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1 第 16 卷 第 5 期 年 9 月 中 国 水 产 科 学 Journal of Fishery Sciences of China Vol.16 No.5 September β- 雌 二 醇 对 鲻 早 期 精 子 发 生 的 影 响 及 其 作 用 机 制 宋 海 霞, 翁 幼 竹, 方 永 强 ( 国 家 海 洋 局 第 三 海 洋 研 究 所, 福 建 厦 门 ) 摘 要 : 应 用 组 织 学 和 免 疫 组 织 化 学 的 方 法, 对 17β- 雌 二 醇 (E 2 ) 影 响 鲻 (Mugil cephalus) 早 期 精 巢 的 精 子 发 生 及 其 作 用 机 制 进 行 了 研 究 饲 喂 含 15 mg/kg 和 50 mg/kg 17β- 雌 二 醇 的 饲 料 60 d, 以 不 添 加 17β- 雌 二 醇 的 饲 喂 组 为 对 照 结 果 表 明, 幼 鲻 投 喂 含 E 2 饲 料 前, 对 照 组 和 实 验 组 精 巢 均 属 早 期 精 巢, 胞 囊 中 原 始 的 精 原 细 胞 占 优 势,Sertoli 细 胞 紧 贴 精 原 细 胞 投 喂 含 E 2 饲 料 后 1 个 月, 低 剂 量 组 (15 mg/kg) 的 4 尾 幼 鲻 均 出 现 精 原 细 胞 的 有 丝 分 裂, 有 丝 分 裂 细 胞 的 数 量 多 于 高 剂 量 组 (50 mg/kg), 对 照 组 精 巢 未 见 精 原 细 胞 的 有 丝 分 裂, 说 明 E 2 能 够 诱 发 精 原 细 胞 的 分 裂 实 验 结 束 后 投 喂 E 2 组 精 巢 发 育 处 在 小 生 长 期, 可 见 精 巢 中 有 初 级 精 母 细 胞 存 在 于 精 小 叶 中, 而 对 照 组 刚 刚 出 现 精 原 细 胞 的 发 育 分 化 用 雌 激 素 受 体 α 和 β 亚 型 抗 体 进 行 免 疫 组 织 化 学 染 色 发 现, 对 照 组 和 实 验 组 早 期 精 巢 中 的 精 原 细 胞 和 sertoli 细 胞 均 显 示 强 的 免 疫 阳 性 反 应, 这 为 E 2 诱 发 精 原 细 胞 有 丝 分 裂 的 作 用 机 制 提 供 了 新 的 形 态 学 证 据 [ 中 国 水 产 科 学,2009,16(5): ] 关 键 词 : 鲻 ; 精 子 发 生 ;17β- 雌 二 醇 ; 免 疫 组 织 化 学 中 图 分 类 号 :S91 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 : (2009) 鲻 (Mugil cephalus) 广 泛 分 布 于 热 带 与 亚 热 带 海 域, 为 世 界 性 养 殖 鱼 类, 也 是 中 国 东 南 沿 海 地 区 重 要 的 养 殖 鱼 类 之 一 由 于 鲻 在 水 产 养 殖 中 占 有 的 重 要 的 地 位, 从 1930 年 开 始, 世 界 各 国 就 开 展 了 人 工 繁 殖 实 验, 中 国 台 湾 于 1977 年 获 得 鲻 人 工 繁 殖 成 功, 但 尚 未 取 得 生 产 性 突 破 [1-2] 有 关 鲻 生 殖 细 胞 的 发 生 及 其 [3] 内 分 泌 调 控, 已 有 许 多 学 者 进 行 了 研 究 何 大 仁 等 [4] 对 厦 门 杏 林 湾 鲻 性 腺 进 行 了 组 织 学 研 究 林 君 卓 等 [5] 和 洪 万 树 等 对 鲻 精 子 发 生 过 程 进 行 了 组 织 学 和 超 微 结 构 的 观 察, 将 其 精 巢 发 育 过 程 划 分 为 5 个 时 期, [6] 揭 示 了 鲻 精 子 发 生 的 生 物 学 特 点 方 永 强 等 研 究 发 现,17α- 甲 基 睾 酮 可 诱 发 鲻 精 巢 的 精 子 发 生 和 释 精, 并 发 现 间 质 细 胞 在 精 子 发 生 中 起 着 重 要 的 作 用 [7] 最 近,O Donnell 等 在 对 啮 齿 类 的 研 究 中 发 现, 雌 激 素 在 精 子 发 生 中 起 着 重 要 的 作 用, 从 而 提 出 把 雌 激 素 物 质 看 作 为 雄 性 激 素 的 新 概 念 此 后,Bouma 等 利 用 