5 973, ;,,,, [4 ]. FISH, [5 10 ], [11, 12 ]. FISH SRPs [13, 14 ], FISH SRPs FISH SRPs, ; SRPs,, FISH SRPs SRPs 16 S rdna 16 S rrna, ARB, 8 ( 1),

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1 ENV IRONMEN TAL SCIENCE Vol. 27,No. 5 May,2006, 3,, (, ) : ( Fluorescence in situ hybridization, FISH), rrna (Sulfate reducing prokaryotes, SRPs, ), SRPs :SRPs, 4 1 ; / ml, 20 % ; ( Desulf ovibrio) ( Desulf otom aculum ), 8171 % ( 4145 %), % ( 3190 %). Desulfobacterales Syntrophobacterales 2 SRPs, Thermodesulf obacteriales Thermodesulf ovibro SRPs 7159 % ( 2192 %),3157 % ( 1139 %) 2132 % ( 0180 %)., 4129 %( 1175 %) A rchaeoglobus SRPs, SRPs FISH SRPs, SRPs : ;;;; :X172 :A : (2006) Detection of SRPs in Injection Water of Shenli Oil Field by FISH ZEN G Jing2hai, WU Xiao2lei, ZHAO Gui2fang, Q IAN Yi ( ESPC State Key Joint Laboratory, Department of Environmental Science and Engineering, Tsinghua University, Beijing , China) Abstract :Fluorescence in situ hybridization ( FISH) with 16 S rrna2targeted oligonucleotide probes was applied for analyzing the structure of sulfate reducing prokaryotes ( SRPs) community in injection water of Shengli Oil Field. Eight probes and their various combinations were used to detect SRPs in the water. Results showed SRPs detected in the water were diverse, which followed in 4 bacterial phyla and 1 archaeal phylum. Total amount of SRPs was cells/ ml, accounting for 20 % of total cells of microorganisms in the water of the Oil Field. Desulf ovibrio and Desulf otom aculum cells were about 8171 % ( 4145 %) and %( 3190 %) of the total microbial cells respectively, being dominant in the water. The relative amounts of SRPs belonging to Desulfobacterales and Syntrophobacterales, Thermodesulf obacteriales, and Thermodesulf ovibro to total microbial cells in the water were 7159 %( 2192 %), 3157 %( 1139 %) and 2132 %( 0180 %) respectively. In addition, SRPs belonging to A rchaeoglobus were also detected with the amount of 4129 % ( 1175 %) of total microbial cells, which tells that archeal SRPs are also very important sulfate reducing microorganisms in the injection water of oil field. Key words :FISH ; sulfate reducing prokaryotes( SRPs) ; gene probes ; microbial community ; maximum probable number, ( Sulfate2 reducing prokaryotes, SRPs), (SRB) [1, 2 ]. SRPs, 11 4 SRPs, : [3 ], SRPs; SRPs 130, 4 ( Proteobacteria, Nit rospirae, Thermodesulfobacteria, Firmicutes) 1 ( Euryarchaeota) [2 ], SRPs, SRPs ; 2 [1 ],, (Fluorescence i n sit u hybridization, FISH), rrna ;, rrna : ;: : ( ) : (1981 ),,,,E2mail gscas. ac. cn 3,E2mail :xiaolei - edu. cn 转载

2 5 973, ;,,,, [4 ]. FISH, [5 10 ], [11, 12 ]. FISH SRPs [13, 14 ], FISH SRPs FISH SRPs, ; SRPs,, FISH SRPs SRPs 16 S rdna 16 S rrna, ARB, 8 ( 1), SRPs 124, Desulfovibrionales, Desulfobacterales, Synt rophobacterales, Clost ridiales, Nit rospirales, Thermodesulfobacteriales, Archaeoglobales Desulfovibrionaceae, Desulfomicrobiaceae, Desulfo2 halobiaceae, Desulfonat ronumaceae, Desulfobacter2 aceae, Desulfobulbaceae, Nit rospiraceae, Synt rop2 hobacteraceae, Peptococcaceae, Thermodesul2 fobacteriaceae Archaeoglobaceae. 62FAM 8 5 ( ),SRPs ( FISH) , m, ; [10, 11 ],, 100 %, - 20 ( 3 ) ; 1 L, FISH, ;,,16 S rrna ;, 20min ; DAPI DNA ;,, 62FAM,,DAPI, SRPs, ( SRPs),, SRPs (SY/ T ),, ( ), 1mL,, d,, SRPs, SRPs S rrna Table 1 16 S rrna probes applied SRPs ACCGGTATTCCTCCCGAT23 5 2GCGCAAAATTCCTCACTG23 5 2CTACGGATTTCACTCCTA23 5 2ATGGGACGCGGATCCATC23 5 2ATGGGACGCGGACCCATC23 5 2GCTGTGGAATTCCACCTT23 5 2TGAGGAGGGCTTTCTGGG23 5 2GCCCGTACGGATCTTCGG23 Desulfobacterales,Syntrophobacterales Desulfobacterales,Syntrophobacterales Desulfovibrionales Desulfotomaculum Desulfotomaculum Nitrospirales( Thermodesulfovibro) Thermodesulfobacteriales Archaeoglobales 11311, SRPs FISH, SRPs,

