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瞬邱
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1 黄芩汤对溃疡性结肠炎大鼠 NF-κBp65 调控作用研究王怡薇 1, 张会会 1, 王彦礼 1, 郭姗姗 1, 李涛 2, 陈立 1, 庄帅星 1, 周钟鸣 1, 杨伟鹏 ( 中国中医科学院 1 中药研究所, 2 医学实验中心, 北京 ) 摘要 : 研究黄芩汤对溃疡性结肠炎大鼠细胞因子 NF-κB p65 蛋白表达的影响, 探讨其治疗效果及作用机制运用复合法 ( 三硝基苯磺酸 + 乙醇 ) 制备细胞免疫反应性 UC 大鼠模型, 大鼠随机分成正常对照组模型组柳氮磺胺吡啶 (SASP) 组和黄芩汤高中低剂量组 ( g kg -1 ) 治疗 5 d 后评估各组大鼠饮食量体重变化及组织损伤程度, 采用 Griess 法测定血清中 NO 含量,ELISA 法测定 IL-6 TNF-α PGE 2 含量, 运用免疫组化法检测 NF-κB p65 蛋白表达情况结果显示, 模型组大鼠饮食量及体重显著低于正常组 ; 血清中 NO IL-6 TNF-α PGE 2 水平结肠组织 NF-κB p65 蛋白表达量及组织损伤程度显著高于正常组黄芩汤高中剂量组大鼠上述指标均较模型组显著好转黄芩汤对溃疡性结肠炎的治疗可能是通过抑制 NF-κB P65 通路活化, 进而下调促炎细胞因子 NO IL-6 TNF-α PGE 2 表达实现的关键词 : 黄芩汤 ; 溃疡性结肠炎 ;NF-κB p65; 细胞因子 Effect of Huangqin Tang on the function of regulatory NF-κB p65 signal pathway in rats with ulcerative colitis WANG Yi-wei 1,ZHANG Hui-hui 1,WANG Yan-li 1,GUO Shan-shan 1,LI Tao 2, CHEN Li 1,ZHUANG Shuai-xing 1,ZHOU Zhong-ming 1,YANG Wei-peng* 1 (1. Institute of Chinese Materia Medica, 2. The Experimental Research Center, China Academy of Chinese Medical Sciences,Beijing , China) 1 * 收稿日期 : ; 修回日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金项目 ( ); 中国中医科学院自主业务选题项目 (ZZ ). * 通讯作者 :Tel: ,Fax: , hrbywp@sina.com 1

(20 10 5g kg -1 ) 治疗 5 d 后评估各组大鼠饮食量体重变化及组织损伤程度, 采用 Griess 法测定血清中 NO 含量,ELISA 法测定 IL-6 TNF-α PGE 2 含量, 运用免疫组化法检测 NF-κB p65 蛋白表达情况结果显示, 模型组大鼠饮食量及

