影响资料与方法临床资料收集收集年月至年月在汕头大学医学院附属肿瘤医院诊治的复发转移性乳腺癌患者共例收集的临床资料包括年龄月经状态肿瘤大小淋巴结转移情况肿瘤分期病理组织学类型转移部位和转移时间表达水平以及铂类化疗疗效评估治疗方法例复发转移性乳腺癌患者例晚期转移后

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素农
5 years ago
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1 转移性乳腺癌患者原发灶的表达及与化疗疗效预后的关系郑泓斌杜彩文汕头大学医学院附属肿瘤医院广东汕头摘要目的探讨 '' 的表达与转移性乳腺癌患者预后的关系及 '' 对含铂类方案化疗敏感性的影响方法收集转移性乳腺癌患者的临床病理资料和肿瘤组织蜡块免疫组化方法检测其术前 '' 的表达水平分析原发灶 '' 表达水平与转移性乳腺癌患者预后及含铂方案化疗疗效的关系结果转移性乳腺癌患者原发灶 '' 表达阳性率为 %'' 高表达患者较低表达患者内脏转移部位更广泛 '%() 表达水平高 '%'' 高表达者较低表达者含铂化疗敏感性差 '%'' 高表达的患者无疾病生存期 *+, 和总生存期 -, 较低表达者短但差异均无统计学意义结转移性乳腺癌患者原发灶 '' 蛋白高表达者较低表达者含铂化疗疗效差关键词乳腺肿瘤 '' 预后中图分类号 %. 文献标识码文章编号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晚期转移性乳腺癌常因化疗耐药而预后较差是致患者死亡的主要原因聚 *' 核糖聚合酶 '' 蛋白已被证实在 * 损伤修复细胞凋亡和维持基因组稳定过程中发挥重要作用可能是收稿日期修回日期基金项目国家自然科学基金项目通讯作者杜彩文!"#$%!& 参与肿瘤细胞对化疗药物耐药机制的主要基因表达产物之一本研究通过收集.. 年月至年月在汕头大学医学院附属肿瘤医院诊治的具有完整临床资料的转移性乳腺癌患者病例检测转移性乳腺癌原发灶中 '' 的表达情况探讨 '' 与转移性乳腺癌临床病理特征临床预后等方面的关系及 '' 对含铂类方案化疗敏感性的!"#!

2 影响资料与方法临床资料收集收集年月至年月在汕头大学医学院附属肿瘤医院诊治的复发转移性乳腺癌患者共例收集的临床资料包括年龄月经状态肿瘤大小淋巴结转移情况肿瘤分期病理组织学类型转移部位和转移时间表达水平以及铂类化疗疗效评估治疗方法例复发转移性乳腺癌患者例晚期转移后无法化疗予剔除余例患者均使用含铂方案进行姑息化疗其中大部分患者均已使用过紫杉类蒽环类抗代谢类等化疗药如!"# 吉西他滨卡培他滨长春瑞滨等一线二线化疗方案及内分泌治疗后复发进展本组患者均为三线及以上方案化疗其中例患者使用铂类单药化疗卡铂 $%&$ ' 或奈达铂 $%&$ ' 例患者使用卡铂 $%&$ 长春瑞波 $%&$ '' 方案化疗例患者使用卡铂 $%&$ 紫杉醇 $%&$ '' 方案化疗例患者使用卡铂 $%&$ 卡培他滨 (&$ '' 方案化疗随访方法随访从治疗第天开始计算末次随访时间至年月日或患者死亡时间局部或区域复发指临床或组织学显示同侧乳腺或区域淋巴结复发远处转移指临床及影像学检查显示有远处转移总生存时间 )*+, 指从初始治疗至死亡或末次随访的时间截止年月例复发转移性乳腺癌患者中位随访时间为 ( 个月个月其中例患者死亡所有患者的中位无疾病进展时间 -#+ 为个月中位总生存时间 *+ 为个月免疫组织化学染色肿瘤组织蜡块由汕头大学医学院附属肿瘤医院提供置于冰箱中冻存约. 随后在切片机上切片每张厚约 $ 采用 + 免疫组织化学方法进行染色单克隆抗体 " 为稀释生物素标记的山羊抗小鼠二抗及 -"/ 显色试剂购自福州迈新生物公司以 /+ 代替一抗做阴性对照具体方法常规脱蜡水化切片置于恒温箱烘烤 $01 二甲苯缸每缸分别浸泡 $01 梯度酒精脱水乙醇 $01 乙醇 $01 乙醇 $01 乙醇 $01 乙醇 $01 蒸馏水 $01 抗原热修复切片放入柠檬酸溶液 ( 后在微波炉里高火 $01 沸腾后再低火加热约 $01 自然冷却至室温内源性过氧化物酶的去除 * 处理 $01 蒸馏水水洗再用 /+ 洗 $01 次非特异性蛋白的封闭取出切片水分用滤纸吸干正常山羊血清滴在组织上放入湿盒置于室温 $01 一抗孵育甩去切片上的山羊血清用滤纸擦干组织周围残留血清滴加已稀释的 " 抗体稀释比放入湿盒中冰箱过夜二抗孵育将一抗倒掉用 /+ 洗 $01 次用滤纸吸去周围多余的液体加入即用型抗体 " 鼠兔通用后放入恒温烤箱中 $01 取出切片用 /+ 洗 $01 次 -"/ 显色取蒸馏水滴加 -"/ 按照 "/ 顺序各配置成 $ 显色现配现用显色 $01 光学显微镜下观察满意后用自来水冲洗终止显色苏木素染液复染 $01 盐酸酒精分化梯度酒精脱水乙醇乙醇乙醇乙醇乙醇各 $01 封片二甲苯透明 $01 中性树胶封片免疫组化判定标准 " 抗原阳性物为棕黄色颗粒 " 表达主要定位于胞核通过计数在胞核上内有阳性染色的细胞个数进行组织学分析 " 的表达结果判定标准光镜下首先按着色强度分为个等级无着色记为分淡黄色记为分黄色记为分棕黄色记为分然后每张切片中选取癌细胞较多的个高倍视野每个视野计数个细胞按阳性细胞百分比分级计为计为分计为分记为分计为分计为分最后将两者积分相乘乘积为表示阴性肿瘤细胞异型性明显胞浆胞膜及胞核均未见着色大于为阳性其中表示弱阳性肿瘤细胞异型性明显部分肿瘤细胞胞核可见浅黄或棕色颗粒沉着表示阳性肿瘤异型性核浆比高核深染核分裂易见为强阳性肿瘤细胞胞核可见深棕色颗粒沉着胞浆出现浅黄着色将阴性及弱阳性!"#!