3 :44,46, 30 %,215h SRPs 8 FISH, SRPs ; SRPs ( 62FAM ) ( DAPI ), SRPs, SRPs ;SRPs, SRPs SRPs SRPs, (Richness), ( Evenness),Shannon Simpson, SPRs (Richness) : S = SRPs Shannon : H = - Simpson : D = 1 - p ilog 2 p i p2 i : p i SRPs ( Evenness) : E = : H max = log 2 S H H max SRPs , SRPs, SRPs, SRPs, FISH SRPs SRPs 8, 1 SRPs, 4 ( Proteobacteria, Thermodesulfobacteria, Firmicutes, Nitrospirae) 1 ( Euryarchaeota) ( 1). ( Desulf ovibrio) ( 3) ( Desulf otom acul um ) ( 4 5 ) 8171 % ( 4145 %) % ( 3190 %),, [15,16 ]. 8 1 SRPs Fig. 1 Amount of SRPs cells in the injection water from Shenli oil field Euryarchaeota A rchaeoglobus SRPs, 4129 % ( 1175 %),,, SRPs,,, Desulfobacterales Syntrophobacterales 2 SRPs, Thermodesulfobacteriales SRPs, Thermodesulf ovibro SRPs 7159 %( 2192 %),3157 %( 1139 %) 2132 % ( 0180 %). SRPs ( Desulf otom acul um ) ( Thermodesulf ovibro) 6,,8 SRPs %( %), SRPs SRPs,, SRPs,,, SRPs, SRPs, SRPs, SRPs FISH SRPs SRPs Shannon : H = 1179 ; Simpson : D = 0181 ;( Evenness) : E = 0192,

4 5 975 SRPs 212 SRPs SRPs, 2 Table 2 Detection of SRPs by combinations of probes SRPs SRPs / % / % / % / % ,3 4 5 SRPs,3 4 5 SRPs 8, ( Desulf ovibrio ) ( Desulf otom acul um), SRPs 3,4,5 3, SRPs,, SRPs SRPs, SRPs SRPs, SRPs FISH,, SRPs 213 SRPs 21311, 21d,, SRPs 9 / ml FISH 8 8 SRPs % ( 4112 %) ;, DAPI ;, ; SRPs, SRPs / ml. 4, FISH SRPs. FISH, SRPs,. FISH 8 20h, 14 21d, FISH SRPs SRPs SRPs 3 (1) FISH SRPs: SRPs SRPs,SRPs. FISH SRPs, ; FISH 8 20h, 14 21d,

5 SRPs,, (2) 1, ( Desulf ovibrio) ( Desulf otom acul um) SRPs, 8171 % ( 4145 %) % ( 3190 %) ; Thermodesulf ovibro SRPs, Desulf otom acul um 1/ %( 1175 %), (3), SRPs,,,SRPs. FISH SRPs : [ 1 ], [J ].,1998,27 : [ 2 ] Loy A, Lehner A, Lee N, et al. Oligonucleotide microarray for 16S rrna gene2based detection of all recognized lineages of sulfate2 reducing prokaryotes in the environment [ J ]. Appl. Environ. Microbiol., 2002, 68 : [ 3 ] Amann R I, Ludwig W, Schleifer K2H. Phylogenetic identification and in situ detection of individual microbial cells without cultivation [J ]. Microbiolog. Rev., 1995, 59 (1) : [ 4 ] Stoffels M, Ludwig W, Schleifer K2H. rrna probe2based cell fishing of bacteria[j ]. Environ. Microbiol., 1999, 1 (3) : [ 5 ] Glockner F O, Fuchs B M, Amann R I. Bacterioplankton compositions of lakes and oceans : a first comparison based on fluorescence in situ hybridization [ J ]. Appl. Environ. Microbiol., 1999, 65 : [ 6 ] Moter A, Gobel U B. Fluorescence in sit u hybridization ( FISH) for direct visualization of microorganisms [ J ]. J. Microbiol. Method., 2000, 41 : [ 7 ] Antoaen J, Llobet2Brossa E, Rodrgguez2Valera F, et al. Fluorescence in situ hybridization analysis of the prokaryotic community inhabiting crystallizer ponds [ J ]. Environ. Microbiol., 1999, 1 (6) : [ 8 ] Friedrich U, Van Langenhove H, Altendorf K, et al. Microbial community and physicochemical analysis of an industrial waste gas biofilter and design of 16srRNA2targeting oligonucleotide probes[j ]. Environ. Microbiol., 2003, 5 (3) : [ 9 ] Brossa E L, Mora R R, Amann R I. Microbial community composition of Wadden Sea sediments as revealed by fluorescence in situ hybridization [ J ]. Appl. Environ. Microbiol., : [ 10 ] Snaidr J, Amann R I, Huber I, et al. Phylogenetic analysis and in situ identification of bacteria in activated sludge [ J ]. Appl. Environ. Microbiol., : [ 11 ] Wu X L, Conrad R. Functional and structural response of a cellulose2degrading methanogenic microbial community to multiple aeration stresses at two different temperatures [ J ]. Environ. Microbiol., 2001,3 (6) : [ 12 ] Wu X L, Chin K J, Stubner S, et al. Functional patterns and temperature response of cellulose2fermenting microbial cultures containing different methanogenic communities [ J ]. Appl. Microbiol. Biotechnol., 2001, 56 (2) : [ 13 ] Kleikemper J, Schroth M H, Sigler W V, et al. Activity and diversity of sulfate2reducing bacteria in a petroleum hydrocarbon2 contaminated aquifer [ J ]. Appl. Environ. Microbiol., 2002, 68 : [ 14 ] Okabe S, Itoh T, Satoh H, et al. Analyses of Spatial distributions of sulfate2reducing bacteria and their activity in aerobic wastewater biofilms [ J ]. Appl. Environ. Microbiol., 1999, 65 : [ 15 ],,,. [J ].,2003,20 (4) : [ 16 ],,,. [J ]. ( ),2002,26 (2) :

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