医学研究杂志２０１８年５月第４７卷论第５期著８０８５其５年生存率常低于２０２３虽然随２蛋白免疫印迹ＷＢ法应用蛋白质印迹分析着诊断和治疗技术的不断的发展肺癌总体生存率仍检测ＨＩＧＦ１ＥＧＦＲ蛋白表达水平使

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卒姚
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1 非小细胞肺癌组织中 HIF-1α EGFR IGF-1 的表达及临床意义刘勇进俞列群叶帆摘要目的探讨非小细胞肺癌 (NSCLC) 组织中缺氧诱导因子 -1α(HIF-1α) 胰岛素样生长因子 (IGF-1) 表皮生长因子受体 (EGFR) 的表达水平及临床意义方法采用蛋白免疫印迹法检测 NSCLC 组织及癌旁非肿瘤组织中 HIF-1α EGFR IGF-1 的表达情况, 并与临床病理特征及预后做相关分析结果 NSCLC 组织中 HIF-1α IGF-1 EGFR 的蛋白表达均显著高于癌旁非肿瘤组织 (P<0.05) HIF-1α 与 IGF-1 表达在鳞癌和腺癌中的差异均无统计学意义 (P>0.05),EGFR 在鳞癌中的表达显著高于腺癌 (P<0.05) 低分化癌组织中 HIF-1α IGF-1 EGFR 的表达水平均显著高于中高分化癌组织 (P<0.05), Ⅰ Ⅱ 期肿瘤组织中 HIF-1α IGF-1 EGFR 的表达水平显著低于 Ⅲ Ⅳ 期肿瘤组织 (P<0.05), 且有淋巴结转移组织中的 HIF- 1α IGF-1 EGFR 表达水平显著高于无淋巴结转移组织 (P<0.05) HIF-1α 与 EGFR 表达水平呈显著正相关 (r 2 =0.301,P< 0.05), 且与 IGF-1 表达水平呈显著正相关 (r 2 =0.611,P<0.05) HIF-1α EGFR 及 IGF-1 的表达水平与患者预后无明显相关性 (P>0.05) 结论 HIF-1 EGFR IGF-1 在 NSCLC 组织中表达均显著增加,HIF-1 与 EGFR 及 EGF-1 均呈正相关, 且 HIF-1α IGF-1 EGFR 的表达水平与分化程度 TNM 分期淋巴结转移密切相关, 且 EGFR 与病理类型密切相关, 在 NSCLC 的发生发展过程中起重要作用关键词非小细胞肺癌缺氧诱导因子 -1α 表皮生长因子受体胰岛素样生长因子 -1 中图分类号 R734.2 文献标识码 A DOI /j.issn X ExpressionofHIF-1α,EGFR andigf-1innon-smalcellungcanceranditsclinicalsignificance. LiuYongjin,YuLiequn,Ye Fan.DepartmentofInternalMedicine,HangzhouHospitalinArmedPoliceCorpsofZhejiang,Zhejiang310051,China Abstract Objective Toinvestigatetheexpressionofhypoxia-induciblefactor-1α (HIF-1α),insulin-likegrowthfactor (IGF-1) andepidermalgrowthfactorreceptor(egfr) innon-smalcellungcancer(nsclc) andtheirclinicalsignificance. Methods TheexpressionofHIF-1α,EGFRandIGF-1inNSCLCtissuesandadjacentnon-tumortissuesweredetectedbywestern blot,andthecorelationwithclinicopathologicalfeaturesandprognosiswereanalyzed.results TheexpressionofHIF-1α,IGF-1and EGFRinNSCLCtissuesweresignificantlyhigherthanthatinnon-tumoroustissues.Therewerenosignificantdiferenceintheexpres