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1 药 学 学 报 Acta Pharmaceutica Sinica 2010, 45 (8): 睾 酮 对 雄 性 精 子 发 生 障 碍 大 鼠 CMTM 家 族 表 达 的 影 响 李 1, 刚 2, 李 光 艳 1, 吉 海 杰 1, 赵 文 杰 1, 楚 世 峰 1, 陈 乃 宏 1 (1. 中 国 医 学 科 学 院 北 京 协 和 医 学 院 药 物 研 究 所, 北 京 ; 2. 内 蒙 古 医 学 院, 内 蒙 古 呼 和 浩 特 ) 摘 要 : 研 究 睾 酮 对 生 精 功 能 障 碍 大 鼠 的 作 用, 以 及 对 CMTM 家 族 各 蛋 白 表 达 的 影 响 采 用 棉 酚 (50 mg kg ) 和 环 磷 酰 胺 (20 mg kg ) 建 立 大 鼠 精 子 发 生 障 碍 模 型, 给 予 丙 酸 睾 酮 (5 mg kg, 隔 日 给 药, 共 6 次 ) 后 取 左 侧 附 睾 尾, 收 集 精 子 采 用 CASA 图 像 分 析 系 统 对 精 子 进 行 数 量 和 活 力 分 析, 取 睾 丸 组 织 采 用 HE 染 色 进 行 形 态 学 检 查, 采 用 蛋 白 印 记 方 法 (Western blotting) 对 CMTM 家 族 各 成 员 进 行 蛋 白 水 平 表 达 研 究 研 究 发 现, 棉 酚 和 环 磷 酰 胺 均 可 使 睾 丸 组 织 发 生 明 显 的 病 理 改 变, 降 低 精 子 数 量 和 活 力, 而 睾 酮 (5 mg kg ) 具 有 一 定 的 改 善 作 用 研 究 CMTM 家 族 表 达 情 况 发 现, 棉 酚 和 环 磷 酰 胺 均 可 降 低 雄 性 大 鼠 睾 丸 组 织 中 CMTM4 的 表 达, 睾 酮 (5 mg kg ) 可 显 著 提 高 CMTM4 表 达 ; 棉 酚 可 显 著 增 加 睾 丸 中 CMTM2 的 表 达, 给 予 睾 酮 后 CMTM2 表 达 量 显 著 下 降, 而 环 磷 酰 胺 对 于 CMTM2 影 响 不 显 著 ; 棉 酚 和 环 磷 酰 胺 对 于 CKLF1 CMTM3 和 CMTM5 的 表 达 影 响 不 显 著, 睾 丸 组 织 中 未 检 测 到 CMTM6 CMTM7 和 CMTM8 的 表 达 研 究 结 果 表 明, 睾 酮 (5 mg kg ) 的 生 精 作 用 可 能 与 影 响 CMTM 家 族 个 别 成 员 表 达 有 关, 趋 化 因 子 CMTM2 和 CMTM4 可 能 在 精 子 发 生 过 程 具 有 作 用 关 键 词 : 睾 酮 ; CMTM; 精 子 发 生 中 图 分 类 号 : R963 文 献 标 识 码 : A 文 章 编 号 : (2010) Effect of testosterone on the expression of CMTM family of the male spermatogenesis suppression rats LI Gang 1, 2, LI Guang-yan 1, JI Hai-jie 1, ZHAO Wen-jie 1, CHU Shi-feng 1, CHEN Nai-hong 1 (1. Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing , China; 2. Inner Mongolia Medical College, Hohhot , China) Abstract: This study is to investigate the influence and the expression of CMTM family of testosterone on spermatogenesis suppression in the male rats treated by gossypol and cyclophosphamide. Gossypol (50 mg kg ) and cyclophosphamide (20 mg kg ) were administered to male rats to induce spermatogenesis suppression. Testosterone propionate was administrated at the dose of 5 mg kg every other day for 6 times. Sperm was collected from the left