2 Abstract:To investigate the effect of Huangqin Tang on express of cytokines and NF-κB p65 in rats with ulcerative colitis, and to probe into its underlying mechanisms of action. The mode of UC rats with cell immunoreactivity were made using compound method(trinitrobenzene sulfonic acid and ethanol). Rats were randomly divided intocontrol group, model group, SASP group, high dose, middle dose and low dose of Huangqin Tang. The food intake, body weight and microscopic damage of rats in each group were evaluated after being treated for five days. The blood and colon tissue were also collected. Production of NO was detected by Griess assay, the expression levels of IL-6, TNF-α, PGE 2 were detected by ELISA. ICH method was undertaken to determine the expression of NF-κB p65 protein in colon tissue. The food intake and body weight of model group rats were lower than that of control group. The expression levels of NO, IL-6, TNF-α, PGE 2 in serum and NF-κB p65 protein of colon tissue in model group were higher than that of control group. The above indexes were improved in high and middle dose of Huangqin Tang groups. But there was no significant difference with SASP group. NF-κB p65 may be involved in the pathogenesis of UC, and Huangqin Tang can inhibit the relative activity of NF-κB p65, and decrease the expression levels of NO, IL-6, TNF-α, PGE 2. Key words: Huangqin Tang; Ulcerative Colitis; NF-κB p65; cytokines 溃疡性结肠炎 (ulcerative colitis,uc) 是一种病因尚不十分清楚的慢性非特异性炎症疾病临床表现为腹痛腹泻里急后重粘液脓血便等 [1] UC 的常规治疗药存在停药后易复发, 长期用药副反应多, 部分顽固性病例疗效不理想等缺点 [2] 黄芩汤是伤寒论中经典治痢名方, 由黄芩芍药甘草和大枣配伍而来课题组前期研究结果显示黄芩汤中主要含黄酮类和萜类化合物, 具有明显的抗炎解热和镇痛作用 [3] 目前临床上应用黄芩汤治疗 UC 取得了显著疗效 [4], 但其具体的抗炎作用机制还不清楚核因子 -κb (nuclear factor kb, NF-κB) 是高度保守的一种转录因子, 能调控多种炎症细胞因子基因的表达 [5,6] [7] 已有研究显示 NF-κB 与炎症性肠病密切相关本实验通过观察黄芩汤对 UC 大鼠结肠组织 NF-κB p65 蛋白表达及血清细胞因子的影响, 探讨其治疗 UC 的可能作用机制 2

Rats were randomly divided intocontrol group, model group, SASP group, high dose, middle dose and low dose of Huangqin Tang.

3 材料与方法动物健康 SPF 级 SD 大鼠, 雄性, 体重 180~200g, 由北京维通利华实验动物技术有限公司提供, 合格证为 SCXK( 京 ) 药品与试剂黄芩 (Scutellaria baicalensis Georgi) 芍药 (Paeonia lactiflora Pall.) 炙甘草 (Glycyrrhiza uralensis Fisch.) 大枣 (Ziziphus jujuba Mill.) 购自北京同仁堂公司, 经中国中医科学院中药研究所李先端研究员鉴定后, 储存于本实验室黄芩汤由上述 4 味药配伍而成, 按本实验室方法制备 [8], 黄芩白芍炙甘草大枣分别配伍 ( ,g), 称重后分别用 10 倍和 8 倍饮片重量的水煎煮 1 h, 滤过, 滤液合并后用旋转蒸发仪挥去水分,60 C 真空干燥箱干燥, 称重, 粉碎成粉末, 过筛 (40 目 ) 即得黄芩汤水提物 (HQT) 样品, 其质量经指纹图谱相似度和多成分含量分析控制提取率约为 36%, 与对照图谱相似系数为 0.998, 主要含黄酮和萜类化合物, 其中主要成分质量分数黄芩苷为 %, 汉黄芩苷为 %, 千层纸素 A- 苷为 %, 黄芩素为 %, 汉黄芩素为 %, 千层纸素 A 为 %, 甘草素二糖苷为 %, 甘草苷为 %, 异甘草素二糖苷为 %, 甘草素为 %, 异甘草苷为 %, 异甘草素为 % 柳氮磺胺吡啶肠溶片 (salazosulfapyridine, 缩写 SASP, 批号 : , 上海中西三维药业有限公司 ),2,4,6- 三硝基苯磺酸 (TNBS,Sigma 公司 ),IL-6 TNF-α PGE 2 ELISA 试剂盒 ( 上海泛柯实业有限公司 ), 免疫组化及 DAB 显色试剂盒 ( 武汉博士德生物工程有限公司 ), 兔抗鼠 NF-κB p65 单克隆抗体 (CST 公司 ) 造模方法采用 Morris [9] 报道的方法制备溃疡性结肠炎模型大鼠, 大鼠禁食 24 h 后, 一次性将 TNBS(100 mg kg -1 ) 和 50% 乙醇溶液 0.25 ml 用橡胶输液管缓慢注入距肛门约 8 cm 处的肠腔内, 捏紧肛门, 倒置几分钟即可正常组, 注入相同体积的生理盐水, 术后常规饲养实验分组及样品采集将造模成功的大鼠按体重随机分为模型组阳性药 SASP 组黄芩汤高中低剂量组, 注入生理盐水的作为正常组, 每组 7 只造模 3 天后开始给药, 黄芩汤高中低剂量组分别按 g kg -1 灌胃给药 (g kg -1, 生药量 / 大鼠体重, 按照临床人用剂量 27g/70kg/ 天, 大鼠给药剂量相 3

