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1 RPC IEX (Sephadex LH2) 4 7 WTO herbal 39%, 41% % 15 (29.6%)72 (14.1%) 78 (15.4%) 1 3-5% 1 5 FDA 2 Draft Guidance on Botanical Drug Product for Industry IIIII food supplement 3. 1 EMEA herbal remedy 2. 3 Evidence Based

2 ABCT 2 7 genomicproteomic metaonomics system biology DNA Genomic Transcriptomic Proteomic Metabolomic,,,,, ( GAPGLPGCPGEPGMPGSP ) 1 8 7

3 7 95% (NPC) RPC IEX (Sephadex LH2) HSCCC Normal Phase Chromatography, Reverse Phase Chromatography ; C4, C8,C18 SOURCE HPLC Macroporus media 4 polyacrylamide Super Critical Fluid, CO2 CO2 4 Sephadex LH2 (e.g.sepharose HP) Ion exchange chromatography HSCCC,, Alkaloid <ph3 SP Sepharose HP

4 <ph12 Q Sepharose HP Organic acid Saponin Sephadex LH-2 Q Sepharose HP C FlavoneFlavonoid Q Sepharose HP Sephadex LH-2 Polyphenol Terpene Sephadex LH-2 IEX Sepharose HP SOURCE Toxin Polysaccharides Sephadex G5,1,2Superdex 2 PG Sephacryl 3, 4,5 <ph3 SP Sepharose HP <ph3 SP Sepharose HP 6-8%( ) SOURCE15RPC C18 9% SOURCE ( ) 1M C8C18 27 ( ) Sephadex LH

5 N SP HP4:1_UV1_21nm SP HP4:1_UV2_28nm SP HP4:1_UV3_26nm SP HP4:1_Conc SP HP4:1_Inject mau 35 H H N N H 3 CH 3 O O Column: HiTrap Sepharose SP HP Sample: atropine,procaine,quinine O Buffer A: 2% ethanol ph1.5; Bu 25 O OH Gradient: -5% 1CV; 15%-3% Flowrate: 1ml/min 2 H 2 C 15 HO H N H 3 C O H 1 N ; SP Sepharose HP pka mau mau ml cv <ph3 <1%SP Sepharose HP >8% >95% mau SrSPHP XK16/ ml <ph3 <2% SP Sepharose HP >9% SOURCE15RPC 27 >98%

6 SP Sepharose High Performace 3 >ph11 Q Sepharose HP Sephadex LH2 C >ph12 Q Sepharose HP 5% Sephadex LH-2 9% UV1_28nm UV2_27nm UV3_254nm Cond Conc ph Inject mau 2 Column: Q Sepharose HP Buffer A: 25mM Ethanolamine ph 11 Buffer B: A+1M NaCl ph 11 Sample: ml >ph11 <1% SP Sepharose HP >9%

7 >ph11 <5% SP Sepharose HP >9% SOURCE15RPC >97% Sephadex LH-2 Sephadex G-25 Sephadex LH-2 tannie Sephadex LH2 28 HIV1 29 Sephadex LH-2 Prof. Hans Henke Sephadex LH-2 3 GE Healthcare

8 <3% Sephadex LH2 >66% C18 >95% (Rosmarinic acid, RosA)Ellis Rosemarnus officinalis L 2 18/356 (1) (2) (3) (4) (5) FDA (GRAS,21 CFR Chapter 21,part182) 2UV Sephadex LH-2 3% >66% AKTA explore Sephadex LH-2 >ph11 Q Sepharose HP Sephadex LH2 >ph11 Q Sepharose HP Q Sepharose HP C UV1_23nm UV2_2 15nm Cond Conc mau 25 A:25mM???, B:1MNaCL PH=11?? Sample 2 5 mau UV1_23nm Cond Conc ph Peck ml ml

9 >95% C >ph11 <5% Q Sepharose HP>7% C18 UStep 1 Sepharose Q HP Step 2 Source 15RPC 3 25 A: 2mM Phosphate ph 11 A: 1mM NaOH ph12 B: A + 1M NaCl 15 B: ACN A A C C C C C C C C Wast % >95% Q Sepharose HP>9% C18 Q Sepharose HP Sephadex LH2 Sephadex LH-2 Sephadex G Sephadex LH , Q Sepharose FF Q Sepharose FF Sephadex LH-2 95 Sephadex LH-2 mau UV1_28nm UV2_27nm UV3_254nm Cond Conc ph Inject Logbook A:25mM?? ph=9.84, B: 1zz5?? Buffer A: 25mM Ethanolamine ph 1 3 Buffer A: 25mM Ethanolamine ph 1 Buffer B: A+1M NaCl ph 1 Sample: Buffer B: EtOH 25 RPC Puerain Sample QHP

10 2% Q Sepharose HP >8% C18 >95% Q sepharose FF Q sepharose FF 9.3 Sephadex LH2 24 Sephadex LH-2 Sephadex LH-2 Sephadex LH , Sephadex LH-2 LPO SOD Sephadex LH2 3

11 Sephadex LH-2 Sephadex LH-2 27 AKTA explore Sephadex LH Sephadex LH-2 Sephadex LH2 Sephadex LH-2 Sephadex LH-2 Sephadex LH-2 3

12 Sephadex LH AKTAexplore Sephadex LH Sephadex LH Sephadex LH2 9 FDA GE Healthcare Biosciences BioProcess Fineline 35 HPLC ~5 65~ FDA SFDA cgmp

13 BioProcess : BioProcess MPLC 1mm : FineLINE 35L : : 5% purity : >99% Sephadex LH Sepharose Superdex/Sephacryl SOURCE RPC 59, _ _54 S uperose 12 MonoQ Sepharose Superdex 2/Sephacryl 3-1

14 , 33 DEAE Sephadex G1 67 AH-1AH-2 AG-2 Sephadex G2 DHP- 63,64 1,DHP-2 Sephadex G Superdex 2 Sephadex Sephadex G Sephadex G-2 72, ,64 6 min Superdex 2 prep grade 8 min Superdex 2 Sephadex G Sevag GE Healthcare ng Kg ÄKTA Bioprocess Unicorn GE Healthcare Sephadex Sepharose MonobeadsSOURCE

15 ÄKTAbasic ÄKTApurifier 1 ml, 25 1 ml, 25MPa ÄKTAexplorer/ÄKTApilot 1ml, 8ml, 4-1MPa BioProcess systems 2-2L/h,.3-1MPa UNICORN ÄKTAexplorer System GMP FDA Unicorn 99 1ml/min ug-g ph BioProcess MPLC, HPLC System 36112mm 122 / 1-1MP Unicorn AKTA cgmp BPGBPSSINdEX FineLINEHPLC 2m

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