动全自动生化分析仪, 在医学实验室进行对人血清或血浆中的 C- 反应蛋白进行定量检测所使用的临床化学体外诊断试剂 ( 盒 ) 本指导原则不适用于 : 1. 对 C 反应蛋白校准品和质控品的评价 2. 各类胶体金标记试纸二注册申报资料要求 ( 一 ) 综述资料 C- 反应蛋白 (C-reacti

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吭拐包
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1 C 反应蛋白测定试剂盒注册技术审查指导原则 (2016 年修订版 ) 本指导原则旨在指导注册申请人对 C 反应蛋白测定试剂盒, 包括常规 C 反应蛋白定量检测试剂盒 / 超敏 ( 高敏 )C 反应蛋白定量检测试剂盒 / 全量程 C 反应蛋白定量检测试剂盒注册申报资料的准备及撰写, 同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考本指导原则是对 C 反应蛋白测定试剂盒的一般要求, 申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用, 若不适用, 需具体阐述理由及相应的科学依据, 并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件, 不涉及注册审批等行政事项, 亦不作为法规强制执行, 如有能够满足法规要求的其他方法, 也可以采用, 但应提供详细的研究资料和验证资料应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则本指导原则是在现行法规标准体系及当前认知水平下制定的, 随着法规标准体系的不断完善和科学技术的不断发展, 本指导原则相关内容也将适时进行调整一适用范围本指导原则适用于基于分光光度法原理, 利用手工和半自 1

2 动全自动生化分析仪, 在医学实验室进行对人血清或血浆中的 C- 反应蛋白进行定量检测所使用的临床化学体外诊断试剂 ( 盒 ) 本指导原则不适用于 : 1. 对 C 反应蛋白校准品和质控品的评价 2. 各类胶体金标记试纸二注册申报资料要求 ( 一 ) 综述资料 C- 反应蛋白 (C-reactive protein,crp) 由肝细胞合成, 在胎儿期产生, 非母体胎盘传递其产生机理是 : 当机体受感染或组织受损伤时巨噬细胞和其他白细胞等被激活, 产生白细胞介素 -6(IL-6) 白细胞介素-1(IL-1) 肿瘤坏死因子 TNF-a 等细胞因子及其他介导物, 这些细胞因子和介导物到达肝脏, 刺激肝细胞和上皮细胞合成 CRP 在结构上,CRP 含 5 个多肽链亚单位, 非共价地结合为盘形多聚体, 分子量为 11.5 万 14 万,CRP 是一种典型的急性时相蛋白全程 C 反应蛋白包括常规 C 反应蛋白 ( 常规 CRP) 和超敏 C 反应蛋白 ( 超敏 CRP) 一次性检测常规 CRP 和超敏 CRP, 这种方法被称为全程 C 反应蛋白检测常规 CRP 和超敏 CRP 在化学本质上无区别, 是同一种物质, 只是检测方法的定量下限不同常规 CRP 测定包括定性半定量和定量分析, 可用于评价感染, 组织损伤和炎症性疾病对于常规的 CRP 测定, 参考值 2

通常被认为是临床上含量高于 10 毫克 / 升在健康人群血液中 CRP 水平低于 5 毫克 / 升, 而在各种条件下, 急性炎症 4 8 小时内,CRP 值达到约 20 至 500 毫克 / 升常规 CRP 作为急性炎症评估指标比红细胞沉降率 (ESR) 和白细胞计数更敏感更可靠超敏 C 反应蛋白线性范围低端低于常规 CRP,

3 通常被认为是临床上含量高于 10 毫克 / 升在健康人群血液中 CRP 水平低于 5 毫克 / 升, 而在各种条件下, 急性炎症 4 8 小时内,CRP 值达到约 20 至 500 毫克 / 升常规 CRP 作为急性炎症评估指标比红细胞沉降率 (ESR) 和白细胞计数更敏感更可靠超敏 C 反应蛋白线性范围低端低于常规 CRP, 这种较低的范围可扩大使用适应症,C 反应蛋白是非特异性的, 必须结合临床症状综合评估, 不能作为特定的疾病或疾病的风险的确诊依据图 1 超敏 CRP 与常规 CRP 的区别超敏 C 反应蛋白常见的用途可作为心血管疾病风险识别的辅助手段配合传统的急性冠脉综合征临床诊断使用, 可作为冠状动脉疾病或急性冠脉综合征复发的预警指示物 3

4 图 2 超敏 CRP 的临床意义表 1 各种 CRP 的区别及性能要求常规 CRP 用途感染, 组织损伤和炎症性疾病的评价提供炎症性疾病的诊断, 治疗和监控的信息超敏 CRP 是区分低水平炎症状态的灵敏指标, 血清 hs-crp 水平与动脉粥样硬化及急性脑梗死 ( ACI) 等心脑血管疾病的发生严重程度及预后密切相关参考值范参考值范围 : 约 10mg/ L 参考值范围 : 1mg/L 围推荐线性范围健康人群 : 5mg / L 急性范围 : mg/l 5mg/L 到上限 0.5 mg/l 到 10.0mg/L 灵敏度明确在线性范围低端的性能确定定量限 ( 功能灵敏度 ) 综述资料主要包括 CRP 的代谢产品预期用途产品描述参考品的详细溯源性有关生物安全性的说明研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容, 其中同类产品上市情况介绍部分应着重从方法学临床应用情况性能指标等方面写明 4

