿 维 菌 素 激 活 和 衍 生 化 反 过 成, 阿 维 菌 素 的 特 征 峰 基 本 保 持 不 变, 以 保 证 阿 维 菌 素 的 生 物 活 性 将 伴 胞 晶 体 处 理 后 的 原 毒 素 阿 维 菌 素 衍 生 物 和 碳 化 二 亚 胺 类 偶 联 剂 EDC 进 行 藕 合 反 应, 生 成 BtA 藕 合 物, 在 nm 波 长 之 间, 吸 收 峰 发 生 了 较 大 的 变 化, 阿 维 菌 素 的 特 征 峰 基 本 不 变, 形 成 了 左 边 为 阿 维 菌 素 特 征 峰, 右 边 为 原 毒 素 藕 合 峰 的 BtA 藕 合 物 的 波 形 特 征 ( 图 1D) A. 原 毒 素 紫 外 分 光 扫 描 B 阿 维 菌 素 紫 外 分 光 扫 描 C. 阿 维 菌 素 衍 生 物 紫 外 分 光 扫 描 D BtA 藕 合 物 紫 外 分 光 扫 描 高 效 液 相 色 谱 (HPLC) 是 重 要 的 现 代 分 析 手 段 之 一, 它 学 中 的 多 肽 蛋 白 质 及 核 酸 等 生 物 大 分 子 的 分 离 分 析 及 制 备 具 有 分 离 效 率 高 分 析 速 度 快 和 应 用 范 围 广 的 特 点, 在 分 析 提 纯 用 高 效 液 相 色 谱 法 (HPLC) 来 分 析 蛋 白 质 是 一 种 近 年 来 化 学 中 一 直 占 据 着 极 其 重 要 的 地 位 在 生 物 有 机 无 机 化 发 展 较 快 新 型 分 析 方 法 BIETZ: 在 年 就 第 一 次 学 等 众 多 领 域 中, 都 发 挥 着 重 大 的 作 用 作 为 当 今 一 种 较 为 对 用 反 相 (RP) 和 尺 寸 排 阻 (SE) 高 效 液 相 色 谱 法 来 分 离 小 麦 先 进 的 分 离 手 段, 它 能 将 复 杂 的 混 合 物 通 过 色 谱 柱 分 离 为 相 蛋 白 质 和 玉 米 蛋 白 质 的 实 验 进 行 报 导 : 由 于 高 效 液 相 色 谱 柱 对 单 一 的 纯 组 份, 并 可 根 据 需 要 对 纯 品 进 行 定 性 定 量 分 析 的 改 进 和 HPLC 技 术 的 迅 速 发 展,HPLC 法 在 蛋 白 质 分 析 研 究 和 制 备, 尤 其 适 用 于 目 前 最 活 跃 的 研 究 领 域 之 一 生 命 科 中 越 趋 成 熟 HPLC 分 析 蛋 白 质 不 仅 简 便 快 捷, 而 互 选 择 性 好, 分 离 效 率 高, 检 测 灵 敏 度 高 ; 根 据 分 离 机 理, 蛋 白 质 的 收 稿 日 期 : HPLC 可 以 分 成 尺 寸 排 阻 色 谱 (SEC) 反 相 高 效 液 相 色 谱 作 者 简 介 : 朱 育 菁 (1972-), 女, 德 国 波 恩 大 学 博 士 生, 副 研 究 员 (RP-HPLC) 和 凝 胶 渗 透 色 谱 (GPC) 三 大 类 其 中, 反 相 液 相 色

10 1 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 谱 (RP-HPLC) 一 般 使 用 弱 极 性 DS 固 定 相 和 极 性 比 DS 固 定 相 要 强 的 流 动 相, 是 应 用 最 广 泛 的 液 相 色 谱 法, 用 于 有 机 化 合 物 的 分 离, 在 食 品 医 药 生 物 分 析 中 扮 演 着 重 要 角 色 本 研 究 的 目 的 是 利 用 反 相 液 相 色 谱 来 检 测 多 位 点 生 物 杀 虫 毒 素 BtA 化 学 藕 合 过 程 的 物 质 变 化, 进 行 定 性 分 析, 进 一 步 证 实 藕 合 反 应 中 新 物 质 的 产 生 2 材 料 与 方 法 Bt 菌 株 LSZ948 伴 胞 晶 体, 纯 度 95% 以 上 DTT 为 北 京 华 美 生 物 工 程 公 司 的 进 品 分 装 乙 腈 为 上 海 化 学 试 剂 研 究 所 生 产 的 色 谱 纯 三 氟 乙 酸 (TFA) 为 中 国 医 药 上 海 化 学 试 剂 公 司 生 产 高 效 液 相 色 谱 为 HP11, 色 谱 柱 为 C18 (4.mm 25mm, 内 径 5um), 检 测 器 为 VWD 色 谱 分 析 条 件 : 温 度 为 室 温, 流 动 相 A 为 纯 水,B 为 加 乙 腈 流 速 为 1.ml/min, 进 样 量 为 1ul 原 毒 素 的 制 备 : 取 1ml 浓 度 为 2mg/ml 的 晶 体, 加 入 4ml 含 1mmol/mlDTT 的.1mmol/L NaCO3-HCl(pH9.5) 缓 冲 液,37 水 浴 1h 后, 用.2um 注 射 过 滤 器 过 滤, 取 上 清 液 作 为 样 品 BtA 的 藕 合 : 取 1ml 原 毒 素 与 1ml(.4mg/ml)Abamectin-COONa 在 乙 腈 中 均 匀 混 合 VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA32\BTA15.D) 后, 加 入 2mgEDC, 将 混 合 物 混 匀 后 置 于 25 下 反 应, 每 24h 取 样 检 测 以 B.t. 原 毒 素 (Protoxin) Abamectin-COONa EDC 原 毒 素 +Abamectin-COONa 原 毒 素 +EDC 和 Abamectin-COONa+EDC 作 为 对 照 而 后 分 别 进 行 不 同 反 应 时 间 BtA 藕 合 反 应 体 系 中 的 物 质 变 化,BtA 藕 合 反 应 体 系 与 单 组 分 反 应 底 物 的 比 较,BtA 藕 合 反 应 体 系 与 双 组 分 反 应 底 物 的 比 较,BtA 藕 合 反 应 体 系 中 物 质 的 定 性 分 析, 以 确 定 藕 合 新 物 质 产 生 以 及 该 物 质 的 特 征 色 谱 峰 3 结 果 与 分 析 3.1 不 同 反 应 时 间 的 BtA 反 应 体 系 中 的 物 质 变 化 试 验 结 果 见 图 2-4 在 B.t. 原 毒 素 Abamectin-COONa 和 EDC 混 合 后 立 即 进 行 HPLC 检 测, 色 谱 图 中 检 测 到 5 个 峰, 在 25 下 反 应 24h 以 后 色 谱 检 测 到 6 个 峰 ( 从 左 到 可 定 名 为 峰 1- 峰 6), 在 保 留 时 间 2min 左 右 出 现 1 个 新 峰 ( 图 2) 6 个 色 谱 峰 的 峰 高 变 化 表 明, 随 着 反 应 时 间 的 延 长, 峰 1 和 峰 4 的 高 度 不 断 升 高, 峰 2 和 峰 3 有 高 度 不 断 下 降, 峰 5 和 峰 6 有 高 度 基 本 保 持 不 变 可 以 看 出 在 峰 1 和 峰 4 位 置 的 物 质 的 量 在 不 断 地 增 加, 表 明 有 新 的 物 质 产 生 VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA33\BTA2.D) mi mi BtA at h BtA at 24h VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA34\BTA.D) VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA37\BTA.D) mi BtA at 48h BtA at 12h 图 2 不 同 反 应 时 间 BtA 的 色 谱 图 mi 峰 高 () h 24h 48h 12h 反 应 时 间 P1 峰 高 (mau) h 24h 48h 12h 反 应 时 间 P2 P3 P4 P5 P6 图 3 不 同 反 应 时 间 BtA 峰 1 的 峰 高 变 化 图 4 不 同 反 应 时 间 BtA 峰 2- 峰 6 的 峰 高 变 化

11 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) BtA 反 应 体 系 中 与 单 组 分 反 应 底 物 之 间 的 比 较 试 验 结 果 见 图 5 将 反 应 12h 的 BtA 与 12 的 原 毒 素 Abamectin-COONa 和 EDC 分 别 进 行 比 较 可 以 看 出 原 毒 素 的 主 要 的 色 谱 峰 有 3 个, 其 保 留 时 间 在 4.86min 7.589min 和 min, 峰 高 分 别 为 364.9,33.7 和 86.8; 在 BtA 藕 合 反 应 体 系 中, 在 原 毒 素 的 相 应 位 置 上, 峰 2 已 几 乎 消 失, 峰 1 和 峰 3 的 高 度 大 幅 度 下 降, 分 别 降 低 了 91.92% 和 86.52%, 可 见 在 BtA 的 反 应 体 系 中, 原 毒 素 的 量 下 降 在 Abamectin-COONa 的 色 谱 图 中 检 测 到 3 个 峰, 其 保 留 时 间 分 别 为 min 2.535min 和 22.42min, 峰 高 分 别 为 和 65.6; 在 BtA 藕 合 反 应 体 系 中, 在 Abamectin-COONa 的 相 应 位 置 上, 峰 2 和 峰 3 的 峰 高 只 有 轻 微 的 变 化, 分 别 为 41.5 和 61.1, 但 在 峰 1 的 位 置, 峰 高 上 上 升 了 %, 为 97.5, 表 明 在 峰 1 位 置 有 新 物 质 产 生 溶 于 乙 腈 的 饱 和 量 的 EDC 的 色 谱 图 中 只 有 1 个 峰, 保 留 时 间 为 min, 高 度 仅 为 23.1 比 较 结 果 表 明, 与 BtA 藕 合 反 应 体 系 中 的 单 组 分 的 反 应 底 物 原 毒 素 Abamectin-COONa 和 EDC 相 比,BtA 的 峰 1 和 峰 4 位 置 出 现 的 峰 高 变 化 表 示 有 新 物 质 的 产 生, 峰 4 的 物 质 的 保 留 时 间 与 Abamectin-COONa 峰 1 的 保 留 时 间 接 近 3 25 VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA37\BTA3.D) VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA32\BTA11.D) mi mi Protoxin at 12h Abamectin-COONa at 12h VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA31\BTA9.D) VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA37\BTA.D) mi EDC at 12h BtA at 12h 图 5 BtA 反 应 体 系 中 与 反 应 底 物 单 组 分 之 间 的 比 较 mi 3.3 BtA 反 应 体 系 中 与 双 组 分 反 应 底 物 之 间 的 比 较 前 面 的 结 果 已 表 明 在 BtA 藕 合 反 应 体 系 中 在 峰 1 和 峰 4 位 置 有 新 物 质 产 生, 由 于 BtA 的 藕 合 是 由 三 个 单 组 分 原 毒 素 Abamectin-COONa 和 EDC 进 行 反 应 的, 产 生 的 新 物 质 有 可 能 是 由 其 中 的 两 个 物 质 产 生, 而 不 是 由 三 个 物 质 同 时 反 应 形 成, 因 此 本 研 究 同 时 进 行 了 BtA 藕 合 反 应 与 双 组 分 反 应 底 物 的 比 较 试 验 结 果 见 图 6 在 反 应 12h 后, 在 Abamectin-COONa+ 原 毒 素 的 色 谱 图 中, 原 毒 素 和 Abamectin-COONa 保 持 着 原 有 的 特 征 峰, 表 明 在 没 有 EDC 参 与 反 应 的 条 件 下, 二 者 单 独 加 在 一 起 没 有 起 任 何 反 应 Abamectin-COONa+EDC 的 色 谱 图 与 Abamectin-COONa 的 色 谱 图 接 近, 这 可 能 是 由 于 EDC 的 色 谱 峰 与 Abamectin-COONa 的 峰 1 相 重 叠 原 毒 素 +EDC 的 色 谱 图 中, 出 现 3 个 大 峰 和 3 个 小 峰, 与 原 毒 素 相 比, 保 留 了 原 毒 素 的 特 征 峰, 但 出 现 了 与 BtA 峰 1 同 样 的 峰, 但 在 BtA 的 峰 4 位 置, 只 有 峰 高 为 31.3 的 小 峰, 其 峰 高 比 BtA 的 峰 4 低 了 66.2 比 较 结 果 表 明, 在 BtA 藕 合 体 系 与 单 组 分 反 应 底 物 表 现 出 差 异 的 峰 1 和 峰 4, 其 中 的 峰 1 在 原 毒 素 +EDC 的 双 组 分 混 合 物 中 出 检 测 到, 但 峰 4 的 变 化 在 3 组 的 双 组 分 反 应 底 物 的 混 合 物 皆 未 检 测 到, 在 此 该 峰 应 是 原 毒 素 和 Abamectin-COONa 的 峰 1 在 EDC 的 作 用 下 藕 合 而 成 BtA 3.4 BtA 藕 合 反 应 体 系 中 物 质 的 定 性 分 析 为 进 一 步 确 定 BtA 藕 合 体 系 中 峰 4 为 藕 合 产 物 BtA 的 特 征 峰, 需 进 行 定 性 分 析, 即 在 BtA 的 藕 合 反 应 体 系 中 分 别 加 入 单 组 分 的 反 应 底 物, 立 即 进 行 检 测, 观 察 色 谱 峰 的 变 化 试 验 结 果 见 图 7- 图 8, 在 48h 的 BtA 藕 合 反 应 体 系 中 加 入 原 毒 素 后, 峰 2 的 峰 高 迅 速 增 高, 表 明 峰 2 为 原 毒 素 的 特 征 峰 ; 加 入 Abamectin-COONa 后, 峰 5 和 峰 6 的 峰 高 增 高, 表 明 峰 5 和 峰 6 为 Abamectin-COONa 的 特 征 峰 ; 加 入 EDC 后, 峰 1 的 峰 高 增 高, 表 明 峰 1 为 EDC, 这 与 前 面 所 测 的 溶 于 乙 腈 的 EDC 的 色 谱 峰 的 保 留 时 间 有 所 不 同, 是 由 于 在 BtA 藕 合 体 系 中 除 了 乙 腈 外, 还 存 在 着 Na2CO3 的 缓 冲 液, 因 此 该 峰 是 EDC 与 缓 冲 液 作 用 后 的 物 质 峰 6 处 峰 中 在 3 组 定 性 分 析 中 不 产 生 变 化 的 峰 3 和 峰 4, 由 于 峰 3 属 于 原 毒 素 的 特 征 峰 之 一, 因 此 峰 4 被 再 次 确 定 为 藕 合 产 物 BtA

