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1 第 卷 218 年 第7期 Vol No 7 ENVIRONMENTAL CHEMISTRY 7月 李玉白 吕冰 张磊 等 气相色谱 三重四极杆质谱法测定母乳样品中二 July 218 英类物质的验证 J 218 7 1678 1682 LI Yubai LYU Bing ZHANG Lei et al Determination of dioxins in breast milk samples by gas chromatography triple quadrupole mass spectrometry J Environmental Chemistry 218 7 1678 1682 气相色谱 三重四极杆质谱法测定母乳样品中二 英类物质的验证 李玉白1 吕 冰2 摘 李敬光2 邓启良1 赵云峰2 吴永宁2 2 国家食品安全风险评估中心 卫生部食品安全风险评估重点实验室 北京 121 1 天津科技大 天津 17 张 磊2 本研究在建立气相色谱 三重四极杆质谱法 GC MS MS 测定二噁英同类物 PCDD Fs 分析方法的 要 基础上 验证了 GC MS MS 测定母乳样品中的 17 种 PCDD Fs 的可行性 结果表明 对于 17 种 PCDD Fs GC MS MS 方法在 1 1 ng ml 的浓度范围内具有良好的线性 平均相对响应因子在 97 1 47 之间 标准 曲线的相对响应因子的相对标准偏差小于 1 使用标准溶液进行定量检测精密度测试 17 种目标的 相对标准偏差均低于 1 n 8 证明该方法具有良好的重复性 方法定量限为 8 977 pg g fat 满足 母乳样品中 PCDD Fs 的痕量分析需求 对 个母乳样品进行前处理后分别使用 GC MS MS 和 GC HRMS 分 析测定 将 GC MS MS 和 GC HRMS 的定量数据利用 SPSS 进行比较 配对 t 检验的结果证明两种方法对于各 目标和总毒性当量均无显著差异 研究结果表明 GC MS MS 可以用于母乳中 17 种 PCDD Fs 的准确 测定 关键词 多氯代二苯并 对 二 气相色谱 三重四极杆质谱 二噁英同类物 母乳 英 PCDDs 和多氯代二苯并呋喃 PCDFs 通常被称为二 英同类物 PCDD Fs 其中 17 种 2 3 7 8 位全部被氯原子取代的 PCDD Fs 同类物因具有生殖毒性 内分泌干扰和致癌性而受到广泛关注 PCDD Fs 具有 高度亲脂性 易存在于动物脂肪组织和哺乳动物乳汁中 在生物体内的蓄积程度会通过食物链传递放大 由于人类位于 食物链的顶端 膳食暴露会造成 PCDD Fs 在人体脂肪中富集 目前母乳是公认的评价二 理想生物样品 母乳中的 PCDD Fs 浓度可以直接反映人体中的浓度 英及其类似物人体负荷水平的 通常情况下 PCDD Fs 的浓度在超痕量 pg 级别 具有高选择性和高灵敏度等优势的同位素稀释气相色谱 高分辨 质谱联用法 GC HRMS 是分析 PCDD Fs 的标准检测方法 然而 GC HRMS 的购置和维护成本高昂 对仪器使用人员要 求较高 极大地制约着科研人员对这类高毒性物质的分析监测 随着质谱技术的不断发展 三重四极杆质谱在灵敏度及 可靠性等方面获得大幅提升 欧盟已经将 GC MS MS 列入食品及饲料中 PCDD Fs 的确认分析方法 本研究在 建 立 GC MS MS 测 定 17 种 PCDD Fs 同 类 物 的 仪 器 分 析 方 法 基 础 上 通 过 分 析 比 较 GC MS MS 与 GC HRMS测定同样的母乳样品 验证了 GC MS MS 测定母乳中 PCDD Fs 的准确性和可靠性 1 1 1 实验部分 仪器与试剂 气相色谱 三重四极杆质谱 GCMS TQ8 Shimadzu 日本 气相色谱 高分辨质谱 DFS Thermo