5 拟申报产品与目前市场上已获批准的同类产品之间的异同应符合体外诊断试剂注册管理办法 ( 国家食品药品监督管理总局令第 5 号 ) 和关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告 ( 国家食品药品监督管理总局公告 2014 年第 44 号 ) 的相关要求人源性材料须对有关传染病 (HIV HBV HCV 梅毒等 ) 病原体检测予以说明, 并提供相关的证明文件其他动物源及微生物来源的材料, 应当提供相应的说明文件, 证明其在产品运输使用过程中对使用者和环境是安全的, 并对上述原材料所采用的灭活等试验方法予以说明 ( 二 ) 主要原材料研究资料 ( 如需提供 ) 1. 试剂盒所用抗体的制备筛选纯化以及鉴定等详细试验资料如抗体为申请人自制, 则应详述抗体的名称及生物学来源, 申请人对该抗体技术指标的要求 ( 如外观纯度蛋白浓度效价等 ), 确定该抗体作为主要原材料的依据 ; 如抗体为申请人外购, 则应详述抗体的名称及生物学来源, 外购方名称, 提交外购方出具的抗体性能指标及检验证书, 详述申请人对该抗体技术指标的要求以及申请人确定该抗体作为主要原材料的依据 2. 其他主要原辅料的选择及验证资料, 如包被板反应缓冲液等, 申请人应详述每一原辅料技术指标的要求以及确定该原辅料作为主要原辅料的依据若为外购, 应详述每一原辅料的外购 5

6 方名称并提交外购方出具的每一原辅料性能指标及检验证书 3. 企业内部参考品的原料选择制备定值过程及试验资料 4. 添加上述原材料辅料的详细信息请以附录的形式呈现 ( 三 ) 主要生产工艺及反应体系的研究资料 ( 如需提供 ) 1. 主要生产工艺介绍, 可以流程图方式表示, 并简要说明主要生产工艺的确定依据 2. 产品反应原理介绍 3. 抗体包被 / 致敏工艺研究 : 申请人应考虑如包被液量浓度时间温度等指标对产品性能的影响, 通过试验确定上述指标的最佳组合 4. 实验体系反应条件确定 : 申请人因考虑反应时间反应温度 ph 值等条件对产品性能的影响, 通过试验确定上述条件的最佳组合 5. 体系中样品加样方式及加样量确定 : 申请人应考虑样品加样方式加样量对产品检测结果的影响, 通过实验确定最佳的加样方式及加样量如样本需采取稀释或其他必要的方法进行处理后方可用于最终检测, 申请人还应对可用于样本稀释的物质或处理方法进行研究, 通过试验确定最终选择的用于样本稀释的物质或处理方法确定反应所需其他物质用量 ( 标准品酶标物底物等 ) 的研究资料固相载体显色 ( 发光 ) 系统酶作用底物等的介绍 6

7 6. 不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述 ( 四 ) 分析性能评估资料企业应提交原厂在产品研制阶段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料, 包括具体研究方法实验数据质控标准统计分析等详细资料对于 C 反应蛋白定量检测试剂盒建议多批产品对以下分析性能进行研究 : 分析灵敏度准确度特异性线性范围精密度 ( 批间批内 ) 等指标, 具体研究方法建议参考相关指导原则对于适用多个机型的产品, 应提供如产品说明书适用机型项中所列的所有型号仪器的性能评估资料 1. 试剂空白吸光度适用时, 用纯化水作为样本重复测定 2 次, 计算试剂空白吸光度 (A), 测定结果均值应符合产品技术要求性能指标的要求 2. 分析灵敏度测定一份浓度接近 40 mg/l 的样品, 重复测定 2 次, 计算该样本产生的吸光度改变与空白吸光度改变的差值 ( A), 取 2 次结果的均值, 等比换算出浓度为 40mg/L 的 CRP 所产生的吸光度差值 ( A), 结果应符合产品技术要求性能指标的要求测定一份浓度接近 5 mg/l 的样品, 重复测定 2 次, 计算该样本产生的吸光度改变与空白吸光度改变的差值 ( A), 取 2 次结果的均值, 等比换算出浓度为 5mg/L 的 CRP 所产生的吸光度差值 7

8 ( A), 结果应符合产品技术要求性能指标的要求 3. 检出限生产企业应提供 CRP 试剂盒的空白限检出限及参考区间等相关信息根据生产企业提供信息, 对 5 份浓度近似最低检出限 (LOD) 的低值样本进行检测, 每份样本检测 5 次, 对检测结果按照大小进行排序, 符合如下条件, 即可认为生产企业提供的空白限和检出限的设置基本合理, 结果符合产品技术要求性能指标的要求 (1) 低于生产企业提供的空白限数值的检测结果的数量应小于等于 3 个 ; (2) 适用时, 无高于生产企业提供的参考区间下限的检测结果 4. 准确度 (1) 总则可采用相对偏差企业参考品测试和比对试验之一测试试剂 ( 盒 ) 的准确度, 应符合产品技术要求性能指标的要求 ; 如适用, 优先采用相对偏差的方法 (2) 相对偏差根据生产企业提供的试剂盒线性区间, 将能用于评价常规方法的参考物质作为样本, 合理设置 2 3 个浓度, 将其作为样本按照待测试剂盒说明书的步骤进行检测, 每个样品重复测定 3 次, 8