12 12 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA37\BTA1.D) VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA32\BTA13.D) 原 毒 素 +Abamectin-COONa at 12h min Abamectin-COONa+EDC at 12h min VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA37\BTA2.D) VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA37\BTA.D) mi 原 毒 素 +EDC at 12h 图 6 BtA 反 应 体 系 中 与 双 组 分 反 应 底 物 之 间 的 比 较 VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA34\BTA4.D) BtA at 12h VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA34\BTA1.D) 4.98 mi GCSC-BtA at 48h VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA34\BTA2.D) min GCSC-BtA+protoxin VWD1 A, Wavelength=254 nm (BTA34\BTA3.D) min mi GCSC-BtA+Abamectin-COONa 图 GCSC-BtA+EDC BtA 藕 合 反 应 体 系 中 物 质 的 定 性 分 析 mi Peak height Peak 1 Peak 2 Peak 3 Peak 4 Peak 5 Peak 6 BtA BtA+Protoxin BtA+A-COONa BtA+EDC 图 8 BtA 藕 合 反 应 体 系 中 物 质 的 定 性 分 析 各 处 理 色 谱 峰 的 峰 高 变 化 参 考 文 献 1 贺 延 春, 王 克 勤,1993. 北 京 鸭 血 清 HDL 主 要 载 脂 蛋 白 的 高 效 液 相 层 析 分 离 及 其 理 化 性 质. 生 物 化 学 杂 志,9(3): 王 颖,1998. 蛋 白 质 及 肽 的 快 速 液 相 分 析. 国 外 医 学 药 学 分 册,2 3 周 雅 琳, 阚 健 全, 陈 宗 道,21. 高 效 液 相 色 谱 法 在 蛋 白 质 分 析 中 应 用. 粮 食 与 油 脂.11: 徐 明 波, 姚 志 健,1992.SDS- 蛋 白 复 合 物 的 性 质 及 其 液 相 色 谱 分 离 研 究. 生 物 化 学 与 生 物 物 理 进 展.19(3): 王 迎, 谢 锦 云, 梁 宋 平,1997. 大 腹 园 蛛 拖 丝 蛋 白 一 级 结 构 初 步 研 究. 生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报.29(5): 毋 理 超, 朱 碧 英,21. 低 值 鱼 酶 解 蛋 白 的 制 取 及 其 组 成 研 究. 水 产 科 学.2(4): 喻 子 牛 苏 云 金 芽 孢 杆 菌 制 剂 的 生 产 和 应 用. 农 业 出 版 社

13 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 13 农 作 物 枯 萎 病 研 究 进 展 刘 波 朱 育 菁 林 营 志 林 抗 美 冒 乃 和 肖 荣 凤 葛 慈 斌 曹 宜 史 怀 苏 明 星 阮 传 清 ( 福 建 省 农 科 院 生 物 技 术 中 心 农 业 环 保 技 术 研 究 室 ) 1 农 作 物 枯 萎 病 的 发 生 与 危 害 1.1 枯 萎 病 原 植 物 病 害 是 农 业 生 产 的 主 要 问 题 之 一, 据 James(1981) 估 计 全 球 植 物 病 害 造 成 的 农 作 物 损 失 达 13-2%, 其 中 绝 大 部 份 是 由 土 传 病 害 引 起 的 枯 萎 病 是 一 类 植 物 病 害 的 总 称, 因 病 原 菌 的 侵 害, 造 成 植 物 枯 死 萎 蔫 枯 萎 病 原 有 细 菌 性 ( 如 玉 米 细 菌 性 枯 萎 病 等 ) 和 真 菌 性 病 原, 本 研 究 所 指 的 枯 萎 病 为 真 菌 性 病 原 植 物 枯 萎 病 是 由 镰 刀 菌 寄 生 引 起 的 一 种 世 界 性 的 真 菌 土 传 病 害, 其 主 要 致 病 菌 是 尖 孢 镰 刀 菌 (Fusarium oxysporum Schl.) 半 知 菌 类 (Fungiimperfecti) 梗 孢 目 (Moniliales) 痤 孢 科 (Tubercular) 镰 刀 菌 属 (Fusarium) 自 从 Snyder W. C. 和 Hansen H.N.(194) 把 镰 刀 菌 属 美 丽 组 内 的 种 合 并 为 1 个 成 为 尖 孢 镰 刀 菌 (Fusarium oxysporum Schl.) 1.2 侵 染 寄 主 (1) 经 济 作 物 : 棉 花 油 桐 甘 蔗 蓖 麻 亚 麻 等 (2) 茄 科 作 物 : 番 茄 胡 椒 马 铃 薯 烟 草 等 (3) 瓜 类 作 物 : 黄 瓜 节 瓜 冬 瓜 西 瓜 南 瓜 西 葫 芦 甜 瓜 丝 瓜 白 瓜 ( 越 瓜 ) 苦 瓜 葫 芦 瓜 哈 密 瓜 等 (4) 豆 科 作 物 : 大 豆 四 季 豆 豇 豆 猪 屎 豆 豌 豆 等 (5) 花 卉 植 物 : 康 乃 馨 郁 金 香 鱼 尾 菊 非 洲 菊 鸢 尾 水 仙 翠 菊 合 欢 百 合 仙 人 掌 穿 心 莲 一 品 红 草 坪 草 等 (6) 林 果 植 物 : 松 树 相 思 树 柑 桔 沙 棘 水 杉 铁 线 莲 属 植 物 梨 树 等 (7) 其 它 植 物 : 莴 苣 小 麦 大 蒜 荸 荠 芦 笋 姜 香 蕉 等 1.3 危 害 特 性 尖 孢 镰 刀 菌 世 界 各 地 均 有 分 布, 和 其 它 的 病 原 菌 一 样, 尖 孢 镰 刀 菌 有 多 种 专 化 型, 可 侵 染 多 种 寄 主, 但 是 不 同 专 化 型 在 不 同 地 区 的 分 布 不 同 不 同 的 专 化 型 侵 染 植 株 后 的 发 病 症 状 是 多 种 多 样 的, 一 般 导 致 维 管 束 枯 萎 植 株 枯 黄 球 茎 和 根 腐 烂, 植 株 生 长 衰 弱 其 中 起 重 要 致 病 作 用 的 是 维 管 束 枯 萎 在 镰 刀 菌 引 起 的 植 株 维 管 束 枯 萎 病 中, 尖 孢 镰 刀 菌 是 最 主 要 的 致 病 菌 植 株 发 病 后, 最 初 的 症 状 表 现 是, 嫩 叶 外 部 出 现 轻 微 的 褪 绿, 而 后 老 叶 开 始 下 垂 在 苗 期, 植 株 被 病 原 菌 侵 染 后 会 在 出 现 发 病 症 状 后 迅 速 死 去 ; 在 成 株 期, 在 叶 脉 缺 失 和 叶 片 下 垂 后, 植 株 出 现 生 长 缓 慢 下 部 叶 片 的 黄 化 不 定 根 的 形 成 叶 片 和 嫩 茎 的 萎 蔫 落 叶 剩 余 叶 片 边 缘 坏 死, 最 终 全 株 死 亡 (Agrios, 1988) 维 管 束 组 织 的 褐 变 是 镰 刀 菌 枯 萎 病 最 明 显 的 特 征 (Jones et al.,1982), 在 较 老 的 植 株 上, 从 盛 花 期 到 果 实 成 熟 期, 症 状 会 变 得 更 明 显 (Smith et al.,1988) 图 1 枯 萎 病 对 葫 芦 瓜 生 产 造 成 严 重 为 害 图 2 植 株 感 染 枯 萎 病 后 全 株 枯 死 图 3 瓜 类 作 物 的 温 室 种 植 1.4 侵 染 方 式 尖 孢 镰 刀 菌 是 一 类 在 土 壤 和 有 机 质 中 数 量 多 而 活 跃 的 腐 生 菌, 其 中 一 些 成 为 了 植 物 的 致 病 菌 (Smith et al., 1988) 它 的 腐 生 能 力 使 得 它 可 以 在 土 壤 中 长 期 生 存, 在 植 物 发 病 植 株 的 残 株 也 可 以 生 存 这 些 真 菌 可 以 菌 丝 体 或 3 种 孢 子 中 的 任 何 一 种 存 活 只 要 生 长 地 的 土 壤 被 尖 孢 镰 刀 菌 所 污 染, 健 康 的 植 株 就 会 被 病 原 菌 侵 染 尖 孢 镰 刀 菌 会 用 孢 子 萌 发 管 或 菌 丝 体 从 根 部 侵 入 植 株 体 内, 可 直 接 从 根 尖 根 部 的 伤 口 或 是 在 侧 根 的 形 成 点 进 入 植 株 体 内 一 旦 进 入 植 株 体 内, 菌 丝 体 就 在 根 皮 层 细 胞 间 生 长 当 菌 丝 体 到 达 木 质 部 后, 它 通 过 木 质 部 的 纹 孔 侵 入 导 管, 而 后 在 导 管 中 向 上 生 长 至 植 株 的 茎 和 顶 部 当 它 生 长 时, 菌 丝 体 的 会 分 枝, 并 产 生 小 分 生 孢 子, 小 分 生 孢 子 会 在 导 管 中 跟 着 树 液 的 传 输 从 下 往 上 移 动 当 小 分 生 孢 子 萌 发 时, 菌 丝 体 会 穿 透 木 质 部 的 上 层 壁, 在 相 邻 的 导 管 中 产 生 更 多 的 小 分 生 孢 子 同 时, 尖 孢 镰 刀 菌 也 会 通 过 木 质 部 的 纹 孔, 从 侧 面 进 行 进 一 步 的 侵 染 由 于 病 原 菌 在 植 株 维 管 组 织 内 的 生 长, 植 株 水 分 的 供 应 受 到 了 很 大 的 影 响, 缺 水 导 致 了 叶 片 气 孔 的 关 闭 叶 片 的 萎 蔫 和 植 株 的 整 体 死 亡 这 时, 病 原 菌 侵 入 了 植 株 的 软 组 织, 直 至 最 终 到 达 死 亡 组 织 的 表 面, 在 那 里 大 量 地 产 生 孢 子 这 些 孢 子 又 成 为 病 原 菌 新 的 进 一 步 扩 散 的 接 种 体 1.5 传 播 途 径 枯 萎 病 病 原 菌 以 菌 丝 厚 垣 袍 子 和 菌 核 在 土 壤 及 未 腐 熟 的 带 菌 绿 肥 中 越 冬, 种 子 也 可 带 菌 尖 孢 镰 刀 菌 的 短 距 离 传 播 主 要 是 通 过 灌 溉 水 和 带 菌 的 农 用 器 具 长 距 离 传 播 是 通 过 带 菌 的 种 苗 和 土 壤 尽 管 病 原 菌 有 时 也 会 侵 染 果 实 和 种 子, 但 通 过 种 子 传 播 的 可 能 性 很 小, 同 时 也 可 能 通 过 风 进 行 孢 子 传 播 1.6 病 害 流 行 在 我 国 南 方, 经 济 作 物 枯 萎 病 中 以 瓜 类 枯 萎 病 发 病 严 重, 受 害 面 积 最 大 为 害 最 广 泛 ( 丁 亚 军 等,1999) 在 我 国 北 方, 经 济 作 物 枯 萎 病 中 以 棉 花 枯 萎 病 发 生 严 重, 受 害 面 积 大 为 害 程 度 重 ( 冯 洁 等,1994) 病 原 菌 从 根 部 为 害 植 物, 引 起 维 管 束 病 害, 造 成 植 株 枯 死, 在 植 株 的 全 生 育 期 均 可 发 生, 因 此 一 旦 发 病, 就 难 以 根 除, 并 随 着 连 作 年 份 的 增 加, 发 病 率 升 高, 是 一 种 顽 固 的 土 传 病 害 2 世 纪 9 年 代 以 来, 我 国 设 施 蔬 菜 瓜 类 作 物 面 积 不 断 增 加, 由 于 在 相 对 封 闭 的 设 施 内 形 成 的 特 殊 小 气 候, 既 有 利 于 蔬 菜 生 长, 同 时 也 成 为 各 种 病 虫 害 滋 生 的 温 床, 长 年 的 连 作, 使 土 壤 中 病 原 菌 的 数 量 不 断 增 加 ; 并 在 较 适 宜 的 根 际 土 壤 中 迅 速 增 殖, 猖 撅 发 生, 土 传 性 病 害 在 3 4 年 内 就 会 由 零 星 点 片 发 展 为 普 遍 流 行 性 病 害, 更 使 得 枯 萎 病 发 生 面 积 扩 大, 危 害 逐 年 加 重 病 田 一 般 减 产 2 3% 严 重 田 块 可 达 5 6%, 甚 至 绝 产, 在 各 地 的 瓜 类 产 区 均 有 严 重 发 生, 是 目 前 造 成 瓜 类 生 产 大 面 积 减 产 的 主 要 原 因 之 一, 限 制 着 我 国 瓜 类 作 物 的 生 产 发 展 ( 王 振 跃 等,21) 2 农 作 物 枯 萎 病 原 菌 微 生 物 学 特 性 2.1 菌 落 形 态 在 固 体 培 养 基 上, 例 如 马 铃 薯 葡 萄 糖 琼 脂 培 养 基 (PDA), 尖 孢 镰

14 14 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 刀 菌 的 不 同 专 化 型 有 不 同 的 菌 落 形 态 一 般 来 说, 最 初 的 气 生 菌 丝 是 白 色 的, 而 后 不 同 的 专 化 型 菌 株 的 菌 落 会 变 成 各 种 不 同 的 颜 色, 从 淡 紫 到 深 紫 红 色 在 分 生 孢 子 座 很 多 的 情 况 下, 也 会 出 现 奶 油 色 或 桔 黄 色 在 不 同 培 养 基 上. 