sionofhif-1αandigf-1insquamouscelcarcinomaandadenocarcinoma(p>0.05).theexpressionofegfrinsquamouscelcar cinomawassignificantlyhigherthanthatinadenocarcinoma(p<0.05).theexpressionofhif-1α,igf-1andegfrinlowdiferen tiatedcarcinomaweresignificantlyhigherthanthoseinmediumandhighdiferentiatedcarcinomatissues,andtheexpressionofhif-1α, IGF-1andEGFRinstageⅠ andⅡ tumortissuesweresignificantlylowerthanthoseinstageⅢ andⅣ tumortissues(p<0.05).the expressionofhif-1α,igf-1andegfrwithlymphnodemetastasisweresignificantlyhigherthanthatwithoutlymphnodemetastasis intumortissues.therewasasignificantpositivecorelationbetweentheexpressionofhif-1αandegfr(r 2 =0.301,P<0.05),and theexpressionofhif-1αwaspositivelycorelatedwiththeexpressionofigf-1(r 2 =0.611,P<0.05).TheexpressionofHIF-1α, EGFRandIGF-1hadnosignificantcorelationwiththeprognosis(P>0.05).Conclusion HIF-1,EGFRandIGF-1weresignifi cantlyincreasedinnsclctissues,andhif-1waspositivelycorelatedwithegfr andegf-1,andtheexpressionofhif-1α, IGF-1andEGFRarecloselyrelatedtothedegreeofdiferentiation,TNM stagingandlymphnodemetastasis,andegfriscloselyrelat edtopathologicaltype.theyplayanimportantroleinthedevelopmentandprogressionofnsclc. Keywords Non-smalcellungcancer;HIF-1α;EGFR;IGF-1 基金项目 : 浙江省自然科学基金资助项目 (LY14H130018) 作者单位 : 杭州, 武警浙江省总队杭州医院内一科通讯作者 : 刘勇进, 电子信箱 :liuyongjin19821@sina.com 78 肺癌是世界上增长速度最快恶性病死率最高的癌症 [1] 肺癌有两种亚型, 非小细胞肺癌 (non- smalcellungcancer,nsclc) 和小细胞肺癌 (smal cellungcancer,sclc), 其中 NSCLC 最为常见, 占约

医学研究杂志２０１８年５月第４７卷论第５期著８０８５其５年生存率常低于２０２３虽然随２蛋白免疫印迹ＷＢ法应用蛋白质印迹分析着诊断和治疗技术的不断的发展肺癌总体生存率仍检测ＨＩＧＦ１ＥＧＦＲ蛋白表达水平使用然有待于提高因此探究ＮＳＣＬＣ发生发展的分子ＲＩＰＡ蛋白提取试剂

