+$ 西安交通大学学报医学版第卷 ##(#-#./+"# +&&& )#(($ # ##"# ##.# +##& )+,( +## ( !# ##!)* 多药耐药是乳腺癌产生耐药的机制之一紫杉类药物作为乳腺癌的基本化疗药物也是糖蛋白的转运底物 %&'& 编码的糖蛋白通过增加肿瘤细胞

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济琨琳却
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1 第卷第期年月西安交通大学学报医学版!"#$## %&'&! 基础研究基因多态性对乳腺癌紫杉类药物化疗疗效的影响刘新兰张海霞赵岳阳姜敏宁夏医科大学总医院肿瘤医院肿瘤内科宁夏银川 $ 宁夏医科大学宁夏银川 $ 宁夏医科大学总医院生物芯片中心宁夏银川 $ 摘要目的检测乳腺癌患者多药耐药 %&'& 基因多态性分析其与乳腺癌患者应用紫杉类药物化疗疗效的关系方法采用 ' 技术检测 $ 例期乳腺癌患者 %&'&#(!')#(!*)% 和 #(!'$) 基因分型探讨其与乳腺癌患者应用紫杉类药物化疗疗效的关系结果 $ 例期乳腺癌患者中 ') 位点 '' 基因型占 +,') 基因型占 $$+,)) 基因型占 -,*)% 位点 ** 基因型占,*) 基因型占 $+,*% 基因型占,)) 基因型占 +$,%) 基因型占 +,'$) 位点 '' 基因型占,') 基因型占,)) 基因型占, 回族与汉族病例组中 %&'& 待测位点基因多态性相比差异无统计学意义经./0#1!#/ 遗传平衡检验认为 ')*)% 和 '$) 基因多态性具有群体代表性 $ 例期乳腺癌患者接受以紫杉为基础的化疗方案 '$) 位点 '))) 基因型患者有 $, 较好的反应率化疗疗效优于 '' 基因型 $+-, ++ -) 等位基因携带者化疗有效率高于 ' 等位基因携带者 + 结论检测 %&'& 基因 '$) 位点基因多态性对预测乳腺癌患者应用紫杉类药物化疗疗效有重要的临床参考价值关键词乳腺癌 %&'& 基因多态性技术化疗疗效多药耐药中图分类号 - 文献标志码 %!"#$ $%!&$'&! #'"&#'&%&$" '"!& 1!2.! 3%4*.11. 3%5 6"#.! 7%4* 81! #./8#!(95!(2()"8(/(:1.2(941!1.#1.2!1;#/:1*#!#/.2(:1.2 61!".!$41!1.#1.2!1;#/:161!".!$#./8#!(9&1(1 '#!#/41!1.#1.2!1;#/:1*#!#/.2(:1.261!".!$'1!. ("# (!)*+##", #+- ( "###./+"# + ##&0(.. ". $-""+ ## 1(*/ *!"$#% + ##.+-## # +##-#. # &$-%+##(((##"&+ ($$&+ $$&+0 00 &0 $&+0 & +&$ &+($ (( &( &"&&( ""# "+- "'&&"/+#+-" (0"($" &&$%+##- "#"#./+"# (($"+ $& &&+##(($&+- &++-&& 收稿日期 /+/ 修回日期 // 基金项目宁夏回族自治区高等学校科学研究项目 '&' $"+ "#$##*#12#'.* '&' 通讯作者刘新兰 &/.##&&# 刘新兰与张海霞为共同第一作者优先出版 ---&#3&3#"&--&*&$&-&&/$/!"#"!