其 菌 落 直 径 大 小 颜 色 形 态 及 产 孢 量 均 有 所 不 同 ( 刘 雪 静 等,1996) 非 洲 菊 枯 萎 病 菌 菌 丝 生 长 发 育 适 温 为 25-3 ; 适 宜 ph 为 5-6,, 喜 中 性 偏 酸 全 光 照 或 光 照 交 替 培 养 下 生 长 良 好 ( 徐 秉 良 等,22) A B C D 图 4 尖 孢 镰 刀 菌 在 PDA 上 的 菌 落 形 态 图 5 尖 孢 镰 刀 菌 的 菌 丝 体 与 孢 子 形 态,A 为 小 分 生 孢 子, B 为 大 分 生 孢 子,C 为 厚 坦 孢 子,D 为 菌 丝 体 2.2 孢 子 形 态 尖 孢 镰 刀 菌 产 生 3 种 无 性 孢 子 : 小 分 生 孢 子 大 分 生 孢 子 和 厚 垣 孢 子 小 分 生 孢 子 为 -1 隔, 产 生 量 最 多, 在 任 何 条 件 下 都 可 形 成, 同 时 也 是 在 被 侵 染 植 株 的 导 管 中 产 生 量 最 多 的 孢 子 类 型 大 分 生 孢 子 为 3-5 隔, 这 些 孢 子 一 般 可 在 死 亡 植 株 的 表 面 和 分 生 孢 子 座 群 中 被 发 现 厚 垣 孢 子 为 圆 形 的 厚 壁 孢 子, 在 老 的 菌 丝 体 上 或 大 分 生 孢 子 中 产 生,-1 隔 分 生 孢 子 萌 发 的 温 度 范 围 为 8-36, 最 适 温 度 28-3 菌 丝 生 长 的 温 度 范 围 为 8-34, 最 适 温 度 分 生 孢 子 萌 发 的 ph 值 范 围 为 3-1 最 适 ph 为 5-7 菌 丝 生 长 的 ph 值 范 围 为 3-1, 最 适 ph 为 年 对 新 疆 棉 花 耐 高 温 菌 HAI-17 的 大 分 生 孢 子 形 态 测 定, 结 果 表 明,HAI-17 能 在 4 下 生 长, 易 产 生 粘 分 生 孢 子 团, 大 分 生 孢 子 μm, 为 镰 刀 型 ( 缪 卫 国 等,2) 2.3 生 理 分 化 枯 萎 病 原 菌 存 在 生 理 小 种 的 分 化, 并 在 种 下 设 生 理 型 (form), 后 改 为 专 化 型 (form specialis) 朱 天 圣 等 研 究 广 东 苦 瓜 枯 萎 病 原 菌, 结 果 表 明 广 东 苦 瓜 枯 萎 病 由 尖 镰 孢 (F. oxysporum) 侵 染 引 起, 经 5 科 15 种 不 同 属 植 物 接 种 的 专 化 型 研 究 证 明, 属 尖 镰 孢 苦 瓜 专 化 型 (F. oxysporum Schl.f.sp.momordicae Sun S.K. & Huang J.W. ) ( 朱 天 圣 等,1998) 至 今 已 报 道 的 尖 孢 镰 刀 菌 专 化 型 有 35 种, 其 中 已 报 道 瓜 类 枯 萎 病 菌 有 8 个 专 化 型 :1 F. oxysporum Schl. f. sp. cucumerinum Owen 尖 孢 镰 刀 菌 黄 瓜 专 化 型 2 F. oxysporum Schl. f. sp.niveum (E.F.Smith) Snyder&Hansen 尖 孢 镰 刀 菌 西 瓜 专 化 型 3 F. oxysporum Schl. f. sp melonis Snyder&Hansen 尖 孢 镰 刀 菌 甜 瓜 专 化 型 4 F. oxysporum Schl. f. sp.luffae Kwai, Suzuki & Kawai 尖 孢 镰 刀 菌 丝 瓜 专 化 型 5 F. oxysporum Schl. f. sp.lagenariae Matuo & Yamamoto 尖 孢 镰 刀 菌 葫 芦 专 化 型 6 F. oxysporum Schl. f.sp.momordicae Sun S.K.&Huang J.W. 尖 孢 镰 刀 菌 苦 瓜 专 化 型 7 F. oxysporum Schl. f. sp. benincasae Gerlagh M. & Ester A. 尖 孢 镰 刀 菌 冬 瓜 专 化 型 8 F. oxysporum Schl. f. sp. cucurbitacearum Gerlagh M.&Block W.J. 瓜 类 专 化 型 我 国 已 经 明 确 报 道 的 有 西 瓜 甜 瓜 黄 瓜 冬 瓜 葫 芦 专 化 型 ; 苦 瓜 丝 瓜 上 在 海 南 被 发 现 有 镰 刀 菌 枯 萎 病, 专 化 型 正 鉴 定 中 同 时, 同 一 专 化 型 的 枯 萎 病 原 菌 在 不 同 的 地 区, 存 在 着 明 显 的 致 病 性 分 化, 形 成 不 同 的 生 理 小 种 将 西 瓜 甜 瓜 和 冬 瓜 枯 萎 病 菌 专 化 型, 分 别 接 种 于 幼 苗 期 和 成 株 期 7 种 葫 芦 科 作 物 后, 均 严 重 侵 害 专 化 型 寄 主, 而 非 专 化 型 寄 主 一 般 轻 度 受 侵 或 不 受 侵, 各 菌 株 具 有 高 度 选 择 致 病 性, 专 化 性 表 现 较 为 典 型, 同 时 发 现 甜 瓜 枯 萎 病 菌 严 重 侵 害 苗 期 瓠 子 (Lagenarium siceraria Var.hispida)( 吉 加 兵 等,1992) 专 化 型 尖 孢 镰 刀 菌 的 分 化 在 同 工 酶 上 存 在 着 差 异,1989 年 在 郑 州 开 封 两 市 郊 区 采 集 黄 瓜 西 瓜 瓠 瓜 和 冬 瓜 枯 萎 病 株, 经 分 离 鉴 定, 其 病 菌 都 是 尖 孢 镰 刀 菌 尖 孢 镰 刀 菌 菌 酯 酶 同 工 酶 酶 谱 测 定 结 果 表 明,4 个 专 化 型 的 酶 谱 明 显 不 同 ( 吴 营 昌 等,1996) 鉴 别 寄 主 的 抗 感 鉴 定, 可 以 区 别 尖 孢 镰 刀 菌 的 生 理 分 化, 中 国 黄 瓜 枯 萎 病 病 原 菌 为 尖 孢 镰 刀 菌, 经 生 理 小 种 鉴 定, 引 用 Armstrong 等 所 采 用 的 鉴 别 寄 生 MSU8519,MSU44134 PI39265 进 行 抗 或 感 的 反 应 测 定, 结 果 分 别 为 抗 一 抗 - 感 的 反 应, 证 明 国 内 黄 瓜 枯 萎 病 菌 孢 镰 刀 菌 也 存 在 小 种 分 化 ( 黄 仲 生 等,1994) 尖 孢 镰 刀 菌 是 许 多 重 要 作 物 枯 萎 病 的 病 原 真 菌, 迄 今 已 报 道 的 专 化 型 分 化 有 8 多 个, 专 化 型 下 又 划 分 为 许 多 生 理 小 种 专 化 型 和 生 理 小 种 的 鉴 别, 对 于 抗 病 育 种, 植 物 检 疫 以 及 病 害 防 治, 具 有 重 要 的 理 论 和 实 际 意 义 ( 郑 服 丛 等,1995) 3 农 作 物 抗 枯 萎 病 的 研 究 3.1 毒 素 作 用 枯 萎 病 菌 生 长 过 程 会 分 泌 胞 外 毒 素, 通 过 过 滤 枯 萎 病 菌 的 发 酵 液 可 得 到 胞 外 毒 素 利 用 遗 传 背 景 一 致 而 抗 病 性 不 同 的 岱 16 变 异 品 系 和 抗 病 品 种 中 12, 研 究 了 接 种 棉 花 枯 萎 病 菌 (Fusarium oxysporum f.sp. vasinfectum) 及 用 枯 萎 病 菌 粗 毒 素 处 理 后, 棉 苗 维 管 束 的 病 理 变 化 结 果 表 明, 接 种 枯 萎 病 菌 后, 病 株 茎 部 导 管 及 薄 壁 细 胞 中 有 枯 萎 菌 丝 存 在, 粗 毒 素 处 理 能 引 起 棉 苗 维 管 束 的 病 理 变 化 ( 袁 红 旭 等,22) 粗 毒 素 可 用 于 品 种 抗 性 鉴 定, 用 苦 瓜 枯 萎 病 菌 滤 液 - 粗 毒 素 测 定 苦 瓜 不 同 品 种 的 苗 期 抗 性, 所 得 结 果 与 常 规 人 工 苗 期 接 种 鉴 定 结 果 基 本 一 致, 因 此 采 用 病 菌 滤 液 来 测 定 苦 瓜 苗 期 对 枯 萎 病 抗 性 的 方 法 是 可 行 的 ( 饶 雪 琴 等,1999) 3.2 蛋 白 抗 原 通 过 蛋 白 抗 原 的 制 备, 可 进 行 枯 萎 病 菌 的 特 异 性 测 定 以 棉 花 枯 萎 病 菌 菌 株 为 材 料, 用 D.Iannelli 法 提 取 菌 丝 孢 子 蛋 白 抗 原, 按 改 进 的 J.E.Devay 免 疫 方 案 制 备 抗 血 清 琼 脂 双 扩 散 测 得 效 达 1/64, 用 琼 脂 双 扩 散 ( 比 较 ) 对 流 免 疫 电 泳 间 接 ELISA 及 SPA-ELISA 测 定 血 清 的 特 异 性, 用 于 鉴 定 枯 萎 病 菌 的 存 在, 灵 敏 度 较 高 ( 李 启 新 等,1997) 3.3 抗 性 蛋 白 抗 性 等 级 不 同 的 寄 主, 存 在 着 抗 性 蛋 白 的 差 异 用 SDS-PAGE 方 法 分 析 了 4 种 感 枯 萎 病 棉 花 及 其 抗 病 后 代 的 种 子 蛋 白 棉 花 种 子 蛋 白 主 要 有 分 子 量 的 14KD 16KD 23KD 27KD 34KD 41KD 46KD 的 8 种 组 分 抗 病 类 型 及 其 相 关 的 敏 感 品 种 间, 种 子 蛋 白 组 间 差 异 甚 微, 但 蛋 白 组 分 量 有 较 大 差 异 ( 朱 新 产 等,1996) 3.4 同 工 酶 测 定 枯 萎 病 菌 侵 染 寄 主, 能 引 起 寄 主 同 工 酶 的 变 化 在 温 室 盆 栽 条 件 下 研 究 了 丛 枝 菌 根 (Arbuscular Mycorrhiza,AM) 真 菌 Glomus versiforme 和 西 瓜 枯 萎 镰 刀 菌 Fusarium oxysporum f.sp.niveum 对 西 瓜 根 系 中 过 氧 化 物 酶 (POD), 苯 丙 氨 酸 解 氨 酶 (PAL),β-1,2- 葡 聚 糖 酶 和 几 丁 质 酶 活 性 的 影 响 较 大 ( 李 敏 等,21) 利 用 过 氧 化 物 酶 同 工 酶 酶 谱 鉴 定 西 瓜 黄 瓜 不 同 品 种 的 抗 枯 萎 病 能 力, 结 果 发 现, 高 抗 种 抗 病 品 种 在 接 菌

15 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 15 后 过 氧 化 物 酶 同 工 酶 没 有 新 生 酶 带 出 现 或 出 现 很 少 ; 感 病 品 种 在 接 菌 后 有 新 生 酶 带 出 现, 感 病 愈 重, 新 生 酶 带 愈 多 ( 王 守 正 等,21) 镰 刀 菌 枯 萎 病 的 侵 染 使 寄 主 黄 瓜 根 部 的 苯 丙 氨 酸 解 氨 酶 过 氧 化 物 酶 和 多 酚 氧 化 酶 活 性 增 加, 抗 病 感 病 各 品 种 的 3 种 酶 活 性 曲 线 均 呈 现 两 个 峰 值, 抗 病 各 品 种 酶 活 性 峰 I 值 比 感 病 品 种 高 ( 徐 建 华 等,1995) 3.5 DNA 导 入 肖 光 辉 等 综 述 了 外 源 DNA 直 接 导 入 技 术 的 原 理 方 法 和 技 术 特 点 ; 瓠 瓜 枯 萎 病 抗 性 导 入 西 瓜 的 方 法, 后 代 性 状 的 变 异 与 抗 枯 萎 病 材 料 和 抗 性 组 合 的 选 育 结 果, 以 及 西 瓜 抗 枯 萎 病 育 种 所 取 得 的 突 破 性 进 展 ( 肖 光 辉 等,22) 通 过 3keV 不 同 剂 量 的 Ar + 注 入 和 DNA 溶 液 浸 滴 法, 将 比 克 氏 棉 和 红 麻 DNA 导 入 泗 棉 2 号, 结 果 表 明 : 离 子 注 入 可 显 著 地 促 进 外 源 DNA 导 入 受 体, 增 加 受 体 后 代 性 状 的 变 异 频 率 和 变 异 类 型, 而 且 多 数 变 异 可 迅 速 趋 于 稳 定 在 供 试 剂 量 中, 以 Ar + 为 最 佳 ( 程 备 久 等,1996) 利 用 外 源 DNA 导 入 生 物 技 术, 并 结 合 病 圃 连 续 定 向 培 育, 获 得 的 棉 花 新 品 系 , 经 大 面 积 重 病 地 试 验 示 范, 不 仅 表 现 有 良 好 的 抗 ( 耐 ) 棉 花 枯 萎 病 性, 尚 兼 有 丰 产 优 质 性 进 而 验 证 了 该 技 术 用 于 棉 花 抗 病 育 种 的 可 行 性 ( 闫 春 吟 等,22) 3.6 转 基 因 技 术 用 花 粉 管 通 道 法 将 菜 豆 几 丁 质 酶 基 因 与 烟 草 β-1 3 葡 聚 糖 酶 基 因 双 价 植 物 表 达 载 体 pblgc 导 入 新 疆 棉 花 主 栽 品 种 ( 系 ) 系 石 远 321 通 过 卡 那 霉 素 检 测 PCR-Southern 验 证 抗 黄 萎 病 枯 萎 病 性 筛 选, 得 到 抗 病 性 良 好 且 遗 传 性 稳 定 的 转 基 因 棉 花 ( 乐 锦 华 等,22) 3.7 凝 集 素 分 析 用 PH7.2,.5mol/L Tris-HCL 缓 冲 液 从 高 抗 枯 萎 病 棉 花 品 种 86-1 种 子 脱 脂 粉 中 抽 提 出 棉 花 凝 集 素, 测 定 其 专 一 性 结 合 糖, 结 果 表 明 : 棉 花 凝 集 素 的 专 一 性 结 合 糖 是 D- 半 乳 糖 N- 乙 酰 -D- 氨 基 葡 萄 糖 D - 葡 萄 糖, 棉 花 凝 集 素 最 适 PH 为 6-8, 具 有 较 高 的 抗 热 性 ( 蔡 马 等,1996) 研 究 了 FITC 或 HRP 标 记 的 棉 花 凝 集 与 枯 萎 病 菌 丝 体 作 用 后, 在 荧 光 显 微 镜 下 或 扫 描 电 镜 下 可 以 清 晰 地 看 到 FITC- 凝 集 素 或 HRP- 凝 集 素 - 受 体 复 合 物 在 菌 丝 体 上 的 均 匀 分 布 实 验 表 明, 纯 化 的 棉 花 凝 集 素 对 棉 花 枯 萎 病 菌 丝 体 的 生 长 有 较 强 的 抑 制 作 用 ( 曾 仲 奎 等,1995) 通 过 几 丁 质 柱 层 析 和 SephadexG-75 过 滤, 得 到 SDS-PAGE 电 泳 显 一 条 蛋 白 带, 专 性 结 合 甘 露 糖 和 葡 萄 糖, 能 凝 集 兔 血 红 细 胞 的 棉 花 凝 集 素, 分 子 量 为 134 利 用 电 镜 和 凝 集 素 探 针 检 测 棉 花 枯 萎 病 菌 分 生 孢 子 表 面 结 构, 发 现 分 生 孢 子 壁 的 骨 架 成 份 是 几 丁 质 ( 刘 士 庄 等,1996) 4 农 作 物 枯 萎 病 的 生 物 防 治 4.1 生 物 防 治 的 优 势 生 物 防 治 有 许 多 的 好 处 ; 一 是 可 以 挖 掘 常 规 品 种 的 利 用 潜 力, 象 一 些 非 重 病 田 可 以 采 用 常 规 品 种 和 行 之 有 效 的 生 防 措 施 相 结 合, 获 得 更 好 的 收 成 ; 二 是 可 以 延 长 抗 病 品 种 的 使 用 寿 命, 可 以 使 抗 病 品 种 抗 病 性 能 更 好, 丰 产 性 和 优 质 性 接 近 常 规 品 种 ; 三 是 可 以 避 免 出 现 类 似 化 学 药 剂 使 用 后 病 原 菌 产 生 抗 性 等 等 同 时, 枯 萎 病 生 防 资 源 丰 富, 陈 三 凤 等 从 几 十 种 作 物 的 根 际 和 叶 围 分 离 获 得 35 株 微 生 物, 其 中 细 菌 和 放 线 菌 分 别 为 2 株 和 15 株, 对 所 有 这 些 分 离 物 进 行 了 抑 制 真 菌 试 验 和 几 丁 质 酶 活 性 测 定 抑 菌 试 验 中 以 棉 花 枯 萎 病 菌 棉 花 黄 萎 病 菌 黄 瓜 枯 萎 病 菌 及 西 瓜 枯 萎 病 菌 作 为 供 试 病 原 菌 ( 陈 三 凤 等,1994) 对 来 自 以 色 列 和 中 国 的 分 属 Enterobacter,Pseudomonas 和 Bacillus 三 个 属 9 个 菌 株 的 室 内 测 试 结 果 表 明, 基 中 几 个 菌 株 对 Rhizoctonia solani 和 Fusarium meloni 具 有 很 强 的 拮 抗 能 力 和 对 几 丁 质 具 有 很 强 的 分 解 能 力, 其 抗 菌 活 性 物 质 因 对 象 菌 的 不 同 可 分 别 表 现 抑 菌 作 用 或 杀 菌 作 用 ( 吴 加 志 等,1996) 4.2 真 菌 类 生 防 菌 生 防 真 菌 中 研 究 应 用 较 多 的 有 木 霉 属 真 菌 (Trichoderma) 丛 技 菌 根 真 菌 (Arbuscular Mycorrhize,AM) 非 致 病 尖 孢 镰 刀 菌 木 霉 分 布 广 泛, 极 易 分 离 和 培 养. 