漂 浮 器 官 培 养 系 统 进 一 步 发 现,17β- 雌 二 醇 (E 2 ) 能 够 增 强 精 子 发 生 之 前 未 成 熟 虹 鳟 间 质 细 胞 的 增 殖 近 10 年 来, 关 于 雌 激 素 影 响 鱼 类 精 子 发 生 及 其 作 用 机 制 已 成 为 研 究 鱼 类 精 巢 发 育 内 分 泌 调 节 的 新 热 点 [9-14], 而 国 内 有 关 雌 激 素 影 响 鱼 类 精 子 发 生 的 研 究 则 少 见 报 道, 因 此, 在 笔 者 前 期 研 究 雄 激 素 诱 发 鲻 精 子 发 生 工 作 的 基 础 上 [6], 进 一 步 探 讨 17β- 雌 二 醇 对 鲻 早 期 精 子 发 生 的 影 响 及 作 用 机 制, 旨 在 为 鱼 类 精 子 发 生 的 内 分 泌 调 控 提 供 新 的 资 料 1 材 料 与 方 法 1.1 实 验 鱼 6 月 中 旬 从 龙 海 海 水 鱼 类 养 殖 场 购 买 100 多 尾 雄 性 鲻 带 回 实 验 室, 该 鲻 取 自 同 批 野 生 鱼 苗, 经 人 工 养 殖 2 个 多 月 后 体 长 10 cm 左 右 体 质 量 20.5 ~ g, 性 腺 刚 开 始 发 育 将 该 鱼 随 机 分 为 高 剂 量 组 低 收 稿 日 期 : ; 修 订 日 期 : 基 金 项 目 : 国 家 海 洋 局 第 三 海 洋 研 究 所 基 本 科 研 业 务 费 专 项 资 金 资 助 项 目 ( 海 三 科 ). 作 者 简 介 : 宋 海 霞 (1977-), 女, 硕 士, 助 理 研 究 员, 主 要 从 事 海 洋 动 物 生 殖 生 理 方 面 的 研 究. Tel: ; songhaixia@163.com

2 第 5 期 宋 海 霞 等 :17β- 雌 二 醇 对 鲻 早 期 精 子 发 生 的 影 响 及 其 作 用 机 制 713 剂 量 组 和 对 照 组 3 个 组, 每 组 30 尾, 每 组 设 2 个 平 行 各 组 分 开 养 殖 在 小 的 养 殖 池 中, 暂 养 1 周 待 恢 复 摄 食 后, 开 始 进 行 实 验 1.2 含 雌 激 素 饲 料 的 配 制 高 剂 量 组 和 低 剂 量 组 17β- 雌 二 醇 (Estradiol- 17β,E 2, 美 国 Sigma 公 司 产 品 ) 的 添 加 剂 量 分 别 为 50 mg/kg 和 15 mg/kg 饲 料 其 配 制 方 法 是 预 先 将 雌 二 醇 溶 解 在 医 用 100% 酒 精 中, 然 后 均 匀 喷 在 颗 粒 饲 料 上, 反 复 混 合 均 匀, 而 对 照 组 饲 料 仅 喷 洒 不 含 雌 激 素 的 等 量 酒 精, 用 处 理 过 的 饲 料 分 别 投 喂 3 组 鲻, 每 天 上 午 8 00 左 右 各 组 分 别 投 喂 质 量 为 体 质 量 1% 的 处 理 饲 料, 待 摄 食 完 毕, 下 午 3 00 左 右 再 投 喂 正 常 饲 料, 每 天 饲 料 投 喂 总 量 不 超 过 体 质 量 的 2.5% ~ 3%, 实 验 持 续 60 d 1.3 样 品 制 备 实 验 开 始 前 先 从 各 组 取 雄 鱼 2 尾, 作 为 实 验 前 精 巢 的 发 育 水 平 对 照, 实 验 开 始 后 每 2 周 抽 样 检 查 各 实 验 组 和 对 照 组 鱼 性 腺 发 育 情 况, 第 1 次 各 组 取 2 尾, 之 后 各 组 取 4 尾,60 d 后 将 动 物 全 部 处 死 实 验 鱼 先 用 丁 香 酚 麻 醉, 然 后 打 开 腹 部 仔 细 分 离 位 于 腹 腔 背 面 的 线 状 精 巢, 一 侧 精 巢 放 入 Bouin-Hollane 氏 液 中, 另 一 侧 精 巢 放 入 不 含 醋 酸 的 Bouin 氏 液 中, 分 别 固 定 6 ~ 8 h, 系 列 酒 精 脱 水,Paraplast 包 埋, 连 续 横 切 片, 切 片 厚 5 ~ 6 μm, 苏 木 精 - 伊 红 染 色, 用 于 观 察 鲻 精 巢 发 育 的 形 态 特 点 和 分 析 E 2 对 其 精 巢 发 育 的 影 响 1.4 免 疫 组 织 化 学 切 片 经 脱 蜡 水 化 后, 浸 入 3% H 2 O 2 - 甲 醇 液 中 10 