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忱嗣家
5 years ago
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1 4 论著环氧酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白及人类表皮生长因子受体与胃癌预后的相关性杜静陈有为李鹏张骏 -- 杭州浙江省人民医院消化内科通信作者张骏 0! '=;0 -? '! # $ 8-2-,#0 %% 摘要目的分析环氧酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 ) * 及人类表皮生长因子受体 + *, ' 与胃癌患者预后的相关性为胃癌临床诊断和治疗提供实验依据方法应用免疫组织化学染色方法对浙江省人民医院 --. 年月至 -- 年月期间诊治的.- 例胃癌患者手术样本进行分析比较胃癌组织与癌旁正常胃组织中 ) * 及 + *, ' 蛋白的表达差异应用 / 0 0 秩相关分析 10!0 法 0 检验以及多因素风险比例回归模型描述和推断 ) * 及 + *, ' 蛋白与胃癌病理分期及预后的相关关系结果. 份胃癌癌体组织样本中 ) *+ *, ' 蛋白的阳性表达率分别为 2 3 份 34 份和.3 份明显高于配对癌旁正常胃组织 5. 和均 6- - 和 + *, ' 蛋白表达水平和胃癌分期之间均呈正相关和 + *, ' 蛋白阳性表达患者的总体生存情况和无复发生存情况明显劣于阴性表达患者均 6- - 蛋白的表达水平是胃癌总体生存时间的独立预测因素风险比结论 ) * 和 + *, ' 蛋白均参与了胃癌的发生或发展和 + *, ' 蛋白与胃癌的病理分期和总体生存时间相关蛋白表达可作为胃癌预后的独立预测因子关键词胃肿癌预后环氧酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白人类表皮生长因子受体!!! " # "$%! & '!% $ "! " ' %(" ") $" ' ' $" ") )")!!" # $ % &%' ' %'! '!! $ %!) * % & +!& '% +%, -.//.0 %!&! 1 %'! $ % % (, % /-.!'!! *!2 *+"),-./ ) : % 0 ; #!0 " # #! 0% 00! 0 0 " 0 0 # ) * 0 ;'0 0! ; "0# # + *, ' ; % % " 0% # #0 # 0 : 0! 0% % " 0% # #0 # 0 #! #0! 0 % % '& ); 0% # #0 # 0 %%' %0! % 0 0#; 0 0# 0! %%' %0! %. 0% # #0 # 0 #0% % 0" %' "! --.! - - 0!! %! # " ; 0 < : # 0! <! % + % 0! ); "" # % %% 0 % " ) * 0 + *, ' # 0 ); #!0 " ) * 0 + *, ' ; ; #! #0! %0 0 % % " 0% # #0 # 0 0% %# 0 0%% %% / #!0 00! % % 10!0 ;! 0 % 0 0! ;0=0 %! 1 ); %% 0 % " ) * 0 + *, '.- 0% # #0 # 0 %%' %0! % 2 3 %0! % 3 4 %0! % 和.3 %0! % ; #; 0!! ; ; ;0 0 0# 0! %%' %0! % !! *, ' %% % % :! #!0 ; ' %0 % " 0% # #0 # ); : 0!! %' : :0! 0 0!0 % " %' : :0! 0 " ; 0 % ; 0 + *, ' % : %% " 0 : % 0!! 6- - >' ; %% 0% 0 % # "0# " 0! %' : :0! " 0% # #0 # ) * 0 + *, ' 0 # 0 ; #0 # % % " 0% # #0 # *, ' 0 ; %% : 0 % " 0% # #0 # 0 ; 0% 0 % #

