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肖瓦后
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GE Healthcare Life Sciences 数据文件 2897681 AA 蛋白质样品制备 Protein A Mag Sepharose Xtra 和 Protein G Mag Sepharose Xtra 是设计用于从各个物种中对单克隆和多克隆抗体进行有效高容量纯化 / 筛选的磁珠抗体被高度特异地捕获在 Mag Sepharose 上的 protein A 和

1 GE Healthcare Life Sciences 数据文件 AA 蛋白质样品制备 Protein A Mag Sepharose Xtra 和 Protein G Mag Sepharose Xtra 是设计用于从各个物种中对单克隆和多克隆抗体进行有效高容量纯化 / 筛选的磁珠抗体被高度特异地捕获在 Mag Sepharose 上的 protein A 和 protein G 配体上, 然后用磁力装置收集磁珠该磁珠简化了小规模纯化的样品处理和 Protein G Mag Sepharose Xtra 提供 : 各个物种抗体的高容量小规模纯化高纯度和产量轻松地平行筛选抗体, 具有高度重现性可放大性 : 从小或大体积样品中简单地捕获抗体 ( 低至微升, 高至毫升规模 ) 每种磁珠提供有两种包装规格 :2 1 ml 1% 填料悬浮液和 5 1 ml 1% 填料悬浮液 1 ml 1% 填料悬浮液相当于 1μl 沉淀填料根据推荐的操作步骤, 一个 1 ml 填料悬液足够 1 次纯化运行与 MagRack 6( 一种用于处理微型离心管中的磁珠的分离工具 ) 一起使用, 可平行处理达 6 个样品, 轻松实现在机械装置上高通量平行筛选大量样品抗体的可靠捕获和 Protein G Mag Sepharose Xtra 是具有 Protein A 或 Protein G 配体的亲和层析填料 ( 树脂 ), 两者对单克隆或多克隆抗体都具有高度亲和力 Protein A 和 Protein G 对免疫球蛋白的结合强度取决于来源物种和具体的免疫球蛋白的亚类表 1 显示 Protein A 和 Protein G 的相对结合强度图 1. 和 Protein G Mag Sepharose Xtra 设计用于从澄清的细胞裂解液和生物体液中抗体的高容量纯化表 1. 对 Protein A 和 Protein G 的相对结合强度物种人鸡蛋黄牛狗山羊豚鼠仓鼠马考拉骆驼猴 ( 恒河 ) 小鼠猪兔大鼠绵羊亚类 lga lgd lgd lgg2 lgg3 lgg4 lgm lgy lgg2 lgg2a lgg2b lgg3 lgm lgg2a lgg2b lgg3 protein A 结合可变可变可变 / = 强结合, = 中等结合, = 弱或不结 protein G 结合

2 简单化处理磁珠形式对小规模实验具有极好的性质高密度磁珠通过磁力装置可快速捕获, 同时磁珠的能见度确保稳定地收集在纯化步骤中结合的抗体与产品一起提供的有经过优化用于抗体纯化的操作步骤 MagRack 6 能够制备 6 个样品, 捕获在 1.5 ml 微型离心管中 ( 图 2) 离心管放置于支架, 磁珠在几秒内被吸至磁铁上这可以轻松地去除上清, 而磁珠被留在离心管内 Ab SpinTrap Buffer Kit 可节省缓冲液配制时间, 加快可重现的抗体纯化 Protein A Mag Sepharose Xtra 和的特征被总结在表 2 中抗体结合容量标准分析在 GE Healthcare 实验室进行比较标准分析以研究使用不同的磁珠产品对抗体的结合容量我们比较了和 Protein G Mag Sepharose Xtra 与来自 Millipore Invitrogen 和 Qiagen 的相应磁珠产品 ( 表 3) 根据它们各自的厂商说明书纯化人 IgG 和兔 IgG ( 表 3) 所有的填料都经过一个测试, 即 IgG 的上样量超出每种填料的吸附容量图 2. 高密度磁珠通过 MagRack 6 磁铁装置可以快速捕获表 2. 和的特征基质高度交联的有磁性的球形琼脂糖 (Sepharose) 填料 Protein A 交联 NHS 活化的 Mag Sepharose 配体 Protein A 结合容量 >27 mg 人 IgG/ml 填料颗粒大小 37 到 1 μm 工作温度室温保存溶液 2% 乙醇,1% 填料悬液保存温度 4 到 8 基质高度交联的有磁性的球形琼脂糖 (Sepharose) 填料 Protein G 交联 NHS 活化的 Mag Sepharose 配体 Protein G 结合容量 >27 mg 人 IgG/ml 填料颗粒大小 37 到 1 μm 工作温度室温保存溶液 2% 乙醇,1% 填料悬液保存温度 4 到 8 表 3. Protein A 和 Protein G 填料的实验条件供应商层析填料上样结合 / 洗涤缓冲液洗脱缓冲液 GE Healthcare (GEHC) 和 Protein G Mag Sepharose Xtra PBS (14 Mm NaCl, 2.7 mm KCl, 1 mm 磷酸盐, ph 7.4) 1 mm 甘氨酸, ph 2.8 Millipore PureProteome Protein A 和 PureProteome Protein G Magnetic Beads PBS (14 mm NaCl, 2.7 mm KCl, 1 mm 磷酸盐, ph 7.4) 2 mm 甘氨酸, ph 2.5 Qiagen BioMag Protein A 和 BioMag Protein G 1 mm TrisHCl, 15 mm NaCl, ph mm 甘氨酸, ph 2.5 Invitrogen Dynabeads Protein A 和 Dynabeads Protein G PBS (14 mm NaCl, 2.7 mm KCl, 1 mm 磷酸盐, ph 7.4) 包括.2% Tween 2 1 mm 甘氨酸, ph 2.8