9 测试结果记为 (Xi), 按公式 (1) 分别计算相对偏差 (Bi), 如果 3 次结果都符合产品技术要求性能指标的要求, 即判为合格如果大于等于 2 次的结果不符合, 即判为不合格如果有 1 次结果不符合要求, 则应重新连续测试 20 次, 并分别按照公式 (1) 计算相对偏差, 如果大于等于 19 次测试的结果符合产品技术要求性能指标的要求, 即判为合格, 准确度符合产品技术要求性能指标的要求式中 : Bi 相对偏差 ; Xi 测量浓度 ; T 标定浓度 Bi=(Xi-T)/T 100% (1) (3) 企业参考品测试由生产企业提供企业参考品, 按照常规样本进行检测, 每份样本测定 3 次, 测试结果记为 (Xi), 按公式 (1) 分别计算相对偏差 (Bi), 结果应符合产品技术要求性能指标的要求 5. 线性将接近线性区间上限的高值样本按一定比例稀释为至少 5 个浓度, 其中低值浓度的样本须接近线性区间的下限对每一浓度的样本至少重复测定 2 次, 计算其平均值, 将测定浓度的平均值与理论浓度或稀释比例用最小二乘法进行直线拟合, 得到线性回归方程, 并计算线性相关系数 r 及绝对偏差或相对偏差, 结果应 9

10 符合产品技术要求性能指标的要求 6. 重复性用同一批号试剂盒, 对 2 3 个不同浓度的样品分别重复测定 10 次, 计算 10 次测定结果的平均值 (M) 和标准差 (SD), 根据公式 (2) 得出变异系数 (CV), 结果应符合产品技术要求性能指标的要求 CV=SD/M 100% (2) 式中 : CV 变异系数 ; SD 10 次测量结果的标准差 ; M 10 次测量结果的平均值 7. 批间差用三个不同批号试剂盒, 对 2 3 个不同浓度的样品分别重复测定 10 次, 计算每个浓度样本每批号 10 次测量结果的平均值 (Xi, i=1 2 3) 及每个浓度样本三个批号 30 次测量结果的总平均值 (XT), 根据公式 (3) 得出批间相对极差 (R), 结果应符合产品技术要求性能指标的要求 R=(Xmax-Xmin)/XT 100% (3) 式中 : R 批间相对极差 ; Xmax Xi 的最大值,i=1 2 3; Xmin Xi 的最小值,i=1 2 3; XT 每个浓度样本 30 次测量结果的平均值 10

11 8. 分析特异性 (1) 交叉反应 : 易产生交叉反应的其他抗原抗体及嗜异性抗体等的验证情况 ; (2) 干扰物质 : 样本中常见干扰物质对检测结果的影响, 如高脂黄疸类风湿因子抗凝剂等干扰因子的研究 ( 结果应量化表示, 禁用轻度严重的模糊表述 ); (3) 药物影响 : 常见相关治疗药物对检测结果的影响 9. 钩状 (Hook) 效应 ( 如有 ): 说明不会产生 Hook 效应的浓度上限或相关研究, 如需稀释, 应注明对稀释液的要求最佳或最大稀释比例 10. 质控品性能要求 ( 如有 ) (1) 定值质控品测量准确度应至少给出一种用校准品校准测量程序后测定该定值质控品的试验方法 (2) 均一性通常取同批号的一定数量最小包装单元的校准品质控品, 每包装单元测试 1 次, 按下面的公式计算测试结果的平均值 ( X 1 ) 和标准差 S 1 ; 另用上述校准品质控品中的 1 个最小包装单元连续测试相同次数, 计算测试结果的平均值 ( X 2 ) 和标准差 S 2 ; 按下列各公式计算瓶间重复性 CV%, 所有参数的瓶间重复性结果均应符合要求最小装量不够完成瓶间差检测的可只进行批内 11

12 精密度检测公式 1 公式 2 公式 3 公式 4 S X 瓶间 CV 瓶间 2 S 1 S 2 2 (%) S / X1 100 瓶间当 S 1 <S 2 时, 令 CV 瓶间 =0 式中 : X ---- 平均值 ; S---- 标准差 ; n---- 测量次数 ; 2 ( X X i S n n 1 xi---- 指定参数第 i 次测量值 11. 生物安全性 ( 如适用 ) n i 1 n x i i ) 2 校准品质控品如含人源性成分, 用经过国家批检合格的以下四种体外诊断试剂盒对该试剂盒的校准品质控分别进行检测 :a) 人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒 ;b) 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒 ;c) 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒,HIV 抗体 HCV 抗体和 HBsAg 应为阴性 ;d) 梅毒螺旋抗体诊断试剂盒, HIV 抗体 HCV 抗体 HBsAg 和 TP 抗体应为阴性 12

13 ( 五 ) 参考区间确定资料阳性判断值或参考区间确定所采用的样本来源确定方法及详细的试验资料建议参考 CLSI/NCCLS C28-A2 ( 六 ) 稳定性研究资料稳定性研究资料主要涉及两部分内容, 申报试剂的稳定性和适用样本的稳定性研究前者主要包括实时稳定性 ( 有效期 ) 运输稳定性开瓶稳定性及冻融次数限制等研究, 申请人可根据实际需要选择合理的稳定性研究方案稳定性研究资料应包括研究方法的确定依据具体的实施方案详细的研究数据以及结论对于实时运输及开瓶稳定性研究, 应提供至少三批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的研究资料试剂稳定性和样本稳定性两部分内容的研究结果均应在说明书储存条件及有效期和样本要求两项中进行详细说明 ( 七 ) 生产及自检记录提供连续三批产品生产及自检记录的复印件 ( 八 ) 临床评价资料 1. 研究方法选择境内已批准上市临床普遍认为质量较好的同类产品作为参比试剂, 采用拟申报产品 ( 以下称考核试剂 ) 与之进行对比试验研究, 证明本品与已上市产品等效或优于已上市产品建议企业尽量选择方法学相同线性范围及精密度等性能接近的同类试剂作为参比试剂同时应充分了解所选择产品的技术信息, 包 13