Scientific 美国 配 有 Trace 气相色谱 Thermo Scientific 意大利 加速溶剂萃取仪 ASE3 Thermo Scientific 美国 自动样品净仪 北京普立泰科仪器有限公司 配有硅胶柱 氧铝柱 活性碳柱 减压旋转蒸发仪 Heidolph 德国 Buchi 瑞士 冷冻干 燥机 Christ 德国 正己烷 二氯甲烷 乙酸乙酯 甲苯 农残级 J T Baker 美国 壬烷 Thermo Fisher Scientific 德国 浓 硫酸 优 级 纯 北 京 工 厂 硅 胶 Merck 德 国 硅 藻 土 Merck 德 国 EPA16 系 列 标 准 溶 液 EPA16CS EPA16CS1 CS3 EPA16LCS EPA16ISS Wellington Laboratories 加拿大 1 2 样品处理 样品的前处理按照 GB T 9 2 27 食品中二 国家自然科基金 211 资助 通讯联系人 Tel 1 67791 E mail lijg cfsa net cn 英及其类似物毒性当量的测定 进行 称取大约 g 母乳样

2 7期 李玉白等 气相色谱 三重四极杆质谱法测定母乳样品中二 英类物质的验证 1679 品冻干 研磨并按比例加入硅藻土混合均匀 加入 1 μl 同位素标记的 PCDD Fs 定量内标溶液 EPA16LCS 以正己 烷 二氯甲烷 1 1 V V 为萃取溶剂 使用加速溶剂萃取仪进行提取 ASE3 主要参数设置 温度 压力 1 psi 循 2 次 静态时间 l min 提取液经旋转蒸发浓缩 冷却后测定母乳样品脂肪含量 加入 44 的酸硅胶除去脂肪 除脂 后的样品通过配有硅胶柱 氧铝柱和活性碳柱的自动样品净仪以分离收集 PCDD Fs 净获得的溶剂在微弱氮气流 下浓缩至 2 μl 最后加入 μl 回收率内标标准溶液 EPA 16 ISS 后等待上机检测 1 3 仪器条件 两种方法的气相色谱参数相同 按照 GB T 9 2 27 食品中二 英及其类似物毒性当量的测定 设置 DB MS 色谱柱 6 m mm μm 美国 J W Scientific 进样口温度 29 不分流进样 进样量 1 μl 柱温初始温度 1 保持 3 min 以 2 min 升 温 至 23 保 持 18 min 再 以 min 升 温 至 23 保 持 1 min 最 后 以 4 min 升温至 32 保持 1 min 载气 氦气 流速 1 ml min 三重四极杆质谱 EI 源温度 电离能量 7 ev 灯丝电流 μa 多重反应监测模式 MRM 每个选取 两个 MRM 离子对分别作为定量 定性离子对 表 1 其中将 F 离子对的驻留时间设置为 C12 TCDD F 的 高分辨质谱的条件按照 GB T 9 2 27 食品中二 英及其类似物毒性当量的测定 设置 EI 源温度 26 1 7 倍 检测器电压为 1 8 kv 表1 保留时 间 min C C C C C C 子离子 9 1 9 27 92 3 9 267 9 28 86 28 89 36 79 36 82 39 3 39 38 33 9 3 9 3 9 24 9 267 9 6 9 31 9 339 9 31 9 339 9 287 9 276 9 287 9 276 9 定性离子 碰撞能 V 3 9 母离子 子离子 7 9 3 9 333 9 269 9 333 9 321 9 9 9 3 9 9 9 3 9 242 9 269 9 8 9 28 9 274 9 28 9 274 9 碰撞能 V 4 367 9 33 9 36 9 9 4 76 38 8 321 9 387 8 323 9 4 16 4 78 母离子 27 6 27 63 C 1 2 3 4 TCDD 定量离子 PCDD Fs 的 GC MS MS 采集参数 电子能量 4 ev 灯丝电流 7 ma 多离子监测模式 multiple ion