A5284 Protein A40 Plus 亲和层析预装柱使用说明专业实验仪器耗材提供商

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2 A5284 Protein A40 Plus 亲和层析预装柱使用说明预装柱介绍芯硅谷 A40 Plus 预装柱是专为实验室抗体快速简单分离纯化而设计的亲和柱, 有 1ml 和 5ml 两种规格柱管采用生物耐受性的聚丙烯材料, 具有无毒不与生物分子结合及低溶解度的优点预装柱的 1/16 英寸接口, 可随实验条件不同与注射器蠕动泵或色谱系统配套使用预装芯硅谷 A40 Plus, 是以单分散高交联度聚苯乙烯 - 二乙烯基苯微球为载体, 重组 Protein A 为配基的亲和色谱填料, 其载体的刚性结构快速传质能力以及 Protein A 的正确键合, 使芯硅谷 A40 Plus 成为抗体纯化的理想填料预装柱规格柱体积 1 ml 5 ml 柱尺寸 I.D mm I.D mm 最大流速 4 ml/min ml/min 推荐流速 ml/min 1-5 ml/min 最大压力 5 bar 5 bar 注意 : 芯硅谷 A40 Plus 预装柱不可拆开或自行填装两端的堵头确保拧紧以免贮存液泄漏填料规格参数描述载体单分散高交联度聚苯乙烯 - 二乙烯基苯 (PS-DVB) 配基重组 A 蛋白粒径 40 µm 动态载样量约 30 mg higg/ml 填料 ( 通过 10% 前沿分析法, 流速 500 cm/hr, 柱长 50 mm,residence time = 0.6 min) 最大压力 <1000 psi 缩胀性 < 1% from 1 100% organic solvent ph 稳定范围 ph 3 12( 常用 ) ph 2 14(CIP) CIP 清洗剂 M NaOH 温度稳定范围 4 30 储存条件 % 乙醇操作说明由于 Protein A 与 IgG 的结合可以在较宽的 ph 范围里进行, 选择何种缓冲体系取决于所应

3 用的样品洗脱过程通常采用降低 ph 的方式进行, 而不同来源的 IgG 因其亚基不同, 适宜的洗脱缓冲液 ph 也不相同下表提供了各种常见 IgG 亚体与 Protein A 结合能力以及适宜的上样洗脱 ph Antibody Affinity Binding ph Elution ph Human IgG1 very high IgG2 very high IgG3 low-none IgG4 low-high Mouse 缓冲液的准备 IgG1 low IgG2a moderate IgG2b high ~ IgG3 low-high ~ 推荐采用下列缓冲液 : 上样缓冲液 :20 mm 磷酸盐缓冲液, 含 0.15 M NaCl,pH 7.5 洗脱缓冲液 :0.1 M 甘氨酸盐酸盐缓冲液,pH 2.5~3.6 注意 : 若用芯硅谷 A40 Plus 预装柱纯化鼠源 IgG1, 上样缓冲液中添加 2.5 M NaCl 可以提高载量配制缓冲液所用的水及各种试剂必须为高纯度的, 并且使用前需经过 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤样品准备如果需要, 可采用下列方法调整样品至上样缓冲体系中 : 用上样缓冲液稀释样品通过凝胶色谱法进行缓冲液臵换样品在进样前需经过 0.45 μm 滤膜过滤或者离心, 以避免微粒杂质堵塞柱子, 延长柱子使用寿命纯化步骤 1 取下预装柱顶端堵头, 将其接入色谱系统中或注射器上, 操作时应避免空气进入柱中 ; 2 取下预装柱底部堵头, 用至少 5 个柱体积的纯水或上样缓冲液将柱子中乙醇冲洗出 ; 3 用 10 个柱体积的上样缓冲液平衡柱子, 流速 1ml/min(1ml 预装柱 ) 或 5ml/min(5ml 预装柱 ); 4 通过泵或者注射器上样 ; 5 用 5~10 个柱体积的上样缓冲液过柱子直到色谱图中曲线回到基线附近 ; 6 洗脱 : 如使用注射器, 通常以 2-5 个柱体积的洗脱液流过柱子即可 ; 如使用泵, 可采用梯度或等度方式洗脱 : 梯度洗脱 : 在 10~20 个柱体积内 0-100% 洗脱缓冲液等度洗脱 : 用 2~5 个柱体积洗脱缓冲液洗脱 7 再生 : 用 5 个柱体积洗脱缓冲液冲洗柱子 ;