14 括方法学临床预期用途主要性能指标校准品的溯源情况推荐的阳性判断值或参考区间等, 以便对试验结果进行科学的分析且临床试验必须符合赫尔辛基宣言的伦理学准则, 必须获得临床试验机构伦理委员会的同意 2. 临床研究单位的选择申请人应当选定不少于 2 家 ( 含 2 家 ) 获得国家食品药品监督管理总局资质认可的临床试验机构, 按照有关规定开展临床试验申请人应根据产品特点及其预期用途, 综合不同地区人种流行病学背景病原微生物的特性等因素选择临床试验机构临床试验机构必须具有与试验用体外诊断试剂相适应的专业技术人员及仪器设备, 并能够确保该项试验的实施申请人应当在临床试验前制定文件明确各方的职责分工, 与各临床试验机构协商制定统一的临床试验方案, 按照临床试验方案组织制定标准操作规程, 并组织对参加试验的所有研究者进行临床试验方案和试验用体外诊断试剂使用的培训, 以确保临床试验方案和试验用体外诊断试剂操作的一致性, 并在临床试验过程中促进各研究者之间的沟通在临床试验开始前, 申请人应与临床试验工作人员进行临床试验的预试验, 使其熟悉并掌握该产品所适用的仪器操作方法技术性能等, 以最大限度地控制试验误差 14

15 在临床试验过程中, 申请人应考虑吸收流行病学统计学临床医学检验医学等方面专业人员 ( 或知识 ), 以保证临床试验科学合理地开展临床研究单位应有能力提供临床评价所需的各类样本, 实验操作人员有足够的时间熟悉检测系统的各环节 ( 仪器试剂质控及操作程序等 ), 熟悉评价方案在整个实验中, 考核试剂和参比试剂都应处于有效的质量控制下, 定期对仪器进行校准, 最大限度保证试验数据的准确性及可重复性不同的临床单位应使用同一批考核试剂进行临床试验, 以便对数据进行科学客观的统计分析 3. 临床试验方案临床试验实施前, 研究人员应从流行病学统计学临床医学检验医学等多方面考虑, 设计科学合理的临床研究方案各临床研究机构的方案设置应基本一致, 且保证在整个临床试验过程中遵循预定的方案实施, 不可随意改动整个试验过程应在临床研究机构的实验室内并由本实验室的技术人员操作完成, 申报单位的技术人员除进行必要的技术指导外, 不得随意干涉实验进程, 尤其是数据收集过程试验方案中应确定严格的病例纳入 / 排除标准, 任何已经入选的病例再被排除出临床研究都应记录在案并明确说明原因在试验操作过程中和判定试验结果时应采用盲法及样本随机分配 15

16 以保证试验结果的客观性对于新试剂的动态监测研究, 应在方案中明确前后两次浓度变化有临床意义的标准临床试验中所涉及的样本类型应与产品说明书一致, 且每种样本类型例数的选择应符合基本的统计学要求各研究单位选用的参比试剂及所用机型应一致, 以便进行合理的统计学分析开展体外诊断试剂临床试验, 申请人应当按照试验用体外诊断试剂的类别风险预期用途等特性, 组织制定科学合理的临床试验方案一般应当包括以下内容 : (1) 一般信息 ( 包括产品信息临床试验开展的时间和人员等相关信息申请人相关信息等 ); (2) 临床试验的背景资料 ; (3) 试验目的 ; (4) 试验设计 ; (5) 评价方法 ; (6) 统计方法 ; (7) 对临床试验方案修正的规定 ; (8) 临床试验涉及的伦理问题和说明知情同意书文本 ( 如有 ); (9) 数据处理与记录保存 ; (10) 其他需要说明的内容 4. 研究对象的选择 (1) 临床试验样本量的确定 : 申请人或临床研究者应根据 16

17 产品临床使用目的, 与该改产品相关疾病的临床发生率确定临床研究的样本量在符合指导原则有关最低样本要求的前提下, 还应符合统计学要求 1 临床研究的总样本数至少为 200 例 2 应考虑样本量的分布样本量的选择应符合统计学及相关指导原则的要求 3 样本浓度应覆盖考核试剂检测范围, 尽可能均匀分布尽可能使 40% 样本的测定值处于参考区间以外, 但在测量范围内 (2) 变更事项相关的临床试验 : 涉及产品检测条件优化增加与原样本类型具有可比性的其他样本类型等变更事项, 产品临床试验总样本数至少为 100 例, 并在至少 2 家 ( 含 2 家 ) 临床试验机构开展临床试验 ; 变更抗原抗体等主要原材料的供应商阳性判断值或参考区间的变化及增加临床适应症等变更事项, 应根据产品具体变更情况, 酌情增加临床试验总样本数 (3) 建议在临床试验中选择部分含干扰物质的标本进行对比研究, 包括高脂溶血黄疸的样本类风湿因子阳性样本, 易共存的其他急性炎症时相因子同时升高的患者标本, 以从临床角度验证试剂的特异性 5. 统计学分析对临床试验结果的统计应选择合适的统计方法, 如相关分析线性回归受试者工作特征 (ROC) 曲线分析等对于对比 17

18 实验的等效性研究, 最常用是对考核试剂和参比试剂两组检测结果的相关及线性回归分析, 应重点观察相关系数 (r 值 ) 或判定系数 (R 2 ) 回归拟合方程( 斜率和 y 轴截距 ) 等指标结合临床试验数据的正 / 偏态分布情况, 建议统计学负责人选择合理的统计学方法进行分析, 统计分析应可以证明两种方法的检测结果无明显统计学差异在临床研究方案中应明确统计检验假设, 即评价考核试剂与参比试剂是否等效的标准 6. 结果差异样本的验证对于比较研究试验中测定结果不符的样本, 应采用金标准或其他合理的方法进行复核, 以便对临床试验结果进行分析如无需复核, 应详细说明理由 7. 临床试验总结报告撰写根据关于发布体外诊断试剂临床试验技术指导原则的通告 ( 国家食品药品监督管理总局通告 2014 年第 16 号 ) 的要求, 临床试验报告应该对试验的整体设计及各个关键点给予清晰完整的阐述, 应该对整个临床试验实施过程结果分析结论等进行条理分明的描述, 并应包括必要的基础数据和统计分析方法建议在临床总结报告中对以下内容进行详述申请人或临床试验牵头单位应对各临床试验机构的报告进行汇总, 并完成临床试验总结报告临床试验报告的格式及内容如下 : 18