可 以 在 许 多 基 物 上 迅 速 生 长. 对 多 种 病 原 菌 有 抑 制 作 用, 是 一 种 理 想 的 生 防 菌 木 霉 的 生 防 机 制 目 前 认 为 主 要 有 重 寄 生 抗 生 和 竞 争 作 用 已 报 道 用 于 防 治 枯 萎 病 的 有 哈 次 木 霉 (Trichoderma harzianum) 和 绿 色 木 霉 (Trichoderma viride) 电 镜 扫 描 表 明, 哈 茨 木 霉 菌 对 枯 萎 菌 丝 有 强 烈 的 寄 生 作 用, 产 生 吸 器 直 接 穿 入 枯 萎 菌 丝, 分 泌 胞 外 溶 菌 酶, 从 而 减 轻 病 害 AM 菌 根 是 自 然 界 普 遍 存 在 的 一 类 真 菌 与 植 物 根 系 建 立 的 互 惠 共 生 体, 它 可 促 进 共 生 植 物 的 生 长, 增 强 植 株 的 抗 逆 性, 应 用 AM 真 菌 防 治 枯 萎 病 是 利 用 它 与 镰 刀 菌 存 在 的 竞 争 关 系 非 致 病 尖 孢 镰 刀 菌 的 利 用 是 应 用 了 弱 株 系 交 互 保 护 作 用 原 理, 不 同 尖 镰 抱 菌 株 间 都 存 在 有 不 同 程 度 的 诱 导 抗 性 作 用 然 而 作 为 微 生 物 之 间 的 这 种 干 扰 作 用, 往 往 因 各 种 因 素 的 影 响 而 降 低 效 果, 同 时 在 大 面 积 应 用 上, 必 须 考 虑 选 用 无 致 病 力 或 致 病 力 很 弱 的 尖 镰 孢 菌, 并 注 意 防 止 新 选 择 的 诱 导 菌 的 致 病 性 变 异 问 题, 否 则 产 生 的 后 果 将 不 堪 设 想 吴 石 平 等 研 究 了 木 霉 菌 与 微 量 三 唑 酮 配 合 使 用 对 西 瓜 枯 萎 病 的 防 效 和 对 寄 主 生 长 根 系 发 育 及 根 分 泌 物 的 影 响 木 霉 菌 与 微 量 三 唑 酮 配 合 对 防 治 西 瓜 枯 萎 病 有 增 效 作 用, 在 药 砂 培 处 理 的 西 瓜 根 分 泌 物 作 用 下, 尖 孢 镰 刀 菌 厚 垣 孢 子 萌 发 率 较 水 砂 培 处 理 低 ( 吴 石 平 等,22) 将 土 壤 中 分 离 出 的 木 霉 菌 株 (T41), 通 过 对 峙 法 对 尖 镰 孢 菌 进 行 了 体 外 拮 抗 作 用 测 定 评 价, 并 利 用 制 备 的 木 霉 生 防 菌 剂 对 番 茄 枯 萎 病 进 行 了 室 内 盆 栽 防 治 试 验 结 果 表 明 : 木 霉 T41 对 番 茄 枯 萎 病 的 防 效 达 86%, 并 具 有 防 效 长 久 和 刺 激 作 物 生 长 的 作 用 ( 田 连 生 等,21) 离 体 培 养 测 定 表 明, 黄 枯 萎 病 原 真 菌 和 木 霉 单 独 培 养 均 符 合 S 生 长 曲 线 病 菌 与 木 霉 对 峙 培 养 及 病 菌 在 涂 木 霉 培 养 基 中 生 长, 培 养 6 天 后 比 较 病 菌 菌 落 半 径, 结 果 表 明, 病 原 真 菌 生 长 受 到 极 大 限 制, 且 部 分 病 菌 菌 丝 死 亡 病 菌 在 一 定 浓 度 棉 萎 灵 中 培 养, 生 长 缓 慢, 但 符 合 生 长 曲 ( 陈 建 爱 等,22) 从 土 壤 中 分 离 得 到 的 4 种 拮 抗 真 菌 (Trichoderma koningii, T. pseudokoningii, T. harzianum 和 Gliocladium sp) 分 别 用 紫 外 光 诱 变, 得 到 抗 氧 氮 化 铜 扑 海 因 和 多 菌 灵 的 变 异 菌 株, 这 些 变 异 菌 株 对 西 瓜 枯 萎 病 具 有 抑 制 作 用 ( 黎 起 秦 等,2) 4.3 细 菌 类 生 防 菌 目 前 研 究 证 明, 有 18 个 属 的 细 菌 在 植 物 土 传 病 害 生 防 上 有 潜 力, 生 防 细 菌 的 抑 菌 机 制 主 要 有 营 养 基 质 的 竞 争 和 生 态 位 的 排 斥, 嗜 铁 素 和 抗 菌 素 细 菌 在 其 生 长 环 境 里 能 分 泌 胞 外 活 性 物 质, 细 菌 素 是 其 中 的 一 大 类, 它 具 有 很 强 的 拮 抗 专 化 性 利 用 产 细 菌 素 菌 株 防 治 植 物 病 害 的 研 究 有 许 多 成 功 报 道, 在 实 际 应 用 中 也 取 得 了 一 定 的 效 果 在 枯 萎 病 的 防 治 中, 已 有 报 道 的 有 萤 光 假 单 胞 细 菌 (fluorescent Pseudomonas spp.) 恶 臭 假 单 胞 杆 菌 和 芽 孢 杆 菌 属 (Bacillus spp.), 其 中 研 究 最 多 的 是 芽 抱 杆 菌 芽 孢 杆 菌 属 已 在 许 多 种 作 物 上 进 行 了 广 泛 的 控 制 病 虫 害 能 力 的 测 试, 芽 孢 杆 菌 用 于 植 物 土 传 病 害 防 治 的 例 子 很 多, 而 且 芽 孢 杆 菌 不 仅 有 防 病 作 用, 而 有 增 产 作 用 由 于 这 个 种 群 能 产 生 耐 热 耐 干 燥 的 厚 沿 孢 子. 且 分 布 广 泛, 极 易 分 离 培 养, 批 量 生 产 广 工 艺 简 单, 成 本 也 比 较 低. 施 用 方 便 和 贮 藏 期 长, 也 是 一 种 理 想 的 生 防 微 生 物 平 板 共 生 培 养 测 定 表 明,B36-1 菌 对 供 试 的 8 种 植 物 病 原 真 菌 均 有 不 同 程 度 的 拮 抗 性, 其 中 含 B36-1 菌 活 菌 体 液 剂 对 玉 米 小 斑 病 菌 小 麦 赤 霉 病 菌 黄 瓜 炭 疽 病 菌 棉 花 枯 萎 病 菌 和 水 稻 恶 苗 病 菌 菌 丝 生 长 抑 制 率 依 次 为 8.22% 8.5% 77.75% 75.3%( 王 明 祖 等,1996) APS 抗 真 菌 多 肽 是 一 种 由 蜡 状 孢 杆 菌 产 生 的 新 型 抗 真 菌 环 多 肽, 研 究 表 明, APS 具 有 广 谱 抗 菌 性, 对 棉 花 枯 萎 病 等 种 病 原 真 菌 及 黑 曲 霉 的 孢 子 萌 发 具 强 烈 的 抑 制 作 用, 最 小 的 MIC 达 2.5μg m1-1, 对 真 菌 的 生 长 亦 具 有 强 烈 的 抑 制 作 用, 随 着 APS 处 理 浓 度 的 增 加, 抑 制 作 用 增 强 ( 刘 建 国 等,1999) 拮 抗 菌 BS-98 菌 株 在 BPY 液 体 培 养 基 中 产 生 的 蛋 白 质 经 硫 酸 铵 分 级 盐 析 Sephadex G-1 柱 层 析 DEAE- 纤 维 素 柱 层 析 和 Sephadex G-1 柱 再 层 析 后, 分 离 纯 化 得 到 的 抗 菌 蛋 白 在 电 泳 中 显 现 出 三 条 带, 经 初 步 纯 化 的 抗 菌 蛋 白 对 热 稳 定 ( 胡 剑 等,1997) 孔 建 等 报 道 枯 草 芽 孢 杆 菌 B-93 菌 株 对 棉 枯 萎 病 等 多 种 土 传 镰 刀 菌 和 苹 果 轮 纹 病 等 的 抑 菌 活 性 电 镜 和 光 学 镜 观 察 证 实, 该 菌 抗 菌 物 质 可 使 病 菌 细 胞 畸 形, 胞 内 物 质 外 泄 和 细 腻 壁 崩 溃 盆 栽 和 田 间 试 验, 证 明 以 B-93 菌 液 浸 种 可 显 著 降 低 棉 炭 疽 病 等 棉 苗 丰 和 菠 菜 枯 萎 病 ( 孔 建 等,1999) 许 煜 泉 等 设 计 了 一 种 新 的 高 效 筛 选 程 序, 从 植 物 根 际 土 壤 中 分 离 出 一 株 具 有 ACC 脱 氨 酶 活 性 的 促 生 拮 抗 双 功 能 假 单 胞 菌 株 M18 在 培 养 皿 中,M18 能 有 效 地 抑 制 黄 瓜 枯 萎 病 菌 以 及 多 种 其 他 枯 萎 病 原 菌 和 植 物 病 原 菌 的 生 长 M18 活 菌 浸 种 处 理 春 黄 瓜 种 子 以 及 在 大 棚 定 植 后, 根 际 土 壤 病 原 菌 显 著 减

16 16 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 少, 对 黄 瓜 幼 苗 的 根 系 具 有 明 显 的 促 进 作 用 ( 许 煜 泉 等,1999; 王 灿 华 等,2) 4.4 链 霉 菌 生 防 菌 链 霉 菌 生 防 菌 通 过 分 泌 抗 菌 素, 抑 制 枯 萎 病 菌 的 生 长, 达 到 控 病 的 目 的 通 过 室 内 和 田 间 试 验 测 定 了 从 小 麦 根 际 筛 选 的 一 株 链 霉 菌 (Streptomyces spp.)s-5 对 棉 花 苗 期 病 害 根 腐 病 红 腐 病 炭 疽 病 和 棉 花 枯 黄 萎 病 菌 的 防 病 效 果 抑 菌 作 用 测 定 结 果 表 明, 链 霉 菌 S-5 具 有 广 谱 抑 菌 作 用, 对 棉 花 枯 黄 萎 病 菌 抑 菌 作 用 明 显 ( 张 克 诚 等,22) 以 西 瓜 枯 萎 病 菌 为 实 验 菌, 研 究 了 中 生 菌 素 ( 链 霉 菌 的 一 种 ) 对 丝 状 真 菌 的 作 用 结 果 表 明 : 中 生 菌 素 能 显 著 地 引 起 菌 丝 细 胞 内 原 生 质 凝 集, 对 病 原 菌 孢 子 的 萌 发 具 有 强 烈 的 抑 制 作 用,2.5μg/mL 完 全 抑 制 孢 子 萌 发, 并 具 有 杀 死 作 用, 对 孢 子 的 形 成 有 较 强 的 阻 碍 作 用 ( 蒋 细 良 等,1997) 农 抗 12 对 西 瓜 枯 萎 病 菌 抑 制 作 用 结 果 表 明, 农 抗 12 对 西 瓜 枯 萎 病 菌 孢 子 的 萌 发 和 菌 丝 的 形 态 无 明 显 影 响, 对 孢 子 的 形 成 和 菌 丝 生 长 有 一 定 抑 制 作 用, 能 够 提 高 西 瓜 幼 苗 抗 枯 萎 病 菌 毒 素 致 萎 的 能 力 和 幼 苗 体 内 过 氧 化 物 酶 活 性 ( 蒋 细 良 等,1998) 田 间 试 验 表 明 生 物 杀 菌 剂 农 抗 12 对 西 瓜 枯 萎 病 具 有 一 定 的 防 治 效 果, 对 其 防 病 机 理 进 行 了 初 步 研 究 表 明 :2% 农 抗 12 水 剂 对 其 菌 丝 生 长 具 有 明 显 的 抑 制 作 用, 同 时 还 可 以 抑 制 小 孢 子 的 萌 发 ( 韩 巨 才 等,1995) 4.5 几 丁 糖 作 用 观 察 了 由 蝇 蛆 壳 制 备 而 成 的 几 丁 糖 ( 壳 聚 糖 ), 在 PH5.6 1mg/ ml 时 16 种 常 见 植 物 病 原 真 菌 的 生 长 抑 制 作 用, 以 及 几 丁 糖 含 量 分 别 在 mg/ml 时 对 菌 丝 生 长 的 抑 制 情 况, 发 现 几 丁 糖 具 有 广 谱 抑 菌 特 性, 而 且 随 几 丁 糖 浓 度 的 提 高 抑 制 作 用 加 强 ( 赖 凡 等,1998) 4.6 诱 导 抗 性 枯 萎 病 非 致 病 菌 株 能 诱 导 寄 主 的 抗 病 机 制 王 守 正 等 研 究 了 西 瓜 黄 瓜 对 枯 萎 病 和 炭 疽 病 的 诱 导 抗 病 机 制 结 果 发 现 : 西 瓜 黄 瓜 经 枯 萎 病 非 致 病 菌 株 诱 导 后 与 抗 病 性 有 关 的 过 氧 化 物 酶 多 酚 氧 化 酶 苯 丙 氨 酸 解 氨 酶 活 性 明 显 增 强 ; 酚 类 物 质 和 木 质 素 含 量 增 多 西 瓜 黄 瓜 对 枯 萎 病 的 诱 导 抗 病 机 制 和 黄 瓜 对 炭 疽 病 的 诱 导 抗 病 机 制 基 本 一 致 ( 王 守 正 等,21) 研 究 了 西 瓜 黄 瓜 对 枯 萎 病 和 炭 疽 病 的 诱 导 抗 病 性, 结 果 表 明 : 用 从 西 瓜 维 管 束 中 分 离 到 的 尖 孢 镰 刀 菌 非 致 病 菌 株 F-3 和 茄 病 镰 刀 菌 非 致 病 株 F5-1 诱 导 处 理 西 瓜 幼 苗, 能 使 西 瓜 产 生 对 枯 萎 病 的 抗 性, 非 致 病 菌 与 致 病 接 种 间 隔 天 数 越 多, 诱 导 抗 病 效 果 越 好 ( 王 守 正 等,21) 黄 瓜 枯 萎 菌 [Fusarium oxysporum (Schl.) f.sp. cucumerinum Owen] 能 诱 导 黄 瓜 几 丁 酶 的 积 累, 但 在 诱 导 的 速 度 和 强 度 上, 抗 病 品 种 和 感 病 品 种 有 明 显 的 差 异 抗 病 品 种 津 杂 四 号 积 累 的 幅 度 远 大 于 感 病 品 种 研 四 号, 升 高 的 幅 度 是 泽 研 四 号 的 2.8 倍 ( 史 娟 等,21) 4.7 益 微 菌 作 用 益 微 菌 是 一 类 有 益 微 生 物 制 剂 的 简 称, 对 枯 萎 病 具 有 抑 制 作 用 用 平 板 测 定 与 生 测 法 相 结 合, 针 对 棉 花 枯 萎 病 菌, 将 益 微 菌 AB34-2,AB272 与 病 原 菌 导 入 植 物 体 中, 测 定 益 微 菌 的 抑 制 能 力, 结 果 表 明, 在 平 板 培 养 基 中, 对 枯 萎 病 菌 具 有 较 强 抑 菌 能 力, 被 抑 制 枯 萎 病 菌 的 分 生 孢 子 数 减 少, 在 植 物 体 中, 两 种 益 微 菌 对 棉 花 的 生 长 具 有 促 进 作 用 ( 缪 卫 国 等,1998) 5 农 作 物 枯 萎 病 的 化 学 防 治 5.1 杀 菌 剂 (1) 咪 唑 类,4% 灭 菌 净 是 以 有 机 硫 咪 唑 类 农 药 添 加 助 剂 复 配 而 成 的 新 型 杀 菌 剂 福 美 双 多 菌 灵 在 PSA 培 养 基 上 测 得 对 稻 恶 苗 病 菌 EL5 分 别 为 2.437μg/mL,4.6μg/mL; 配 成 混 剂 后 的 EL5 为.266 μg/ml,sr 为 1.891, 证 实 混 剂 有 明 显 增 效 作 用, 配 比 科 学 合 理 同 时, 经 浙 江 江 西 多 点 小 区 试 验, 对 稻 恶 苗 病 菌 具 有 较 好 的 抑 制 作 用 ( 诸 葛 龙 等,21) (2) 安 索 菌 毒 清,5% 安 索 菌 毒 清 防 治 棉 花 枯 萎 病 具 有 一 定 的 防 效, 防 效 达 36.5%-51.7%, 且 随 浓 度 升 高 防 效 增 加, 生 产 上 应 用 采 用 2 倍 液,2mg/ 穴, 定 苗 后 灌 根, 生 长 期 灌 根 二 次 ( 杨 世 刚 等,1995) (3) 华 光 霉 素, 通 过 测 定 2 种 助 剂 对 华 光 霉 素 制 剂 的 影 响, 结 果 筛 选 到 4 种 对 华 光 霉 素 的 抑 菌 作 用 较 为 理 想 的 助 剂, 对 西 瓜 枯 萎 病 菌, 棉 花 