) 购自北京同仁堂公司, 经中国中医科学院中药研究所李先端研究员鉴定后, 储存于本实验室黄芩汤由上述 4 味药配伍而成, 按本实验室方法制备 [8], 黄芩白芍炙甘草大枣分别配伍 (9..6.

4 当于临床人用剂量的倍 ), 阳性药 SASP 混悬液组按 0.5g kg -1 灌胃给药, 正常组和模型组给予等剂量的生理盐水, 每日 1 次, 连续 5 d 末次给药后大鼠禁食 24 h, 第 2 天各组大鼠眼眶取血, 以 3000 r min -1 转速离心 15min, 分离血清, 置 -20 冰箱冷冻保存取血完毕后处死大鼠, 取出距肛门 8 cm 处结肠组织, 沿肠系膜缘剪开肠腔, 用生理盐水冲洗肠内容物, 剪成 2 段, 一段置于多聚甲醛溶液内固定, 另一段置于中性甲醛溶液内固定, 石蜡包埋进行常规病理切片 HE 染色及免疫组化染色指标检测及方法外观指标造模前造模后和给药后分别观察大鼠精神及活动状况, 记录饮食量及体重病理学指标肉眼及镜下观察结肠组织形态按常规包埋, 切片, 厚度 4μm, 进行 HE 染色, 高倍显微镜下选取视野根据溃疡大小炎症浸润结构损伤程度等进行结肠组织病变损伤程度比较 [10,11] 血清中细胞因子测定 NO 含量用 Griess 法测定, IL-6 TNF-α PGE 2 含量用 ELISA 试剂盒测定, 具体步骤按试剂盒说明书进行操作免疫组化染色各组结肠组织按常规包埋, 切片, 厚度 4μm 采用 S-P 法检测大鼠结肠组织中核因子 NF-κB p65 蛋白表达结肠组织用中性甲醛固定 24h 后, 常规脱水浸蜡包埋切片, 然后常规二甲苯脱蜡, 梯度酒精水化, 采用复合消化液和抗原修复液进行抗原修复,PBS 洗 3 次, 用 3% H 2 O 2 溶液孵育 10min( 去除内源性过氧化氢酶活性 ), 滴加 1:200 浓度的兔抗鼠 NF-κB p65 单克隆抗体,4 过夜,PBS 洗 3 次, 滴加聚合 HRP 标记抗兔 IgG 37 孵育 50min,PBS 冲洗,DAB 显色, 常规脱水, 用中性树胶封片每张切片在高倍镜下 (400 ) 随机选取 4 个视野, 以出现棕黄色染色为阳性信号, 检测 NF-κB p65 积分光密度, 以均值表示每个标本积分光密度统计学方法实验数据用 SPSS 19.0 统计软件进行分析, 数据以 `x±s 表示, 各组数据间比较采用 t 检验进行分析,P<0.05 为差异有统计学意义,P<0.01 为差异极具统计学意义结果 1 黄芩汤对 UC 大鼠精神活动状况饮食量及体重的影响 4

肛门 8 cm 处结肠组织, 沿肠系膜缘剪开肠腔, 用生理盐水冲洗肠内容物, 剪成 2 段, 一段置于多聚甲醛溶液内固定, 另一段置于中性甲醛溶液内固定, 石蜡包埋进行常规病理切片 HE 染色及免疫组化染色指标检测及方法外观指标造模前