3 定义为低表达阳性及强阳性定义为高表达数据处理采用软件进行统计学分析计数资料用卡方检验和精确检验患者生存分析采用!" #$% 分析法生存率组间差异采用 &' # 检验认为有统计学差异结果免疫组化结果例转移性乳腺癌患者中 () 蛋白表达 * 例阴性例阳性阳性率为 +, 其中 + 例 () 高表达 +, * 例 () 低表达 *,- () 表达水平与转移性乳腺癌患者临床特征之间的关系 () 高表达组的患者较低表达组的患者内脏转移部位更广泛. 且 /0/)1 表达水平高.+ 差异具有统计学意义而在组织类型分期淋巴结转移情况 ) 及 )) 的表达水平等方面差异无统计学意义 " () 的表达水平与转移性乳腺癌含铂化疗疗效关系剔除例晚期转移后无法化疗余例患均使用含铂方案进行姑息化疗 /) 和 ) 定义为铂类药物化疗敏感 2 和 2 定义为铂类药物化疗不敏 1 感 /)) 之和计算有效率 () 低表达组有效率为 *,1 例其中部分缓解 )+ 例, 完全缓解 /) 例,() 高表达者有效率为 *,+ 例均为 )() 高表达者较低表达者含铂化疗有效率低两者差异具有显统计学意义 34 " () 对转移性乳腺癌 25 的影响截止年月例复发转移性乳腺癌患者中位随访时间为 +* 个月 2 为 1 个月中位总生存 5 为 1 个月 () 高表达组中位 2 为个月其中年 + 年年 2 分别为 +, *,++,() 低表达组中位 2 为 * 个月其中年 + 年年 2 分别为 1,+1,, &' # 检验 () 表达水平对患者 2 的影响差异无统计学意义.* () 高表达组中位 5 为 1 个月其中年 + 年年 5 分别为 *, +, 1+, () 低表达组中位 1 1 ; ;1 1 6'7 # 78 9!'# 3$4: ;7'!" ; 9!'# 34;' 7 ;7'!" ; 9!'# 347'# ;7'!" ; 9!'# 34!""#$!# % &'& #! "#"!!"#!