2 医学研究杂志２０１８年５月第４７卷论第５期著８０８５其５年生存率常低于２０２３虽然随２蛋白免疫印迹ＷＢ法应用蛋白质印迹分析着诊断和治疗技术的不断的发展肺癌总体生存率仍检测ＨＩＧＦ１ＥＧＦＲ蛋白表达水平使用然有待于提高因此探究ＮＳＣＬＣ发生发展的分子ＲＩＰＡ蛋白提取试剂Ｂｅｍｅ裂解组织细胞从细机制对提高肺癌预后具有十分重要的意义肿瘤组胞中提取蛋白质在４下１２０００离心１０ｍｎ后织存在特殊的肿瘤微环境具有组织缺氧肿瘤血管通过１０ＳＤＳＰＡＧＥ分离上清液将分离的蛋白质生成等特点在肿瘤的发生发展中起重要作用缺转移到硝酸纤维素膜美国Ｓｍａ公司上将膜在Ｆ１α 是介导细胞对缺氧微环氧诱导因子１α ＨＩＰＢＳ和５脱脂乳中封闭１ｈ并用针对ＨＩＦ１α 境进行适应转导调控因子在多种癌症中过表达参ＩＧＦ１ＥＧＦＲ的一抗美国ＣｅＳｎａｎｔｅｈｎ与肿瘤生长浸润和转移表皮生长因子受体ＥＧ公司将膜在４孵育过夜将膜用ＨＲＰ缀合的二ＦＲ是一种酪氨酸激酶受体其过表达与肿瘤细胞增抗美国ＣｅＳｎａｎｔｅｈｎ公司在室温下孵殖血管生成等密切相关４胰岛素样生长因子１ＩＧＦ１影响细胞增殖分化并抑制细胞凋亡其在肿瘤发生发展过程中具有重要作用５本研究旨在探讨ＮＳＣＬＣ组织中ＨＩＧＦ１ＥＧＦＲ的ｎ蛋白表达作为内参使用Ｑｕａｎ育１ｈ β ａＯｎｅ软件美国Ｌｆｅｔｅｈｎｅｓ公司评估相对蛋白表达水平３统计学方法实验中所有数据均利用ＳＰＳＳ２１０统计学软件进行数据统计处理统计数据均采表达水平及临床意义资料与方法用平均数 ±标准差ｘ±ｓ表示行检验或Ｆ检验１一般资料选取笔者医院２０１４年１１１月于２计数资料均采用率进行描述行ｘ检验生存胸外科手术切除并经病理学确认为ＮＳＣＬＣ的组织曲线评估采用ＫａｐａｎＭｅｅｒ法组间比较采用Ｌｕｍ组与癌组Ｔｕｍ组及癌旁非肿瘤组织ｎｒａｎｋ法以Ｐ００５为差异有统计学意义织同源距肿瘤边缘２ｍ标本５３例其中男性３３例女性２０年患者年龄４０６０岁平均年龄５３±５结果１ＮＳＣＬＣ组织中ＨＩＧＦ１的蛋岁所有患者的临床资料均完整在术前均未进行放白表达情况ＮＳＣＬＣ肿瘤组织Ｔｕｍ组和癌旁非肿疗化疗及其他肿瘤相关治疗且经影像学检查确认ｕｍ组中ＨＩＧＦ１蛋瘤组织ｎ肿瘤无远处转移现象术后随访３０个月其中鳞癌白表达情况与ｎｕｍ组比较Ｔｕｍ组ＨＩＦ１α ２２例腺癌３１例高分化癌１７例中分化癌１１例低ＥＧＦＲＩＧＦ１蛋白表达水平均显著增加差异均有分化癌２５例 Ⅰ 期１１例 Ⅱ 期１４例 Ⅲ 期１５例 Ⅳ 统计学意义Ｐ００５详见图１期１３例有淋巴结转移３６例无淋巴结转移１７例图１ＮＳＣＬＣ肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织中ＨＩＧＦ１蛋白表达ＡＨＩＦ１α ＢＥＧＦＲＣＩＧＦ１２ＮＳＣＬＣ组织中ＨＩＧＦ１的表差异均无统计学意义Ｐ００５ＥＧＦＲ在鳞癌中的ＧＦ１ＥＧＦＲ表达达与临床特征的关系ＨＩ表达显著高于腺癌差异有统计学意义Ｐ００５与性别年龄肿瘤直径等特征无明显相关性Ｐ低分化癌组织中ＨＩＧＦ１ＥＧＦＲ的表达均００５ＨＩＦ１α与ＩＧＦ１表达在鳞癌和腺癌中的显著高于中高分化癌组织Ｐ００５ Ⅰ Ⅱ 期７９

3 NSCLC 中 HIF-1α IGF-1 EGFR 的表达水平显著低于 Ⅲ Ⅳ 期肿瘤组织 (P<0.05), 且有淋巴结转移组织中的 HIF-1α IGF-1 EGFR 表达水平显著高于无淋巴结转移组织, 差异均有统计学意义 (P< 0 05) 提示 HIF-1α IGF-1 EGFR 的表达水平与分化程度 TNM 分期淋巴结转移密切相关, 且 EGFR 与病理类型密切相关, 详见表 1 表 1 HIF-1α EGFR IGF-1 的表达与临床特征的关系 (x±s) 临床特征 n HIF-1α t/f P EGFR t/f P IGF-1 t/f P 性别男性 ± ± ± 女性 ± ± ± 年龄 ( 岁 ) ± ± ± > ± ± ± 肿瘤直径 ± ± ± (cm) > ± ± ± 病理类型鳞癌 ± ± ± 腺癌 ± ± ± 高分化 ± ± ±0.28 分化程度中分化 ± ± ± 低分化 ± ± ±0.17 Ⅰ 期 ± ± ±0.20 TNM 分期 Ⅱ 期 ± ± ± Ⅲ 期 ± ± ± Ⅳ 期 ± ± ±0.19 淋巴结转移无 ± ± ± 有 ± ± ± NSCLC 中 HIF-1α 与 EGFR 和 IGF-1 表达的相关性 :HIF-1α 与 EGFR 表达水平呈显著正相关 (r 2 =0.301,P<0.05, 图 2A), 且与 IGF-1 表达水平呈显著正相关 (r 2 =0.611,P<0 05, 图 2B) 图 2 NSCLC 中 HIF-1α 与 EGFR 和 IGF-1 表达的相关性分析 A.EGFR;B.IGF-1 4.NSCLC 中 HIF-1α 