2 国际流行病学传染病学杂志年月第卷第期! " # $ %& '! " # " % % " % # # # 8 #! %% % % )<#! =< %! " <# 1'! > " # # 近年来我国胃癌的发病率和死亡率呈明显上升趋势位居我国恶性肿瘤死因顺位第位研究与胃癌临床进展预后相关的分子标记物有助于提高胃癌的诊断和治疗水平环氧酶 )*+ 为前列腺素合成的限速酶可通过促进细胞增殖和侵袭能力抑制细胞凋亡促进新血管形成等多种机制参与肿瘤的发生和发展哺乳动物雷帕霉素靶蛋白,*- 是一种丝. 苏氨酸蛋白激酶其介导的信号通路在肿瘤形成和发展中扮演重要角色并参与肿瘤的侵袭和转移人类表皮生长因子 /0- 受体 1 -. ' 是 /0- 家族成员之一主要通过 - %.- ". 以及. 两条信号通路参与调控细胞的增殖和凋 2( 亡与肿瘤的生长转移浸润密切相关本文拟对 )*+,*- 以及 1 -. ' 蛋白在胃癌中的表达水平以及与胃癌患者病理分期及其预后的相关关系进行研究旨在为胃癌的临床诊疗提供新的参考对象与方法一研究对象选取浙江省人民医院 3 年月至年月期间 3 例胃腺癌包括管状腺癌黏液腺癌印戒细胞癌患者的癌体组织进行分析 3 例胃癌患者中男性例女性例年龄 456 岁平均年龄 2 岁按照国际抗癌联盟 7)) 公布的第 4 版, 分期标准对患者进行, 分期期例期例期例期 4 例所有患者在手术治疗前均未进行新辅助化疗或其他抗癌治疗除期患者外 5 期患者术后均接受 8*+ 方案化疗所有术后样本均经过病理组织切片明确诊断以癌旁的正常胃组织离癌灶 # 作为正常对照本研究对 3 例胃癌患者进行术后随访随访时间为手术当日至 2 年月日所有样本提供者均签署知情同意书二试剂与仪器浓缩型兔抗人 )*+,*- 及 1 -. ' 多克隆抗体均购自美国 8 ) '9 公司二抗购自武汉博士德生物工程有限公司免疫组织化学试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司 :8 双氧水多聚赖氨酸及 $ : 显色剂和二甲苯均购自南京建成生物工程研究所切片机为德国 ; 9 公司产品显微镜为日本奥林巴斯公司产品隔水式电热恒温箱购自 : 公司免疫组化孵育盒购自福州迈新生物技术开发有限公司三免疫组织化学染色免疫组织化学染色采用 :) 法进行清洁载玻片多聚赖氨酸浸泡载玻片 % 载玻片烘干备用福尔马林浸泡样本过夜石蜡包埋冷冻切片机内快速连续切片切片厚度烤片脱蜡封闭和抗原修复加一抗于 4 恒温箱中孵育 2 加增强剂处理后 :8 冲洗加二抗孵育 :8 冲洗后加 $ : 显色剂显色 52 并复染脱水后封片免疫组化分析软件进行图像处理染色分析四组织阳性程度的判定采用双盲法由位病理科医师对免疫组化结果进行独立判断光镜下随机选取 2 个高倍视野进行观察以细胞膜或细胞浆内出现棕黄色颗粒判断为阳性表达首先判断阳性表达细胞面积百分率计算方法为 2 记为分 2 52 记为分 2 52 记为分记为分 42 记为分随后对细胞染色强度进行计分无着色的记为分淡棕黄色记为分深棕黄色记为分趋于淡棕黄和深棕黄色之间记为分组织阳性强度计算公式阳性强度阳性表达细胞面积百分率数值染色强度数值阳性强度判断方法为弱阳性为 5 分记为中等阳性为 253 分记为强阳性为 65 分记为