4 59 为 *1 个月其中年 1 年 + 年 59 分别为 -1,'1,'+*,-' /%#!: 检验表达水平对患者 59 的影响差异无统计学意义 ;),*-( "#$ 1(/4% 1 讨在晚期转移性乳腺癌的治疗中化疗仍是目前主要的治疗手段然而癌细胞的耐药十分常见是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导致晚期乳腺癌治疗失败预后差的主要原因在单链断裂修复基因组稳定性维持细胞代谢调控细胞死亡和增殖调控等过程中起到非常重要的作用文献表明的表达与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关比如子宫内膜癌恶性黑色素瘤等并且的表达与肿瘤的分期及患 + 者的预后也有显的关系一项大型研究发现在乳腺癌中的表达高于正常组其基因表达的上调常发生在. 均阴性的乳腺癌中免疫组化结果也证 * 实了这点另有研究表明与肿瘤的恶性程度相关表达阳性患者较阴性患者对化疗更敏感认为可作为临床疗效和预后的一个指标本文研究显示高表达的患者 676( 表达水平更高 ;),))1 且内脏转移部位更广泛 ;),)+ 而在患者年龄月经状态家族史肿瘤组织类型分期淋巴结转移情况. 及或的表达水平无统计学相关性多部位内脏转移个部位患者比单部位内脏转移患者中高表达者的百分比明显增高在乳腺癌中表达的情况可能与肿瘤组织代谢旺盛产生大量活性氧一氧化氮氧自由基等过氧化物引起断裂从而激 - 活有关肿瘤细胞增殖快细胞内常存在较多断端也可能是激活的原因之 ) 一并且作为 " 细胞因 ( "6(8 连环蛋白 #!! +!"#!

5 &)/7.5+ *)?5?/4 4+ (6)(**5+: 59 (6)(**5+: &)/7.5+ *)?5?/4 4+ (6)(**5+: 59 (6)(**5+:!&':,+.* ':,+.*!"#$ %& ' (&()* 复合物的共活化因子参与了肿瘤的发生本文关于对转移性乳腺癌铂类化疗疗效相关性研究结果显示高表达患者的化疗敏感率为例而低表达组患者的化疗敏感率为例两者之间差异具有显统计学意义基因的缺失使细胞!" 对损伤因子易感可能参与肿瘤的发生体内体外的研究已初步提示抑制可以降低修复功能从而增强放疗和化疗对肿瘤的治疗效果另一项研究发现蛋白的表达可能是导致舌鳞癌对化疗敏感性下降的一个重要因素而下调的表达水平可以提高其对铂类为主化疗方案的敏感性相反国外一项研究结果显示的过表达对紫杉类 # 蒽环类化疗方案敏感其病理缓解率是阴性患者的倍提示是预测紫杉类 # 蒽环类新辅助化疗疗效的一个指标我们分析结的不一致是由于样本的差异病例数不同采用了不同的化疗方案标本 $ % 检测结果判定存在主观性以及不同种类的癌对损伤类药物反应不同且各研究划定的阳性界值不统一有关这就提示我们为了准确的预测状态对化疗疗效影响大样本多中心的前瞻性研究是必需的同时本研究所有患者中位!&' 为个月其中高表达组为个月低表达组为个月中位 ' 为个月其中高表达组为个月低表达组为个月高表达的患者无疾病生存期更短总生存期有下降的趋势但两组差异均不具有统计学意义 ()*+ 等进行的一项回顾性分析例乳腺癌患者," 表达与预后的关系 -(./ 分析结果显示的表达是影响无转移生存的预后因素目前耐药机制表达与乳腺癌预后更多体现于 0"1 的研究中研究发现具有 1 失活特征 1(** 的乳腺癌可从抑制剂中获益由于同源重组修复障碍不仅存在 0"1 中其他类型乳腺癌中也存在这就使得三阴性乳腺癌及非三阴性乳腺癌中均有从抑制剂中获益的可能综上所述转移性乳腺癌患者原发灶蛋白高表达者较低表达者其表达水平更高内脏转移部位更广泛且蛋白高表达者较低表达者含铂化疗疗效差参考文献 2%/ '+ 3(. /4.+5,,( )(*6+*(.+ / 1#1 5 7/7() 8 7+./)9(. :; '+(5 0'/)6 1 $.()/7.5+* + +/4564/.5 5..( 7.+64/*, / / 94./.5+( 8-(./4 4+,57* :; %/+ /9 25 3(. /4 (7+,5/.5+ + <=>&/ -- 6)( ,6 +(,(./*./*5* 5,/ )(/*. 7/7()8 /7() (..: ; 1/)5 '( 8%-(./ '(. /4 (*5/4 )(/*. 7/ 7()5/9+*( -$ 5 6/.5(.* )(7(5?59 (+/@?/. 7(,+.()/6 5. / 5.+. (?/75A,/8 ')9 7+4:; -5/*/B/ / C$B(/ 3(. /4.5.,+) /7.5? /6/)5/ 6+4:!)5+*( 6+4,()/*(: 555.+) 5 74.)( (+,(.)5/4 7/)75+,/ 7(44*8 1- /7() : ; C+A5+4 -*B *B/ 555.+)*!"#!

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材料方法

材料方法生物技术通报姜燕采用鼠抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记鼠抗人血红蛋白单克隆抗体及对照抗体羊抗鼠利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原在内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克隆一步法胶体金检测试卡用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白抗体方法检测效价免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡法检测效价的结果显示鼠抗人