19 7.1 首篇首篇是每份临床试验报告的第一部分, 所有临床试验报告均应包含该部分内容封面标题包括试验用体外诊断试剂的通用名称试验开始日期试验完成日期主要研究者 ( 签名 ) 临床试验机构 ( 盖章 ) 统计学负责人签名及单位盖章申请人 ( 盖章 ) 申请人的联系人及联系方式报告日期原始资料保存地点目录列出整个临床试验报告的内容目录和对应页码研究摘要对临床试验情况进行简单的介绍试验研究人员列出临床试验主要研究人员的姓名单位在研究中的职责及其简历 ( 列于附件中 ), 主要研究人员包括主要研究者及各单位的主要参加人员统计学负责人临床试验报告的撰写人缩略语临床试验报告中所用的缩略语的全称 7.2 正文内容和报告格式基本内容引言 19

20 介绍与临床试验产品有关的背景情况 : 包括 (1) 被测物的来源生物及理化性质 ;(2) 临床预期使用目的, 所针对的目标适应症人群, 目前针对该适应症所采用的临床或实验室诊断方法等 ;(3) 所采用的方法原理技术要求等 ;(4) 国内外已批准上市产品的应用现状等说明申请人和临床试验机构间的合作关系研究目的说明本临床试验所要达到的目的试验管理对试验管理结构的描述管理结构包括主要研究者主要参加人员实验室质量控制情况统计 / 数据管理情况以及试验中发生的问题及其处理措施等试验设计试验总体设计及方案的描述试验的总体设计和方案的描述应清晰简洁, 必要时采用图表等直观的方式试验进行时方案修改的情况和任何方案以外的信息来源也应详细叙述应包括 : (1) 临床试验的整体管理情况临床研究单位选择临床主要研究人员简介等基本情况介绍 ; (2) 病例纳入 / 排除标准不同年龄段人群的预期选择例 20

21 数及标准 ; (3) 样本类型, 样本的收集处理及保存等 ; (4) 统计学方法统计软件评价统计结果的标准试验设计及试验方法选择试验设计中应包括以下内容 : (1) 样本量及样本量确定的依据 (2) 样本选择依据入选标准排除标准和剔除标准 (3) 样本采集保存运输方法等 (4) 对比试剂的确立 (5) 临床试验用所有产品的名称规格来源批号效期及保存条件, 对比试剂的注册情况考核试剂和参比试剂的名称批号有效期及所用机型等信息 (6) 质量控制方法对质量控制方法进行简要的阐述试验人员培训仪器日常维护仪器校准质控品运行情况, 对检测精密度质控品回收 ( 或测量值 ) 抽查结果评估 ; (7) 临床试验数据的统计分析方法对各研究单位的病例数病种分布情况进行总合, 建议以列表或图示方式给出具体例数及百分比 1 数据预处理差异数据的重新检测或第三方验证以及是否纳入最终数据统计对异常值或缺失值的处理研究过程中是否涉及对方案的修改 21

22 2 定量值相关性和一致性分析用回归分析验证两种试剂结果的相关性, 以 y=a+bx 和 R 2 的形式给出回归分析的拟合方程, 其中 :y 是考核试剂结果,x 是参比试剂结果,b 是方程斜率,a 是 y 轴截距,R 2 是判定系数, 同时应给出 b 的 95%( 或 99%) 置信区间, 定量值结果应无明显统计学差异 (8) 具体试验过程, 样本检测数据收集样本长期保存结果不一致样本的校验等 (9) 试验过程中方案的修改一般情况下, 临床试验方案不宜更改试验过程中对方案的任何修改均应说明, 对更改的时间理由更改过程及有无备案进行详细阐述并论证其对整个研究结果评价的影响临床试验结果及分析讨论和结论对总体结果进行总结性描述并简要分析试验结果, 对本次临床研究有无特别说明, 最后得出临床试验结论有关临床试验中特别情况的说明附件临床试验中所采用的其他试验方法或其他诊断试剂产品的基本信息, 如试验方法诊断试剂产品来源产品说明书及注册批准情况 22

23 临床试验中的所有试验数据, 需由临床试验操作者复核者签字, 临床试验机构盖章 ( 封面盖章和骑缝章 ) 主要参考文献主要研究者简历申请人需要说明的其他情况等 ( 九 ) 产品风险分析资料对体外诊断试剂产品寿命周期的各个环节, 从预期用途可能的使用错误与安全性有关的特征已知和可预见的危害等方面的判定以及对患者风险的估计进行风险分析风险评价和相应的风险控制基础上, 形成风险管理报告应当符合相关行业标准的要求 ( 十 ) 产品技术要求拟定产品技术要求应符合体外诊断试剂注册管理办法体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式关于发布医疗器械产品技术要求编写指导原则的通告 ( 国家食品药品监督管理总局通告 2014 年第 9 号 ) 的相关规定作为定量检测试剂盒,C 反应蛋白产品的注册检测应主要包括以下性能指标 : 外观检查物理检查准确度线性范围分析灵敏度 / 检出限 ( 空白限 ) 精密度( 批间重复性 ) 校准品溯源性质控品测量准确度及均一性生物安全性 ( 如适用 ) 等如果拟申报试剂已有相应的专用国家 / 行业标准或相应方法学的通用标准要 23