min, 以 灭 活 内 源 性 过 氧 化 物 酶 按 SABC( 抗 生 物 素 - 生 物 素 - 过 氧 化 物 酶 复 合 物 ) 法 进 行 免 疫 组 织 化 学 反 应 蒸 馏 水 轻 洗 后, 在 0.01 mol/l PBS(pH 7.2 ~ 7.4) 中 浸 泡 5 min, 然 后 滴 加 1 10(V/V) 的 正 常 山 羊 血 清 封 闭 液, 室 温 下 孵 育 10 ~ 20 min, 以 减 少 非 特 异 性 染 色 滴 加 第 一 抗 体, 兔 抗 人 雌 激 素 受 体 亚 型 α 和 β 抗 体 ( 分 别 以 体 积 比 和 稀 释 ),4 孵 育 36 ~ 48 h PBS 轻 洗 后, 滴 加 SABC 复 合 物, 在 室 温 下 孵 育 30 ~ 40 min,pbs 轻 洗, 最 后 用 3,3 - 二 氨 基 联 苯 胺 (DAB) 显 色 10 ~ 20 min 对 照 实 验 切 片 采 用 PBS 正 常 兔 血 清 替 代 第 一 抗 体 进 行 同 步 孵 育, 染 色 结 果 为 阴 性 2 结 果 与 分 析 2.1 鲻 早 期 精 巢 的 形 态 结 构 饲 喂 E 2 前 抽 样 解 剖 实 验 组 ( 高 剂 量 低 剂 量 ) 和 对 照 组 鲻 精 巢, 切 片 观 察 精 子 发 生 情 况 结 果 显 示, 3 组 精 巢 形 态 结 构 和 发 育 水 平 类 似 其 精 巢 均 为 线 条 状, 外 被 一 层 薄 的 结 缔 组 织, 生 殖 上 皮 随 结 缔 组 织 向 内 延 伸, 在 精 巢 内 形 成 许 多 管 状 的 精 小 管, 这 些 精 小 管 在 精 巢 内 互 相 连 接 形 成 精 小 叶, 最 后 这 些 输 出 小 管 汇 合 形 成 一 条 大 的 输 精 管, 开 口 在 直 肠 与 输 尿 管 之 间 的 泄 殖 乳 突 上 切 片 观 察 结 果 显 示, 鲻 精 子 发 生 的 排 列 方 式 属 叶 状 结 构 (Lobular structure), 它 们 均 为 早 期 发 育 精 巢, 其 共 同 特 点 是 多 个 精 原 细 胞 ( 通 常 3 ~ 5 个, 有 的 多 达 8 个 ) 被 结 缔 组 织 包 裹 在 一 起, 呈 不 规 则 形 或 长 椭 圆 形, 细 胞 沿 管 周 排 列, 形 成 胞 囊 结 构 ( 图 版 Ⅰ-1) 胞 囊 内 可 见 2 种 类 型 精 原 细 胞 : 一 种 是 原 始 的 精 原 细 胞 (Primordial spermatogonia, 或 称 为 A 型 精 原 细 胞 ), 其 特 点 是 细 胞 体 积 大, 为 卵 圆 形 或 椭 圆 形, 紧 贴 生 殖 上 皮, 胞 径 ~ μm, 核 径 8.78 ~ μm, 核 居 中 或 偏 于 一 侧, 有 1 个 核 仁, 着 色 较 深, 核 质 分 布 较 均 匀, 核 膜 清 晰, 胞 质 着 色 差 另 一 种 是 B 型 精 原 细 胞, 靠 近 生 殖 上 皮, 细 胞 为 椭 圆 形, 胞 径 8.45 ~ μm, 核 径 5.12 ~ 7.84 μm, 核 位 于 中 央, 有 1 个 大 的 核 仁, 居 中 或 偏 于 一 侧, 核 质 嗜 碱 性 很 弱, 细 胞 质 不 着 色 ( 图 版 Ⅰ-2) 精 原 细 胞 外 为 Sertoli 细 胞 所 包 围,Sertoli 细 胞 在 光 镜 下 只 能 见 到 细 胞 核, 为 不 规 则 形 椭 圆 形 或 长 形, 在 光 镜 下 常 可 见 Sertoli 细 胞 紧 贴 精 原 细 胞 ( 图 版 Ⅰ-1 2 3) 此 时, 在 生 精 小 管 内 有 多 个 胞 囊 组 成, 在 早 期 胞 囊 中 可 见 原 始 的 精 原 细 胞 与 Sertoli 细 胞 紧 密 排 列 β- 雌 二 醇 对 精 巢 发 育 的 影 响 在 7 月 上 旬, 实 验 组 ( 高 剂 量 低 剂 量 组 ) 和 对 照 组 雄 鱼 精 巢 切 片 没 有 显 著 差 异 但 从 7 月 15 后 进 行 精 巢 切 片 观 察 发 现, 实 验 组 精 巢 发 育 出 现 明 显 的 变 化, 用 高 倍 和 油 镜 观 察 均 发 现 低 剂 量 组 4 尾 鲻 早 期 精

