文件编号：

Size: px

Start display at page:

Download "文件编号："

缚铮巫
5 years ago
Views:

1 SP Focurose 6XL 为确保产品的性能和无忧的操作, 使用前请仔细阅读本手册, 有任何疑问请咨询本公司售后技术支持或当地的销售人员 ( 联系方式见附录 ) 1. 产品介绍 SP Focurose 6XL 适用于分离纯化蛋白多肽核酸等所有带电的生物分子特点 : a. 高载量, 提高产能 b. 适合于大规模生物分子的初期捕获或中度纯化 c. 纯化工艺灵活性高, 可以和疏水层析组合使用表 1: 性能参数介质基质粒径范围 SP Focurose 6XL 含有葡聚糖的高度交联 6% 的琼脂糖 µm 平均粒径 90µm 介质类型强阳离子交换带电基团 -CH 2 CH 2 CH 2 SO 3 - 离子载量 umol H + /ml 介质 ph 稳定性 4-13( 长期 ) 3-14( 短期 ) 操作压力最大流速 0.3MPa 700cm/h 化学稳定性所有常用缓冲液 1.0M 氢氧化钠 8.0M 尿素 6.0M 盐酸胍 70% 乙醇避免使用氧化剂阳离子去污剂阳离子缓冲液贮存溶液 0.2M NaAc,20% 乙醇贮存温度 4-30 第 1 页共 5 页

2 2. 离子交换介质的选择图 1: 离子交换介质的选择说明 : a. 当目标物所在溶液的 ph 目标物的等电点时, 选择阳离子交换介质 b. 当目标物所在溶液的 ph 目标物的等电点时, 选择阴离子交换介质 c. 选择离子交换介质时, 所有使用溶液的 ph 应该在离子交换介质的使用 ph 范围以内 d. 选择离子交换介质时, 所有使用溶液的 ph 盐的种类盐的浓度必须能维持目标物的活性, 避免目标物过酸 / 过碱水解沉淀等情况 3. 缓冲溶液的选择表 2: 阴离子交换缓冲液 ph 范围缓冲盐浓度 (mm) 平衡离子 pka(25 ) N-Methylpiperazine 20 Cl Piperazine 20 Cl - 或 HCOO Bis-Tris 20 Cl Bis-Tris propane 20 Cl Triethanolamine 20 Cl - 或 CH3COO Tris 20 Cl N-Methyldiethanolamine 20 SO Propane 1,3-Diamino 20 Cl Bis-Tris propane 20 Cl Ethanolamine 20 Cl Piperazine 20 Cl Propane 1,3-Diamino 20 Cl Piperidine 20 Cl 第 2 页共 5 页

3 表 3: 阳离子交换缓冲液 ph 范围缓冲盐浓度 (mm) 平衡离子 pka(25 ) Citric acid 20 Na Lactic acid 50 Na Acetic acid 50 Na + 或 Li Methyl malonic acid 50 Na + 或 Li MES 50 Na + 或 Li Phosphate 50 Na HEPES 50 Na + 或 Li BICINE 50 Na 说明 : a. 必须严格按照表 2 和表 3 的要求选择缓冲溶液的种类和浓度 b. 错误的缓冲液 ( 种类和浓度 ) 会干扰分离效果, 具体体现在影响分离度离子交换介质的载量分离纯化过程中的 ph 波动等 c. 选择离子交换介质时, 所有使用溶液的 ph 应该在离子交换介质的使用 ph 范围以内 d. 所有缓冲液试剂必须使用分析纯或者更高纯度的试剂 e. 在溶液配制后, 须经过滤 ( 粒径 45µm 用 0.22µm 过滤粒径 165µm 用 0.45µm 过滤粒径 300µm 用 0.8µm 过滤, 避免堵塞离子交换介质 ) 和脱气处理 ( 影响分离效果 ) 4. 样品的制备 a. 样品所在溶液盐的组分及 ph 必须和平衡液保持一致, 可以通过用平衡液稀释或透析超滤 G25 进行缓冲液置换处理 b. 样品过滤 ( 粒径 45µm 用 0.22µm 过滤粒径 165µm 用 0.45µm 过滤粒径 300µm 用 0.8µm 过滤, 避免堵塞离子交换介质 ) 备注 : 不建议直接用强酸或强碱调整样品溶液的 ph, 可能会出现目标物的降解和失活 5. 纯化方式的选择 a. 用纯化水以 150cm/h 的流速清洗 5-10CV b. 用平衡液以 150cm/h 的流速平衡 5-10CV, 直至 UV ph 电导平稳 c. 将制备好的样品加载到层析柱中 d. 用平衡液清洗 5-10CV, 直至没有物质流穿为止 e. 线性梯度洗脱 ( 优选 ): 线性梯度洗脱 10-20CV(0%-50% 洗脱液 ) 等度洗脱 : 在平衡液的基础上逐步提高盐浓度进行洗脱, 每种盐浓度洗脱液洗脱 5CV f. 用 100% 洗脱液洗脱 5CV 备注 : 洗脱液 = 洗脱液 +1M NaCl, 其它组分不变第 3 页共 5 页