5 造模后, 正常组大鼠仅在第 1 天时出现稀便懒动竖毛体重轻度下降症状, 第 2 天起即开始恢复, 体重持续上升, 而模型组大鼠第 1 天即出现不同程度的血便稀便懒动竖毛毛泽无光食量减少体重下降等情况, 此后 3 天上述症状不同程度的加重给药后, 阳性药 SASP 组和黄芩汤组上述症状出现不同程度的好转大鼠饮食量及体重统计结果见图 Mean food intake/g Normal control Model control Salazosulfapyridine High dose of HQT Middle dose of HQT Low dose of HQT Day after 2,4,6-Trinitrobenzenesulfonic acid solution treated Figure 1 Effects of Huangqin Tang (HQT) on food intake of ulcerative colitis rats Normal control Model control Salazosulfapyridine High dose of HQT Middle dose of HQT Low dose of HQT Mean body weight/g Day after 2,4,6-Trinitrobenzenesulfonic acid solution treated Figure 2 Effects of Huangqin Tang (HQT) on body weight of ulcerative colitis rats (n = 7,`x±s ) 5

0 Normal control Model control Salazosulfapyridine High dose of HQT Middle dose of HQT Low dose of HQT 4 5 6 7 8 9 Day after 2,4,6-Trinitrobenzenesulfonic acid solution treated Figure 1 Effects of

6 2 病理学指标 UC 大鼠结肠组织 HE 染色结果见图 3, 高倍镜下各组大鼠结肠组织病变损伤情况比较结果见表 1 肉眼观察大鼠结肠组织 : 正常组大鼠结肠外观正常, 未见充血, 颜色正常, 浆膜面黏膜面和肌层未见有明显病变模型组大鼠部分结肠明显充血瘀血, 个别肠黏膜颜色呈褐色, 直肠较重肠黏膜及肌层明显变薄, 粪便有节段性充满肠道, 部分味恶臭模型较严重的与有个别与周边组织粘连 SASP 组大鼠结肠未见明显充血瘀血, 病变明显减轻黄芩汤 3 个不同剂量组大鼠结肠充血瘀血, 肠颜色及肌层厚度与模型组相比有不同程度减轻镜下观察大鼠结肠组织 : 正常组大鼠结肠黏膜完整, 黏膜下未见有炎症, 肌层结构正常模型组大部分大鼠结肠黏膜有炎症, 细胞浸润, 结肠腺体消失, 被浸润的炎症细胞替代, 以单核细胞淋巴细胞嗜酸性细胞代替了正常细胞, 个别黏膜层明显变薄, 个别肌层组织炎症较重, 失去了正常结构 SASP 组大鼠结肠黏膜炎症浸润, 肠腺溃疡, 与模型组相比病变明显减轻黄芩汤 3 个不同剂量组大鼠结肠黏膜炎症浸润, 肠腺溃疡, 肌层病变与模型组相比, 病变都有明显减轻 Table1 Microscopic damage of colon tissue of rats(10 40). n=7 Group Dose /g kg -1 - ± Normal control Model control SASP High dose of HQT Middle dose of HQT Low dose of HQT Standard:: - : Normal colonic mucosa and colonic mucosal gland structure ± :No focal inflammation under the colonic mucosa + :Limited focal inflammation under colonic mucosa gland ++ :Large inflammatory infiltration under colonic mucosa gland +++ :Large inflammatory infiltration under colonic mucosa gland,disappear and Loss of normal structure 6

大鼠结肠充血瘀血, 肠颜色及肌层厚度与模型组相比有不同程度减轻镜下观察大鼠结肠组织 : 正常组大鼠结肠黏膜完整, 黏膜下未见有炎症, 肌层结构正常模型组大部分大鼠结肠黏膜有炎症, 细胞浸润, 结肠腺体消失, 被浸润的炎症细

7 A B C D E F Figure 3 Effects of Huangqin Tang (HQT) on colon tissue damage of rats. A Normal -1-1 control B Model control C SASP D HQT 20 g kg E HQT 10 g kg F HQT 5g kg-1 3 黄芩汤对UC大鼠血清中NO IL-6 TNF-α PGE2含量的影响大鼠造成UC模型后连续给药5天后血清中NO IL-6 TNF-α PGE2含量变化结果如表2所示 UC模型组血清中NO IL-6 TNF-α PGE2含量均显著高于正 7