3 五统计学分析实验数据采用统计软件进行分析癌旁的正常胃组织和胃癌组织之间蛋白表达差异采用配对样本 )!# * 秩检验各病理期间的蛋白表达差异采用 + '%,-!)-!! %. 检验蛋白表达阳性强度和胃癌病理分期级别之间的相关性采用 - - 秩相关分析各组总体生存时间生存曲线采用 +-!-/ 法描绘不同生存时间分布曲线间的差异采用 0 1 -, 检验 * 风险比例回归模型用以判断胃癌总体生存时间的影响因素为差异有统计学意义结果一 2 3 和. 34 ' 蛋白在配对胃癌组织中的表达情况免疫组化结果显示 5 份胃癌癌体组织样本中 ' 蛋白的阳性表达率分别为 6 7 份 7( 份和 57 份其中和 2 3 蛋白均表达于细胞浆. 34 ' 蛋白主要表达于细胞膜部分表达于细胞浆 2 3 和. 34 ' 蛋白在胃癌中的表达水平明显高于配对癌旁正常胃组织 8 5 和均见图免疫组化结果显示随着胃癌的进展在癌细胞胞浆内的着色量增加. 34 ' 在癌细胞胞膜上的染色加深并且胞膜染色连续性增加其中期患者和. 34 ' 蛋白的表达强度明显高于期患者 8 6 和均 - - 秩相关分析显示和. 34 ' 蛋白表达水平和胃癌病理分期等级之间均呈正相关以上结果说明 2 3 和. 34 ' 蛋白均参与了胃癌的发生或发展其中和. 34 ' 蛋白可能与胃癌预后相关二 ' 蛋白表达和胃癌预后的相关性分析 5 例胃癌术后患者中最长随访时间为 6 个月平均个月在随访过程中 ( 例 5 7 存活例 67 死亡例 6 7 复发 +-!-/ 方法和 0 1 -, 检验结果显示和. 34 ' 蛋白阴性患者的总体生存和无复发生存均优于阳性患者而 2 3 蛋白是否表达对患者总体生存无复发生存无明显影响见图多因素 * 回归模型分析显示蛋白的表达是影响胃癌生存时间的重要因素见表以上结果说明和. 34 ' 蛋白表达与胃癌总体生存无复发生存相关其中蛋白表达可作为胃癌预后的独立预测因子注环氧酶 2 3 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白. 34 ' 人类表皮生长因子受体 9 癌旁正常组织的蛋白表达 : 癌旁正常组织的. 34 ' 蛋白表达癌旁正常组织的 2 3 蛋白表达 $ 胃癌组织的蛋白表达胃癌组织的. 34 ' 蛋白表达 ; 胃癌组织的 2 3 蛋白表达图. 34 ' 和 2 3 蛋白在癌旁正常胃组织和胃癌组织中的表达 $9: 染色

4 国际流行病学传染病学杂志年月第卷第期! " # $ %& '! 注环氧酶 ) * 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 + *, ' 人类表皮生长因子受体图 ) *+ *, ' 蛋白表达对胃癌患者生存时间的影响表单因素回归模型分析 ) * 和 + *, ' 蛋白表达对胃癌预后的影响总体生存无复发生存变量风险比 / 值风险比 / 值表达 / //2 // 4 / ) * 表达 / 2 / / 2 / / + *, ' 表达 / / 23 4 / 注环氧酶 ) * 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 + *, ' 人类表皮生长因子受体表多因素回归模型分析 ) * 和 + *, ' 蛋白表达对胃癌预后的影响变量风险比 / 值表达 3/2 3 4 / ) * 表达 3 /2 / + *, ' 表达 / /2 / 注环氧酶 ) * 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 + *, ' 人类表皮生长因子受体讨论研究表明 ) * 以及 + *, ' 是细胞内重要的信号转导通路蛋白参与了多种恶性肿 -. 瘤的产生和发展过程本研究在对 ) * 及 + *, ' 与胃癌患者病理分期及预后的相关关系研究中发现 ) * 和 + *, ' 蛋白均参与了胃癌的发生或发展其中和 + *, ' 蛋白表达与胃癌的病理分期和总体生存明显相关蛋白表达可作为评估胃癌预后的独立预测因子此研究结果为进一步开展以为基础的胃癌靶向诊断治疗以及治疗后随访观察提供了有价值的实验依据在细胞因子或炎性因子的刺激下蛋白在胃黏膜中表达上调通过促进细胞增殖和新血管增生以及抑制细胞凋亡和机体免疫应答而参与胃癌的 -/. 发生和发展本研究发现术后胃癌组织中蛋白表达水平不但明显上调而且随着病理分期的进展其阳性着色亦逐步加深表现为的表达水平与胃癌病理分期呈正相关并且高表达的胃癌人群的生存时间明显缩短它是一个可预测胃癌 -. 预后的独立指标然而 01 #10! 等开展的一项针对高加索人群的队列研究指出基因尚不能成为评估胃癌预后的预测因子另外 1 -. 等的一项荟萃分析研究发现仅 /0 和