3 714 中 国 水 产 科 学 第 16 卷 巢 中 均 出 现 精 原 细 胞 的 有 丝 分 裂, 其 特 征 为 核 内 染 色 质 的 凝 集 ( 图 版 Ⅰ-4 5), 而 高 剂 量 组 虽 然 也 见 精 原 细 胞 的 有 丝 分 裂, 但 进 入 分 裂 的 精 原 细 胞 数 量 显 然 没 有 低 剂 量 组 多 ( 图 版 Ⅰ-6), 而 对 照 组 在 多 个 切 片 中 均 未 见 此 现 象 ( 图 版 Ⅰ-7) 8 月 中 旬, 对 低 剂 量 和 高 剂 量 实 验 组 组 织 切 片 的 观 察 结 果 显 示, 此 时 精 巢 发 育 为 Ⅱ 期, 其 特 点 是 除 靠 近 生 殖 上 皮 有 多 层 精 原 细 胞 以 及 紧 贴 其 边 缘 的 Sertoli 细 胞 外, 还 可 见 初 级 精 母 细 胞 位 于 精 小 叶 的 中 部, 表 明 精 巢 发 育 进 入 小 生 长 时 期 ( 图 版 Ⅰ-8 9) 对 照 组 精 巢 也 出 现 进 一 步 发 育, 表 现 在 精 原 细 胞 开 始 发 育 分 化, 有 少 数 初 级 精 母 细 胞 分 散 在 精 小 叶 中, 但 精 巢 发 育 仍 处 于 Ⅰ-Ⅱ 期 ( 图 版 Ⅰ-10) 2.3 雌 二 醇 诱 发 精 原 细 胞 分 裂 的 机 制 用 雌 激 素 受 体 α 和 β 亚 型 抗 体 对 鲻 早 期 精 巢 进 行 免 疫 组 织 化 学 研 究 结 果 显 示, 对 照 组 与 低 高 剂 量 组 精 巢 的 精 原 细 胞 和 Sertoli 细 胞 对 这 2 种 受 体 亚 型 显 示 免 疫 活 性, 阳 性 物 质 定 位 在 沿 胞 膜 分 布 的 胞 质 或 细 胞 核 ( 图 版 Ⅰ-11 ~ 14), 这 为 研 究 17β- 雌 二 醇 诱 发 精 原 细 胞 有 丝 分 裂 的 机 制 提 供 了 形 态 学 证 据 3 讨 论 鱼 类 精 子 发 生 由 3 个 主 要 时 相 组 成, 即 精 原 细 胞 有 丝 分 裂 增 殖, 精 母 细 胞 成 熟 分 裂 和 精 子 形 成 [9] 研 究 表 明, 雄 性 鱼 类 精 子 发 生 的 内 分 泌 调 节 像 其 他 脊 椎 动 物 一 样, 也 受 到 腺 垂 体 分 泌 的 黄 体 生 成 素 (Luteinizing hormone,lh) 和 卵 泡 刺 激 激 素 (Follicle stimulating hormone,fsh) 调 节,LH 通 过 它 的 靶 细 胞 Leydig 细 胞 ( 间 质 细 胞 ) 受 体 的 表 达, 产 生 类 固 醇 激 素 11- 酮 基 睾 酮 (11-ketotestosterone,11-KT)( 被 公 认 为 硬 骨 鱼 类 一 种 潜 在 雄 激 素 ) 激 活 精 子 发 生 [10-11] 长 期 以 来 一 直 认 为 雄 激 素 中 主 要 是 11-KT 能 够 激 活 精 原 细 胞 的 增 殖 然 而, 最 近 研 究 表 明, 鱼 类 精 子 发 生, 从 精 原 干 细 胞 更 新 到 精 子 成 熟 都 是 受 类 固 醇 激 素 [12] 的 控 制 日 本 学 者 Miura 等 以 日 本 鳗 鲡 (Anguilla japonica) 为 模 型 来 研 究 鱼 类 精 子 发 生, 采 用 埋 植 和 离 体 器 官 培 养 技 术, 发 现 E 2 可 有 效 地 诱 导 日 本 鳗 鲡 在 体 精 巢 和 离 体 培 养 精 巢 组 织 精 原 细 胞 干 细 胞 的 分 裂, 并 且 这 种 分 裂 可 被 三 苯 氧 胺 (Tamoxifen, 一 种 抗 雌 激 素 受 体 药 品 ) 所 抑 制, 这 表 明 雌 激 素 在 精 子 发 生 [13] 早 期 是 一 种 不 可 缺 少 的 雄 激 素 Miura 等 还 使 用 离 体 精 巢 悬 浮 器 官 培 养 系 统 来 揭 示 类 固 醇 激 素 诱 发 鳗 鲡 精 子 发 生 的 内 分 泌 机 制, 研 究 结 果 有 力 地 证 明 了 精 原 细 胞 干 细 胞 的 更 新 受 天 然 雌 激 素 E 2 的 调 节, 而 11-KT 则 起 诱 导 和 促 进 作 用 Bouma 等 利 用 离 体 漂 浮 器 官 培 养 系 统 还 发 现, 