2 +$ 西安交通大学学报医学版第卷 ##(#-#./+"# +&&& )#(($ # ##"# ##.# +##& )*+,( +## ( *!# ##!)* 多药耐药是乳腺癌产生耐药的机制之一紫杉类药物作为乳腺癌的基本化疗药物也是糖蛋白的转运底物 %&'& 编码的糖蛋白通过增加肿瘤细胞内药物的外泵作用介导肿瘤细胞耐药最新研究报道 %&'& 基因多态性可以改变糖蛋白的结构从而影响其功能本研究将选择目前研究关注最多的 %& '&#(!#(! 和 #(!$ 位点采用高分辨率溶解曲线 1/#:(2"1(! 8#21! 技术检测以上待测位点基因多态性观察其对乳腺癌化疗疗效的影响分析 %&'& 基因多态性作为预测乳腺癌化疗敏感性的遗传标记物的可靠性材料与方法病例资料收集年月至 $ 年月就诊于宁夏医科大学总医院的宁夏地区 $ 例经病理确诊且临床资料完整的期女性乳腺癌患者均经乳腺钼靶或彩超胸腹部头颅 ') 或全身骨断层扫描 )') 等证实具有可测量的肿瘤病灶其中汉族 - 例回族例中位年龄 $ 岁岁所有患者化疗前功能状态 '5* 评分均在分血常规肝肾功能在正常范围内心电图及心功能正常 - 化疗方案 $ 例期乳腺癌患者既往术后辅助化疗均采用以蒽环为基础的化疗方案采用以紫杉类药物为基础的化疗方案其中紫杉醇多西他赛联合卡培他滨方案 +$ 例紫杉醇多西他赛联合吡柔比星方案例第天紫杉醇剂量为 88 或多西他赛 88 静滴吡柔比星剂量为 88 静滴 $ 卡培他滨 88 口服每为个周期共 $ 个周期. 疗效评价疗效评定参照 ') 实体瘤疗效评定标准分为完全缓解 ' 部分缓解病情稳定和疾病进展以 ' 为有效为无效 /01(( 技术检测乳腺癌患者基因分型 /0/ 标本采集与 4% 提取所有患者化疗前采集外周静脉血 8 乙二胺四乙酸 )% 抗凝采用美国 5*% 公司 4% 试剂盒抽提全血基因组 4% 并利用 4.!(/( 分光光度计和琼脂糖凝胶电泳完成样本 4% 质量鉴定统一标定 4% 样本质量浓度为! 分装置于冰箱保存备用 0-' 检测基因型采用 /18 #//18#/ 根据 *#!&.! 已知基因序列设计引物 ') 引物序列 <=)))')'%')'*)'')** )%=='%)%*%*'')')*'%)'%=*) % 引物序列 <=%%*'%')*%%%*%)%%*%= =)%*)%%*'%*)%***%*)='$) 引物序列 <= ***)**)*)'%'%**%%*%*= =)*')'''%**')*)))%)))= 引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成总反应体系为含 8(2 上下游引物各荧光素 5 '.: #/14% 模板采用 (#1' 2#/$+ 检测 #(!#(! 和 # (!$ 基因分型扩增阶段循环参数 - 预变性 81!- 变性 : 退火条件 ) *)%'$) 分别为 +: 共计个循环延伸 81! 根据 ' 基因分型结果随机抽取, ') 和 '$) 各型样本例 *)% 突变型样本测序验证上海生工生物工程技术服务有限公司利用 '/(8.: 软件进行终点分析统计学方法采用软件进行统计分析检验水准为采用./0#1!#/ 遗传平衡检验方法进行基因型分布遗传平衡吻合度检验 %&'& 各位点不同基因型分布及其与乳腺癌化疗有效率的比较采用检验或 <1:#/ 精确检验法采用非条件 (1:1 回归分析 %&'& 基因多态性和乳腺癌化疗疗效之间的关系以前进法筛选自变量 - 结果 -/ 乳腺癌多态性及 &!,#%! 遗传平衡检验结果 ') 和 '$) 位点分别有 ''') 和 )) 种基因型 *)% 位点由于 *) 与 *% ))%% 与 %) 间的 )8 值差异较小初步获得 ** *)% 和 ))%%%) 种基因型图 '$) *)% 位点 *) 与 *%))%% 与 %) 基因型通过基因测序区别得出 *)*%)) 和 %)$ 种基!"#"!

