Acta Horticulturae Sinica AFLP * AFLP 9 EcoR /Mse % UPGMA % 80% AFLP S A X 20
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1 Acta Horticulturae Sinica AFLP * AFLP 9 EcoR /Mse % UPGMA % 80% AFLP S A X Analysis of Castanea mollissima Germplasm Resources by AFLP LAN Yan-ping ZHOU Lian-di * YAO Yan-wu WANG Shang-de and LIU Guo-bin Institute of Agricultural Integrated Development Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences Beijing China Abstract The genetic variation and genetic relationships of 90 Castanea mollissima cultivars were analyzed by the fluorescent-aflp technique with 9 primer combinations. Among the 806 bands detected 695 bands were polymorphic and the high percentage of polymorphic loci 86.23% revealed a high genetic diversity among the 90 C. mollissima cultivars. The UPGMA phenogram based on genetic identity clustered the 90 C. mollissima cultivars into 2 groups and 14 rows. The 9 pairs of AFLP primer combination used could distinguish all the tested cultivars the highest ratio of identification is 93% and the lowest is 80%. Key words Castanea mollissima genetic relationship AFLP germplasm identification Castanea mollissima Blume B32 * Author for correspondence liandizhou@126.com Tel
2 RAPD ISSR SSR 1999 Casasoli et al Marinoni et al Ai et al AFLP RFLP RAPD 2008 AFLP ~ Table 1 Materials used in the experiment No. Cultivar Origin site No. Cultivar Origin site 1 Yanshan Hongli 2 Huaijiu 4 1 Liuduhe Zaoli Liuduhe Zaoli Duanfeng(Late 20) 10 Hongguang 53 Chunzhili 54 5 Zunyou 5 Hebei 55 2 Feng 2 56 Wukeli Hebei 57 Yuchanggou 58 Baoke Youli Hebei 59 Liuyuebao 12 Yankui Hebei 60 Zaoyan Hebei 61 Yinhong 14 Yinfeng Hebei 62 Yinzi Hebei 63 Yinzhi 17 Zunhua Duanci 18 Qingfeng 19 Tima Zhenzhu 20 Kuili 22 Yanshan Duanzhi 23 Yanquan Hebei 65 Zaochang 66 Yinmiao 67 Yimeng Duanzhi Zhejiang 68 1 Tuanquanhe 1 Hebei 69 Laixi Youli 70 Jingshan Hongmaozao 24 5 Nan 5 Hebei 71 2 Zhuangdaokou Xiazhuang 1 72 Yanhong sport 26 2 Xiazhuang 2 73 Qianci Dabanli 27 1 Xinglongcheng 1 Hebei 74 Maoli 28 Duanhua 76 Youli 30 1 Dongtai 1 78 Tafeng 31 Huaihuang 32 Wuhua 33 Zaofeng 34 Mingjian 35 Huijian 79 Maobanhong 80 Dabanhong Hebei 82 Yangmaoli Shaanxi 83 Zhongci Banli Shaanxi 84 Jiuyuehan Hebei Zhejiang Hebei
3 9 AFLP No. Cultivar Origin site No. Cultivar Origin site 36 Huaifeng 37 Damingli 38 Huzhaoli 39 Shifeng 40 Zundali 41 Tafeng Shaanxi 85 Xinyang Wanyouli Henan 87 2 Tuanquanhe 2 88 Chushuhong 89 Yanshan Zaofeng Hebei 90 Male abortion(female) Hebei 91 Huafeng 42 2 Beiyu 2 Hebei 92 Hongguang 43 Dongling Mingzhu 44 Jinfeng 45 Taian Baoke 46 Jiujiazhong 47 Yufeng 48 Shangfeng Hebei 93 Jianding Youli Jiangsu Hebei Dancheng Songjiazao 96 Hongbao 97 Shucheng Youli 99 Yangmaoli Hebei 100 Siduhe Zaoli Anhui Hebei Chuizhi 2 51 Huanghuacheng Zaoli 52 Hongli 102 Guihua 103 Yinhong sport CTAB DNA AFLP AFLP EcoR I/Mse I AFLP EcoR Mse / µl DNA PCR buffer 2.5 µl EcoRI MseI 1.0 µl 2.5 mmol L -1 dntps 0.5 µl TaqDNA 0.5 µl ddh 2 O 25 µl DNA GENESCAN 3.1 GeneScan 500 Size Standard ROX-500 Matrix BINTHERE POPGENE PPL Nei s Nei 1973 H e Shannon I G ST G ST = D ST /H t [N m N m = G ST /G ST ] D NTSYSpc UPGMA AFLP 64 EcoR Mse / AFLP 9 90 DNA % ACA/CAG 90.32% ACA/CAT 78.26% % 2 AFLP
4 E-ACA, M-CAT Fig. 1 1 ~ The PCR results of some Castanea mollissima cultivars Primer pairs E-ACA and M-CAT 1 61 represent 61 chestnut cultivars. 2 AFLP Table 2 Results of AFLP analysis of Castanea mollissima EcoR I Primer EcoR I Mse I Primer Mse I Number of amplified bands Number of polymorphic bands /% Percent of polymorphic loci ACA CAG ACA CAT ACA CTG AGG CAT ACG CAT AGC CTG ACC CTA ACC CAG ACT CTT Total Mean AFLP POPGENE 1.32 Nei s Shannon N m 1 90 Nei s H e Shannon I Nei s