8 常组, 黄芩汤高中低剂量组血清中的 NO 含量均显著低于模型组 ;IL-6 TNF-α PGE 2 含量, 黄芩汤各剂量组与模型组相比均有降低, 其中黄芩汤高中剂量组与模型组相比有显著性差异 ; 对于 TNF-α 指标, 黄芩汤高中低剂量组呈现明显的量效关系 Table 2 Effects of Huangqin Tang (HQT) on concentrations of NO,IL-6,TNF-α and PGE 2 after 5 days oral administration on ulcerative colitis rats (n = 7,`x±s). P<0.05,**P<0.01 vs normal control; P<0.05, P<0.01 vs model control Group Dose NO IL-6 TNF-α PGE 2 /g kg -1 /μmol L -1 /ng L -1 /ng L -1 /ng L -1 Normal control ± ± ± ±1.91 Model control ±7.15** 17.64±1.58** 55.19±1.73* 70.43±1.98* SASP ± ± ± ±7.72 High dose of HQT ± ± ± ±4.86 Middle dose of HQT ± ± ± ±9.11 Low dose of HQT ± ± ± ± 黄芩汤对 UC 大鼠结肠组织中 NF-κB p65 表达的影响免疫组化检测发现, 正常组大鼠结肠组织仅少量细胞胞质内可见黄色颗粒, 模型组胞质胞核均可见棕黄色和褐色颗粒,SASP 组和黄芩汤高中低剂量组与模型组相比细胞核内棕黄色和褐色颗粒均有明显减少, 结果见图 4; 各组大鼠结肠组织 NF-κB p65 的表达量详见图 5, 黄芩汤高中低剂量组 NF-κB p65 表达与模型组相比均有明显降低, 呈现一定的量效关系, 其中, 黄芩汤高中剂量组与模型组相比有显著性差异, 黄芩汤低剂量无显著性差异 8

01 vs normal control; P<0.05, P<0.01 vs model control Group Dose NO IL-6 TNF-α PGE 2 /g kg -1 /μmol L -1 /ng L -1 /ng L -1 /ng L -1 Normal control - 13.13±4.18 14.48±1.38 49.99±3.23 53.03±1.

9 A B C D E F Figure 4 Effects of Huangqin Tang (HQT) on express of NF-κB p65 protein in colon tissue of -1 rats 200. A Normal control B Model control C SASP D HQT 20 g kg E -1-1 HQT 10 g kg F HQT 5g kg 9

10 45 40 ** 35 NF-κB p65 (IOD) Normal control Model control SASP High dose Middle dose Low dose Figure 5 Effects of Huangqin Tang (HQT) on concentration of NF-κB p65 protein in colon tissue of rats. *P<0.05,**P<0.01 vs normal control; P<0.05, P<0.01 vs model control 讨论黄芩汤临床上广泛用于溃疡性结肠炎急性胃肠炎细菌性痢疾等胃肠道疾病的治疗 [12,13] UC 是一种炎症性肠病, 发病机制未明确, 目前认为是免疫遗传环境微生物细胞和分子因素共同作用的结果 [14] 近年研究发现, 免疫因素是 UC 发生与发展的主因 [15],UC 的发病涉及到免疫反应的整个过程, 是多个免疫因素共同作用的结果本研究从细胞因子调控以及与炎症密切相关的核转录因子 NF-κB 的信号通路调控方面探讨黄芩汤对 UC 的作用机制本研究所采用的大鼠 UC 模型属免疫复合法, 相比于化学刺激法免疫法造模, 该模型动物易存活, 制作简单, 是现在最常用的 UC 动物模型之一, 产生的肠炎模型更接近于人 Crohn S 病, 适合于炎症性肠病免疫学研究研究结果显示, 大鼠 UC 造模后, 在外观体征上表现出体重下降食量下降不同程度的血便稀便懒动竖毛毛泽无光等变化, 且随时间延长有加重趋势, 阳性药 SASP 组及黄芩汤各剂量组给药过程中外观体征均有明显改观 ; 病理组织学观察结果显示, 相对于模型组大鼠的结肠充血瘀血肠颜色肌层厚度的异常变化以及镜下观察模型组大鼠结肠黏膜炎症, 细胞浸润, 结肠腺体消失被浸润的炎症细胞替代, 个别黏膜层明显变薄, 个别肌层组织炎症较重, 失去正常 10