24 求发布, 则企业标准的要求不得低于上述标准要求 1. 产品性能指标详述以下性能指标 : 注 1: 由于 C 反应蛋白目前尚无国家参考品, 故选用国际约定行业参考品或企业内部参考品, 以后国家参考品若建立, 采用国家参考品注 2: 对线性范围分析灵敏度等的最低要求见表外观应根据产品的包装特点规定适当的外观要求一般应有试剂盒各组份组成性状 ; 内外包装标签清晰等的要求试剂盒应组分齐全, 内外包装均应完整, 标签清晰 ; 液体试剂无渗漏, 冻干组分呈疏松体, 复溶后液体均匀 ( 无肉眼可见颗粒无沉淀 ) 1.2 试剂空白吸光度适用时, 生产企业应规定试剂空白吸光度, 并符合相应要求 1.3 分析灵敏度常规 C 反应蛋白定量检测试剂盒全量程 C 反应蛋白定量检测试剂盒, 在生产企业规定波长 ( 光径 1cm), 对应于浓度为 40mg/L 的 CRP 所引起的吸光度差值 ( A) 的绝对值应在的范围内超敏 ( 高敏 )C 反应蛋白定量检测试剂盒, 在生产企业规定波长 ( 光径 1 cm), 对应于浓度为 5mg/L 的 CRP 所引起的吸光 24

25 度差值 ( A) 的绝对值应在的范围内注 : 仅适用于免疫透射比浊法 1.4 检出限生产企业应提供 CRP 试剂 ( 盒 ) 的检出限, 常规 C 反应蛋白定量检测试剂盒检出限不高于 5mg/L, 超敏 ( 高敏 )C 反应蛋白定量检测试剂盒全量程 C 反应蛋白定量检测试剂盒检出限不高于 0.5mg/L 1.5 准确度准确度应符合如下要求之一 : 相对偏差 : 用可用于评价常规方法的有证参考物质 (CRM) 作为样本进行检测, 其测量结果的相对偏差应不超过 ±15% 企业参考品测试 : 对具有溯源性的企业参考品进行检测, 其测量结果的相对偏差应不超过 ±10% 1.6 线性生产企业应规定 CRP 试剂 ( 盒 ) 的线性区间, 线性区间内, 线性相关系数 r 应不小于 0.990; 超敏 C 反应蛋白定量检测试剂 ( 盒 ) 线性区间不窄于 [0.5,10] mg/l; 常规 C 反应蛋白定量检测试剂 ( 盒 ) 线性区间不窄于 [5,80] mg/l; 25

26 1.6.4 全量程 C 反应蛋白定量检测试剂盒线性区间不窄于 [0.5,80] mg/l 应规定线性区间内的线性偏差, 可根据实际情况, 在线性区间的不同分段以相对偏差或绝对偏差表达 1.7 重复性在线性区间范围内, 选择 2 3 个不同浓度水平的样本, 浓度选择可参考医学决定水平, 代表正常值和异常值水平各重复检测 10 次, 其变异系数 (CV) 应不大于 10% 1.8 批间差用三个批号试剂盒分别选择 2 3 个不同浓度水平的样本, 则三个批号试剂盒之间的批间相对极差应不大于 15% 1.9 稳定性可对效期稳定性和热稳定性进行验证效期稳定性生产企业应规定试剂 ( 盒 ) 的有效期取效期末的试剂盒检测其试剂空白吸光度分析灵敏度检出限准确度线性和重复性等符合相应指标的要求 ; 热稳定性试验 ( 如适用 ) 取有效期内的试剂盒在 37 放置一定时间, 检测其试剂空白吸光度分析灵敏度检出限准确度线性和重复性等, 应符合相应指标的要求 26

27 注 1: 热稳定性试验不能用于推导产品有效期, 除非是采用基于大量的稳定性研究数据建立的推导公式 ; 注 2: 一般地, 效期为 1 年时选择不超过 1 个月的产品, 效期为半年时选择不超过半个月的产品, 以此类推但如超过规定时间, 产品符合要求时也可以接受 ; 注 3: 根据产品特性可选择上述方法的任意组合, 但所选用方法宜能验证产品的稳定性, 以保证在效期内产品性能符合要求 1.10 质控品性能要求 ( 如有 ) 定值质控品测量准确度均一性 1.11 生物安全性 ( 如适用 ) 2. 检验方法检验方法的制定应与相应的性能指标相适应应优先考虑采用公认的或已颁布的标准检验方法检验方法的制定需保证具有可重现性和可操作性, 需要时明确样品的制备方法, 必要时可附相应图示进行说明, 文本较大的可以附录形式提供对于体外诊断试剂类产品, 检验方法中还应明确说明采用的参考品 / 标准品样本制备方法使用的试剂批次和数量试验次数计算方法 3. 附录 27