4 8 用 3 个柱体积上样缓冲液过柱 ; 9 如果需要可进行一次在线清洗 CIP, 用 M NaOH 溶液冲洗 5 个柱体积 ; 10 用 5~10 个柱体积上样缓冲液平衡柱子至基线流出液 ph 及电导率达到预设值注意 : 不可超过柱子耐压上限清洗清洗的目的是除去柱子中残余的蛋白及污染物柱子在使用过程中, 由于样品或杂蛋白的沉积脂类物质不可逆的吸附及其他污染引起柱子的堵塞柱压升高载量下降等现象, 因此为了避免上述污染的累积以延长柱子寿命, 当出现下列情况时便需要对柱子进行一次清洗发现柱压增加时发现柱效下降时同一根柱子在进行不同样品分离时分离同一样品至少进行 5 次循环时清洗流程 1 用平衡缓冲液冲洗柱子 3 个柱体积 ; 2 用 M NaOH 冲洗柱子至少 2 个柱体积, 保持分钟 ; 3 立即用至少 5 个柱体积的平衡缓冲液冲洗柱子 CIP 过程通常在洗脱步骤之后, 但在用 M NaOH 冲洗前, 建议用中性的平衡缓冲液将柱子调整至中性 ph, 以避免低 ph 的洗脱液与高 ph 清洗液直接接触导致柱内温度升高 NaOH 的浓度接触时间以及清洗频率需要客户根据实际情况进行适当调整和优化, 我们建议通常每 5 次分离后进行一次 CIP, 以及分离不同类样品间隔时提示 : 不论哪一种清洗方法, 推荐采用反向冲洗以驱赶柱中微粒, 防止柱子下部分受到污染消毒消毒的目的是降低柱子中微生物的污染所有的柱子都应定期进行消毒, 方法如下 : 用 3 个柱体积平衡缓冲液冲洗柱子 ; 用 M NaOH 冲洗柱子并保持至少 15 分钟 ; 立即用平衡缓冲液冲洗柱子至少 5 个柱体积注意 : 更高的 NaOH 浓度或更长的接触时间能够更有效的除去微生物, 但同时这种条件可能导致填料动态载量的下降, 因此需综合考虑以最低的载量损失达到最优的微生物清除效果存放短时间或过夜存放 : 以 20% 乙醇臵换柱子中缓冲液并存放于 4~8 下长时间保存柱子前, 最好先进行一次 CIP, 再用 20% 乙醇保存于 4~8 下不可冷冻! 确保柱子两端堵头拧紧以避免柱子干裂!

5 问题及解决办法出现的问题引起原因及解决措施使用过程中柱压升高柱子堵塞引起, 清洗柱子使用黏度高的溶液时, 应降低流速上样过程中压力波动较大样品中的气泡引起, 洗脱峰变宽如果可能应对样品进行真空脱气洗脱缓冲液强度不够或污染物在柱子中积累所引起优化洗脱条件及清洗条件, 和 / 或提高清洗频率产率下降洗脱强度及清洗不够引起, 优化洗脱条件及清洗条件, 和 / 或提高清洗频率洗脱过程中出现沉淀洗脱条件及清洗不够理想引起, 清洗过程中压力过高柱效下降, 优化洗脱条件及清洗无效优化洗脱条件及清洗条件, 和 / 或提高清洗频率柱子中的蛋白沉淀引起优化洗脱条件和 / 或在清洗前用酸性溶液 (ph3 或更低 ) 进行再生, 采用低流速更换新柱子, 柱子的寿命主要取决于样品及样品预处理 Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd. Suite 601,No.196 New Jinqiao Road, Shanghai,201206,China (tel) (fax)

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N5289 Ni 亲和层析预装柱使用说明专业实验仪器耗材提供商 N5289 Ni 亲和层析预装柱使用说明专业实验仪器耗材提供商 N5289 Ni 亲和层析预装柱使用说明预装柱介绍 Ni 亲和预装柱是专为实验室蛋白质核酸及多肽的分离纯化, 尤其是组氨酸标记蛋白质的分离纯化而设计的亲和柱, 有 1ml 和 5ml 两种规格柱管采用生物耐受性的聚丙烯材料, 具有无毒不与生物分子结合及低溶解度的优点预装柱的 1/16 英寸接口, 可随实验条件不同与注射器

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