detection MID 分辨率大于 1 监测离子选择参见 GB T 9 2 27 46 3 9 3 8 38 8 292 9 9 321 9 33 9 8 387 8 29 9 2 9 323 9 C C C 47 49 41 8 3 9 43 8 339 8 C 47 68 41 8 3 9 43 8 339 8 C C C 1 3 4 8 3 8 C 3 43 8 1 8 C C 46 2 47 1 47 17 47 1 47 7 48 1 48 17 48 68 48 7 1 32 3 3 87 3 88 7 38 7 39 7 61 3 8 38 8 3 8 389 8 389 8 41 8 389 8 38 8 3 8 47 8 423 8 4 8 47 8 469 7 47 7 441 7 9 321 9 9 326 9 326 9 3 9 326 9 321 9 8 387 8 8 391 8 391 8 43 8 391 8 387 8 2 9 323 9 2 9 328 8 328 8 339 8 328 8 323 9 9 8 2 9 4 8 49 8 6 8 36 8 3 8 4 8 4 8 394 8 8 8 421 8 4 8 4 8 421 8 49 8 471 7 49 7 443 7 37 8 3 8 362 8 37 8 6 8 47 8 396 8 38 8

3 168 2 2 1 卷 结果与讨论 灵敏度和重复性 将标 准 溶 液 EPA16CS2 稀 释 4 倍 TCDD F PeCDD F HpCDD F F 的 浓 度 分 别 为 pg μl 以考察 GC MS MS 的灵敏度 当进样量为 1 μl 时 GC MS MS 测定得到的 17 种天然 PCDD Fs 同类物均峰 型良好且信噪比大于 表明该方法对超痕量 PCDD Fs 具有较高的灵敏度 将稀释 4 倍的 EPA16CS2 分别进行日内和日间进样 连续进样 9 次 日内进样 3 次 连续 3 d 结果显示 17 种 PCDD Fs 同类物的峰面积的相对标准偏差 RSD 均小于 1 表明该方法在超痕量水平仍有具有良好的重现性 2 2 仪器线性范围及定量限 使用 个不同浓度水平的 EPA16 标准校正溶液 EPA16CSL EPA16CS 和 EPA16CS1 CS3 分别进样绘 制标准曲线 参照 EPA Method 16 利用所得校正曲线分别计算 17 种 PCDD Fs 同类物的线性范围及平均相对响应因子 RRF 见表 2 结果表明 每个目标平均 RRF 的 RSD 均小于 1 校正曲线显示出了良好的线性 说明该方法具 有较宽的线性范围 欧盟法规规定标准曲线上最低校准点下获得的 RF 与标准曲线上所有点获得的平均 RF 的相对偏差 需小于 3 计算得到 17 种 PCDD Fs 的 RF 偏差在 1 14 符合欧盟法规要求 本研究对仪器定量限 iloq 与方法定量限 mloq 分别进行了评价 以最低可接受校准点的 8 次重复进样结果来 计算 iloq 在该浓度下所有同类物的色谱峰面积的相对标准偏差 RSD 小于 1 PCDD Fs 的 RF 偏差均小于 2 满 足欧盟法规要求 故将 EPA16CS2 稀释 4 倍后重复进样 8 次 稀释液中天然 TCDD F PeCDD F HpCDD F F 的浓度分别为 pg μl 进样量 1 μl 即绝对进样量分别为 fg 计算其 1 倍标准偏差 SD 作为 iloq 计算得到的 PCDD Fs 的仪器定量限范围为 17 6 pg μl 使用硅藻土作为空白样品进行加标实验来测定方法定量限 mloq 采用 8 个程序空白样品 分别向其中添加 1 μl 定量内标 EPA 16LCS 按 1 2 节 进行前处理后用 GC MS MS 测定 由此计算空白样品中各目标物质的平均值和标 准偏差 SD 空白样品平均值加 6 倍 SD 作为 GC MS MS 的 mloq 