28 应提供所用 CRP 校准品的来源赋值过程的详细溯源性报告以及测量不确定度等内容 ( 十一 ) 产品注册检验报告根据体外诊断试剂注册管理办法要求, 首次申请注册的第二类产品应该在具有相应医疗器械检验资质和承检范围的医疗器械检测机构进行注册检测注册检验时优先使用有证参考物质, 若无法获取可以使用企业参考品 ( 十二 ) 产品说明书说明书承载了产品预期用途标本采集及处理实验方法检测结果解释以及注意事项等重要信息, 是指导实验室工作人员正确操作临床医生针对检验结果给出合理医学解释的重要依据, 因此, 产品说明书是体外诊断试剂注册申报最重要的文件之一产品说明书的格式应符合关于发布体外诊断试剂说明书编写指导原则的通告 ( 国家食品药品监督管理总局通告 2014 年第 17 号 ) 的要求, 境外试剂的中文说明书除格式要求外, 其内容应尽量保持与原文说明书的一致性, 翻译力求准确且符合中文表达习惯产品说明书的所有内容均应与申请人提交的注册申报资料中的相关研究结果保持一致, 如某些内容引用自参考文献, 则应以规范格式对此内容进行标注, 并单独列明文献的相关信息结合体外诊断试剂说明书编写指导原则的要求, 下面对 C 反应蛋白定量检测试剂盒说明书的重点内容进行详细说明, 以 28

29 指导注册申报人员更合理地完成说明书编制 1. 预期用途 C 反应蛋白定量检测试剂盒用于体外定量检测血清血浆全血中的 C 反应蛋白浓度, 适用的样本类型应结合实际的临床研究情况进行确认第二段应阐述与该注册产品预期用途相关的临床适应症及详细背景资料注 :C 反应蛋白包括常规 C 反应蛋白 (CRP) 超敏 CRP (hscrp), 全程 C 反应蛋白, 具体根据临床试验核定 2. 主要组成成分 (1) 说明试剂包含主要组分及所用原材料的名称数量比例或浓度等信息 (2) 试剂中不包含但对该项检测必须的组分, 申请人应列出相关试剂 / 耗材的名称货号及其他相关信息 (3) 试剂盒中不包含质控品校准品或其他耗材, 应说明经验证后推荐配合使用的商品化质控品校准品或其他耗材的制造商产品名称以及产品货号等详细信息 ; 如包含校准品和 / 或质控品, 应说明其主要组成成分及其生物学来源, 校准品应注明其定值及溯源性, 质控品应有合适的检测范围 (4) 应注明不同批号试剂盒中各组分可否互换 3. 储存条件及有效期 29

30 试剂的效期稳定性开封稳定性运输稳定性等信息作详细介绍并对开封后未使用产品允许暴露于空气中的温度湿度及效期等条件予以明确注 : 保存条件不应有模糊表述, 如室温, 应明确贮存温度, 如 2 8, 有效期 12 个月稳定期限应以月或日或小时为单位 4. 样本要求重点明确以下内容: (1) 样本采集 : 采集时间点是否受临床症状用药及进食情况等因素的影响, 具体采集部位及类型, 详述具体的操作方法或列出相关操作指南文件以指导使用者 ( 最好能够给出具体图示 ), 尽量减少由于样本采集或处理不当对实验造成的影响 (2) 样本处理及保存 : 样本的保存条件及期限 ( 短期长期 ) 运输条件等冷藏 / 冷冻样本检测前是否须恢复室温, 冻融次数限制 (3) 样本的最大可稀释倍数 (4) 样本适用的抗凝剂类型及实验反应温度 5. 适用机型所有适用的仪器型号, 并提供与仪器有关的重要信息以指导用户操作 6. 检验方法详细说明实验操作的各个步骤, 包括 : (1) 实验条件 : 实验环境的温度湿度等注意事项, 检验试剂及样本复温试剂孵育温度及试剂空白等要求 30

31 (2) 试剂使用方法 ( 手工 / 半自动 / 全自动 ) 注意事项 (3) 详述待测样品的预处理方法步骤及注意事项 (4) 明确样本满足临床检测需要的加样量及观察时间 (5) 质量控制程序 : 质控品的使用质量控制方法 (6) 校准程序 : 校准品的准备和使用, 校准曲线的绘制方法 (7) 应详述实验结果的计算方法, 以及与国际单位的换算公式 ( 如适用 ) 7. 参考区间应注明常用样本类型的参考区间, 简单介绍设定该参考区间所选健康人群的区域特征, 建议注明以下字样由于地理人种性别及年龄等差异, 建议各实验室建立自己的参考值区间并简要说明参考区间的确定方法 8. 检验结果的解释结合质控品对所有可能出现的结果进行合理的解释本试剂的检测结果仅供临床参考, 对患者的临床诊治应结合其症状 / 体征病史其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑明确有可能存在的数值升高因素及数值降低因素, 明确说明对何种条件下需要进行重复检测, 以及在重复检测时对待测样本可能采取的优化条件等进行详述 9. 检验方法局限性 (1) 干扰物质及钩状效应 (HOOK 效应, 如适用 ) 对检测 31

32 结果的影响 (2) 操作时必须严格按照操作规程, 精心操作才能得到正确结果, 对操作程序作任何修改都可能影响结果 (3) 有关假阴性结果的可能性分析某些未知成分屏蔽了抗原决定簇使之无法与抗体结合 ;C 反应蛋白抗原随着样本放置时间的延长和外界温度上升逐渐降解无法被抗体识别 ; 不合理的样本采集转运及处理样本中被测物质浓度过低等均有可能导致假阴性结果 10. 产品性能指标说明该产品的主要性能指标 11. 注意事项应至少包括以下内容: (1) 有关人源组分 ( 如有 ) 的警告, 如 : 试剂内质控品或其他可能含有人源物质的组分, 虽已经通过了 HBs-Ag HIV1/2-Ab HCV-Ab TP-Ab 等项目的检测, 但截至目前, 没有任何一项检测可以确保绝对安全, 故仍应将这些组分作为潜在传染源对待 (2) 建议实验室的环境要求, 如温度湿度电磁环境等 (3) 对采集样本的要求, 建议使用新鲜血液, 不建议使用高脂乳糜样黄疸高类风湿因子样本, 勿使用溶血样本, 明确样本的处理办法明确特异性抗体有无干扰 (4) 对所有样本和反应废弃物都视为传染源进行处理 32