4 6. 清洗清洗后可以去除一些强结合性物质 ( 例如一些强结合的蛋白变性蛋白脂类等 ), 从而达到恢复介质的优良性能 ( 例如载量流动性柱效等 ) 建议每使用 5-10 次后进行一次清洗, 具体清洗频率需根据纯化的初始样品的洁净度进行调整 a. 用 5CV 2M NaCl 以 50cm/h 的流速冲洗 ( 保证接触时间为 1-2h) b. 用 5CV 1M NaOH 以 50cm/h 的流速冲洗 ( 保证接触时间为 1-2h) c. 用 5CV 2M NaCl 以 50cm/h 的流速冲洗 ( 保证接触时间为 1-2h) d. 用 5CV 纯化水以 50cm/h 的流速冲洗, 直至 UV 电导平稳 e. 用 5CV 保存液以 50cm/h 的流速冲洗后保存备注 : 保存液为 20% 乙醇或 0.1M NaOH 7. 常见问题表 4: 常见问题及解决方案问题可能原因解决方案纯化时目标物不与介质结合或结合量较低洗脱时没有收集到目标物或只收集到少量目标物目标物纯度较低介质载量下降 1. 上样量过载降低上样量 2. 上样速度过快降低上样流速 3. 蛋白或脂类在介质中聚集及时有效地清洗介质或更换新的介质 4. 目标物不带电或与介质带同样的电荷筛选合适的结合缓冲液 5. 样本或平衡液中盐浓度和 ph 不正确检查样品和平衡液中的电导和 ph 6. 选用了错误的缓冲液参考缓冲液选择表 7. 样品中加入了不合适的去污剂检查样品中是否有不合适的去污剂 1. 目标物没有与介质结合或结合量较少先确认目标物是否与介质结合 2. 洗脱条件不合适第 4 页共 5 页洗脱液洗脱能力不够, 加大盐浓度和调整洗脱液 ph 3. 洗脱时间不够降低流速, 延长洗脱液的保留时间 4. 洗脱体积过小加大洗脱体积 5. 目标物在洗脱液条件下出现聚集沉淀检测目标物在洗脱液条件 ( 盐浓度和 ph) 下的溶解度和稳定性 1. 样品没有经过前处理样品上柱前必须要经过离心或过滤 2. 样品粘度过高 3. 洗杂不彻底用平衡液适当的稀释样品, 降低粘度加大洗杂体积直至基线平稳并与平衡液一致 4. 杂质蛋白或脂类在介质中聚集沉淀及时有效地清洗介质 5. 洗脱条件不佳优化洗脱条件 6. 目标物出现降解检测目标物的稳定性 7. 柱料装填效果不佳重新装填或购买 8. 分离柱顶部有较大储样体积重新装柱或降低储样体积 9. 介质中有微生物生长介质使用完后, 请及时正确保存介质 1. 上样速度过快降低上样流速 2. 蛋白或脂类在介质中聚集, 导致载量下降及时清洗介质

3. 使用次数过多, 配基被氧化或脱落及时清洗介质或更换新介质色谱峰上升缓慢介质装填过紧重新装柱色谱峰拖尾介质装填太松重新装柱柱床有裂缝或干涸出现泄露或大体积气泡引入检查管路是否有泄露或气泡, 重新装柱 1. 蛋白或脂类聚集及时清洗介质或滤膜液流较慢 2. 蛋白沉淀在介质中 3.

5 3. 使用次数过多, 配基被氧化或脱落及时清洗介质或更换新介质色谱峰上升缓慢介质装填过紧重新装柱色谱峰拖尾介质装填太松重新装柱柱床有裂缝或干涸出现泄露或大体积气泡引入检查管路是否有泄露或气泡, 重新装柱 1. 蛋白或脂类聚集及时清洗介质或滤膜液流较慢 2. 蛋白沉淀在介质中 3. 分离柱中微生物生长调整平衡液和洗脱液组分, 以维持目标物的稳定性和介质的结合效率所用试剂必须经过过滤和脱气 ; 样品上柱前必须离心或过滤 8. 订购信息表 5: 订购信息表产品规格 (ml) 货号 SP Focurose 6XL 25 HY SP Focurose 6XL 100 HY SP Focurose 6XL 500 HY SP Focurose 6XL 1000 HY 备注 : 大规格包装产品或其它产品购买, 请咨询本公司当地销售或售前技术支持 9. 联系方式武汉汇研生物科技股份有限公司地址 : 武汉市东湖新技术开发区流芳园南路 18 号新特工业园电话 : 网址 : 邮箱 :Huiyanbio@126.com 第 5 页共 5 页

SOURCE 15RPC 反相层析柱在ÄKTA系统上快速分离,制备中草药有效成份

SOURCE 15RPC 反相层析柱在ÄKTA系统上快速分离,制备中草药有效成份 MMC 6HF 使用说明书为确保产品的性能和无忧的操作, 使用前请仔细阅读本手册, 有任何疑问请咨询本公司售后技术支持或当地的销售人员 1. 产品介绍 MMC 6HF 是一种多模式耐盐生物分离介质, 适用于蛋白多肽核酸等所有带电的生物分子的组群分离中度纯化图 1:MMC 6HF 的配基是一种多模式配基, 它与目标分子存在许多类型的相互作用, 主要是离子作用, 其次是氢键作用和疏水作用等