caudal epididymis, the count and motility of sperm were analyzed by CASA. Morphological change of testis tissue was observed with HE staining. The expression of CMTM family was examined by Western blotting assay. Gossypol (50 mg kg ) and cyclophosphamide (20 mg kg ) decreased the count and motility of sperm, and the pathological change of testis tissue was also observed. But, testosterone (5 mg kg ) had positive effect. Furthermore, CMTM4 down-expressed remarkably in the gossypol and cyclophosphamide treated rats, the expression of the CMTM4 was up-expressed after testosterone administration. On the contrary, the expression of CMTM2 increased significantly only in gossypol treated male rats, but not in cyclophosphamide treated male rats. The expression of CMTM2 was down-expressed after testosterone administration. However, no obvious change of CMTM2 was observed in cyclophosphamide treated rats. Testosterone did not influence the expression of CKLF1, CMTM3 and CMTM5, the CMTM6, CMTM7 and CMTM8 of CMTM family were not detected in testis tissue. These demonstrated that the 收 稿 日 期 : 基 金 项 目 : 国 家 高 技 术 研 究 发 展 计 划 (863 计 划 ) 资 助 项 目 (2006AA020501); 内 蒙 古 医 学 院 2008 年 博 士 启 动 基 金 (NYBQ ). 通 讯 作 者 Tel / Fax: , chennh@imm.ac.cn

2 996 药 学 学 报 Acta Pharmaceutica Sinica 2010, 45 (8): spermatogenesis effect of testosterone (5 mg kg ) was associated with the expression of CMTM family, and CMTM2 and CMTM4 may take part in the spermatogenesis process. Key words: testosterone; CMTM; spermatogenesis 男 性 不 育 是 一 种 较 为 复 杂 的 临 床 综 合 征, 其 发 病 率 近 年 来 有 上 升 的 趋 势, 约 占 育 龄 夫 妇 的 10%~ 12% [1] 这 类 疾 病 的 发 病 原 因 众 多, 其 中 睾 丸 功 能 障 碍 所 致 不 育 是 男 性 不 育 中 常 见 而 棘 手 的 病 因, 其 主 要 临 床 表 现 为 原 因 不 明 的 少 精 子 症 和 无 精 子 症 [2] 男 性 生 殖 系 统 的 生 理 特 点, 使 得 任 何 生 理 和 病 理 环 境 的 改 变 都 可 能 造 成 男 性 生 殖 功 能 的 损 伤, 男 性 精 子 活 力 以 及 数 量 减 少 等 直 接 影 响 到 能 否 顺 利 完 成 受 孕 过 程 睾 酮 (testosterone, T) 作 为 体 内 的 重 要 激 素 之 一, 对 于 男 性 性 功 能 的 维 持 精 子 的 生 成 以 及 男 性 生 育 功 能 维 持 具 有 重 要 的 作 用 [3, 4] 睾 酮 通 过 与 睾 酮 受 体 结 合, 使 得 睾 酮 受 