枯 萎 病 菌 和 苹 果 轮 纹 病 菌 防 效 较 高, 田 间 试 验 示 范 结 果 表 明, 助 剂 Z-7(.3 ) 和 华 光 霉 素 (12.5μg/ml) 的 混 合 液 对 苹 果 叶 螨 的 防 治 效 ( 朱 昌 雄 等,1999) (4) 菌 线 威, 用 不 同 剂 量 的 菌 线 威 在 西 瓜 定 植 和 膨 瓜 期 进 行 灌 根 试 验, 结 果 表 明 : 每 67.5 m 2 计 9 株 西 瓜, 每 次 用 菌 线 威 9 7 5g 兑 水 45kg, 于 定 植 时 和 膨 瓜 初 期 2 次 灌 根 对 枯 萎 病 的 防 治 效 果 较 好, 尤 以 每 次 用 菌 线 威 9g 兑 水 45kg 的 处 理 效 果 最 好, 在 连 续 2 年 重 茬 田 中 应 用 后, 西 瓜 枯 萎 病 病 情 指 下 降 ( 徐 宗 刚 等,22) (5) 丰 抗 素, 通 过 27-1 丰 抗 素 在 棉 花 各 生 育 期 用 不 同 剂 量 次 数 喷 施 后, 结 果 表 明, 丰 抗 素 对 棉 花 枯 萎 病 有 一 定 的 抑 制 作 用, 防 治 效 果 分 别 达 36.46%-39.82% 介 于 在 没 有 抗 病 品 种 和 钉 菌 剂 的 情 况 下, 应 用 丰 抗 素 可 增 加 植 株 的 抗 逆 能 力, 减 轻 枯 萎 病 的 发 生, 起 到 防 病 的 效 果 ( 何 海 芬 等,2) (6) 硅 唑 类, 合 成 了 2 个 新 型 含 硅 唑 类 化 合 物, 其 化 学 结 构 经 IR,MS,1HNMR 和 元 素 分 析 确 证 生 物 活 性 测 定 显 示 一 些 化 合 物 对 棉 花 枯 萎 病 菌 等 有 较 好 的 抑 制 活 性, 一 些 化 合 物 对 黄 瓜 灰 霉 病 菌 的 抗 性 菌 有 很 好 的 活 性 讨 论 了 化 合 物 的 结 构 与 生 物 活 性 关 系 ( 李 文 明 等,1995) (7) 二 硝 基 苯 胺 类, 棉 花 感 病 品 种 种 入 含 二 硝 基 苯 胺 类 化 合 物 的 育 苗 土 中, 移 栽 后 能 明 显 提 高 对 棉 枯 萎 病 的 抗 性, 效 果 达 7% 二 硝 基 苯 胺 类 化 合 物 为 非 杀 菌 化 合 物 试 验 表 明, 该 化 合 物 对 FOV 的 生 长 无 抑 制 作 用, 反 而 还 能 刺 激 菌 丝 生 长 和 孢 子 萌 发 FOV 对 处 理 过 的 棉 苗 侵 染 率 低, 且 只 能 侵 ( 葛 银 林 等,1995) (8) 枯 萎 立 克, 在 棉 花 枯 萎 病 重 发 棉 田, 用 5 倍 枯 萎 立 克 在 棉 花 苗, 蕾 期 各 喷 施 一 次 能 有 效 降 低 棉 花 枯 萎 病 发 病 率, 显 著 提 高 棉 花 保 苗 效 果, 能 显 著 提 高 棉 花 产 量, 增 加 植 棉 经 济 效 益 ( 郑 仁 富 等,1999) (9) 铜 制 剂, 通 过 铜 大 师 不 同 比 例 拌 种 灌 根 和 喷 施, 对 棉 花 苗 期 的 根 腐 病 立 枯 病 枯 萎 病 均 有 防 治 效 果, 使 三 种 病 发 病 晚 发 病 轻 增 强 无 病 区 的 免 疫 能 力, 同 时 对 棉 花 生 育 也 有 促 进 作 用 其 中 拌 种 灌 根 叶 面 喷 施 以 8 倍 液 效 果 最 好, 防 治 效 果 分 别 达 83.84%-69.62% ( 罗 巨 海 等,22) 5.2 除 草 剂 ( 氟 乐 灵 ) 田 间 试 验 结 果, 除 草 剂 氟 乐 灵 48% 乳 油 以.86kg/hm2 作 棉 苗 播 前 土 壤 处 理, 可 明 显 减 轻 棉 花 枯 萎 病 的 发 生, 在 现 苗 期, 施 用 氟 乐 灵 后 对 感 病 品 种 沪 棉 211 和 抗 病 品 种 中 棉 12 枯 萎 病 株 发 病 率 的 防 治 效 果 分 别 48.25%-69.42% 和 49.41%-7( 宋 凤 鸣 等,1994) 分 析 了 氟 乐 灵 (2μg/g 土 ) 诱 发 处 理 及 枯 萎 病 菌 侵 染 后 棉 苗 叶 片 和 根 茎 部 不 同 细 胞 定 位 过 氧 化 物 酶 (POD) 活 性 的 变 化 结 果 表 明 :(1) 总 可 溶 性 POD 胞 内 POD 胞 间 POD 以 及 细 胞 壁 结 合 型 POD 的 活 性 抗 病 品 种 高 于 感 病 品 种 ;(2) 氟 乐 灵 诱 发 处 理 及 枯 萎 病 ( 宋 凤 鸣 等,1997) 田 间 试 验 在 棉 花 苗 病 和 枯 萎 病 常 年 发 病 田 进 行 以 175ml48% 氟 乐 灵 乳 油 /666.7m2 的 剂 量 处 理 苗 床 地 表 土, 播 种 棉 籽 后 以 含 氟 乐 灵 (1.-1.5mg 有 效 成 分 /kg 土 ) 的 土 壤 覆 盖 以 清 水 处 理 为 对 照, 结 果 表 明 L 氟 乐 灵 处 理 组 的 出 苗 率 高 于 对 照 ( 宋 凤 鸣 等,1995) 5.3 增 抗 剂 用 83 增 抗 剂 防 治 西 瓜 枯 萎 病, 试 验 结 果 表 明,83 增 抗 剂 对 西 瓜 枯 萎 病 具 有 较 好 的 防 治 效 果, 且 增 产 显 著 使 用 方 法 : 种 子 处 理 用 5kg 种 姜 拌 4g 菌 剂 ; 灌 根 用 6kg/hm2 剂 量, 对 水 5 倍 ( 卢 灿 坤 等,1999) 3.4- 亚 甲 二 氧 基 苯 甲 酸 酯, 是 一 种 重 要 的 精 细 化 学 品, 广 泛 地 用 作 合 成 香 料, 高 档 防 霉 抗 菌 剂, 抗 肿 瘤 和 防 治 高 血 压 的 药 物, 以 及 治 疗 小 麦 粉 锈 病, 柑 桔 菌 致 枯 萎 病 等 植 物 病 症 高 效 农 药 的 中 间 5.4 种 子 胞 衣 用 本 所 研 制 的 蔬 菜 种 衣 剂 对 黄 瓜 黑 星 病 发 疽 病 枯 萎 病 菌 核 病 马 铃 薯 晚 疫 病 病 菌 进 行 杀 菌 效 果 试 验, 抑 菌 率 达 67-1%, 差 异 极 显 著 ; 对 经 包 衣 处 理 的 黄 瓜 种 子 进 行 表 面 和 内 部 杀 菌 效 果 试 验, 灭 菌 效 果 达 1% ( 马 文 荷 等,1999) 棉 花 枯 萎 病 首 先 于 1891 年 在 美 国 亚 拉 巴 马 州 发 现, 现 在 除 澳 大 利 亚 外 几 乎 遍 及 世 界 各 产 棉 国 抗 病 机 制 是 由 于 物 理 阻 碍 或 化 学 抑 菌 作 用 所 致, 或 者 是 两 者 同 时 存 在 的 结 果, 但 化 学 抑 菌 起 着 主 导 作 用 ( 何 旭 平 等,1999) 6 农 作 物 枯 萎 病 的 农 业 防 治 6.1 嫁 接 砧 木 用 六 个 常 用 的 南 瓜 (Cucurbita moschata Duch.) 砧 木 品 种 嫁 接 网 纹 甜

17 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 17 瓜 (Cucumis melo L.var reticulatus Nand.) 试 验 结 果 表 明 : 网 纹 甜 瓜 嫁 接 后, 可 大 大 降 低 枯 萎 病 (Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum),( 陈 幼 源 等,22) 6.2 家 畜 沤 肥 家 畜 沤 肥 浸 渍 液 对 黄 瓜 枯 萎 病 具 有 一 定 的 防 治 效 果, 猪 粪, 马 粪 和 牛 粪 沤 肥 浸 渍 液 的 防 治 效 果 分 别 为 %, % 和 % 机 理 研 究 结 果 表 明 :(1) 沤 肥 浸 渍 液 对 黄 瓜 枯 萎 病 菌 的 小 孢 子 萌 发 具 有 明 显 的 抑 制 效 果 ( 马 利 平 等,1999) 家 畜 沤 肥 浸 渍 液 对 青 枯 萎 病 具 有 显 著 防 治 效 果, 其 中 猪 粪 沤 肥 浸 液 在 温 室 盆 栽 的 防 治 效 果 为 88.5%, 马 粪 牛 粪 沤 肥 浸 渍 液 在 温 室 盆 栽 的 防 治 效 果 分 别 为 56.6% 和 65.5%( 马 利 平 等,21) 6.3 无 土 栽 培 在 无 土 栽 培 条 件 下 对 不 同 的 网 纹 甜 瓜 品 种 进 行 两 种 不 同 的 整 枝 方 法 和 没 的 单 株 留 瓜 数 试 验, 结 果 表 明 : 双 杆 整 枝 株 2 个 瓜 的 产 量 最 高 果 实 品 质 也 较 理 想 ; 但 以 单 杆 整 枝 朱 留 1 个 抓 的 果 实 外 观 可 深 性 固 形 物 含 量 果 实 秀 品 率 等 品 质 指 标 都 最 好 ( 陈 幼 源 等,2) 6.4 控 施 氮 肥 在 相 同 环 境 条 件 下, 观 察 了 施 肥 种 类 数 量 时 期 方 法 对 蔬 菜 西 瓜 病 虫 害 发 生 危 害 衣 其 产 量 的 影 响 结 果 表 明, 花 椰 菜 黑 腐 病 菜 青 虫 西 瓜 枯 萎 病 的 危 害 随 施 氮 量 增 加 而 严 重, 当 施 氮 量 吻 合 作 物 各 个 品 种 的 耐 肥 能 力 时, 病 虫 危 害 显 著 减 轻, 增 产 率 明 显 提 高 ( 陈 一 杭 等,1995) 6.5 金 属 阳 离 子 林 福 呈 等 研 究 了 五 种 二 价 金 属 阳 离 子 化 合 物, 即 CaC12,MgC12, CuSO4,MnC12 和 CoC12 对 西 瓜 枯 萎 病 菌 厚 垣 孢 子 发 芽 管 生 长 的 影 响 ( 林 福 呈 等,1996) 6.6 生 物 液 肥 报 道 腐 植 酸 类 液 肥 生 物 活 性 的 3 种 检 验 方 法,(1) 用 大 蒜 水 培 法 测 定 促 进 作 物 生 长 ;(2) 用 菜 豆 有 或 黄 瓜 的 叶 片 测 定 气 孔 开 张 度 ;(3) 用 棉 花 黄 萎 病 菌 和 枯 萎 病 菌 平 皿 培 养 法 作 抑 菌 和 杀 菌 试 验, 这 些 方 法 的 效 果 很 显 著 并 与 腐 植 酸 浓 度 相 关 ( 边 文 骅 等,1999) 在 保 护 地 黄 瓜 栽 培 中 应 用 禾 康 生 物 液, 对 真 菌 性 病 害 进 行 防 治 效 果 试 验, 结 果 表 明 : 禾 康 生 物 液 稀 释 5 倍, 采 用 浸 种 方 法 处 理, 防 治 立 枯 病 效 果 达 到 94.77%; 稀 释 1 倍 用 其 灌 根, 防 治 枯 萎 病 效 果 达 到 91.79%( 马 晓 军 等,1998) 6.7 稀 土 肥 料 本 试 验 对 稀 土 提 高 棉 花 抗 枯 萎 病 和 增 产 作 用 进 行 了 研 究, 结 果 表 明,3mg/kg 稀 土 溶 液 处 理 种 了, 发 病 率 可 降 低 18.96~11.45%, 病 情 指 数 降 低 25.6~17.43, 相 对 防 效 分 别 为 29.19~39.3% 西 瓜 专 用 药 肥 92-4 在 西 瓜 重 点 产 区 经 几 年 多 点 试 验 示 范, 结 果 证 明 在 一 般 轮 作 栽 培 条 件 下, 每 亩 用 4kg 穴 施 作 基 肥, 具 有 明 显 的 刺 激 西 瓜 生 长, 促 进 早 熟 高 产 的 作 用, 示 范 田 平 均 每 亩 增 产 商 品 瓜 435kg, 增 产 率 34.8% 对 西 瓜 枯 萎 病 的 大 田 防 治 效 果 平 均 达 67%( 储 国 良 等,1994) 6.8 播 种 期 调 节 抑 病 对 棉 花 抗 感 枯 萎 病 品 种 在 春 播 和 夏 播 的 2-3 叶 期 6-7 叶 期 和 现 蕾 期 进 行 了 根 际 真 菌 区 系 分 析, 结 果 表 明 : 第 一 品 种 都 有 自 己 独 特 的 根 际 真 菌 区 系, 抗 病 品 种 根 际 真 菌 种 数 多 于 感 病 品 种, 其 根 际 主 要 优 势 种 是 : 青 霉 (Penicillum pps.) 曲 霉 (Asqergillus spp.) 等,( 李 洪 连 等,1991) 据 研 究 表 明, 随 着 棉 花 移 栽 时 苗 龄 的 增 加, 枯 萎 病 的 发 病 率 病 指 均 极 显 著 地 减 小, 且 壮 苗 的 发 病 率 病 指 都 低 于 弱 苗 棉 花 枯 萎 病 的 发 病 期 发 病 高 峰 移 栽 时 间 关 系 不 大 因 此, 棉 花 采 取 大 苗 壮 苗 适 当 迟 栽, 既 能 推 迟 枯 萎 病 的 发 病 期, 又 能 有 效 地 降 低 发 病 率, 减 轻 发 病 程 度 ( 沈 万 陆 等,1995) 7 农 作 物 枯 萎 病 的 抗 性 育 种 7.1 杂 交 育 种 杂 交 育 种 包 括 了 双 列 杂 交 有 性 杂 交 复 合 杂 交 等 孙 玉 宏 等 综 述 了 甜 瓜 对 枯 病 的 抗 性 表 现 鉴 定 方 法 及 遗 传 多 样 性, 归 纳 了 甜 瓜 抗 枯 萎 病 的 复 合 杂 交 方 法 及 所 取 得 的 成 就, 展 望 了 我 国 甜 瓜 抗 枯 萎 病 育 种 的 发 展 趋 势 ( 孙 玉 宏 等,2) 对 2 余 份 黄 瓜 品 种 资 源 进 行 抗 病 性 鉴 定, 筛 选 出 优 良 自 交 系 451 和 Q12-2, 并 配 制 成 一 代 杂 种 - 津 优 1 号 其 植 株 长 势 强, 以 主 蔓 结 瓜 为 主, 第 一 雌 花 着 生 在 第 4 节 左 右, 瓜 条 么 棒 形, 长 约 36cm, 单 瓜 重 约 2g, 瓜 把 约 为 瓜 长 的 1/7, 瓜 皮 深 绿 色 ( 马 德 华 等,1997) 7.2 抗 病 基 因 转 育 抗 病 基 因 转 育 包 括 了 耐 枯 育 种 低 酚 育 种 自 然 变 异 选 择 转 基 因 育 种 等, 通 过 抗 病 基 因 的 分 析, 建 立 寄 主 抗 病 株 系, 通 过 杂 交 转 育, 将 目 标 抗 性 基 因 转 入 农 艺 形 状 优 良 的 品 种 丰 乐 5 号 是 经 抗 病 基 因 转 育 结 合 多 代 病 圃 筛 选 后, 选 配 的 1 代 优 质, 高 产 且 高 抗 枯 萎 病 的 西 瓜 新 品 种, 该 品 种 早 熟, 全 生 育 期 9 天, 雌 花 开 放 至 果 实 成 熟 3~31 天, 果 实 椭 圆 形, 浅 黑 色 底 上 覆 盖 暗 条 带, 平 均 单 瓜 重 4 ~ 5kg, 单 产 4kg/667m 2 ( 戴 祖 云 等,1998) 用 具 有 目 标 性 状 的 不 同 抗 性 材 料, 采 用 多 亲 杂 交 和 回 交 方 法, 经 病 圃 定 向 选 择, 选 育 出 2 个 抗 病 新 材 料 和 对 2 个 抗 性 材 料 遗 传 规 律 的 研 究 表 明 : 不 同 抗 性 材 料 其 杂 交 组 