01 vs model control 讨论黄芩汤临床上广泛用于溃疡性结肠炎急性胃肠炎细菌性痢疾等胃肠道疾病的治疗 [12,13] UC 是一种炎症性肠病, 发病机制未明确, 目前认为是免疫遗传环境微生物细胞和分子因素共同作用的结果 [14] 近

11 结构的程度,SASP 组及黄芩汤不同剂量组大鼠的病变都有明显减轻, 说明黄芩汤对 UC 模型大鼠具有较显著的治疗作用细胞因子在肠道免疫反应的调节中起重要作用, 促炎细胞因子与抗炎细胞因子失衡被认为是 UC 重要发病机制之一 NO IL-6 TNF-α PGE 2 等在溃疡性结肠炎的发生和发展中起着重要作用 [16-18] 测定血清中 NO IL-6 TNF-α PGE 2 水平可反映溃疡性结肠炎的病情变化, 并可作为观察疗效和判断预后的生物学指标之一细胞因子测定结果显示,UC 模型组血清中 NO IL-6 TNF-α PGE 2 含量均显著高于正常组, 黄芩汤高中低剂量组血清中的 NO 含量均显著低于模型组 ;IL-6 TNF-α PGE 2 含量, 黄芩汤各剂量组与模型组相比均有降低, 其中黄芩汤高中剂量组与模型组相比有显著性差异 ; 对于 TNF-α 指标, 黄芩汤高中低剂量组呈现明显的量效关系 SASP 是治疗溃疡性结肠炎的临床常用药, 对于以上细胞因子的影响, 黄芩汤各剂量组与 SASP 组作用大致相当, 未见组间有明显差异, 说明黄芩汤可减少 UC 大鼠炎性细胞因子的分泌, 减轻肠道炎性反应和粘膜损伤, 进而对 UC 起到治疗作用本研究中细胞因子的结果显示, 对于 TNF-α 黄芩汤具有较好的抑制作用, 且呈现一定的量效关系, 其他三种细胞因子缺乏良好的量效关系, 这种药效量效关系不明显的现象也是中药研究中客观存在的问题考虑到中药成分复杂, 中药的多成分以及方剂配伍后成分变化的复杂性决定了方剂作用的途径是多方面多靶点的, 同一靶器官也可能有多个成分对多个靶点的作用, 对某一靶器官的作用也可能会对另一靶器官产生反射性的影响即使是以有效部位为受试物, 其成分也相当复杂, 虽然其中所含的成分主要为同一类成分, 但还有许多不清楚的成分, 即使是同一类成分, 作用也不会完全相同另外考虑动物的个体差异样本数有限等客观原因, 在药效学试验中未能出现明显的量效关系是可以理解的其原因可能与上述分析的原因有关, 但结果仍可体现黄芩汤对其的抑制作用 NF-κB 是一种具有多向转录调节作用的转录因子, 参与众多炎症反应相关基因的转录调控 NF-κB 最常见的形式是由 p50 和 p65 亚单位组成的异二聚体,p65 亚单位是主要的促炎单位, 其活化在 UC 发病中起关键作用, 许多与 UC 相关的促炎细胞因子都存在 NF-κB 结合位点从本研究中大鼠结肠组织 NF-κB p65 蛋白表达结果可以看出, 模型组胞质胞核均可见棕黄色和褐色颗粒提示 NF-κB p65 11

型组血清中 NO IL-6 TNF-α PGE 2 含量均显著高于正常组, 黄芩汤高中低剂量组血清中的 NO 含量均显著低于模型组 ;IL-6 TNF-α PGE 2 含量, 黄芩汤各剂量组与模型组相比均有降低, 其中黄芩汤高中剂量组与模型组相比有显著性差