体 从 热 休 克 蛋 白 解 离 后 转 入 细 胞 核, 通 过 结 合 特 异 的 雄 激 素 反 应 元 件, 调 节 相 应 的 基 因 表 达 [4] 临 床 中 睾 酮 含 量 的 检 测 通 常 作 为 男 性 不 育 检 测 的 指 标 之 一 对 于 睾 酮 补 充 疗 法 对 精 子 生 成 影 响 的 观 点 存 在 很 大 分 歧, 但 是 低 剂 量 对 于 精 子 活 力 和 数 量 的 促 进 作 用 在 一 些 实 验 中 被 证 实 [5, 6] 宋 博 [7] 等 报 道 在 临 床 应 用 中, 外 源 性 小 剂 量 睾 酮 被 用 于 治 疗 弱 精 症 患 者, 可 以 提 高 精 子 活 力 CMTM (CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing family) 是 介 于 经 典 趋 化 因 子 和 4 次 跨 膜 蛋 白 之 间 的 一 个 新 的 蛋 白 质 家 族 在 人 类, 这 一 家 族 成 员 由 9 个 基 因 编 码, 即 CKLF 和 CMTM1-8 [8] 研 究 发 现, CMTM 家 族 成 员 参 与 体 内 一 些 重 要 的 生 理 及 致 病 过 程, 可 以 诱 导 肿 瘤 细 胞 凋 亡 [9, 10], 影 响 骨 骼 肌 的 分 化 [11], 参 与 哮 喘 发 病 过 程 特 异 性 皮 炎 以 及 风 湿 性 关 节 炎 等 免 疫 系 统 疾 病 [126] CKLF1 在 神 经 系 统 发 育 过 程 中 具 有 重 要 作 用 [17], 以 CKLF1 为 靶 点 可 建 立 体 外 抗 哮 喘 药 物 筛 选 模 型 [18], 作 者 发 现 CMTM 家 族 在 生 殖 系 统 中 亦 具 有 重 要 的 作 用 文 [19, 20] 献 报 道, CMTM 家 族 个 别 成 员 可 能 与 精 子 的 成 熟 与 分 泌 等 生 理 过 程 或 病 理 过 程 有 关 但 是, 睾 酮 对 于 CMTM 家 族 表 达 的 影 响 未 见 报 道 本 研 究 采 用 棉 酚 (gossypol, GY) 和 环 磷 酰 胺 (cyclophosphamide, CS) 建 立 雄 性 大 鼠 生 殖 功 能 障 碍 模 型, 观 察 给 予 适 当 剂 量 的 睾 酮 对 于 CMTM 家 族 各 成 员 表 达 情 况 的 影 响, 希 望 在 CMTM 家 族 中 发 现 可 能 参 与 精 子 生 成 的 相 关 蛋 白 材 料 与 方 法 药 品 和 试 剂 CMTM 家 族 各 成 员 (CKLF1 CMTM2 CMTM3 CMTM4 CMTM5 CMTM6 CMTM7 CMTM8) 抗 体 由 北 京 大 学 人 类 疾 病 基 因 研 究 中 心 韩 文 玲 教 授 惠 赠, 其 中 CMTM7 为 单 克 隆 抗 体, 其 他 均 为 多 克 隆 抗 体 Triton-X100 EGTA 和 蛋 白 酶 抑 制 剂 (PMSF Aprotinin 和 Leupeptin) 均 购 自 Sigma 公 司 ; BCA 蛋 白 定 量 试 剂 盒 购 自 Pierece 公 司 ; HRP 标 记 的 羊 抗 兔 抗 体 以 及 HRP 标 记 的 羊 抗 鼠 抗 体 为 进 口 试 剂, 由 北 京 中 杉 金 桥 生 物 技 术 有 限 公 司 分 装 ; PVDF 膜 购 自 美 国 Millipore 公 司 ; 超 敏 发 光 液 购 自 普 利 莱 公 司 ; 其 他 试 剂 均 为 市 售 分 析 纯 棉 酚 由 中 国 医 学 科 学 院 药 物 研 究 所 提 供 ( 纯 度 >95%), 溶 于 精 制 食 用 油 中 丙 酸 睾 酮 注 射 液 购 自 上 海 通 用 药 业 股 份 有 限 公 司 ( 批 号 : ) 环 磷 酰 胺 注 射 液 为 江 苏 恒 瑞 医 药 股 份 有 限 公 司 产 品 ( 批 号 : ) 实 验 动 物 清 洁 级 Wistar 大 鼠 ( 雄 性 ), 体 重 (220 ± 10) g, 由 中 国 医 学 科 学 院 实 验 动 物 研 究 所 提 供, 合 格 证 号 : SCXK ( 京 ) 动 物 饲 养 于 中 国 医 学 科 学 院 药 物 研 究 所 实 验 动 物 中 心, 自 由 饮 水 摄 食, 12 h 明 暗 交 替 照 明 精 子 生 成 障 碍 动 物 模 型 的 建 立 实 验 动 物 按 照 随 机 的 原 则 分 为 5 组 : 空 白 组 棉 酚 模 型 