的表达与预后的关系 : 以 HIF-1α 蛋白表达水平的平均值作为标准进行分组, 平均值则记为较高水平表达,< 平均值则记为较低水平表达在 53 例 NSCLC 组织标本中,31 例标本显示较高水平表达, 记为高表达组 ;22 例标本显示较低水平表达, 记为低表达组, 分析检测指标表达水平高低对患者生存的影响单因素生存分析的 Kaplan- Meier 生存曲线显示,12 例 (38.71%) 高表达患者死亡,5 例 (22.73%) 低表达患者死亡, 两组患者总体生存率比较差异无统计学意义 (P>0.05, 图 3) 80 图 3 HIF-1α 高表达组和低表达组 NSCLC 患者的生存曲线

4 医学研究杂志 2018 年 5 月第 47 卷第 5 期论著 5.NSCLC 中 EGFR 的表达与预后的关系 :EGFR 高表达组患者 32 例, 其中 13 例 (40.63%) 患者死亡 ; 低表达组患者 21 例, 其中 4 例 (19.05%) 患者死亡, 单因素生存分析的 Kaplan-Meier 生存曲线显示, 两组患者总体生存率比较, 差异无统计学意义 (P> 0 05, 图 4) 图 4 EGFR 高表达组和低表达组 NSCLC 患者的生存曲线 6.NSCLC 中的 IGF-1 表达与预后的关系 : IGF-1 高表达组患者 30 例, 其中 11 例 (36.67%) 患者死亡 ; 低表达组患者 23 例, 其中 6 例 (26.09%) 患者死亡, 单因素生存分析的 Kaplan-Meier 生存曲线显示, 两组患者总体生存率比较差异无统计学意义 (P>0.05, 图 5) 图 5 IGF-1 高表达组和低表达组 NSCLC 患者的生存曲线讨论组织缺氧是发育生物学正常生理学和许多病理状况如肺部疾病和实体瘤等中的重要现象肿瘤组织缺氧可导致更具侵袭性和转移性表型, 与化疗放疗敏感度差及预后差密切相关 [6] HIF-1α 是细胞缺氧适应性的关键调节因子, 在肿瘤组织缺氧导致的细胞遗传不稳定性及恶性选择过程中起关键作用多种恶性肿瘤如宫颈癌肺癌头颈癌胃癌等中均发现 HIF-1α 表达, 且其高表达与预后不良相关既往研究表明,HIF-1α 在前列腺癌组织中高表达, 参与前列腺增生的癌变过程, 与 Gleason 分级淋巴结转移肿瘤分化程度等有关 [7,8] 在胃癌组织中, HIF-1α 的高表达可作为胃癌转移和预后的生物标志物, 与胃癌的发生发展过程密切相关 [9] 本研究发现,HIF-1α 在 NSCLC 组织中的表达显著高于癌旁非肿瘤组织, 且 Ⅰ Ⅱ 期患者肿瘤组织中的表达水平显著高于 Ⅲ Ⅳ 期, 在淋巴结转移患者中的表达水平显著高于无淋巴结转移患者, 提示 HIF-1α 与 NSCLC 的早期癌变有关, 且与肿瘤组织转移相关 HIF-1α 在正常氧条件下与多种生长因子和细胞因子的诱导有关, 包括 EGFR IGF-1 等, 且多种信号转导途径也参与其调节过程, 包括 ERK PI 3 K/ AKT 信号通路 [10] 研究发现,EGFR IGF-1 可诱导 HIF-1α 蛋白表达, 并促进其下游靶基因的表达, 从而调控 HIF-1α 相关生理过程 EGFR 属于酪氨酸激酶受体家族中的一种, 在调节细胞增殖和分化细胞因子信号和应激反应肿瘤细胞增殖和迁移血管生成等中起关键作用 [11] 已有研究证实,EGFR 过表达与多种恶性肿瘤有关, 如头颈部鳞状细胞癌乳腺癌卵巢癌等本研究中发现, 鳞癌组织中 EGFR 的表达显著高于腺癌组织过往研究已证实,EGFR 的表达水平可作为评价肿瘤恶性程度和淋巴结转移的重要生物标志物在本研究中发现,Ⅲ 期和 Ⅳ 期患者 EGFR 的表达水平均显著高于 Ⅰ 期和 Ⅱ 期患者, 且出现淋巴结转移时, 患者 EGFR 表达水平显著增加, 与过往研究一致 [12] 另外, 本研究发现, 低分化癌患者肿瘤组织 EGFR 表达水平显著高于高中分化癌患者这些结果表明,EGFR 的过表达促进 NSCLC 的发生发展, 且与晚期淋巴结转移密切相关有研究发现表明 EGFR 过表达不仅与疾病进展有关, 且与患者预后有关然而, 本研究中发现,EGFR 高表达与低表达患者生存率比较差异无统计学意义, 即 EGFR 表达水平与患者预后无明显相关性, 可能与本研究中样本量较少有关表皮生长因子与其受体 EGFR 结合后, 激活 PI 3 K/AKT 及 MAPK 这两个信号通路, 从而增加 HIF-1α 表达以增强细胞缺氧适应性在卵巢癌中, EGFR 与其受体配体结合可通过调控 PI 3 K/AKT 信号转导途径上调 HIF-1α 的表达, 参与卵巢癌细胞中 EGF 诱导的细胞侵袭 [13] [14] 高杰等通过对子宫内膜癌 HIF-1α 和 EGFR 表达水平进行相关性分析发现, 二者呈正相关与这些研究结果一致, 本研究发 81