5 9 AFLP Shannon POPGENE ~ UPGMA AFLP 1 Fig. 2 Genetic similarity cluster based on AFLP analysis in Castanea mollissima cultivars Code see Table 1
6 UPGMA % 80.00% 88.22% E-ACC/M-CAG E-ACG/M-CAT E-AGC/M-CTG 93.33% 84 E-ACA/ M-CAT 82 E-AGG/M-CAT E-ACC/M-CTA E-ACA/M-CAG E-ACT/M-CTT E-ACA/M-CAT 83.33% 80.00% E-ACC/M-CAG E-ACC/M-CTA E-AGC/M-CTG E-AGG/M-CAT E-ACG/M-CAT E-AGC/M-CTG E-AGC/M-CTG E-AGG/M-CAT 90 3 Table 3 Identification percentage of primer combination for cultivars /% Primer combination Number of cultivars identified Number of cultivars unidentified Efficiency of identification E-ACA/M-CAG E-ACA/M-CAT E-ACA/M-CTG E-ACT/M-CTT E-ACC/M-CAG E-ACC/M-CTA E-ACG/M-CAT E-AGC/M-CTG E-AGG/M-CAT Average % 2002
7 9 AFLP % 2008 AFLP 89% % 86.7% AFLP RAPD AFLP RFLP RAPD RFLP AFLP RAPD RFLP 9 72 ~ 84 90
8 References Ai Cheng-xiang Yu Xian-mei Zhang Li-si Ma Yu-min Yuan Ke-jun Jin Song-nan Liu Qing-zhong A study of genetic diversity of Castanea mollissima in Shandong. Journal of Fruit Science 23 (5) (in Chinese) Ai Cheng-xiang Zhang Li-si Wei Hai-rong Jin Song-nan Yuan Ke-jun Liu Qing-zhong Study on the genetic diversity of natural chestnut of Shandong by ISSR. Chinese Journal of Biotechnology 23 (4) Ai Cheng-xiang Zhang Li-si Wei Hai-rong Liu Qing-zhong Study on the genetic diversity of some chestnut cultivars by AFLP analysis. Acta Horticulturae Sinica 35 (5) (in Chinese) 2008 AFLP Bao Zhao-xia Huang Hong-wen Analysis of genetic diversity and genetic relationships of Chinese chestnut. Acta Horticulturae Sinica 29 (1) (in Chinese) Casasoli M Mattioni C Cherubini M Villani F A genetic linkage map of European chestnut Castanea mollissima Mill. based on RAPD ISSR and isozymei markers. Theor Appl Genet Huang Hong-wen Review of current research of the world Castanea species and importance of germplasm conservation of China native Castanea species. Journal of Wuhan Botanical Research 16 (2) (in Chinese) Lang Ping Huang Hong-wen Genetic diversity and geographic variation in natural populations of the endemic Castanea species in China. Acta Botanica Sinica 41 (6) (in Chinese) Marinoni D Akkak A Bounous G Edwards K J Botta R Development and characterization of microsatellite markers in Castanea sativa(mill.). Molecular Breeding Nei M Analysis of gene diversity in subdivided population. Proceeding of the National Academy of Science USA Wang Tong-kun Dong Chao-hua Qi Yong-shun Zhang Jing-zheng Bai Su-hua Song Wen-jing Zhang Kai-hui Analysis of genetic diversity of Yanshan chestnut by RAPD. Journal of Fruit Science 23 (4) (in Chinese) 2006 RAPD Weng Yao-fu Chen Yuan Zhao Yong-chun Zheng Kang-le Huang Shao-fu DNA fingerprinting of Castanea mollissima elite varieties clone seeding. Scientia Silvae Sinicae 37 (2) (in Chinese) Zhang Yu-he Liu Luan Liang Wei-jian Zhang Yu-ming The economic value and production and research situation of chestnut. China fruit records Chestnut and Hazelnut Volume. Beijing Chinese Forestry Press. (in Chinese) Zhou Lian-di Lan Yan-ping Cao Qing-chang Lan Wei-zong Han Zhen-hai Establishment of AFLP silver-stained reaction system for genomic DNA in Castanea mollissima. Jounal of Fruit Science 23 (1) (in Chinese) 2006 AFLP
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2013 35 2 307-312 http / /xuebao. jxau. edu. cn Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E - mail ndxb7775@ sina. com SSR SCAR 310024 RAPD EST - SSR SCAR 26 24 22 18 81. 8% 7 23 S668. 4 Q943. 2 A 1000-2286
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