组 环 磷 酰 胺 模 型 组 睾 酮 + 棉 酚 组 以 及 睾 酮 + 环 磷 酰 胺 组 棉 [21] 酚 模 型 组 参 照 凌 庆 枝 法 给 药 并 加 以 改 进 口 服 给 予 棉 酚 50 mg kg, 隔 天 1 次, 共 2 周 ; 环 磷 酰 胺 模 型 [22] 组 参 考 刘 志 敏 法 给 药, 腹 腔 注 射 环 磷 酰 胺 20 mg kg, 每 天 给 药 1 次, 共 给 药 10 天 睾 酮 + 棉 酚 组 在 造 模 开 始 隔 日 给 药 (5 mg kg, 皮 下 注 射 ), 共 给 药 6 次 ; 睾 酮 + 环 磷 酰 胺 组 在 造 模 开 始 隔 日 给 药 (5 mg kg, 皮 下 注 射 ), 共 给 药 6 次 精 子 样 本 的 采 集 以 及 活 力 分 析 动 物 麻 醉 后, 打 开 腹 腔 取 附 睾 找 到 附 睾 尾 剪 开 后, 将 附 睾 尾 置 于 提 前 预 温 37 的 生 理 盐 水 中 (3 ml), 静 置 5 min 待 精 子 充 分 游 出 后, 充 分 混 悬 并 对 精 子 活 力 进 行 检 测 检 测 采 用 计 算 机 辅 助 精 子 质 量 分 析 系 统 (CASA) 对 精 子 质 量 ( 精 子 数 量 精 子 活 力 等 ) 进 行 综 合 测 评 精 子 活 力 分 级 标 准 : A 级, 指 快 速 前 向 运 动 的 精 子 ; B 级, 指 慢 或 呆 滞 地 前 向 运 动 的 精 子 ; C 级, 指 非

3 李 刚等: 睾酮对雄性精子发生障碍大鼠 CMTM 家族表达的影响 997 射睾酮 (5 mg kg) 能够显著提高棉酚和环磷酰胺 前向运动的精子; D 级, 指不动的精子 取大鼠附睾后, 迅速找到并 模型组中的精子数量和活力, 对于棉酚以及环磷酰 取得左侧睾丸组织, 用 4%甲醛溶液固定, 24 h 后更换 胺所致的雄性大鼠精子数量降低具有显著提高作用, 4%甲醛固定液继续固定 24 h, 进行 HE 染色, 在光镜 其中对于活力较高的 A+B 级精子百分率具有显著提 下进行观察 高作用 (P < 0.05), 见表 1 和图 1 C1 C2 睾丸组织 HE 染色 Western blotting 检测 将大鼠右侧睾丸组织置 于提前预冷的 RIPA 裂解液中 [50 mmol L Tris (ph 7.4), 150 mmol L NaCl, 1% NP40, 0.5%脱氧胆酸钠, 0.1% SDS, 10%甘油, 50 mmol L NaF, 1 mmol L Table 1 Effect of testosterone on sperm count and motility in male rats. n = 15, x ± s. P < 0.05, P < 0.01 vs control group; # P < 0.05 vs GY group; & P < 0.05 vs CS group. Gossypol; T: Testosterone; CS: Cyclophosphamide Na3VO4, 1 mmol L NaF], 经研磨后裂解 30 min, 以 Group g 离心 10 min 收集上清液, 采用 BCA 蛋白定 量试剂盒进行蛋白定量 取各组样品 30 μg 上样, 用 15% SDS-PAGE 进行电泳 电泳结束后将蛋白转移至 PVDF 膜上, 用 5%脱脂奶粉常温下封闭 1 h, 分别滴 加 CMTM 家族各一抗 (1 100, 4 过夜) 以及 HRP Dose Sperm count The percent of (A+B) /mg kg ( 106/mL) motile sperm/% 151 ± 17 Control GY 50 GY+T CS 5 20 CS+T 5 56 ± ± ± 20 # 94 ± ± 19 & GY: The percent of (A+B) class/% 38 ± 6 42 ± 8 26 ± 5 53 ± 4 # 35 ± 4# 31 ± 5 20 ± 6 44 ± 4 & 30 ± 4 & 标记的二抗 (CMTM7 对应的二抗为羊抗鼠 IgG, 其 他均加入羊抗兔 IgG , 常温孵育 1 h), 设 2 睾酮对睾丸组织形态学的影响 Tris, 150 随机选取各组睾丸组织经 HE 染色后发现, 正常 NaCl, 0.1% Tween-20, ph 7.6) 洗膜后, 采 雄性大鼠的睾丸组织中生精小管排列整齐, 在每一 用 ECL 化学发光法进行观察, 图像采用 Science Lab 生精小管内部管腔界限明显, 可见不同发育期初级 