将 浓 度 为 18.3 nmol/l 的 E 2 加 入 到 培 养 基 能 明 显 增 加 虹 鳟 间 质 细 胞 的 增 殖 而 此 前 先 用 雌 激 素 受 体 拮 抗 剂 处 理 则 无 这 种 增 殖 效 应 他 们 认 为 E 2 能 够 增 强 精 子 发 生 之 前 未 成 熟 虹 鳟 间 质 细 胞 的 增 殖 本 研 究 通 过 将 E 2 拌 在 饲 料 中 投 喂 性 腺 刚 分 化 的 雄 性 幼 鲻, 持 续 投 喂 1 个 月 后, 发 现 低 剂 量 和 高 剂 量 组 均 出 现 精 原 细 胞 的 有 丝 分 裂, 且 低 剂 量 组 精 原 细 胞 分 裂 数 量 多 于 高 剂 量 组, 而 对 照 组 精 巢 则 没 有 出 现 这 种 变 化 从 而 证 实, 投 喂 E 2 也 能 够 有 效 诱 导 精 原 细 胞 的 增 殖 同 时, 本 研 究 还 进 一 步 观 察 到 E 2 有 促 进 精 子 发 生 的 作 用, 其 证 据 为 实 验 结 束 (60 d) 后 检 查 精 巢 组 织 切 片, 实 验 组 精 巢 已 进 入 小 生 长 时 期, 精 巢 中 出 现 初 级 精 母 细 胞, 而 对 照 组 精 巢 则 没 有 观 察 到 以 上 现 象 关 于 E 2 诱 导 精 原 细 胞 [12-13] 增 殖 的 机 制, 本 研 究 的 结 论 与 Miura 等 和 Bouma 等 的 结 论 一 致, 即 E 2 首 先 必 须 通 过 与 其 相 应 受 体 结 合, 诱 发 细 胞 生 理 效 应 应 用 雌 激 素 受 体 拮 抗 剂 使 E 2 的 生 理 效 应 消 失 就 是 一 个 例 证 但 是, 这 些 学 者 没 有 进 一 步 检 查 实 验 鱼 精 巢 中 精 原 细 胞 是 否 存 在 雌 激 素 受 体, 为 此, 本 研 究 采 用 免 疫 组 织 化 学 技 术 对 雌 激 素 2 种 亚 型 受 体 进 行 定 位, 结 果 发 现, 实 验 组 和 对 照 组 幼 鲻 早 期 精 原 细 胞 均 存 在 这 2 种 亚 型 受 体, 阳 性 物 质 定 位 在 胞 核 和 沿 胞 膜 分 布 的 胞 质 此 结 果 不 但 证 实 了 雌 激 素 受 体 在 鲻 性 腺 的 定 位 [14], 还 为 Miura [12] 等 和 Bouma 等 提 出 的 E 2 诱 导 精 原 细 胞 增 殖 的 作 用 是 通 过 其 受 体 介 导 这 一 推 断 提 供 了 新 的 证 据 本 研 究 认 为 E 2 诱 导 幼 鲻 精 原 细 胞 的 有 丝 分 裂 机 制 还 十 分 复 杂, 不 仅 仅 简 单 地 是 E 2 通 过 雌 激 素 受 体 的 介 导 就 能 够 诱 导 精 原 细 胞 的 有 丝 分 裂, 因 为 E 2 和 11-KT

4 第 5 期 宋 海 霞 等 :17β- 雌 二 醇 对 鲻 早 期 精 子 发 生 的 影 响 及 其 作 用 机 制 715 的 作 用 还 受 到 Sertoli 细 胞 产 生 的 其 他 因 子 的 调 节 [13] 本 实 验 也 观 察 到 Sertoli 细 胞 存 在 雌 激 素 受 体, 提 示 E 2 的 作 用 与 Sertoli 细 胞 功 能 之 间 存 在 密 切 关 系, 它 们 内 在 的 复 杂 关 系 有 待 深 入 研 究 [7] O Donnell L,Robertson K M,Jones M E,et al. Estrogen and spermatogenesis [J]. Endocr Rev,2001,22: Bouma J,Cloud J G,Nagler J J. In vitro effects of estradiol-17 beta on myoid and fibroblastic cell proliferation in the immature rainbow trout testis [J]. Fish Physiol Biochem,2003,28: [9] Schulz R W,Miura T. Spermatogenesis and its endocrine regulation [J]. 参 考 文 献 : [1] 廖 一 久. 乌 鱼 完 全 养 殖 试 验 [J]. 