12 表达增加,SASP 组和黄芩汤高中低剂量组与模型组相比细胞核内棕黄色和褐色颗粒均有明显减少, 且各组大鼠结肠组织 NF-κB p65 的表达量化结果与模型组相比均有明显降低, 呈现一定的量效关系, 其中,SASP 组黄芩汤高中剂量组与模型组相比有显著性差异, 黄芩汤低剂量无显著性差异结果显示黄芩汤与 SASP 对于 UC 大鼠结肠组织 NF-κB p65 的表达均具有明显的抑制作用基于 NF-κB 对炎性细胞因子的明确的调控作用和以上实验结果, 我们认为 : 抑制 NF-κB p65 活化, 进而下调复杂的促炎细胞因子网络, 减轻肠道炎性反应和粘膜损伤, 可能是黄芩汤治疗 UC 发病的重要作用机制之一研究发现, 黄芩汤的单体成分黄芩素汉黄芩素白杨素千层纸素 A 等也是通过抑制 NF-κB 活性起到抗炎作用的 [19-25] 但中药复方是一个复杂的整体, 药效物质基础可能是其中的单体成分, 更多的是复方中多成分共同作用的结果, 所以对于黄芩汤的药效物质基础及作用机制均有待于进一步探讨, 以便更好的为临床用药提供参考 References [1] Chow DKL, Leong RWL, Tsoi KKF, et al. Long-term follow-up of ulcerative colitis in the Chinese population[j]. Am J Gastroenterol, 2009, 104: [2] Ukil A,Maity S,Das P. Protection from experimental colitis by theaflavin-3,3'-digallate correlates with inhibition of IKK and NF-κB activation[j].br J Pharmacol, 2006,149: [3] Huang L,Ye WH,Cai BW,et al. A preliminary study on the pharmacology of the compound prescription Huangqin Tang and Its component drugs[j]. China J Chin Mater Med ( 中国中药杂志 ), 1990, 15: [4] Yu XF,Lu XZ,Dong WB. Clinical observation of ulcerative colitis treated by Huangqin Tang[J]. J Emerg Tradit Chin Med ( 中国中医急症 ), 2010 (009): [5] Ho SK, Jeong JM, Joon CW, et al. Bojesodok-eum, a herbal prescription, ameliorates acute inf lammation in association with the inhibition of NF-B-mediated nitric oxide and proinflammatory cytokine production[j]. Evidence-Based Complem Alternat Med, 2012: ,

p65 活化, 进而下调复杂的促炎细胞因子网络, 减轻肠道炎性反应和粘膜损伤, 可能是黄芩汤治疗 UC 发病的重要作用机制之一研究发现, 黄芩汤的单体成分黄芩素汉黄芩素白杨素千层纸素 A 等也是通过抑制 NF-κB 活性起到抗炎作用