2005 Image Guage (V3.0) 软件进行灰度扫描 次级以及精子细胞排列整齐 (图 2A1 A2); 给予棉 actin 作为内参, 使用 TBST (10 mmol L mmol L 统计学分析 数据以 x ± s 表示, 各组间的差异 比较用 SPSS10.0 软件进行单因素方差分析 酚和环磷酰胺后可以导致大鼠睾丸组织发生显著病 理改变, 生精小管内结构紊乱, 管腔界限模糊不清, 同时失去原有各期精子细胞层次, 并有核空泡化的 结果 1 睾酮对雄性大鼠精子数量和活力的影响 现象出现, 在管腔内有脱落的细胞和少量精子存在 (图 2B1 B2) 在给予睾酮 (5 mg kg-1) 后有不同程 棉酚和环磷酰胺可以引起精子生成障碍, 与空 度的缓解作用, 使破坏的细胞层次得以恢复, 管腔界 白组比较显著降低精子数量和活力 (P < 0.05 或 P < 限也逐渐变得清晰 (图 2C1 C2), 同时可见管腔内有 0.01), 见表 1 及图 1A1 A2 B1 B2 大鼠皮下注 少量完整的精子细胞存在 Figure 1 The sperm count of male rats observed under optical microscope. The testosterone could improve the count and motility of sperm in male spermatogenesis suppression rats treated with gossypol or cyclophosphamide. A1, A2: Control; B1: Gossypol (50 mg kg); B2: Cyclophosphamide (20 mg kg); C1: Gossypol (50 mg kg) + testosterone (5 mg kg); C2: Cyclophosphamide (20 mg kg) + testosterone (5 mg kg). (Magnification, 200 )

4 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2010, 45 (8): Figure 2 The HE staning of testis tissue. Great morphological change was observed in testis tissue of male rats treated with gossypol or cyclophosphamide. But, the testosterone (5 mg kg) improved this morphological change in testis tissue of male rats, see the white arrow. A1, A2: Control; B1: Gossypol (50 mg kg); B2: Cyclophosphamide (20 mg kg); C1: Gossypol (50 mg kg) + testosterone (5 mg kg); C2: Cyclophosphamide (20 mg kg) + testosterone (5 mg kg). (Magnification, 400 ) 3 睾酮对 CMTM 家族各成员表达的影响 高, 而睾酮 (5 mg kg ) 可以显著降低 CMTM2 的 大鼠睾丸组织 Western blotting 检测结果显示, 表达 (P < 0.05), 给予环磷酰胺 (20 mg kg) 和睾酮 睾酮对于 CMTM 家族中个别成员表达具有显著影 (5 mg kg) 后表达变化并不显著 (图 4) CKLF1 响 大鼠分别给予棉酚 (50 mg kg) 和环磷酰胺 (20 CMTM3 CMTM5 表达检测发现, 雄性大鼠在给予棉 mg kg ) 后, CMTM4 的表达显著低于空白组, 给予 酚 (50 mg kg) 和环磷酰胺 (20 mg kg) 后变化并 睾酮 (5 mg kg ) 后则可以显著升高 CMTM4 表达 不 显 著, 在 给 予 睾 酮 后 对 于 CKLF1 CMTM3 (P < 0.05), 见图 3 CMTM2 的表达情况却不完全相 CMTM5 表达亦没有显著性影响 (图 5A B C) 而 同, 给予棉酚 (50 mg kg ) 后 CMTM2 表达显著升 在 大 鼠 睾 丸 组 织 未 检 测 到 CMTM6 CMTM7 CMTM8 的蛋白表达 (图 5D E F) Figure 3 Effect of testosterone on CMTM4 in