合 所 表 现 的 遗 传 规 律 不 一 样 ( 张 国 良 等,1999) 7.3 辐 射 诱 变 育 种 辐 射 诱 变 是 西 瓜 育 种 方 法 之 一 在 本 试 验 中 用 6 照 射 西 瓜 种 子, 适 宜 的 剂 量 为 376GY 剂 量 率 为 GH/min 处 理 西 瓜 干 种 子 容 易 操 作, 本 试 验 未 能 获 得 理 想 的 抗 病 突 变 体, 但 获 得 了 1 个 无 杈 有 用 的 突 变 体 ( 黄 学 森 等,1995) 7.4 DNA 导 入 利 用 外 源 DNA 导 入 优 良 品 种, 产 生 抗 枯 萎 病 的 突 变 株, 获 得 抗 性 品 种 采 用 DNA 浸 胚 法 将 供 本 瓠 瓜 的 总 DNA 导 入 西 瓜,D1 代 获 得 一 变 异 株, 变 异 率 为.32%,D2 代 是 植 株 成 株 期 功 能 叶 过 氧 化 物 酶 同 工 酶 酶 带 数 增 加, 出 现 了 供 体 植 株 的 酶 带, 变 异 株 部 分 染 色 体 的 臂 长 臂 比 带 型 与 受 体 相 比 产 生 了 明 显 的 差 异 ( 肖 光 辉 等,1999) 用 瓠 瓜 DNA 导 入 西 瓜 选 育 出 的 抗 性 材 料 来 亲 本, 与 性 状 优 良 的 西 瓜 品 种 或 材 料 选 配 了 24 个 杂 交 组 合 在 病 圃 中 经 小 区 测 试 和 品 比 试 验, 筛 选 出 5 个 优 良 组 合, 各 组 合 不 仅 在 病 圃 中 的 产 量 均 极 显 著 高 于 3 个 对 照 品 种 ( 肖 光 辉 等,1999) 7.5 抗 性 遗 传 规 律 通 过 对 抗 病 品 种 的 表 现 型 特 征 形 状 进 行 分 析, 研 究 抗 性 遗 传 规 律, 揭 示 抗 性 特 征 肖 光 辉 等 概 述 了 近 年 来 在 西 瓜 枯 萎 病 抗 性 遗 传 规 律 研 究, 分 子 育 种 技 术 用 于 西 瓜 种 质 创 新 与 抗 枯 萎 病 育 种 以 及 野 生 西 瓜 的 利 用 等 方 面 取 得 的 重 大 进 展, 提 出 了 今 后 西 瓜 抗 枯 萎 病 育 种 的 主 要 研 究 方 向 ( 肖 光 辉 等,21) 采 用 Grifring 双 列 杂 交 方 法 Ⅱ, 对 西 瓜 枯 萎 病 上 有 不 同 抗 性 的 7 个 品 种 之 后 代 的 抗 性 表 现 进 行 研 究, 结 果 表 明, 西 瓜 品 种 对 枯 萎 病 的 抗 性 属 数 量 性 状, 抗 病 性 由 隐 性 多 基 因 控 制, 其 遗 传 效 应 符 合 加 性 - 显 性 模 型, 以 加 性 效 应 为 主, 且 感 病 对 抗 病 表 现 部 分 显 性 ( 于 利 等,1995) 采 用 高 抗 枯 萎 病 西 瓜 品 种 一 依 姆 波 利 亚, 在 重 茬 西 瓜 田 种 植, 将 全 生 育 期 枯 萎 病 Fusarium oxysporum Schlum schi.f.sp.niveum snyder et Hansen 枯 死 株 控 制 在.8%, 公 顷 产 西 瓜 达 68.25t( 鲁 占 魁 等,1997) 7.6 抗 性 基 因 分 析 用 生 物 间 遗 传 学 原 理 和 方 法 对 7 个 西 瓜 品 种 进 行 苗 期 人 工 接 种 鉴 定, 病 原 菌 采 用 由 全 国 不 同 地 区 搜 集 的 西 瓜 枯 萎 病 菌 的 1 份 单 孢 分 离 物 根 据 病 性 情 指 数 直 接 推 导 出 西 瓜 品 种 和 病 原 分 离 物 的 基 因 型 结 果 表 明 :7 个 西 瓜 品 种 和 1 份 病 析 菌 之 间 至 少 存 在 6 个 相 应 基 因 对 ( 王 浩 波 等,1994) 7.7 抗 性 鉴 定 方 法 抗 性 鉴 定 方 法 包 括 了 孢 子 液 水 倍 法 混 合 接 种 病 原 菌 液 梯 度 浓 度 接 种 粗 提 毒 素 对 组 织 器 官 的 抑 制 病 原 致 病 性 测 定 等 方 法, 对 抗 性 品 种 的 发 病 特 性 形 态 特 征 等 位 基 因 作 出 分 析 采 用 不 同 棉 萎 病 菌 系 及 枯 萎 病 菌 系, 对 新 种 质 川 737 川 282 进 行 病 圃 抗 性 鉴 定 及 不 同 区 域 的 抗 性 测 定 研 究 结 果 表 明, 川 737 川 282 对 我 国 棉 黄 萎 病 三 大 生 理 型 11 个 不 同 菌 系 的 抗 性 均 好, 又 抗 落 叶 型 棉 黄 萎 病, 并 高 抗 棉 枯 萎 病 ( 雷 鸣 等,1994) 黄 河 区 试 长 江 抗 病 区 试 麦 套 棉 区 试 和 夏 棉 区 试 三 轮 试 验 的 6 个 品 种 的 抗 现 性 鉴 定 结 果 表 明, 参 谋 品 种 的 抗 枯 萎 病 性 水 平 较 高, 而 抗 黄 萎 病 性 和 兼 抗 性 水 平 较 低 9 年 代 以 来 参 谋 品 种 的 抗 病 性 发 展 趋 势 为 抗 枯 萎 病 性 在 达 到 较 高 水 平 后 趋 于 稳 定 ; 抗 黄 萎 病 性 和 兼 抗 性 为 上 升 ( 朱 荷 琴 等,1998). 8 经 济 作 物 枯 萎 病 的 研 究

18 18 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 8.1 蓖 麻 枯 萎 病 蓖 麻 枯 萎 病 病 原 菌 的 分 离 鉴 定 表 明 病 原 菌 为 尖 孢 镰 刀 菌 蓖 麻 专 化 型 该 菌 分 生 孢 子 萌 发 适 温 25-28, 相 对 湿 度 为 1% 萌 发 和 生 长 最 适 PH 值 为 6-7, 条 件 适 宜 4 小 时 产 生 芽 突,6 小 时 萌 发 率 达 7.2%, 致 死 温 度 和 时 间 分 别 为 55,2 分 钟 和 6,( 刘 雪 静 等,1996) 应 用 多 元 回 归 法 分 析 了 蓖 麻 枯 萎 病 发 病 率 与 大 气 平 均 相 对 湿 度 及 1cm 平 均 地 温 的 关 系, 分 析 表 明 : 低 温 高 湿 及 地 温 下 降 均 使 病 株 率 增 加,8 月 末 大 气 平 均 相 对 湿 度 降 低, 病 株 率 下 降 ( 吴 国 林 等,21) 8.2 胡 麻 枯 萎 病 (1) 抗 性 品 种 对 胡 麻 18 个 抗 病 性 不 同 的 材 料 进 行 田 间 自 然 病 圃 发 病 率 调 查, 以 总 枯 死 率 为 依 据, 经 方 差 分 析 划 分 为 4 种 抗 性 类 型 即 总 枯 死 率 小 于 9% 为 高 抗 型 (HR),19%-37% 为 中 抗 型 (MR),46%-65% 为 中 感 型 (MS),8%-87% 为 高 感 型 (HS); 应 用 中 各 类 型 又 划 分 为 3 个 抗 病 等 级 ( 郭 世 华 等,22) 1978 年 以 来 通 过 种 质 资 源 鉴 定 新 品 种 选 育 杂 交 育 种, 推 荐 了 丰 产 优 质 抗 病 的 优 良 品 种 12 个 1985 年 以 来 累 计 推 广 面 积 225 多 万 亩, 基 本 控 制 了 胡 麻 枯 萎 病 蔓 延, 稳 定 胡 麻 生 产, 增 产 增 效 明 显 ( 陈 鸿 山 等,1995) 采 用 17 个 从 北 美 新 引 进 的 胡 麻 品 种 ( 系 ), 在 自 然 重 病 地 上 进 行 了 抗 枯 萎 病 性 能 的 研 究, 结 果 表 明, 新 引 进 品 种 ( 系 ) 间 抗 枯 萎 病 性 能 虽 有 差 异, 但 均 属 抗 病 类 型, 它 们 的 生 物 产 量 低 于 当 地 高 抗 枯 萎 病 主 栽 品 种 陇 亚 7 号 ( 党 占 海 等,1997) (2) 病 害 防 治 运 用 5 种 聚 集 度 指 标 分 析 了 胡 麻 枯 萎 病 的 田 间 分 布 型, 结 果 表 明 胡 麻 枯 萎 病 株 呈 聚 集 分 布,( 甘 国 福 等,1996) 刘 珊 等 报 道 了 内 蒙 古 鄂 托 克 前 旗 麻 黄 种 植 田 的 主 要 病 虫 害 : 枯 萎 病, 菟 丝 子, 蚜 虫, 金 龟 子 等, 及 其 生 长 规 律, 并 提 出 了 防 治 措 施 建 议 ( 刘 珊 等,1998) 8.3 芝 麻 枯 萎 病 (1) 抗 原 筛 选 八 五 期 间, 在 不 同 生 态 区 的 14 个 试 验 点, 连 续 三 年 对 七 五 筛 选 出 的 各 类 芝 麻 优 良 资 源 225 份 深 化 鉴 定 与 综 合 评 价, 选 出 稳 定 优 异 资 源 55 份 其 中 具 有 稳 定 高 耐 渍 高 抗 茎 点 枯 病 和 高 抗 枯 萎 病 的 多 抗 一 资 源 1 份 (WZM1523 缅 甸 黑 芝 麻 )( 冯 祥 运 等,1996) 年, 对 八 五 期 间 收 集 的 芝 麻 种 质 资 源 初 鉴 获 得 的 高 抗 茎 点 枯 病 和 高 抗 枯 萎 病 种 质 共 85 份 及 4 个 育 种 单 位 提 供 的 8 个 新 品 系, 在 芝 麻 主 产 区 三 个 生 态 试 验 点 ( 病 圃 ) 进 行 了 鉴 定 评 价, 均 与 当 地 优 良 品 种 比 较, 评 价 出 抗 性 稳 定 相 对 病 情 指 数 <15% 的 抗 茎 点 枯 病 品 种 ( 张 秀 荣 等,21) (2) 抗 性 品 种 采 用 有 性 杂 交 选 育 出 的 芝 麻 新 品 种 漯 12, 河 南 省 区 平 均 产 量 111kg/hm 2, 比 对 照 豫 芝 4 号 增 产 6.% : 省 生 产 试 验 平 均 产 量 922.5kg/hm 2, 比 对 照 豫 芝 4 号 增 产 13.7%, 其 稳 产 性 优 于 对 照 豫 芝 4 号 抗 枯 萎 病, 茎 点 枯 病 叶 斑 病, 籽 粒 纯 白, 粗 脂 肪 含 量 58.34%, 粗 蛋 白 含 量 17%( 张 仙 美 等, 22) 豫 芝 八 号 在 年 5 年 试 验 中, 平 均 亩 产 57.73kg, 比 对 照 平 均 增 产 19.43%, 其 稳 产 性 优 于 对 照 种 豫 芝 二 号 和 豫 芝 四 号 ; 高 抗 茎 点 枯 病, 叶 斑 病, 抗 枯 萎 病 ; 含 油 量 55.59%, 分 别 比 豫 芝 二 号 和 豫 芝 四 号 高 1.54 和 1.3 个 百 分 点 ( 卫 文 星 等,1993) 豫 芝 11 号 在 年 5 年 试 验 中, 平 均 亩 产 67.21kg, 比 对 照 豫 芝 4 号 9 平 均 亩 产 62.27kg) 增 产 7.93%, 其 稳 产 性 优 于 豫 芝 4 号, 高 抗 枯 萎 病, 茎 点 枯 病 和 叶 斑 病 ; 籽 粒 纯 白, 含 油 量 56.66%( 卫 文 星 等,1999) (3) 病 害 防 治 经 不 同 施 药 方 法 的 药 害 测 定 和 田 间 防 效 试 验 表 明, 多 菌 灵 可 湿 性 粉 剂.3% 拌 种, 加 其 3% 复 方 胶 悬 剂 1 倍, 于 夏 芝 麻 初 花 期 常 量 喷 防 两 次, 在 重 茬 2-3 年 的 病 地 可 有 效 控 制 估 萎 病 死 苗 和 整 个 生 长 期 危 害, 相 对 防 效 87.7%, 促 苗 增 重 %( 靳 利 民 等,1993) 8.4 荸 荠 枯 萎 病 (1) 病 原 分 离 荸 荠 枯 萎 病 是 一 种 毁 灭 性 病 害, 近 几 年 在 闽 南 发 生 严 重 为 明 确 该 病 的 病 原, 于 年 在 福 建 省 龙 海 市 荸 荠 产 区 采 集 枯 萎 病 标 样 258 份, 经 分 离 培 养, 致 病 力 测 定 和 形 态 特 征 观 察 等 试 验 表 明, 此 病 原 是 尖 孢 镰 刀 菌, 分 离 频 率 达 1%( 李 本 金 等,1999) (2) 病 原 特 性 年 从 广 州 南 海 市 采 集 荸 荠 枯 萎 标 本, 经 分 离, 纯 化, 鉴 定 和 致 病 性 测 定, 证 实 其 病 原 为 尖 孢 镰 刀 菌 的 荸 荠 专 化 型 寄 主 范 围 测 定 结 果 表 明, 被 接 种 的 16 种 植 物 中 仅 有 荸 荠 发 病 该 病 菌 分 生 孢 子 萌 发 的 温 度 范 围 为 8-36 最 适 温 度 28-3 ( 刘 爱 媛 等,1999) (3) 发 生 防 治 王 文 相 等 介 绍 了 荸 荠 枯 萎 病 的 症 状 形 态 流 行 规 律 和 影 响 因 素 药 剂 筛 选 结 果 表 明 :5% 果 病 克 36% 粉 霉 灵 和 多 霉 灵 对 该 病 菌 有 较 好 的 效 果 并 制 定 出 一 套 防 治 方 法, 经 过 1997~1999 年 的 实 践, 取 得 较 好 的 防 病 效 果 ( 王 文 相 等,2) 8.5 唐 菖 蒲 枯 萎 病 根 据 近 几 年 来 的 唐 菖 蒲 栽 培 经 验, 清 水 地 区 唐 菖 蒲 露 地 栽 植 中 的 病 害 主 要 有 如 下 几 种, 现 从 发 病 症 状 病 原 体 发 病 规 律 和 防 治 方 法 方 面 作 简 要 说 明 ( 李 渭 华 等,21) 8.6 草 坪 草 枯 萎 病 (1) 病 害 调 查 根 据 坪 用 早 熟 禾 枯 萎 病 症 状 分 离 菌 培 养 性 状 及 形 态 和 致 病 性 测 定 结 果, 诊 断 出 访 该 病 是 由 早 熟 禾 镰 孢 菌 所 致 ; 用 代 森 锰 锌 多 菌 灵 和 百 菌 清 进 行 的 室 内 毒 力 测 定 结 果 表 明, 对 病 菌 孢 子 萌 发 的 抑 制 作 用 多 菌 灵 最 好, 代 森 锰 锌 次 之 ( 袁 秀 英 等,1999) 研 究 调 查 了 上 海 地 区 高 羊 茅, 草 地 早 熟 禾, 多 年 生 黑 麦 草, 葡 匐 剪 股 颖 等 主 要 冷 季 型 草 坪 草 病 害 发 生 情 况 鉴 定 出 8 种 主 要 病 害, 其 中 早 熟 禾 枯 萎 病, 黑 麦 草 和 高 羊 在 部 分 草 坪 上 发 生 严 重, 翦 股 颖 上 没 发 现 严 重 病 害 ( 马 忠 华 等,1999) 对 杭 州 不 同 地 区 不 同 种 类 的 草 坪 的 病 害 危 害 程 度 进 行 调 查 结 果 表 明 : 杭 州 地 区 主 要 草 坪 病 害 为 7 种 并 对 这 些 病 害 提 出 综 合 防 治 方 法 ( 马 进 等,21) (2) 病 害 防 治 张 玉 琴 等 阐 述 了 腐 霉 枯 萎 病 的 分 布 病 症, 以 及 引 起 腐 霉 枯 萎 病 不 同 病 症 的 几 种 主 要 致 病 种, 介 绍 了 该 病 的 发 生 发 展 规 律 及 预 测 预 报 方 法, 指 出 腐 霉 枯 萎 病 的 防 治 策 略 是 预 防 为 主 综 合 防 治, 并 对 腐 霉 枯 萎 