本研究基于 g 母乳取样量 约 2 g 脂肪量 对 17 种 合物进行分析 得出用于计算 mloq 的可测定空白浓度 对于空白样品中未检出的 通过将 iloq 调整至样品量来 确定其 mloq 得到按脂肪重量计的 PCDD Fs 的方法定量限范围在 8 977 pg g 表2 平均相对 响应因子 相对标准 偏差 iloq pg μl 1 1 1 6 4 17 1 4 76 1 1 79 4 6 2 3 8 2 1 6 1 1 9 1 4 2 4 2 1 7 39 1 8 1 6 6 1 1 1 1 1 fat 之间 表 2 17 种 PCDD Fs 同类物的标准曲线和定量限相关数据 浓度范围 pg μl 1 12 97 1 9 1 8 1 1 9 4 2 1 8 1 79 7 2 41 6 1 12 1 4 1 47 3 78 77 6 21 6 最低可接受 校准点 pg μl 相对标准 偏差 4 1 1 9 8 9 2 平均空 白水平 pg g mloq pg g fat 8 38 4 8 144 9 4 9 3 4 28 29 4 1 448 977 66 6 16 16 8 4 96 4 4 7 9 1 21 6 9 42 2 3 39 2 欧盟法规规定 17 种 PCDD Fs 的 mloq 之和必须小于对应基质最高残留限量 ML 的 2 目前该法规仅规定了食 品中 PCDD Fs 的限量值 因此本文选取了与母乳样品基质类似的原料乳和乳制品的 ML 2 pg TEQ g 计算 17 种 PCDD Fs 的 mloq 之和为 16 pg TEQ g 2 3 GC MS MS 测定结果与 GC HRMS 结果比较 fat 约为 ML 的 6 4 可满足欧盟有关法规要求 fat 进行比较 本研究中使用实际样品分别在 GC MS MS 和 GC HRMS 上进行测定 通过比较 GC MS MS 测定结果与 GC HRMS 测

4 7期 李玉白等 气相色谱 三重四极杆质谱法测定母乳样品中二 1681 英类物质的验证 定的符合程度对 GC MS MS 方法进行进一步验证 本实验所用的 个母乳样品分别来自北京 福建 江西 吉林和浙江 将经过 1 2 节 处理好的母乳提取溶液在两台仪器上分别进行检测 用 GC HRMS 获得的结果作为参考值验证 GC MS MS 的测量准确性 在计算毒性当量 TEQ 时 检出浓度低于 mloq 的值按 计 2 4 配对 t 检验结果 将 GC MS MS 和 GC HRMS 获得的测量结果用 SPSS 软件进行配对样本 t 检验 除 1289 HxCDF 和 外 其余 PCDD Fs 同类物在两台仪器上的检出率均一致 1289 HxCDF 和 在两台仪器上的检出率不一致可能是由于 样品中这两种同类物的含量过低 仪器无法准确定量造成的 将单一仪器未检出的数据剔除后 以 17 种 PCDD Fs 同类物 为组别对测定结果进行分析 17 种 PCDD Fs 同类物在两台仪器上的统计数据见表 3 17 种 PCDD Fs 同类物在 GC MS MS 和 GC HRMS 上测定结果 pg g 均值 标准偏差 浓度范围 均值 标准偏差 4 32 88 4 18 6 32 3 9 17 1 17 2 2 28 4 21 1 88 88 79 4 2 2 93 1 17 71 38 1 26 46 2 23 6 3 6 2 33 23 27 1 26 61 3 9 77 26 4 1 22 82 26 1 7 3 4 2 27 2 1 27 3 82 42 1 1 46 16 28 4 8 2 3 23 98 74 41 144 2 77 1 64 6 1 92 6 1 16 7 4 77 4 38 1 32 8 1 9 3 2 7 2 96 6 78 1 26 3 79 46 2 36 3 4 126 22 2 3 7 67 6 87 61 9 3 1 17 1 22 3 2 8 28 