结果显示和 Protein G Mag Sepharose Xtra 对人 IgG 的结合载量远高于 Millipore 和 Qiagen 的相应产品用 Protein A Mag Sepharose Xtra 和

protein A 磁珠 Yield (μg) 9 8 7 6 5 4 3 2 1 GEHC GEHC Millipcre Millipcre Invltrogen Invltrogen B).

比较 Protein A 和 Protein G 磁珠对兔 IgG 的纯化产量每条代表一次纯化所获 IgG 量 B).

抗体产量始终很高 (>8%), 且经过 SDSPAGE 分析的纯度 >9% 数据( 图 5 和 6) 显示和 Protein G Mag Sepharose Xtra 的纯化具有高度可重现性, 相对标准偏差 <2% 图 3.

3 结果显示和 Protein G Mag Sepharose Xtra 对人 IgG 的结合载量远高于 Millipore 和 Qiagen 的相应产品用 Protein A Mag Sepharose Xtra 和进行一次可纯化获得大约 354 μg 人 IgG( 图 3A 和 3B) A). protein A 磁珠 A). protein A 磁珠 Yield (μg) GEHC GEHC Millipcre Millipcre Invltrogen Invltrogen B). protein G 磁珠 Yield (μg) GEHC GEHC Millipcre Millipcre Invltrogen Invltrogen 图 4. 比较 Protein A 和 Protein G 磁珠对兔 IgG 的纯化产量每条代表一次纯化所获 IgG 量 B). protein G 磁珠具有高纯度的可重复的抗体纯化为了显示和 Protein G Mag Sepharose Xtra 的效率和可重现性, 进行 6 次重复纯化 ( 表 4) 每种填料上样量是总结合容量的一半抗体产量始终很高 (>8%), 且经过 SDSPAGE 分析的纯度 >9% 数据( 图 5 和 6) 显示和 Protein G Mag Sepharose Xtra 的纯化具有高度可重现性, 相对标准偏差 <2% 图 3. 使用不同的 protein A 和 protein G 磁珠纯化人 IgG 每条代表一次纯化所获 IgG 量表 4. 对和 Protein G Mag Sepharose Xtra 的实验条件在兔 IgG 纯化期间和的结合载量高于 Millipore 和 Qiagen 的相应产品一次可纯化得 78 μg 兔 IgG( 图 4A 和 4B) 样品样品体积结合 / 洗涤缓冲液洗脱缓冲液在大肠杆菌裂解液中加入标准的 IgG 3 μl PBS (14 mm NaCl, 2.7 mm KCl, 1 mm 磷酸盐, ph 7.4) 1 mm 甘氨酸,pH 2.8

A)protein A Mag Sepharose Xtra 回收率 (%) 1 9 8 7 6 5 4 3 2 1 1 2 3 4 5 6 纯化运行 B)protein G Mag Sepharose Xtra 回收率 (%) 1 9 8 7 6 5 4 3 2 1 1 2 3 4 5 6 纯化运行图 5.

MabSelect SuRe 层析柱分析, 数据显示两种技术得到类似的结果 ( 图 7) 然而, 使用具有优于 1 ml HiTrap MabSelect SuRe 层析柱的下列优点 :(i) 样品处理简单, 无需层析系统,(ii) 能够同时分析多个样品, 可减少分析所需要的总时间表 5.