期刘新兰张海霞赵岳阳等 %&'& 基因多态性对乳腺癌紫杉类药物化疗疗效的影响 + 因型本研究人群中无 %% 基因型 $ 例期乳腺癌患者 %&'& 各待测位点基因型和等位基因分布频率见表在 - 例汉族和例回族病例中 ') 位点 '''))) 基因型分别为例例和 + 例 - 例

#/ 遗传平衡检验显示入组样本检测位点 ')*)% 和 '$) 基因型分布均符合遗传平衡定律 ')+$+ *)%-$ '$) 具有恒定性提示本研究入组病例具有群体代表性随机抽取的样本 '$) 测序结果与 ' 结果相符图图.0. 基因型的 ( 检测结果 <1'$)#!

(1!.!.2#2#1!$. 1#!:1:.# /#.:.!#/ 基因型例数频率, 等位基因频率, '). '' + ' ++ '' $$+ )) - ) *)% ** $ * $ *) $+ *% - %% )) $ +$ %) $ + )% - '$) '' ' ') + )) ) $-.

3 期刘新兰张海霞赵岳阳等 %&'& 基因多态性对乳腺癌紫杉类药物化疗疗效的影响 + 因型本研究人群中无 %% 基因型 $ 例期乳腺癌患者 %&'& 各待测位点基因型和等位基因分布频率见表在 - 例汉族和例回族病例中 ') 位点 '''))) 基因型分别为例例和 + 例 - 例行双侧检验结果显示差异无统计学意义 *)% 位点 ***)%))%) 基因型分别为例例和例例两组相比差异无统计学意义 '$) 位点 '''))) 基因型分别为例 -$ 例和 - 例 + 例两组相比差异无统计学意义 $ 经./0#1!#/ 遗传平衡检验显示入组样本检测位点 ')*)% 和 '$) 基因型分布均符合遗传平衡定律 ')+$+ *)%-$ '$) 具有恒定性提示本研究入组病例具有群体代表性随机抽取的样本 '$) 测序结果与 ' 结果相符图图.0. 基因型的 ( 检测结果 <1'$)#!(#### %'$) 基因的标准化随温度变化的溶解曲线图不同颜色荧光曲线区分不同基因型绿色曲线表示 '' 基因型蓝色曲线代表 )) 基因型红色曲线表示 ') 基因型 & 由 % 图派生的荧光强度差异曲线图表 0 例期乳腺癌患者基因型及等位基因频率分布 ).</#>"#!(9%&'&#!(1!.!.2#2#1!$. 1#!:1:.# /#.:.!#/ 基因型例数频率, 等位基因频率, '). '' + ' ++ '' $$+ )) - ) *)% ** $ * $ *) $+ *% - %% )) $ +$ %) $ + )% - '$) '' ' ') + )) ) $-. 例标本未获得基因分型结果例标本未获得基因分型结果例标本未获得基因分型结果 -/- 基因型与乳腺癌紫杉类药物化疗疗效的关系 $ 例期乳腺癌患者应用紫杉类药物化疗图 -.0. 位点测序结果 <1*#!#:#>"#!1!/#:"2(9%&'&'$) 箭头所指为 '$) 基因型 %'' 基因型 &') 基因型 ')) 基因型 ' 为 -+ 例为 $+ 例化疗总体有效!"#"!