5 现, 在 NSCLC 组织中 EGFR 与 HIF-1α 表达水平呈显著正相关提示 EGFR 通过某些相关信号通路, 增加 HIF-1α 的表达水平, 并与 HIF-1α 在肿瘤组织中起协同作用, 共同促进肿瘤的恶性转化 IGF 家族是由 IGF-1 IGF-2 组成的低分子多肽, 通过调节细胞增殖分化及凋亡过程, 在肿瘤发生过程中发挥重要作用, 其中 IGF-1 发挥主要介导作用当细胞膜表达 IGF-1 过表达时, 其与 IGF-1 受体结合, 通过受体磷酸化启动 PI 3 K/AKT 和 MAPK 这两条信号通路发挥促进细胞恶性转化的作用 [15,16] 研究表明,IGF-1 及其受体的异常表达在多种癌症 [17] 的发生发展中起重要作用 Li 等通过研究结肠癌患者组织中 IGF-1 发现,IGF-1 能诱导淋巴结转移在子宫内膜癌中,IGF-1 及其受体的表达水平随恶性肿瘤程度的加重而逐渐增加, 且与子宫内膜癌的临床病理特征密切相关 [18] 另外,IGF-1/IGF- 1R 的异常表达与胃癌的病理特征如淋巴结转移临床分期远处转移等密切相关, 且其高表达与患者预后差有关 Kaaks 等发现,IGF-1 表达水平与乳腺癌的分化程度淋巴结转移临床分期等有关, 可能作为乳腺癌诊断及预后判断的生物学标志物本研究中发现, 在 NSCLC 组织中,IGF-1 表达水平显著增加, 且与 TNM 分期淋巴结转移肿瘤分化程度等临床特征密切相关同样, 由于本研究中样本量较少,IGF- 1 表达水平与患者预后无显著相关性研究发现,IGF-1 通过诱导 MAPK 和 PI 3 K 信号转导途径, 上调 HIF-1α 表达水平, 从而介导结肠癌细胞中血管内皮生长因子 VEGF 的表达水平另外研究发现,IGF-1 与 HIF-1α 在浸润性乳腺癌的发生发展过程中起协同作用在本研究对 IGF-1 和 HIF-1α 表达水平进行相关性分析发现, 二者的表达呈显著正相关, 与过往研究一致, 提示 IGF-1 和 HIF-1α 密切相关, 在 NSCLC 的发生发展过程中共同起作用综上所述,HIF-1α EGFR IGF-1 等蛋白在 NSCLC 组织中的表达均显著增加, 与 TNM 分期淋巴结转移及肿瘤分化程度等临床病理特征密切相关, 且 HIF-1α 与 EGFR 及 EGF-1 均呈正相关, 在 NSCLC 的发生发展过程中起重要作用, 对进一步完善 NSCLC 的发病机制治疗依据有重要意义然而由于本研究中样本量较少,HIF-1α EGFR IGF-1 表达情况与 NSCLC 患者预后的相关性研究还有待扩大样本量进行补充,HIF-1α EGFR IGF-1 三者之 82 间的相互作用机制还有待于深入探究参考文献 1 ParkinDM,PisaniP,FerlayJ.Eratum:globalcancerstatistics[J]. CaACancerJClin,2015,61(2): GoldstrawP,BalD,JetJR,etal.Non-smal-cellungcancer [J].Lancet,2011,378: PakkalaS,RamalingamSS.Combinedinhibitionofvascularendothe lialgrowth factorand epidermalgrowth factorsignalingin non- smal-cellungcancertherapy.[j].clinlungcancer,2009,1 (1): 周瑞芳, 卢仁泉.EGFR 基因突变检测的临床应用 [J]. 现代检验医学杂志,2013,28(3): 金贞爱, 赵以坤, 金正勇, 等. 