13 [6]Cortez M, Carmo LS, Rogero MM, et al. A high-fat diet increases IL-1, IL-6, and TNF-α production by increasing NF-κB and attenuating PPAR-γ expression in bone marrow mesenchymal stem cells[j]. Inflammation, 2013, 36: [7] Jobin C, Sartor RB. NF κb signaling proteins as therapeutic targets for inflammatory bowel diseases[j]. Inflammat bowel dis, 2000, 6: [8] Li T. Study on the Chemical Basis and Pharmacokinetics of Huangqin Tang ( 黄芩汤物质基础与药代动力学特征研究 ) [D]. Beijing: China Academy of Chinese Medical Sciences, [9]Morris GP, Beck PL, Herridge MS, et al. Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon[j]. Gastroenterology, 1989, 96: [10]Chen ZN, Shen MC, Guo MY. Practical Surgical Pathology [M].Shanghai: Shanghai Medical University publishing house( 上海医科大学出版社 ),1997, [11] Yu BJ, Wang ZQ. The Preclinical Safety Evaluation and Practice [M]. Beijing: Military Medical Sciences publishing house( 军事医学科学出版社 ), 1997: [12] Zhang BG, Li XX, Liu QF. Modern pharmacodynamics research and clinic application of Huangqin Tang[J]. China J Chin Mater Med ( 中国中药杂志 ), 2008, 33: [13] Zhou YP, Yang ZJ, Chen C, et al. Clinical observation of effect of Huangqin Tang plus on regulating T Cells of Ulcerative Colitis patients[j].gansu J Tradit Chin Med ( 甘肃中医 ),2004, 17: [14] Lu ZY, Zhong NS. Internal Medicine [M]. 7th Ed. Beijing: People s Medical Publishing House( 人民卫生出版社 ), 2008: [15] Felley-Bosco E, André M. Proteomics and chronic inflammatory bowel diseases[j]. Pathology-Research and Practice, 2004, 200: [16] Liu Diqun, Wu Chengqiu, Shi Wei, et al. Sufferer's chang in tumor necrosis factor, interleukin-8, Nitric oxide synthase and nitric oxide of Ulcerative Colitis[J]. Clinic Focus, 2006, 21: [17] Papadakis CA, Targan SA. Tumor necrosis factor : biology and therapeutic inhibitors[j]. Gastroenterol, 2000, 119: [18]Halter F, Tarnawski AS, Schmassmann A, et al. Cyclooxygenase 2-implications on maintenance of gastric mucosal integrity and ulcer healing: controversial issues and perspectives[j]. Gut, 2001, 49:

Study on the Chemical Basis and Pharmacokinetics of Huangqin Tang ( 黄芩汤物质基础与药代动力学特征研究 ) [D]. Beijing: China Academy of Chinese Medical Sciences, 2013.

14 [19] Chen YC, Yang LL, Lee TJF. Oroxylin A inhibition of lipopolysaccharide-induced inos and COX-2 gene expression via suppression of nuclear factor-κb activation[j]. Biochem Pharm, 2000, 59: [20] Chen YC, Shen SC, Chen LG, et al. Wogonin, baicalin, and baicalein inhibition of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 gene expressions induced by nitric oxide synthase inhibitors and lipopolysaccharide[j]. Biochem Pharm, 2001, 61: [21] Sook Chi Y, Sun Cheon B, Pyo Kim H. Effect of wogonin, a plant flavone from Scutellaria radix, on the suppression of cyclooxygenase-2 and the induction of inducible nitric oxide synthase in lipopolysaccharide-treated RAW cells[j]. Biochem Pharm, 2001, 61: [22] Kang BY, Chung SW, Kim SH, et al. Involvement of nuclear factor-κb in the inhibition of interleukin-12 production from mouse macrophages by baicalein, a flavonoid in Scutellaria baicalensis[j]. Planta medica, 2003, 69: [23] Lin CC, Shieh DE. The anti-inflammatory activity of Scutellaria rivularis extracts and its active components, baicalin, baicalein and wogonin[j]. Am J Chin Med, 1996, 24: [24] Wakabayashi I, Yasui K. Wogonin inhibits inducible prostaglandin E 2 production in macrophages[j]. Eur J Pharm, 2000, 406: [25] Zhang DY, Wu J, Ye F, et al. Inhibition of cancer cell proliferation and prostaglandin E2 synthesis by Scutellaria baicalensis[j]. Cancer Res, 2003, 63:

Wogonin, baicalin, and baicalein inhibition of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 gene expressions induced by nitric oxide synthase inhibitors and lipopolysaccharide[j].

TGF-β AngⅡ B SD ~ 220g SPF. SCXK No SYXK ~ 25 40% ~ 70% OR37G-C

TGF-β AngⅡ B SD ~ 220g SPF. SCXK No SYXK ~ 25 40% ~ 70% OR37G-C 2017 7 43 4 Journal of Southwest Minzu University Natural Science Edition Jul. 2017 Vol. 43 No. 4 doi10. 11920 /xnmdzk. 2017. 04. 008 1 1 1 2 1 1 3 1. 610212 2. 6100413. 610031 AngⅡ TGF-β. SD 60 180 ~