4 + 西安交通大学学报医学版第卷率为,-+$') 位点基因型化疗有以 ')*)% 和 '$) 分别作为自效率为 '' 型,'))) 型 $-, 差异无变量定义 ''**$'' 为 ') 统计学意义 -$+*)% 位 ))*)%))%)$'))) 为化疗点基因型化疗有效率 ** 型 $,*)%)) 疗效为因变量无效有效行非条件 (1:1 %) 型, 差异无统计学意义 + 回归分析结果显示 '$) 基因分型与乳腺癌应 '$) 位点基因型化疗有效率为 '' 型用紫杉类药物化疗疗效有关 '))) 基因型化疗疗 $,'))) 型 $, 差异有统计学意义效优于 '' 基因型 $+-,++ ) 等位基因携带者化疗有效率 - 高于 ' 等位基因携带者 +$ 表表 - 基因型等位基因与 0 例期乳腺癌应用紫杉类药物化疗疗效的关系 ).'21!1.2/#:(!:#(.21.#2.:# #8(#/.. (/1!(%&'&#!(1!.2#2#1!$.1#!:1:.#? /#.:.!#/ 基因多态性例数化疗疗效, ' -, '). '' $+ '))) $$-$+ -$ + -++$+ ' + $+ ) - + +$ +$ *)% ** $ $ $+ *)%))%) $ $ $$$ + -$++$+ * - $+ )% + $+$+ + '$) '' $ -- '))) + -+$$$ + $+++- ' $ ++ $+ ) $ $+ + $. 例标本未获得基因分型结果例标本未获得基因分型结果例标本未获得基因分型结果 ' 完全缓解部分缓解病情稳定疾病进展. 讨论对于相同病理类型临床分期的乳腺癌患者按体表面积给予相同的标准化疗方案会出现不同的化疗疗效和预后基因组学研究显示不同个体的基因存在, 的差异因此推断乳腺癌患者对化疗反应的差异可能与个体基因差异有关位于号染色体 > 的 %&'& 基因编码的糖蛋白具有膜外泵功能既能减少药物流入量也可以主动排出细胞内的药物遗传学相关研究显示 %&'& 基因突变导致的糖蛋白活性改变是乳腺癌化疗反应呈个体差异的主要原因之一紫杉类药物作为复发转移性乳腺癌最有效的化疗药物之一糖蛋白参与其在体内的转运代谢 %& '& 基因多态性可能会影响其在癌细胞内的分布与浓度但是与此相关的诸多国内外研究结果尚不一致本研究将进一步探讨 %&'& 基因多态性对乳腺癌应用紫杉类药物化疗疗效的影响本研究结果显示 $ 例期乳腺癌患者 %& '& 基因待测位点 ')*)% 及 '$) 基因突变频率分别为,-, 和 $-, 与王健等研究结果相符本研究通过技术检测结果显示 ') 位点 '' 型 ') 型 )) 型分别占 +,$$+,-,*)% 位点 ** 型 *) 型 *% 型 )) 型及 %) 型分别占, $+,,+$, 及 +,'$) 位点 '' 型 ') 型 )) 型分别为,,, 这与欧美人群 ')*)% 及 '$) 基因型 $ 结构相比本研究上述基因待测位点突变型分布比例较多一些可能与地域种族差异有关本研究进一步分析了乳腺癌患者 %&'& 基因多态性与民族之间的关系结果显示 ')*)% 及 '$) 位点基因分型在回汉族病例组间差异无统计学意义董通等对宁夏地区回汉族癫痫患者 '$) 基因多态性进行比较也发现两组癫痫人群中 '$) 基因分!"#"!