胰岛素样生长因子 -1 对高氧诱导的 A549 细胞凋亡的影响 [J]. 中国当代儿科杂志,2013,15(6): LeQT,DenkoNC,GiacciaAJ.Hypoxicgeneexpressionandmetas tasis.[j].cancermetastrev,2004,23(3): 田跃军, 刘伟, 景锁世, 等. 缺氧诱导因子 -1α 蛋白表达与前列腺癌风险相关性的 Meta 分析 [J]. 循证医学,2016,16(5): 李伟, 张华东, 李自强, 等.VEGF HIF-1α 在不同前列腺病变组织中的表达及临床意义 [J]. 解放军医药杂志,2012,24(5): 刘彦琦, 于红刚. 缺氧诱导因子 -1α 和血管内皮生长因子在胃癌组织中的表达及其与肿瘤细胞增殖的关系 [J]. 中华实验外科杂志,2015,32(9): SoniS,PadwadYS.HIF-1incancertherapy:twodecadelongstory ofatranscriptionfactor[j].actaoncol,2017,56(4): YangXQ,ChenC,PengCW,etal.Quantum dot-basedquantita tiveimmunofluorescencedetectionandspectrum analysisofepidermal growthfactorreceptorin breastcancertissue arays[j]. IntJ Nanomed,2011,6(default): 胡雅兵.EGFR VEGF 在 NSCLC 中的表达意义及与微血管密度之间的关系 [J]. 四川医学,2011,32(7): ClausenJ.Hypoxia-induciblefactor1 alphamediatesepidermal growthfactor-induceddown-regulationofe-cadherinexpresion andcelinvasioninhumanovariancancercels[j].cancerlet, 2013,329(2): 高杰, 艾桂娟, 韩萍, 等. 缺氧诱导因子 -1α 表皮生长因子受体的表达与子宫内膜癌的相关性研究 [J]. 中国妇幼保健,2016, 31(13): 赵晨辉, 王春利, 郭石平, 等. 胰岛素样生长因子 -1 受体与 NSCLC 的研究进展 [J]. 中华临床医师杂志 : 电子版,2014(5): CardonagomezGP,ChowenJA,GarciaseguraLM.Estradiolandpro gesteroneregulatetheexpressionofinsulin-likegrowthfactor-ire ceptorandinsulin-likegrowthfactorbindingprotein-2inthehypo thalamusofadultfemalerats.[j].jneurobiol,2015,43(3): LiZJ,YingXJ,ChenHL,etal.Insulin-likegrowthfactor-1in duceslymphangiogenesisandfacilitateslymphaticmetastasisincolor ectalcancer.[j]. World JGastroenterolWJG,2013,19(43): 黄炉仁, 曹楚楚, 吴波, 等. 胰岛素样生长因子 -1 及其受体在子宫内膜癌中的研究进展 [J]. 现代妇产科进展,2016,25(6): ( 收稿日期 : ) ( 修回日期 : )

第期王兴涛等猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析病料毒株及细胞试剂引物设计提取及基因克隆及测序

第期王兴涛等猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析病料毒株及细胞试剂引物设计提取及基因克隆及测序河南农业科学王兴涛罗俊滕蔓樊剑鸣鄂巍禹斌刘力张改平利用技术对河南省某规模化猪场乙脑疑似病例的种猪精液进行分析从部分样本中扩增出与流行性乙型脑炎病毒基因和基因具有高度同源性的预期产物在日龄乳鼠脑内接种种猪