台 湾 水 产 学 会 刊,1977,5:1-10. [2] 叶 金 聪, 蔡 良 候, 郑 镇 安, 等. 鲻 鱼 人 工 育 苗 的 研 究 [J]. 台 湾 海 峡, 1977,16(3): [3] 何 大 仁, 肖 金 华, 石 燕 飞. 厦 门 杏 林 湾 普 通 鲻 鱼 性 腺 组 织 学 研 究 [J]. 水 产 学 报,1981,5(4): [4] 林 君 卓, 翁 幼 竹, 方 永 强, 等. 鲻 鱼 精 子 发 生 的 组 织 学 研 究 [J]. 台 湾 海 峡,2001,20(1): [5] 洪 万 树, 翁 幼 竹, 林 君 卓, 等. 鲻 鱼 精 子 发 生 和 形 成 的 超 微 结 构 研 究 [J]. 海 洋 学 报,2001,23(5): [6] 方 永 强, 李 正 森.17α- 甲 基 睾 酮 刺 激 鲻 鱼 精 子 发 生 机 制 的 初 步 研 究 [J]. 海 洋 与 湖 沼,1989,20(1): Fish Physiol Biochem,2002,26: [10] Holdcraft R W,Braun R E. Hormonal regulation of spermatogenesis [J]. Intl J Androl,2004,27: [11] Schulz R W,Cavaco J E B,Santos E M,et al. Gonadotropins,their receptors,and the regulation of testicular functions in fish [J]. Comp Biochem Physiol,2001,129B: [12] Miura T,Miura C,Ohta T,et al. Estradiol-17beta stimulates the renewal of spermatogonial stem cells in males [J]. Biochem Biophys Res Commun,1999,264: [13] Miura T,Miura C. Japanese eel:a model for analysis of spermatogenesis [Review] [J]. Zool Sci,2001,18: [14] 方 永 强, 张 为 民, 翁 幼 竹. 17β- 雌 二 醇 促 进 鲻 鱼 性 腺 发 育 的 作 用 机 制 : 雌 激 素 受 体 的 定 位 [J]. 台 湾 海 峡,2003,22: 欢 迎 订 阅 2010 年 农 业 质 量 标 准 主 管 中 华 人 民 共 和 国 农 业 部 主 办 中 国 农 业 科 学 院 协 办 农 业 部 农 产 品 质 量 安 全 中 心 承 办 中 国 农 科 院 农 业 质 量 标 准 与 检 测 技 术 研 究 所 主 要 栏 目 : 本 刊 特 稿 本 刊 专 稿 本 刊 专 访 专 家 点 评 专 题 论 坛 政 策 法 规 农 产 品 质 量 安 全 农 业 标 准 化 无 公 害 农 产 品 绿 色 食 品 有 机 农 产 品 农 产 品 地 理 标 志 学 科 建 设 与 发 展 标 准 制 定 与 实 施 质 量 认 证 与 管 理 质 量 监 督 与 检 验 检 验 检 测 体 系 建 设 农 业 标 准 公 告 研 究 与 探 讨 海 外 博 览 名 企 名 品 市 场 信 息 与 动 态 编 读 园 地 等 读 者 对 象 : 与 农 产 品 质 量 安 全 农 业 质 量 标 准 和 检 验 检 测 有 关 的 各 级 行 政 管 理 科 研 教 学 检 验 监 测 技 术 推 广 生 产 企 业 等 部 门 的 相 关 人 员 本 刊 为 双 月 刊, 逢 双 月 10 日 出 版 大 16 开 本, 彩 色 四 封,64 页 全 国 各 地 邮 局 ( 所 ) 均 可 订 阅, 也 可 直 接 到 本 刊 编 辑 部 办 理 订 阅 手 续 邮 发 代 号 :82-223, 每 册 定 价 :10.00 元, 全 年 共 元 通 讯 地 址 : 北 京 中 关 村 南 大 街 12 号 中 国 农 科 院 农 业 质 量 标 准 编 辑 部 邮 政 编 码 : 联 系 电 话 / 传 真 :(010) aqs@caas.net.cn 欢 迎 各 界 朋 友 赐 教 赐 稿 订 阅 和 刊 登 广 告