5 期刘新兰张海霞赵岳阳等 %&'& 基因多态性对乳腺癌紫杉类药物化疗疗效的影响 + 布差异无统计学意义数据分析显示 '$) 基因多态性具有种族差异亚洲人与欧洲人群 ' 等位基因频率 +,, 在非洲人群 ' 等对 + 例局部晚期乳腺癌患者采用焦磷酸测序法检测 '$) 基因型分析其与接受蒽环联合紫杉醇化疗疗效的相关性发现 ))$ 化疗 + 反应率较高 35 等通过 #. 分析探讨 ') 基因多态性与恶性肿瘤化疗有效率的关系结果显示亚洲人群中 )) 基因型乳腺癌患者对化疗更敏感本研究采用技术观察 %&'& 基因多态性并与 $ 例期乳腺癌患者接受紫杉类药物化疗疗效的关系开展研究结果显示 '$) 位点 '))) 型患者化疗疗效明显优于 '' 型患者 ) 等位基因携带者化疗有效率高于 ' 等位基因携带者 $') 和 *)% 位点突变型患者和野生型相比也表现出获得更佳治疗效果的趋势 7 - 等通过 '< 技术探讨 %&'& 基因多态性与乳腺癌患者接受蒽环联合紫杉类药物化疗应答的关系认为 $)) 型患者更容易发生耐药现象而 ') 和 *)% 位点单核苷酸多态性在化疗疗效之间未表现出有统计意义上述报道与大多数文献结果不一致 %&'&') 和 '$) 位点单核苷酸多态性是由不改变氨基酸序列的同义突变形成最新的体外研究证实基因相关位点的同义突变可以通过改变糖蛋白结构进而诱导其活性改变 *) % 的 4 是外显子发生错义突变导致 %2.+- 置换为 #/)/ 这种突变与糖蛋白的表达水平具有相关性除乳腺癌外在关于急性淋巴细胞性白血病患者应用阿霉素长春新碱和依托泊苷化疗的研究中发现 ))$ 和 ')$ 基因型患者较 ''$ 型患者中枢神经系统复发危险性明显降低邱晓燕等探讨肾移植患者 %&'& 基因多态性对环孢素的药动学影响结果表明 *)% 基因多态性与环孢素药代动学相关携带或个突变等位基因的患者术后药物浓度均高于野生型患者本研究采用基于定量 ' 的高通量技术探讨 $ 例期乳腺癌患者 %&'& 基因多态性并分析其与接受紫杉类药物化疗疗效的关系研究结果显示 %&'& 基因 '$) 位点基因多态性与乳腺癌患者采用紫杉类药物化疗疗效密切相关 ') )) 基因型患者较 '' 基因型患者对紫杉类药物更敏感 ) 等位基因携带者化疗疗效明显优于 ' 基因携带者推测 ') 和 )) 基因型人群编码的糖蛋白水平较低导致乳腺癌细胞内药物的外排能力下降进而使化疗药物在体内发挥更好的治疗作用本研究还发现 ') 与 *)% 位点不同基因型化疗疗效差异虽无统计学意义但突变型有优于野生型的趋势需扩大样本量进一步研究综上所述 %&'& 作为编码药物转运蛋白的基因其重要功能位点 '$) 核苷酸多态性有望成为预测乳腺癌应用紫杉类药物化疗疗效的遗传标记物为乳腺癌个体化精确化治疗提供可行的理论依据参考文献 4'0 561'7'!$&!)*$ ## "+ +&(#*$$ -+/+& 07*0)*'1*0) 55*$'!(* $&/#"!)* "# "2# +##&((#--/& 王健唐金海赵建华等 &!)* 基因多态性与乳腺癌紫杉醇联合蒽环类药物化疗疗效的关系 & 中国肿瘤临床 + /-& $0**8/*7$9'*7/*!7$)*'/ (*)'$&("$( (!.#+##&0/!*$ /-& *$76:$8 *(85 &$" ( # +## 1" &1#* $/& 董通许贤瑞齐明山等 & 回汉族癫痫患者 ( 基因 ($ 多态性与癫痫耐药的相关性研究 & 中风与神经疾病杂志 +/$& 545 $*09*(&1($!)*/"## # "#"+##&7# /& (' 9(87 )9&( + /"# - /"#/&(.!"+/& -!'087&1 """.#"###/ ##/+""2# (+ ##&(#$/& '!*'75&.1/#/ ## "#!)*/&1#. -/$& 8'0 *$8%&!)*/.""#"-"/ #&- /&!)%' )6$ 4& "/ #/!6#"/ #&"$$-$/-& 邱晓燕焦正仲珑瑾等 &!)*(0($ 的基因多态性对中国汉族肾移植患者环孢素药动学的影响 & 中国临床药学杂志 +$/$& 编辑国荣!"#"!

福建农业学报材料与方法毒株主要仪器主要试剂引物设计的培养反应条件的建立荧光定量检测临床样本结果与分析

福建农业学报材料与方法毒株主要仪器主要试剂引物设计的培养反应条件的建立荧光定量检测临床样本结果与分析福建农业学报林甦朱春华陈珍刘斌琼施少华江斌蔡国漳林羽黄瑜甦男硕士助理研究员主要从事病毒学和动物传染病学研究福建农业学报材料与方法毒株主要仪器主要试剂引物设计的培养反应条件的建立荧光定量检测临床样本结果与分析林甦等鸡亚型白血病病毒荧光定量检测方法的建立福建农业学报讨论林甦等鸡亚型白血病病毒荧光定量检测方法的建立责任编辑

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