8 HiTrap MabSelect SuRe 1 ml PBS (14 mm NaCl, 2.7 mm KCl,1 mm 磷酸盐, ph 7.4),.5% Tween 2 1 mm 磷酸钠, ph 2.8 1.4 1.2 图 6.

4 A)protein A Mag Sepharose Xtra 回收率 (%) 纯化运行 B)protein G Mag Sepharose Xtra 回收率 (%) 纯化运行图 5.6 个重复纯化的回收率始终 >8%(RSD<2%) 1 μl sample 表达筛选研究我们使用磁珠和层析柱进行比较研究以确定在 CHO 细胞中产生的人 IgG1 的表达 ( 表 5) 在两周的细胞培养期间含有 IgG1 的样品被连续地从生物反应器中被取出样品使用磁珠和 1 ml HiTrap MabSelect SuRe 层析柱分析, 数据显示两种技术得到类似的结果 ( 图 7) 然而, 使用具有优于 1 ml HiTrap MabSelect SuRe 层析柱的下列优点 :(i) 样品处理简单, 无需层析系统,(ii) 能够同时分析多个样品, 可减少分析所需要的总时间表 5. 表达筛选研究的实验条件填料体积结合 / 洗涤缓冲液洗脱缓冲液 Protein A Mag Sepharose Xtra 1 μl PBS (14 mm NaCl, 2.7 mm KCl, 1 mm 磷酸盐, ph 7.4) 1 mm 甘氨酸, ph 2.8 HiTrap MabSelect SuRe 1 ml PBS (14 mm NaCl, 2.7 mm KCl,1 mm 磷酸盐, ph 7.4),.5% Tween 2 1 mm 磷酸钠, ph 图 6. 在还原条件下的 SDSPAGE 用 Deep Purple 总蛋白染料染色 6 个重复纯化的纯度始终 >9%(RSD<2%) conc. lmg/ml Sample Prateln A Mag Sepharose Xtra HITrap Mabselect SuRe 图 7. 比较和 HiTrapMabSelect SuRe 不同实验组别所得人 IgG1 浓度注释 : 使用 HiTrap MabSelect SuRe 分析样品 1 和 3

5 大体积低表达的 IgG2b 的纯化磁珠纯化的一个关键优点是能够使用不同体积的样品和填料悬液在本研究中, 使用 1.75 ml 的, 将从 5 ml 稀释的细胞上清液中低表达获取的单克隆小鼠 IgG2b (.7 mg Ab/ml) 成功地纯化和浓缩样品上样量为 3.5 mg, 实验一分为二进行根据 SDSPAGE 结果显示高度特异性 ( 图 8), 且回收率为 ~7% 纯化的小鼠 IgG2b 从 5 ml 被浓缩到 3.5 ml 两种不同的 Protein A 和 Protein G Mag Sepharose 生产线 Protein A Mag Sepharose 和 Protein G Mag Sepharose 被优化用于免疫沉淀技术有效富集低丰度蛋白和 Protein G Mag Sepharose Xtra 被优化用于抗体的小规模纯化 / 筛选关于 Protein A Mag Sepharose 和 Protein G Mag Sepharose 的详细信息见数据文件 :Protein A Mag Sepharose, Protein G Mag Sepharose, NHS Mag Sepharose, GE Healthcare, , Edition AA (29). 表 6. 的实验条件样品样品体积填料悬液体积结合 / 洗涤缓冲液洗脱缓冲液杂交瘤细胞的小鼠 IgG2b 5 ml(25 ml 细胞上清液用 25 ml 结合缓冲液稀释 ) 1.75 ml PBS (14 mm NaCl, 2.7 mm KCl, 1 mm 磷酸盐, ph 7.4) 1 mm 甘氨酸,pH 2.8 低分子量标准蛋白起始样品 ( 细胞上清中的小鼠 IgG2b) 纯化的小鼠 IgG2b, 第二轮纯化的小鼠 IgG2b, 第一轮图 8. 在还原条件下的 SDSPAGE 用 Deep Purpl 总蛋白染料染色在 5 ml 细胞上清液中低表达小鼠 IgG2b 的纯化产生高纯度蛋白 (>9%)

6 Ordering Information Products Related products MagRack6 Ab Buffer Kit HiTrap Desalting PD MiniTrap G25 His Mag Sepharose Ni His Mag Sepharose Ni His Mag Sepharose Ni Protein A Mag Sepharose Protein A Mag Sepharose Protein G Mag Sepharose Protein G Mag Sepharose NHS Mag Sepharose NHS Mag Sepharose TiO2 Mag Sepharose TiO2 Mag Sepharose Quantity 2 1 ml 1% medium slurry 5 1 ml 1% medium slurry 2 1 ml 1% medium slurry 5 1 ml 1% medium slurry Quantity ml 5 columns 2 1 ml 5% medium slurry 5 1 ml 5% medium slurry 1 1 ml 5% medium slurry 1 5 μl 2% medium slurry 4 5 μl 2% medium slurry 1 5 μl 2% medium slurry 4 5 μl 2% medium slurry 1 5 μl 2% medium slurry 4 5 μl 2% medium slurry 1 5 μl 2% medium slurry 4 5 μl 2% medium slurry Code No Code No

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Polyclonal Goat Anti-Rabbit IgG *HRP 亲硫层析介质 (6FF) Thiophilic Adsorbent Beads 6FF 货号 BDTL0025-5 BDTL0025-10 BDTL0025-50 BDTL0025-250 规格 50ml 250ml 1. 产品介绍本品可以快速有效地从血清腹水或组织培养液中纯化抗体本品的配体主要通过与抗体形成电子供体 - 受体复合物, 从而达到对抗体的选择性吸附本品使用耐压的基质, 可以耐受最高