5 716 中 国 水 产 科 学 第 16 卷 Effects and mechanism of estradiol-17β on early spermatogenesis of grey mullet,mugil cephalus SONG Hai-xia,WENG You-zhu,FANG Yong-qiang (The Third Institute of Oceanography of the State Oceanic Administration,Xiamen ,China) Abstract:Using histological and immunohistochemical methods,the effects and mechanism of estradiol-17β(e 2 )on early spermatogenesis of grey mullet,mugil cephalus were investigated. Experimental groups were fed with commercial diet containing 15 mg/kg(low dosage)and 50 mg/kg(high dosage)estradiol-17β for 60 days. Control group was fed with basic feed without additive. Results indicated that testises of experimental and control groups were both in the same developmental level at the beginning of the experiment,and the primordial spermatogonia absolutely predominated in cyst with sertoli cells clinging to spermatogonia. After 1 month feeding,mitosis in spermatogonia could be observed in experimental groups with mitosis cell number in low-dose group significantly more than that in high-dose group,and no mitosis was observed in control group. Above results showed E 2 could hasten cell s division. At the end of the experiment, primary spermatocytes cound be found in seminiferous lobules of testis in experimental group. However,at the same time spermatogonia just began to differentiate in control group. Estrogen receptor α and β subtypes in the early testis of grey mullet were localized in spermatogonia and sertoli cells by using immunohistochemical method,which provided morphological evidence for deeply studying the mechanism of E 2 in inducing spermotogonia s mitosis. [Journal of Fishery Sciences of China,2009,16(5): ] Key words:mugil cephalus;spermatogenesis;estradiol-17β;immunohistochemistry