testis tissue of male rats detected with Western blotting. The testosterone (5 mg kg) was administrated to male rats after treated gossypol (50 mg kg) or cyclophosphamide (20 mg kg). The testis tissue was extracted and subjected to Western blotting analysis. Arrow points to the CMTM4 protein band. Bars represent the scanned values for CMTM4/values for actin. Lane 1: Control; Lane 2: Gossypol (50 mg kg); Lane 3: Gossypol (50 mg kg) + testosterone (5 mg kg); Lane 4: Cyclophosphamide (20 mg kg); Lane 5: Cyclophosphamide (20 mg kg) + testosterone (5 mg kg). P < 0.05 vs control group (1); # P < 0.05 vs gossypol group (2) Figure 4 Effect of testosterone on CMTM2 in testis tissue of male rats detected with Western blotting. Arrow points to the CMTM2 protein band. Bars represent the scanned values for CMTM2/values for actin. Lane 1: Control; Lane 2: Gossypol (50 mg kg); Lane 3: Gossypol (50 mg kg) + testosterone (5 mg kg); Lane 4: Cyclophosphamide (20 mg kg); Lane 5: Cyclophosphamide (20 mg kg) + testosterone (5 mg kg). P < 0.05 vs control group (1); # P < 0.05 vs gossypol group (2)

5 李 刚 等 : 睾 酮 对 雄 性 精 子 发 生 障 碍 大 鼠 CMTM 家 族 表 达 的 影 响 999 Figure 5 Effect of testosterone on CKLF1 (A), CMTM3 (B), CMTM5 (C), CMTM6 (D), CMTM7 (E) and CMTM8 (F) in testis tissue of male rats detected with Western blotting. Lane 1: Control; Lane 2: Gossypol (50 mg kg ); Lane 3: Gossypol (50 mg kg ) + testosterone (5 mg kg ); Lane 4: Cyclophosphamide (20 mg kg ); Lane 5: Cyclophosphamide (20 mg kg ) + testosterone (5 mg kg ) 讨 论 本 研 究 采 用 Western blotting 检 测 睾 酮 对 于 CMTM 家 族 在 雄 性 生 殖 功 能 障 碍 大 鼠 中 的 影 响, 采 用 的 CMTM 抗 体 均 由 北 京 大 学 人 类 疾 病 基 因 研 究 中 心 提 供, 实 验 开 始 前 对 各 抗 体 的 有 效 性 均 进 行 了 体 外 验 证, 通 过 对 HEK293ET 细 胞 进 行 瞬 转 后 提 取 总 蛋 白 进 行 Western blotting 检 测, 发 现 CMTM 各 抗 体 均 有 很 好 的 适 用 性 棉 酚 和 环 磷 酰 胺 是 常 用 的 导 致 精 子 生 成 障 碍 工 具 药 物 棉 酚 具 有 抗 生 育 作 用, 采 用 的 棉 酚 剂 量 与 凌 [21] 庆 枝 等 报 道 的 剂 量 不 一 致, 这 可 能 与 检 测 时 精 子 稀 释 倍 数 以 及 检 测 精 子 活 力 的 方 法 有 关 动 物 实 验 结 果 表 明, 棉 酚 导 致 生 殖 功 能 障 碍 的 药 理 作 用 机 制 是 