病 的 化 学 防 治 生 物 防 治 和 生 态 防 治 进 行 了 总 结 ( 张 玉 琴 等,22) 采 用 人 工 接 种 和 自 然 发 病 相 结 合, 促 进 草 坪 草 染 病 和 病 情 严 重, 通 过 病 情 调 查 发 现 草 地 早 熟 禾 紫 羊 茅 高 羊 茅 和 多 年 生 黑 麦 草 对 腐 霉 枯 萎 病 感 性 有 差 异, 它 们 分 别 代 表 极 感 高 感 中 感 和 低 感 类 型 ; 用 5g/666.7m2 药 量 喷 雾, 可 基 本 控 制 后 3 种 草 坪 草 的 病 情 ( 穆 合 塔 尔 等,2) 呼 和 浩 特 市 草 坪 发 生 的 病 害 主 要 有 枯 萎 病 叶 斑 病 叶 锈 病 危 害 最 重 的 是 枯 萎 病, 该 病 导 致 草 坪 草 枯 黄, 形 成 大 小 不 等 的 秃 斑, 发 病 初 期 喷 施 代 森 锰 锌 与 多 菌 灵 混 合 液 或 用 代 森 锰 锌 均 治 效 果 明 显 ; 叶 斑 病 的 发 病 率 较 高, 不 同 草 种 和 品 种 都 有 感 染,( 袁 秀 英 等,2) 8.7 亚 麻 草 枯 萎 病 (1) 发 生 规 律 从 亚 麻 枯 萎 病 的 发 生 发 展 危 害 病 原 菌 传 播 途 径 到 病 害 综 合 防 治, 进 行 了 系 统 研 究, 明 确 了 该 病 的 发 生 与 品 种 土 壤 类 型 及 气 象 因 素 等 诸 方 面 的 关 系, 为 病 害 防 治 提 供 了 理 论 依 据 ; 也 明 确 了 带 菌 土 壤 和 种 子 是 该 病 害 主 要 侵 染 源 和 传 播 途 径, 用 药 剂 防 治 效 果 可 达 8% 以 上 ( 杨 学 等,22) 通 过 田 间 系 统 调 查, 病 原 分 离 与 回 接 观 察, 病 田 土 壤 生 物 测 定 及 盆 栽 或 病 圃 鉴 定, 结 果 表 明 : 病 原 主 要 是 尖 孢 镰 刀 菌 芬 芳 变 种, 还 有 燕 麦 镰 刀 菌 和 茄 病 镰 刀 蓝 色 变 种, 经 土 壤 越 冬, 侵 染 除 亚 麻 外 还 危 害 豌 豆 等 作 物, 无 专 化 性, 但 有 明 显 的 分 布 区 域 性 ( 孟 兆 军 等,1997) (2) 抗 性 鉴 定 采 用 自 然 重 病 田, 客 土 圃 和 人 工 接 菌 病 圃 同 进 步 行 抗 病 性 鉴 定 的 方 法, 对 近 2 个 亚 麻 品 种 ( 系 ) 和 常 用 品 种 资 源 的 抗 枯 萎 病 性 进 行 了 鉴 定 从 全 国 亚 麻 区 试 的 31 个 品 种 ( 系 ) 中 筛 选 出 8 个 高 抗, 丰 产 良 种 ( 系 ); 从 国 内 育 种 单 位 选 育 的 97 个 新 品 系 和 53 个 常 用 品 种 资 源 ( 刘 信 义 等,1993) 伊 亚 2 号 是 以 油 用 品 种 喀 什 为 母 本, 高 抗 枯 萎 病 的 油 纤 兼 用 加 拿 大 品 种 红 木 65 为 父 本, 经 杂 交 单 株 选 择 和 集 团 选 择,

19 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 19 南 繁 加 代 异 地 鉴 定 选 育 而 成, 该 品 种 具 有 籽 粒 产 量, 原 茎 产 量, 含 油 率 高, 高 抗 枯 萎 病 和 工 艺 长 度 长 特 点 ( 李 睿 先 等,1995) (3) 抗 性 品 种 亚 麻 新 品 系 ( 亲 本 组 合 为 / 美 国 亚 麻 ) 是 庆 阳 地 区 农 科 所 1991 年 从 山 西 省 农 科 院 高 寒 区 作 物 所 引 进 后 经 过 多 年 选 育 而 成 该 品 系 在 品 鉴 品 比 区 试 以 及 全 省 联 合 区 试 中, 折 合 平 均 产 量 kg( 李 科 等,2) 天 亚 5 号 系 经 复 合 杂 交 选 育 而 成 的 油 纤 兼 用 亚 麻 品 种 通 过 导 入 抗 病 基 因, 在 充 分 发 病 条 件 下 的 严 格 选 择, 使 其 具 有 高 抗 枯 萎 病 的 性 能 该 品 种 果 多 粒 大 粒 多, 丰 产 性 好, 在 区 域 试 验, 生 产 试 验 和 大 面 积 示 范 推 广 中, 增 产 效 果 均 显 著 ( 周 祥 椿 等,1995) 坝 亚 七 号 由 加 拿 大 红 木 65 为 母 木, 本 所 育 成 品 系 为 父 本 有 性 杂 交, 系 统 选 择 育 种, 该 品 种 经 张 家 口 区 试, 生 产 鉴 定 和 生 产 示 范, 表 现 高 抗 亚 麻 枯 萎 病, 高 产, 籽 实 含 油 量 高 一 般 单 产 kg/hm^2, 最 高 单 产 kg/hm^2, 籽 实 含 油 是 43.64%, 是 *( 米 君 等,21) 围 绕 高 产, 抗 亚 麻 枯 萎 病 和 油 纤 两 用 的 育 种 目 标, 利 用 复 式 杂 交 选 育 出 天 亚 7 号 亚 麻 新 品 种, 并 且 在 自 然 和 人 工 病 圃 内 进 行 了 抗 亚 麻 枯 萎 病 的 鉴 定 在 品 比 和 区 试 过 程 中, 天 亚 7 号 表 现 显 著 增 产, 籽 实 含 油 率 达 41.9%( 张 金 等,1998) 8.8 一 品 红 通 过 病 原 菌 致 病 性 测 定 形 态 鉴 定, 确 认 一 品 红 枯 萎 病 是 由 尖 孢 镰 刀 菌 引 起 采 用 浸 根 接 种 法 和 灌 根 接 种 法 进 一 步 对 该 菌 进 行 寄 主 范 围 测 定 试 验, 被 接 种 的 11 个 科 14 种 植 物 中 仅 有 一 品 红 发 病, 故 鉴 定 该 菌 为 一 独 立 的 专 化 型 -- 尖 孢 镰 刀 菌 一 品 红 专 化 型 ( 姜 子 德 等,1996) 8.9 香 蕉 香 蕉 枯 萎 病 Fusarium oxysporum Schlum f..cubense(e.f.smith) Suyder et Hasen 在 福 建 为 首 次 记 录, 描 述 了 病 害 症 状 病 原 菌 形 态 学 和 生 物 学 特 性, 并 采 用 麦 粒 培 养 物 一 香 蕉 组 培 苗 进 行 了 致 病 性 快 速 测 定 ( 林 时 迟 等,2) 9 豆 类 枯 萎 病 的 研 究 9.1 抗 性 品 种 对 332 份 入 库 菜 豆 资 源 进 行 炭 疽 病 和 枯 萎 病 的 苗 期 抗 病 性 鉴 定, 对 328 份 菜 豆 嫩 荚 作 营 养 成 分 分 析, 并 对 七 五 期 间 通 过 抗 病 性 鉴 定 和 营 养 养 分 分 析 的 218 份 材 料 进 行 重 复 鉴 定, 在 此 基 础 上 将 筛 选 的 优 异 资 源 材 料 在 三 地 区 进 行 两 年 田 间 综 合 评 价, 最 后 获 得 12 份 可 直 接 利 用 ( 雷 蕾 等,1999) 对 93 份 有 代 表 性 的 菜 豆 资 源 材 料, 根 据 其 生 育 期, 嫩 荚 性 状, 营 养 品 质, 对 炭 疽 病 和 枯 萎 病 人 抗 性 等 11 个 性 状 的 数 据 进 行 了 聚 类 分 析, 最 后 将 其 分 为 7 组 其 中 第 Ⅶ 组 和 第 Ⅴ 组 粗 纤 维 含 量 低, 生 育 期 短, 早 熟, 蛋 白 质 含 量 高, 抗 炭 疽 病 或 枯 萎 病, 是 综 合 性 状 较 好 的 两 个 组 ( 王 素 等,1997) 1992~1993 年 将 七 五 期 间 通 过 抗 病 性 鉴 定 和 营 养 成 分 分 析 获 得 的 抗 炭 疽 病, 抗 枯 萎 病 和 蛋 白 质 含 量 高 的 材 料 共 218 份 进 行 了 重 复 鉴 定, 在 此 基 础 上 筛 选 出 的 优 异 资 源 材 料 在 3 地 进 行 了 2 年 的 田 间 综 合 评 价, 最 后 获 得 了 12 份 可 直 接 或 间 接 利 用 的 优 良 品 种 材 料 ( 王 素,1996) 9.2 抗 性 鉴 定 为 了 在 菜 豆 种 质 资 源 中 寻 找 抗 菜 豆 枯 萎 病 的 抗 源 及 其 更 为 简 单 有 效 的 抗 病 性 鉴 定 方 法, 对 一 周 苗 龄 的 菜 豆 采 用 根 后 培 养 基 糊 蘸 根 和 孢 子 悬 浮 液 蘸 根 等 5 种 方 法 进 行 接 种 鉴 定 试 验 结 果 表 明, 培 养 基 糊 蘸 根 法 发 病 快, 方 法 简 单 用 此 法 鉴 定 了 6 份 菜 豆 种 质 资 源 材 料 ( 王 素 等,1994) 采 用 通 径 分 析 方 法, 研 究 了 48 份 菜 豆 品 种 资 源 3 种 主 要 病 害 的 抗 病 性 与 7 个 农 艺 性 状 的 相 关 性 结 果 表 明 : 英 长 和 英 2 宽 对 病 毒 病 病 毒 情 指 数 的 直 接 作 用 最 大 ; 生 育 期 对 发 痘 病 病 情 指 数 的 直 接 作 用 最 大 ; 英 长 对 枯 萎 病 病 情 指 数 的 直 接 作 用 最 大 ( 徐 丽 鸣 等,1999) 采 用 相 关 分 析 和 通 径 分 析 的 方 法 研 究 了 吉 林 省 142 份 菜 豆 品 种 资 源 的 3 个 主 要 品 质 性 状 与 抗 病 性 之 间 的 关 系 结 果 表 明 : 水 分 含 量 对 枯 萎 病 的 病 情 指 数 直 接 作 用 最 大, 其 它 2 个 性 状 直 接 作 用 较 小 鲜 重 蛋 白 质 含 量 对 炭 疽 病 病 情 指 数 直 接 作 用 最 大 ( 徐 丽 鸣 等,1998) 从 国 家 八 五 期 间 菜 豆 品 种 资 源 苗 期 抗 病 性 鉴 定 及 品 种 分 析 中 筛 选 出 表 现 优 良 的 38 份 种 质, 于 两 年 进 行 田 间 病 毒 病 炭 疽 病 枯 萎 病 抗 性 鉴 定 及 经 济 性 状 鉴 定, 筛 选 出 13 份 双 抗 优 良 种 质 资 源 和 2 份 可 利 用 的 优 异 种 质 资 源 ( 雷 蕾 等,2) 9.3 发 病 规 律 于 1998 年 至 21 年 对 西 昌 市 蚕 豆 病 害 作 了 详 细 调 查 了, 包 括 蚕 豆 常 见 病 害 ; 蚕 豆 赤 斑 病 蚕 豆 褐 斑 病 蚕 豆 锈 病 蚕 豆 枯 萎 病, 蚕 豆 根 腐 病, 蚕 豆 立 枯 病, 蚕 豆 茎 基 腐 病, 及 其 种 类, 病 原 发 病 规 律 等, 在 此 基 础 上 提 出 相 应 的 防 治 对 策 ( 马 建 列 等,22) 1 瓜 类 枯 萎 病 研 究 1.1 病 原 鉴 定 (1) 复 合 侵 染 黄 瓜 枯 萎 病 和 根 结 线 虫 病 是 三 明 地 区 黄 瓜 的 2 种 重 要 病 害, 经 鉴 定 黄 瓜 枯 萎 病 的 病 原 为 尖 镰 孢 (Fusarium axysporum), 黄 瓜 根 结 线 虫 的 种 类 有 南 6 方 根 结 线 虫 (Meloiddogyne indcoginta) 爪 哇 根 结 线 虫 (M. jauanica ) 花 生 根 结 线 虫 (M. arenaria), 形 成 复 合 侵 染 ( 李 茂 胜 等,21) 年 间 对 黄 瓜 死 藤 研 究 结 果 表 明, 南 通 市 的 黄 瓜 死 藤 主 要 由 黄 瓜 枯 萎 病 [Fusarium oxysporum (Schl) f. sp. cucumerinum Owen] 与 菌 核 病 [Sclerotinia sclerotiorum (Lib.)] 复 合 侵 染 所 致 ( 梁 继 农 等,1996) 温 室 种 植 黄 瓜, 病 害 发 生 普 遍 且 种 类 繁 多, 几 乎 瓜 类 中 的 病 害, 比 如 枯 萎 病 疫 病 霜 霉 病 炭 疽 病 白 粉 病 细 菌 性 角 斑 病 等 都 极 易 发 生, 尤 以 前 4 种 病 害 最 为 严 重, 极 大 地 影 响 产 量 和 品 质, 降 低 了 菜 农 的 经 济 收 入 ( 石 鸿 文 等,21) (2) 营 养 体 亲 和 性 在 分 离 鉴 定 侵 染 黄 瓜 的 尖 孢 镰 刀 菌 的 基 础 上, 测 定 3 个 尖 孢 镰 刀 菌 菌 株 ( 包 括 6 个 专 化 型 ) 对 黄 瓜 的 致 病 性 和 营 养 体 亲 和 性 研 究 结 果 表 明, 侵 染 我 国 黄 瓜 的 尖 孢 镰 刀 菌 至 少 有 5 个 以 上 的 营 养 体 亲 和 群 (VCGs)( 王 政 逸 等,21) (3) 营 养 缺 陷 型 测 定 选 用 15 个 采 自 新 疆 不 同 地 区 的 西 瓜 枯 萎 病 菌 体, 在 含 KC13 培 养 基 上 诱 导 出 抗 氯 酸 盐 的 不 能 利 用 硝 酸 盐 营 养 体 突 变 株, 在 不 同 氮 源 培 养 上 划 分 出 nit1,nit2,nit8,nitm 和 nitx5 种 突 变 类 型, 其 中 nit1 出 现 频 率 最 高 ( 王 冬 梅 等,1998) (4) 致 病 毒 素 测 定 镰 刀 菌 是 枯 萎 病 菌 产 生 的 一 种 非 寄 主 特 异 性 致 病 毒 素 β- 葡 萄 糖 苷 酶 在 枯 萎 病 病 程 中 起 着 降 解 细 菌 壁 纤 维 素 破 坏 植 物 细 胞 组 织 的 作 用, 为 了 探 索 西 瓜 枯 萎 病 菌 的 镰 刀 菌 酸 产 量 和 β-1,4- 葡 萄 糖 苷 酶 活 性 与 致 病 力 的 关 系, 本 试 验 测 定 了 28 个 采 自 新 疆 的 菌 株 ( 王 纯 利 等,2) (5) 生 理 小 种 鉴 定 采 用 苗 期 浸 根 法 接 种, 对 采 自 新 疆 不 同 地 区 西 瓜 田 的 32 应 孢 镰 孢 菌 中 的 1 个 分 离 物 进 行 了 专 化 型 生 理 小 种 鉴 定 和 致 病 力 测 定 发 现 新 疆 西 瓜 枯 萎 病 菌 存 在 着 生 理 小 种 分 化, 主 要 以 1 号 小 种 主 同 一 小 种 的 不 同 菌 株 间 致 病 力 存 在 着 显 著 差 异 ( 王 冬 梅 等,1998) 也 对 来 自 合 肥 地 区 的 3 个 西 瓜 枯 萎 病 菌 菌 株 用 浸 根 接 种 法 进 行 了 生 理 小 种 分 化 鉴 定, 结 果 表 明, 危 害 合 肥 地 区 西 瓜 生 产 的 主 要 生 理 小 种 为 号 小 种, 用 毒 力 更 强 的 陕 西 三 原 菌 株 对 41 份 西 瓜 材 料 和 6 个 西 瓜 杂 交 一 代 品 种 进 行 了 抗 病 鉴 定 结 果 中 抗 材 料 5 份, 高 抗 材 料 1 份 ; 杂 交 品 种 中 丰 ( 王 浩 波 等,21) 对 在 北 京 大 兴, 顺 义, 通 县 等 西 瓜 主 产 区 采 集, 经 单 孢 分 离 得 到 的 8 个 西 瓜 枯 萎 病 菌 株 进 行 了 生 理 小 种 子 化 研 究 应 用 国 际 通 用 的 3 个 鉴 别 寄 主 Sugar Baby,charleston Gray,callhour Gray 和 国 内 京 欣 1 号, 苏 蜜 1 号 2 号 品 种 ( 周 凤 珍 等,1996) 1.2 病 害 侵 染 (1) 侵 入 途 径 对 枯 萎 病 菌 侵 入 黄 瓜 不 同 抗 性 品 种 的 途 径, 以 及 黄 瓜 受 侵 染 根 部 维 管 组 织 的 变 化 进 行 了 观 察 分 生 孢 子 在 幼 根 表 皮 上 萌 发 产 生 菌 丝, 通 过 胞 间 层 侵 入 表 皮 细 胞, 之 后 菌 丝 继 续 向 内 部 生 长, 穿 过 皮 层 组 织 进 入 导 管 受 侵 染 的 导 管 内 相 继 出 现 壁 覆 盖 物, 侵 填 体 及 褐 色 物 ( 徐 建 华 等,1997) (2) 超 微 结 构 从 超 微 结 构 水 平 上 以 枯 萎 病 对 黄 瓜 幼 根 的 侵 染 过 程 和 抗 病, 感 病 品 种 受 侵 染 后 细 胞 内 部 结 构 的 变 化 进 行 研 究, 并 探 讨 了 寄 主 细 胞 结 构 变 化