5 )*+,- 和胃癌预后明显相关因此我们认为种族和基因多态性可能影响是否能成为胃癌预后的预测指标其在胃癌发展和预后中的作用及其机制仍值得我们进一步研究. / 通过感知腺苷三磷酸和氨基酸浓度在调控正常组织细胞的生长增殖代谢和自稳方面起 01 重要作用根据功能不同. / 可定位在细胞浆和细胞膜本研究发现较之正常胃组织胃癌组织中. / 表达水平明显升高但和胃癌的病理分期和预后无相关性更不是评估胃癌预后的预测因 0) 子 % 等研究报道. / 的活化形式. / 蛋白和食管鳞状细胞癌预后高度相关是 02 一个独立的预测因子而 % 等研究报道. / 表达水平和食管鳞状细胞癌预后无关与本实验结果一致另外一些子宫颈癌肝癌和胆管癌的研究报道提示. / 蛋白表达是这些肿瘤不良 0 预后的指标与之相反卵巢癌肺癌的研究报道 0 则提示其是这些肿瘤预后良好的指标因此我们认为. / 蛋白的不同形式在不同器官的恶性肿瘤发病及预后中有不同的作用对于. / 在胃癌中的作用尚需进一步探讨 /3 ' 蛋白表达与胃癌预后的关系一直存在争议有研究表明 /3 ' 基因扩增与患者的生存率相关并且还可能作为肿瘤标志物用以临床筛查本研究发现 /3 ' 蛋白在胃癌组织中表达水平明显上调且 /3 ' 阳性表达者的总体生存时间比阴性者明显下降 /3 ' 蛋白和胃癌预后存在相关性但尚不能判定 /3 ' 蛋白可成为预测胃癌预后的因素参考文献 0 刘文婷曹邦伟胃癌的分子靶向治疗药物进展 0 中国医院用药评价与分析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收稿日期 2 22

第卷 3 $ 家族是由以及这四个成员组成该家族蛋白可以参与肿瘤细胞增殖浸润以及血管生成研究显示家族蛋白与多种肿瘤的临床病例特征及预后相关如胃癌乳腺癌及非小细胞肺癌等国内外目前关于家族蛋白在结直肠癌中的报道还相对较少而且绝大多数是关于单个家族成员的研究如等关于家

第卷 3 $ 家族是由以及这四个成员组成该家族蛋白可以参与肿瘤细胞增殖浸润以及血管生成研究显示家族蛋白与多种肿瘤的临床病例特征及预后相关如胃癌乳腺癌及非小细胞肺癌等国内外目前关于家族蛋白在结直肠癌中的报道还相对较少而且绝大多数是关于单个家族成员的研究如等关于家第卷第期年月!"#!# $%# 临床医学 $ 家族蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义刘传渊钟武夏来阳王建肖荷芳余路虎江西省赣州市人民医院南昌大学附属赣州医院胃肠疝外科病理科检验科江西赣州摘要目的通过检测表皮生长因子受体家族蛋白在结直肠癌组织中的表达水平探讨家族蛋白在结直肠癌发生发展中的作用及其临床意义方法采用免疫组化及荧光定量方法检测例手术切除的结直肠癌组织及正常肠黏膜组织中

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