通 过 破 坏 雄 性 睾 丸 细 精 管 的 生 精 上 皮 细 胞, 从 而 导 致 精 子 数 量 的 减 少, 直 至 无 精 子 [23] 同 时 棉 酚 也 可 以 作 用 于 细 胞 器 线 粒 体, 通 过 抑 制 线 粒 体 功 能 而 抑 制 精 子 生 成 [24] 环 磷 酰 胺 是 一 种 氮 芥 类 抗 肿 瘤 药 物, 据 报 道 环 磷 酰 胺 治 疗 可 引 起 男 性 患 者 的 精 子 减 少 症 和 无 精 子 症, 其 机 制 与 环 磷 酰 胺 作 用 于 DNA RNA 以 及 蛋 白 质 有 关, 从 而 导 致 精 子 生 成 障 碍 [25] 睾 酮 作 为 体 内 重 要 的 雄 激 素 对 于 精 子 生 成 的 影 响 存 在 很 大 的 争 议, 但 是, 普 遍 认 为 小 剂 量 具 有 促 进 精 子 生 成 的 作 用, 而 大 剂 量 则 表 现 出 抑 制 作 用, 有 研 究 报 道 将 适 当 剂 量 睾 酮 作 为 促 进 精 子 发 生 的 阳 性 对 [26, 照 药 27] 实 验 中 发 现, 适 当 剂 量 睾 酮 对 于 棉 酚 和 环 磷 酰 胺 所 引 起 的 精 子 数 量 减 少 活 力 降 低 以 及 睾 丸 组 织 病 理 性 改 变 均 具 有 一 定 的 改 善 作 用, 能 够 显 著 提 高 精 子 数 量 以 及 活 力, 对 睾 丸 组 织 的 病 理 性 改 变 具 有 一 定 改 善 作 用 通 过 睾 酮 对 于 CMTM 家 族 表 达 情 况 的 研 究 发 现, 在 CMTM 家 族 中 治 疗 前 后 变 化 最 为 明 显 的 是 CMTM4, 棉 酚 以 及 环 磷 酰 胺 均 使 CMTM4 的 表 达 降 低, 给 予 睾 酮 后 使 CMTM4 表 达 恢 复 正 常 ; CMTM2 仅 在 棉 酚 模 型 组 中 发 生 显 著 变 化, 使 得 CMTM2 表 达 升 高, 而 给 予 睾 酮 后 降 低, 环 磷 酰 胺 模 型 组 中 的 变 化 不 显 著 ; 在 睾 丸 组 织 中 检 测 到 了 CKLF1 CMTM3 以 及 CMTM5 的 表 达, 但 并 未 发 现 显 著 变 化 ;

6 1000 药 学 学 报 Acta Pharmaceutica Sinica 2010, 45 (8): CMTM6 CMTM7 CMTM8 在 睾 丸 组 织 中 并 未 有 表 达, 而 由 于 CMTM1 抗 体 的 原 因 未 能 对 其 进 行 检 测 总 之, 实 验 中 对 于 精 子 生 成 障 碍 分 别 从 不 同 途 径 建 立 模 型, 研 究 了 适 当 剂 量 睾 酮 对 于 精 子 活 力 和 数 量 的 影 响, 同 时 睾 酮 的 这 种 改 善 作 用 可 能 有 CMTM 家 族 个 别 成 员 的 参 与, 发 现 CMTM2 以 及 CMTM4 的 表 达 量 具 有 显 著 差 异 鉴 于 CMTM 家 族 迄 今 为 止 广 泛 参 与 生 理 或 病 理 过 程, 因 此 可 以 推 断 CMTM2 和 CMTM4 可 能 参 与 精 子 发 生 过 程, 可 能 作 为 治 疗 精 子 发 生 障 碍 的 潜 在 的 药 物 开 发 靶 点 References [1] Ma XN. Modern Sexual Medicine ( 现 代 性 医 学 ) [M]. 2nd ed. Beijing: People s Military Medical Press, 2004: 348. [2] Regadera J, Martinez-Garcia F, Paniagua R, et al. Androgen insensitivity syndrome: an immunohistochemical, ultrastructural, and morphometric study [J]. Arch Pathol Lab Med, 1999, 123: [3] McLachlan RI, O Donnell L, Meachem SJ, et al. Identification of specific sites of hormonal regulation in spermatogenesis in rats, monkeys, and man [J]. Recent Prog Horm Res, 2002, 57: [4] Walker WH. 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