20 2 农 业 科 技 推 广 通 讯 23(6) 与 抗 病 性 的 关 系 得 出 分 生 孢 子 在 幼 根 表 皮 附 着 并 萌 发 后, 抗 病, 感 病 品 种 的 表 皮 细 胞 均 发 生 迅 速 反 应 ( 苗 琛 等,1997) (3) 种 子 带 菌 籽 瓜 种 子 带 枯 萎 病 菌 率 高 达 %, 是 新 红 宝 西 瓜 的 倍 ; 重 茬 籽 瓜 田 土 壤 致 病 率 比 重 茬 西 瓜 田 增 加 倍 ( 鲁 占 魁 等,1998) 利 用 吸 水 纸 检 验 法 对 甜 瓜 枯 萎 病 发 病 较 重 地 采 集 的 种 子 进 行 保 湿 培 养 研 究, 结 果 表 明, 供 试 种 子 携 带 多 种 病 原 真 菌, 其 中 枯 萎 菌 带 菌 率 最 高, 其 次 是 黑 根 霉 菌 黑 斑 病 菌 ; 供 试 种 子 除 表 面 带 菌 外, 种 壳 和 种 仁 内 均 可 带 菌, 而 且 种 壳 带 菌 率 明 显 高 于 种 仁 带 菌 率 ( 陈 祥 付 等,2) (4) 感 病 条 件 用 感 病 品 种 蜜 桂 为 桂 材 料, 研 究 了 西 瓜 枯 萎 病 苗 期 发 病 的 规 律 结 果 表 明 : 苗 龄 越 小, 感 病 越 重 ; 最 适 感 病 温 度 2 为 5/21 ; 最 适 感 病 湿 度 为 土 壤 持 水 量 6% 光 照 不 足 是 造 成 枯 萎 病 发 生 的 重 要 因 素 ; 伤 可 加 重 枯 萎 病 的 发 生 ( 肖 光 辉 等,1997) 1.3 抗 性 机 制 (1) 生 理 生 化 指 标 以 西 瓜 为 材 料, 研 究 了 了 西 瓜 苗 期 感 染 枯 萎 病 菌 (Fusarium oxysporum Schlecht.) 后 根 部 细 胞 内 丙 二 醛 含 量 超 氧 化 物 歧 化 酶 和 过 氧 化 氢 酶 活 性 的 动 态 变 化 结 果 表 明, 受 枯 萎 病 菌 侵 染 的 幼 苗 细 胞 内 MDA 含 量 的 增 加 比 率, 抗 病 品 种 克 伦 生 低 于 感 病 品 种 早 花 ;SOD 酶 活 性 的 下 降 ( 王 建 明 等,21) 分 析 了 枯 萎 病 病 原 菌 侵 染 西 瓜 后 幼 苗 叶 片 和 根 茎 部 组 织 中 木 质 素 与 富 含 羟 脯 氨 酸 糖 蛋 白 (HRGP) 含 量 及 其 形 成 的 相 关 酶 - 过 氧 化 物 酶 (POD) 和 苯 丙 氨 酸 解 氨 酶 (PAL) 的 活 性 变 化 结 果 表 明 : 木 质 素 与 HRGP 含 量 POD 与 PAL 活 性, 随 病 菌 的 侵 染 在 抗 感 品 种 体 ( 许 勇 等,2) 研 究 了 西 瓜 不 同 品 种 苗 期 感 染 枯 蒌 病 菌 (Fusarium oxysporum Schecht.f.sp.niveum) 后 根 部 细 胞 的 质 膜 透 性 某 些 酶 类 和 化 合 物, 以 及 光 合 色 素 含 量 的 动 态 变 化 结 果 表 明, 受 枯 蒌 病 菌 侵 染 后, 抗 病 品 种 克 伦 生 在 染 病 后 的 短 时 间 内 (48h 左 右 ) 能 使 细 胞 内 MDA 相 对 电 导 率 SOD 产 生 变 化 ( 王 建 明 等,22) 研 究 表 明 西 瓜 幼 苗 体 内 多 酚 氧 化 酶 过 氧 化 物 酶 活 性 与 西 瓜 枯 萎 病 的 抗 性 间 不 存 在 显 著 相 关 ; 而 抗 坏 血 酸 氧 化 酶 活 性 与 西 瓜 枯 萎 病 抗 性 之 间 存 在 极 显 著 相 关, 这 可 作 为 鉴 定 和 筛 选 抗 病 性 个 体 的 生 化 指 标 西 瓜 幼 苗 根 系 中 苹 果 酸 含 量 草 酸 含 量 及 有 机 酸 总 量 与 抗 病 性 不 存 在 显 著 相 关 ( 张 显 等,21) 通 过 对 田 间 多 年 观 察 和 选 育 的 哈 密 瓜 不 同 品 系 进 行 苗 期 抗 病 性 鉴 定 表 明, 在 供 试 的 8 个 哈 密 瓜 品 系 中,4D16 和 4D23 为 高 抗 品 系, 4D11 为 中 抗 品 系,D3-1 为 轻 感 品 系,D2 D2-2 D4-3 和 网 纹 香 为 高 感 品 系 ( 辛 建 华 等,1997) 对 不 同 抗 性 的 西 瓜 品 种 进 行 了 苗 期 西 瓜 枯 萎 病 菌 接 种 鉴 定, 同 时 对 种 子 和 出 土 后 子 叶 内 的 脂 肪 酸 组 分 进 行 了 气 相 色 谱 测 定 结 果 表 明, 种 子 和 出 土 后 子 叶 内 的 硬 脂 酸 相 对 含 量 与 西 瓜 品 种 的 枯 萎 率 呈 正 相 关 关 系, 即 硬 脂 酸 含 量 越 高, 品 种 的 枯 萎 率 越 高, 抗 枯 萎 病 性 越 弱 ( 王 浩 波 等,1994) (2) 抗 病 基 因 分 析 对 28 个 西 瓜 品 种 进 行 抗 枯 萎 病 筛 选 苗 期 用 特 定 浓 度 接 种, 每 隔 7d 调 查 其 感 病 情 况 及 植 株 生 长 情 况 株 高 茎 粗 叶 片 等 生 长 势 指 标 与 发 病 率 均 呈 极 显 著 负 相 关, 相 关 系 数 分 别 为 ( 王 桂 英 等,1997) 运 用 RAPD 技 术, 采 用 混 合 分 组 分 析 (bulked segregant analysis, BSA) 方 法 进 行 了 西 瓜 (Citrullus lantus (Thunb.) Mansfeld var. citroides) 野 生 种 质 PI 抗 枯 萎 病 基 因 ( 许 勇 等,1999) 将 西 瓜 野 生 种 质 PI 抗 枯 萎 病 生 理 小 种 1 的 抗 性 基 因 连 锁 的 RAPD 标 记 OPP1.7 进 行 克 隆 测 序,Southern 杂 交 证 明 此 标 记 为 1 个 单 拷 贝, 并 转 化 为 SCAR 标 记, 简 化 了 SCAR 扩 增 产 物 的 检 测 技 术 ( 许 勇 等,2) 1.4 抗 性 鉴 定 (1) 孢 子 液 水 倍 法 混 合 接 种 用 属 于 不 同 生 理 小 种 的 5 个 西 瓜 枯 萎 病 菌 分 离 物 对 抗 性 不 同 的 4 个 西 瓜 品 种 进 行 了 孢 子 液 水 倍 法 混 合 接 种 和 间 隔 诱 导 接 种 试 验 结 果 表 明, 间 隔 诱 导 接 种 由 于 存 在 交 叉 保 护 作 用, 不 宜 在 复 合 抗 性 筛 选 中 采 用 提 出 了 复 合 抗 性 筛 选 的 方 法 的 基 础 单 一 接 种 筛 选 出 高 抗 材 料 ( 王 浩 波 等,1996) (2) 病 原 菌 液 梯 度 浓 度 接 种 用 胚 根 接 种 法 和 浸 根 接 种 对 三 倍 体 无 籽 西 瓜 的 幼 苗 进 行 了 枯 萎 病 人 工 接 种 抗 性 鉴 定, 结 果 表 明, 这 2 种 方 法 均 为 无 籽 西 瓜 苗 期 枯 萎 病 抗 性 鉴 定 的 有 效 方 法, 并 确 定 了 胚 根 接 种 的 适 宜 孢 子 浓 度 为 5 1^5 个 /ml, 接 种 时 间 3min 浸 根 接 种 的 适 宜 孢 子 浓 度 为 1 1^6( 王 浩 波 等,1998) 对 生 产 中 常 用 的 4 个 西 瓜 品 种 用 西 瓜 枯 萎 病 菌 接 种 证 明 : 金 钏 贯 龙 最 感 病 ; 对 西 瓜 生 产 中 常 用 的 4 种 胺 接 砧 木, 用 梯 度 浓 度 的 西 瓜 枯 萎 病 菌 接 种 证 明 : 随 着 接 种 浓 度 增 加, 砧 木 植 物 表 现 出 不 同 的 感 病 性 ( 申 卫 星 等,1998) 利 用 温 室 盆 栽 试 验, 研 究 了 枯 萎 菌 不 同 接 种 体 含 量 与 西 瓜 枯 萎 病 发 生 的 关 系 以 及 对 瓜 苗 生 长 的 影 响 ( 宗 兆 锋 等,1996) 西 瓜 枯 萎 病 是 影 响 西 瓜 生 产 的 主 要 问 题, 种 植 抗 病 品 种 是 防 治 的 一 项 主 要 措 施 通 过 人 工 接 种 室 外 盆 栽 试 验, 对 16 个 西 瓜 品 种 进 行 了 抗 枯 萎 病 鉴 定, 明 确 了 不 同 西 瓜 品 种 抗 病 性 的 强 弱, 其 中 豫 艺 57 农 抗 1 号 早 抗 3 号 西 农 8 号 郑 抗 1 号 和 台 湾 黑 宝 等 品 种 抗 病 性 较 强, 病 情 指 数 ( 王 振 跃 等,21) 苗 期 温 室 人 工 土 壤 接 种, 对 12 个 黄 瓜 品 种 抗 枯 萎 病 鉴 定 结 果 表 明, 黄 瓜 品 种 间 抗 枯 萎 病 能 力 有 明 显 差 异, 但 没 有 发 现 高 抗 品 种 较 抗 病 的 品 种 有 长 春 密 刺, 山 东 密 刺 和 中 农 5 号, 其 他 黄 瓜 品 种 感 病 或 严 重 感 病 未 接 菌 前, 过 氧 化 物 酶 同 工 酶 带 数, 山 东 密 刺 为 8 条 ( 吴 营 昌 等,1995) 采 用 大 菌 量 对 七 星 节 瓜 进 行 多 代 人 工 接 种 和 定 向 筛 选, 选 育 出 高 抗 枯 萎 病 节 瓜 新 品 种 绿 丰 该 品 种 生 长 势 旺 盛, 早 中 熟, 第 1 雌 花 着 生 于 主 蔓 第 13 节, 果 实 圆 筒 形 深 绿 色 味 较 甜 品 质 优 良, 每 公 顷 产 量 5-6kg( 虞 皓 等,21) 对 黄 皮 西 瓜 新 品 种 湘 西 瓜 十 一 号 枯 萎 病 病 症 的 田 间 表 现 和 发 病 特 点 作 了 描 述 通 过 对 该 病 害 作 病 菌 来 源 接 种 鉴 定 等 实 验, 测 定 了 黄 皮 西 瓜 新 品 种 湘 西 瓜 十 三 号 的 苗 期 抗 性 实 验 结 果 表 明, 该 新 品 种 比 台 湾 引 进 品 种 宝 冠 较 抗 枯 萎 病 ( 肖 伏 莲 等,2) (3) 粗 提 毒 素 对 组 织 器 官 的 抑 制 甜 瓜 枯 萎 病 的 粗 提 毒 素 对 哈 密 瓜 幼 茎 愈 伤 组 织 的 形 成 有 一 定 的 抑 制 作 用, 对 抗 性 不 同 的 品 系, 这 种 作 用 呈 现 出 一 定 的 差 异, 抗 病 品 系 所 受 的 抑 制 作 用 小 于 感 病 的 品 系 另 外 基 培 养 基 中 毒 素 的 浓 度 不 同, 其 对 愈 伤 组 织 的 抑 制 作 用 也 不 相 同, 浓 度 越 高, 抑 制 作 用 越 大 ( 辛 建 华 等,1998) 通 过 比 较 1 种 具 有 不 同 枯 萎 病 抗 怀 的 黄 瓜 材 料 对 两 类 选 择 压 力 的 反 应, 确 定 离 体 抗 鉴 定 的 适 应 选 择 压 力 为 FOC(the culture filtraltes of Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum) 原 液 和 1mg/L FA(fusaric acid) 粗 制 品 溶 液, 适 宜 的 鉴 定 时 间 为 愈 伤 组 织 诱 导 期,( 赵 秀 娟 等,21) 测 定 了 黄 瓜 枯 萎 病 菌 培 养 滤 液 对 黄 瓜 胚 根 生 长 的 抑 制 作 用, 随 着 枯 萎 病 菌 系 F11 培 养 滤 液 浓 度 的 增 加, 对 津 研 4 号,Msu8519 的 长 春 密 刺 胚 根 生 长 抑 制 率 均 明 显 增 强, 经 高 温 灭 菌 的 培 养 滤 液 仍 有 较 强 的 抑 制 作 用 ( 魏 惠 军 等,1997) (4) 病 原 致 病 性 测 定 年 在 自 然 病 圃 中 观 察 了 25 个 西 瓜 品 种 对 西 瓜 枯 萎 病 的 抗 病 性, 结 果 表 明, 国 内 只 中 862F1, 是 唯 一 保 持 高 抗, 中 861F1, 新 澄 1 号 和 中 育 号 等 表 现 出 中 度 抗 性 外, 其 他 均 属 轻 抗 或 感 病 ; 而 来 自 国 外 的 抗 性 品 种 显 示 出 与 原 来 一 致 的 或 更 高 的 抗 性 ( 马 立 新 等,1993) 从 海 南 岛 种 植 区 的 西 瓜 上 分 离 到 11 个 尖 镰 孢 菌 株, 青 瓜 和 毛 瓜 上 分 离 到 3 个 尖 镰 孢 菌 株 用 胚 根 接 种 法 将 这 些 菌 株 接 种 到 西 瓜 青 瓜 和 毛 瓜 上, 以 测 定 其 对 西 瓜, 青 瓜 和 毛 瓜 的 致 病 性 结 果 表 明, 所 有 参 试 菌 株 都 可 引 致 参 试 寄 主 品 种 表 现 枯 萎 病 症 状 ( 郑 服 丛 等,1999) 1.5 抗 病 育 种 (1) 自 交 系 杂 交 孙 玉 宏 等,2 综 述 了 甜 瓜 对 枯 病 的 抗 性 表 现 鉴 定 方 法 及 遗 传 多 样 性, 归 纳 了 甜 瓜 抗 枯 萎 病 的 复 合 杂 交 方 法 及 所 取 得 的 成 就, 展 望 了 我 国 甜 瓜 抗 枯 萎 病 育 种 的 发 展 趋 势 对 2 余 份 黄 瓜 品 种 资 源 进 行 抗 病 性 鉴 定, 筛 选 出 优 良 自 交 系 451 和 Q12-2, 并 配 制 成 一 代 杂 种 - 津 优 1 号 其 植 株 长 势 强, 以 主 蔓 结 瓜 为 主, 第 一 雌 花 着 生 在 第 4 节 左 右, 瓜 条 么 棒 形, 长 约 36cm, 单 瓜 重 约 2g, 瓜 把 约 为 瓜 长 的 1/7, 瓜 皮 深 绿 色,( 马 德 华 等,1997) 津 优 21 号 是 由 自 交 系 F8-1 与 G 配 制 而 成 的 杂 交 一 代 黄 瓜 新 品 种 该 品 种 植 株 生 长 势 强, 抗 霜 霉 病