6 宋海霞等 17β- 雌二醇对鲻早期精子发生的影响及其作用机制 SONG Hai-xia et al Effects and action mechanism of estradiol-17β on early spermatogenesis of grey mullet Mugil cephalus B 1 A 图版Ⅰ 1 精原细胞 箭头 sertoli细胞 粗箭头 低剂量组鲻精巢 A型精原细胞 箭头A B型精原细胞 箭头B sertoli细胞 粗箭头 高 剂量组精巢 原始精原细胞 箭头 sertoli细胞 粗箭头 低剂量组投喂17β- 雌二醇 30 d 后 可见精原细胞有丝分裂 箭头 图4的 放大 可见有丝分裂前期的染色质凝集 箭头 高剂量组可见少数有丝分裂精原细胞 箭头 对照组鲻精巢未见精原细胞有丝 分裂 投喂结束后 低剂量组鲻精巢进入小生长期 可见初级精母细胞 箭头 投喂结束后 高剂量组精巢可见初级精母细胞 箭 头 投喂结束后 对照组精巢出现精原细胞的变化 对照组雌激素受体 α 亚型定位于精原细胞核或胞质 箭头 以及sertoli细胞 粗箭头 低剂量组雌激素受体 α 亚型定位于精原细胞核 箭头 或胞质以及sertoli细胞 粗箭头 对照组雌激素受体 β 亚型定位 于精原细胞核 箭头 和sertoli细胞 粗箭头 高剂量组雌激素受体 β 亚型定位于精原细胞核 箭头 和sertoli细胞 粗箭头 750. Plant Ⅰ 1 spermatogonium arrow sertoli cell thick arrow Testis of grey mullet in low-dose group type A spermatogonium arrow A type B spermatogonium arrow B sertoli cell thick arrow Testis in low-dose group. Primordial spermatogonia arrow sertoli cell thick arrow Spermatogonia in mitosis after feeding estradiol-17β for a month arrow Magnification of figure 4 chromatin condensation in mitotic prophase arrow There were few spermatogonia in mitosis arrow in high-dose group There were no spermatogonia in mitosis in control group Testis of grey mullet in lowdose group entering into primary spermatocyte stage arrow at the end of feeding Primary spermatocytes in high-dose group at the end of feeding Spermatogonia in control group changed at the end of feeding ER-α were localized in nucleus or cytoplasm of spermatogonia arrow and in sertoli cells thick arrow in control group ER-α were localized in nucleus or cytoplasm of spermatogonia arrow and in sertoli cells thick arrow in low-dose group ER-β were localized in nucleus arrow of spermatogonia and sertoli cells thick arrow in control group ER-β were localized in nucleus arrow of spermatogonia and sertoli cells thick arrow in high-dose group 750.

2 : 419 ( -3) 第 2 时 相 (1) :, ;,,,,,,, 5 7 ( -4) (2) :, 0.2 0.5 µm ( -5),, (3) :,,,,,,, ( -6) ( -7) 第 3 时 相 (1) :,,, ( -8) ( -9), 2.0 3.0 µm,, (2) : 2

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