33 (5) 其他有关 C 反应蛋白定量检测试剂盒的注意事项三名词解释 ( 一 ) 分析特异性 (Analytical Specificity): 测量程序只测量被测量物的能力分析特异性用于描述检测程序在样本中有其他物质存在时只测量被测量物的能力通常以一个被评估的潜在干扰物清单来描述, 并给出在特定医学相关浓度值水平的分析干扰程度注 : 潜在干扰物包括干扰物和交叉反应物 ( 二 ) 精密度 (Precision): 在规定条件下, 相互独立的测试结果之间的一致程度精密度的程度是用统计学方法得到的测量不精密度的数字形式表示, 如标准差 (SD) 和变异系数 (CV) 四参考文献 ( 一 ) 体外诊断试剂注册管理办法 ( 国家食品药品监督管理总局令第 5 号 ) ( 二 ) 关于发布体外诊断试剂临床试验技术指导原则的通告 ( 国家食品药品监督管理总局通告 2014 年第 16 号 ) ( 三 ) 关于发布体外诊断试剂说明书编写指导原则的通告 ( 国家食品药品监督管理总局通告 2014 年第 17 号 ) ( 四 ) 冯仁丰, 临床检验质量管理技术基础, 第二版, 上海科学技术文献出版社,2007 年 4 月 ( 五 )Review Criteria for Assessment of C-Reactive Protein 33

34 (CRP), High Sensitivity C-Reactive Protein (hscrp) and Cardiac C-Reactive Protein (ccrp) Assays,FDA ( 六 )How to Define and Determine Reference Intervals in the Clinical Laboratory ; Approved Guideline, Second Edition 2000,CLSI/NCCLS C28-A2 C 反应蛋白测定试剂盒注册 34

35 技术审查指导原则 (2016 修订版 ) 编制说明一指导原则编写目的 ( 一 ) 本指导原则编写的目的是用于指导和规范 C 反应蛋白测定试剂盒产品注册申报过程中审查人员对注册材料的技术审评 ; 同时也可指导注册申请人的产品注册申报 ( 二 ) 本指导原则旨在让初次接触该类产品的注册审查人员对产品机理结构主要性能预期用途等各个方面有所了解, 同时让技术审查人员在产品注册技术审评时把握基本的尺度, 对产品安全性有效性作出系统评价二指导原则编写依据 ( 一 ) 医疗器械监督管理条例 ( 国务院令第 650 号 ) ( 二 ) 体外诊断试剂注册管理办法 ( 国家食品药品监督管理总局令第 5 号 ) ( 三 ) 关于发布体外诊断试剂临床试验技术指导原则的通告 ( 国家食品药品监督管理总局通告 2014 年第 16 号 ) ( 四 ) 关于发布体外诊断试剂说明书编写指导原则的通告 ( 国家食品药品监督管理总局通告 2014 年第 17 号 ) ( 五 ) 中国生物制品规程 ( 六 ) 国家食品药品监督管理部门发布的其他规范性文件 ( 七 ) 现行的国家标准和行业标准 35

36 三指导原则部分内容编写考虑 ( 一 ) 产品的主要技术指标制定主要参考相关国家标准行业标准 GB/T 临床化学体外诊断试剂 ( 盒 ) YY/T 酶联免疫吸附法试剂 ( 盒 ) ( 二 ) 为了提高本指导原则的通用性, 编写中明确本指导原则包含了免疫比浊法化学发光法时间分辨法免疫荧光法等基于抗原抗体反应原理的免疫学方法由于各种方法可能在国家标准行业标准的标准性能要求上不一致, 如果拟申报试剂已有相应的专用国家 / 行业标准或相应方法学的通用标准要求发布, 则企业标准的要求不得低于上述标准要求 ( 三 ) 本指导原则参考了美国食品药品管理局相关要求, 但是对心脏 CRP 部分, 考虑到国内已合并至超敏 CRP, 故本指导原则未保留同时国内某些公司申请的全程 CRP, 在临床上没有相应的称谓, 也未保留四指导原则编写单位和人员本指导原则的编写成员由广东省医疗器械注册技术审评人员行政审批人员广东省医疗器械质量监督检验中心检验人员临床专家及相关企业技术人员共同组成 36

断试剂申请人应当选定不少于 2 家 ( 含 2 家 ) 临床试验机构, 按照有关规定开展临床试验 2. 体外诊断试剂的临床试验机构应获得国家食品药品监督管理总局资质认可 3. 申请人应根据产品特点及其预期用途, 综合不同地区人种流行病学背景病原微生物的特性等因素选择临床试验机构临床试验机构必须

断试剂申请人应当选定不少于 2 家 ( 含 2 家 ) 临床试验机构, 按照有关规定开展临床试验 2. 体外诊断试剂的临床试验机构应获得国家食品药品监督管理总局资质认可 3. 申请人应根据产品特点及其预期用途, 综合不同地区人种流行病学背景病原微生物的特性等因素选择临床试验机构临床试验机构必须体外诊断试剂临床试验技术指导原则一概述体外诊断试剂的临床试验 ( 包括与已上市产品进行的比较研究试验 ) 是指在相应的临床环境中, 对体外诊断试剂的临床性能进行的系统性研究申请人应在符合要求的临床单位, 在满足临床试验最低样本量要求的前提下, 根据产品临床预期用途相关疾病的流行率和统计学要求, 制定能够证明其临床性能的临床试验方案, 同时最大限度地控制试验误差提高试验质量并对试验结果进行科学合理的分析