7 3 6 78 26 8 1 18 1 P值 浓度范围 的统计数据 气相色谱 高分辨质谱法 气相色谱 三重四极杆质谱法 检出数 n 表3 9 2 77 17 76 7 4 9 2 4 79 6 1 24 8 41 23 1 67 23 2 14 3 从表 3 可以看出 在 GC MS MS 和 GC HRMS 的结果对比中 除 1 2 3 4 6 7 8 HpCDD 和 个同类物外 其余 12 个同类物的配对 t 检验的 P 值均大于 说明 GC MS MS 和 GC HRMS 对这些同类物的检测结果无显著性差异 对统计上有差异的 个 PCDD Fs 同类物进一步分析 后发现其浓度分布范围很宽 最高浓度是最低浓度的 至 倍 当数据范围较宽时配对 t 检验可能不能正确反映出数据 一致性 故将这几个目标物质的 GC HRMS 的测定结果进行百分位数排列并分组 即将数据按从小到大的顺序排列后均 分为三组 然后将来源于同一样品的 GC MS MS 测定结果一一匹配 整理后按组 1 组 2 组 3 分别进行配对 t 检验 结果 表明上述 个 PCDD Fs 同类物在分组后的配对 t 检验中 P 值均大于 说明消除组内浓度范围过宽带来的差异后 GC MS MS 和 GC HRMS 对剩余同类物的检测结果也没有显著性差异 1 2 3 4 6 7 8 HpCDD 和 分组后的配对 t 检验具体数据见表 4 表4 P值 组 1 n 6 组 2 n 7 组 3 n 6 2 母乳样品中二 在比较二 统计上有差异的 个 PCDD Fs 同类物分组后的配对 t 检验 p 值 1 2 3 7 8 PeCDD 1 2 3 4 7 8 HxCDD 1 2 3 4 6 7 8 HpCDD 26 97 2 78 2 87 29 3 17 128 387 1 2 3 4 6 7 8 HpCDF 181 217 294 英及其类似物的含量水平结果对比 英及其类似物人体负荷水平和健康风险时 通常是将这 17 种目标物质使用毒性当量因子 TEFs 计算出 总毒性当量 TEQs 并以脂肪重量计 表 为分别采用 GC MS MS 和 GC HRMS 获得的 个母乳样品的 PCDD Fs 的 TEQs 值 将 GC MS MS 和 GC HRMS 获得的 TEQs 用 SPSS 软件进行配对 t 检验 结果显示 P 7 表明 GC MS MS 与 GC HRMS 获得的结果无统计差异

5 1682 表 卷 通过 GC MS MS 和 GC HRMS 获得的 PCDD Fs 的 TEQ 值 样品编号 气相色谱 三重 四极杆质谱法 气相色谱 高分辨质谱法 相对偏差 样品编号 气相色谱 三重 四极杆质谱法 气相色谱 高分辨质谱法 相对偏差 1 3 97 3 94 63 72 72 3 3 24 3 2 1 4 69 4 86 3 48 4 6 7 8 9 1 2 71 2 63 3 43 3 71 2 76 2 8 3 69 3 6 2 4 2 41 3 1 3 2 39 2 63 4 71 4 67 7 46 1 41 3 66 1 8 4 7 9 76 12 14 1 16 17 18 4 16 9 6 26 2 3 94 3 14 4 16 88 6 9 3 99 66 3 2 结论 3 32 1 73 1 36 1 94 1 99 2 3 本研究对气相色谱 三重四极杆质谱法 GC MS MS 测定母乳样品中的 PCDD Fs 进行了验证 结果表明对于母乳样 品 GC MS MS 能够获得与 GC HRMS 相一致的检测结果 可用于人体中 PCDD Fs 暴露情况的监测评估 但是 需要说明 的是一般情况下母乳样品中的 PCDD Fs 浓度是食品样品的数倍 因此对 GC MS MS 法能否准确测定食品中的超痕量二 英还需要进一步的验证

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