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2 1 F ( ) 5

3 : 1 abstract keywords keywords 5 2 3, 4 2

4 , 5 * 1 - SCI,EI,ISTP,ISR 2 / / SCI EI ISTP ISR SCI EI 1. 6 ;

5 (500 ) mM 1 5mM / 4 L-arg/NO NOS NO 5 10 M 1mM L- 6 L- NO - ( 5 ): - Abstract(limited to 500 words) This study investigated the cardiac polyamine(putrescine,spermide and spermine) metabolism rule, its role and mechanism in myocardial ischemia/reperfusion injury on the rat cardiac ischemia/reperfusion injury models(in vivo,ex vivo, in isolated vetricular myocytes and primary culture neonate rat myocytes) using various means, such as high performance chromatograph of liquid, patch clamp recording, Laser Confocal Scanning Microscope,molecular biology, flow cytometry and electron microscope. We first found: 1 High concentration of spermine induced "calcium burst" in isolated rat cardiac myocytes(10 mm),apoptosis(1-5 mm) or necrosis(10mm) in primary cultures of neonatal rat cardiomyocytes, which mechanism related with calcium overload, increased production of free radical, disorder of energy metabolism, release of inflammatory mediators; 2 acute cardiac iscemia can cause polyamine stress in heart; 3 the myocardial ischemia/reperfusion can cause significant disbalance of polyamine metabolism, which characteristic includes increased expression and up-regulated activity of both ornithine decarboxylase (ODC) and Spermidine/spermine N1-acetyltransferase (SSAT), accumulated putrescine, decreased spermide,spermine and metabolic pool of polyamine; 4 the decrease of spermine during reperfusion is related with up-regulated L-arg/NO pathway( increased NOS and NO), which maybe is a mechanism for I/R injury; 5 low dose of exogenous spermine (10 M - 1mM) markedly lighten cardiac I/R injury through inhibiting L-type calcium channel, decreasing intracellular calcium overload, antioxygenation, attenuating oxygen free radical injury and suppressing apoptosis; (6)disbalance of polyamine is related with myocardial hypertrophy, and L-arginine can prevent cardiac hypertrophy by affecting the key enzymes of polyamines and NO pathways. These data demonstrate our hypothesis of "polyamione is a double edged sword",and provide a target for prevation and treatment of cardiac I/R injury. Keywords(limited to 5 keywords,seperated by;): polyamine; myocardium; ischemia/reperfusion injury; rat; apoptosis; 4

6 1 (1) / ( / )mrna / (2) / SCI SCI 7 16 SCI Langendorff, L-arg/NO / 1 Langendorff / HPLC / ODC SSAT NO NOS NOS SNP NO L-NAME L-arg/NO / L- L-arg / PAs L-arg/NO LDH ROS [Ca 2+ ] i / 5

7 2 40min (ODC) / (SSAT) (40 min, 2 h, 4 h), LDH ROS ODC SSAT, NOS NO NOS NO (NO ) ODC SSAT L-NAM (NOS ) ODC (1 mm) LDH ROS NOS NO Fas caspase-9 mrna 1mmol/L 6

8 7

9 8

10 min / RT-PCR Western blotting ODC / SSAT mrna / ODC SSAT / 2 / : Wistar Sham / I/R NB Sp n=10 / Sp 0.5mM 2ml/kg SOD LDH NO MDA : I/R 90 LVSP dp/dt max NO MDA LDH SOD P < 0.05 P <0.01, Sham Sp I/R NS P < 0.05 P <0.01 : / 9

11 ( X S, n =10) Group Arrhythmia VT VF VEBs AVB Time incidence % % % % % s Sham I/R NB Sp 20 ** ** ( X S, n =10) Group End of stabilization Ischemia 30min Reperfusion 60min LVSP(mmHg) Sham I/R NB Sp * * LV +dp/dt max (mmhg/s) Sham I/R NB Sp * * LV -dp/dt max (mmhg/s) Sham I/R NB Sp * * SOD(U/ml) SOD LDH NO MDA ( X S, n =10) Group End of stabilization Ischemia 30min Reperfusion 60min Sham I/R NB Sp * * LDH(kU/L) Sham I/R NB Sp * * MDA( mol/l) Sham I/R NB Sp * * NO( mol/l) Sham I/R NB Sp * ** 10

12 / TNUNEL MTT Western blot caspase-3,-9 Bcl-2 cytochrome c / caspase-3,-9 Bcl-2 cytochrome c 10 mol/l 10 mol/l / 11

13 Western blot caspase-3,-9 Bcl-2 cytochrome c (A) caspase-3, -9 Bcl-2 cytochrome c. (B E) 12

14 4. - L

15 14

16 5. 1 Sp VP SOD ATP DEX 100 mol/l Sp LDH VP SOD ATP DEX Sp LDH 15

17 MTT A490nm) Normal SP SP+VP SP+SOD SP+ATP SP+DEX MTT (mean SD n=6) mm 10mM 3 10mM 10 M SOD 6. ISO HW/BW LVW/BW ANP mrn inos L- ISO NO ODC inos SSAT enos 16

18 NO L- 17

19 18

20 NSFC-RFBR C SCI 7 16 SCI / L-arg/ L-arg/NO CaSR / CaSR / / Wang Rui ( )

21 ( ) 1 (1) Lakehead Rui WANG Rosenshtraukh LV Rui WANG 3 1 / ( ) NSFC-RFBR (2) /

22 L-Arg/NO / /

23 / ( ) 1 CaSR CaSR CaSR CaSR CaSR CaSR 2 3 2

24 1 Li-na Wang, Chao Wang, Yan Lin, Yu-hui Xi, Wei-hua Zhang, Ya-jun Zhao, Hong-zhu Li,Ye Tian,Yan-jie Lv,Bao-feng Yang,Chang-qing Xu.Involvement of calcium-sensing receptor in cardiac hypertrophy-induced by angiotensinii through calcineurin pathway in cultured neonatal rat cardiomyocytes. Biochemical and Biophysical Research Communications 22-FEB-2008(in press) (SCI IF 2.855) 2. Yan Lin, Li-na Wang, Yu-hui Xi, Hong-zhu Li, Feng-gang Xiao,Ya-jun Zhao, Ye Tian, Bao-feng Yang, Chang-qing Xu. L-Arginine Inhibits Isoproterenol-Induced Cardiac Hypertrophy through Nitric Oxide and Polyamine Pathways. Basic & Clinical Pharmacology & Toxicology 2008(accept) (SCI IF 1.788) 3. Han L, Xu C, Guo Y, Li H, Jiang C, Zhao Y. Polyamine metabolism in rat myocardial ischemia-reperfusion injury. Int J Cardiol Dec 10 [Epub ahead of print] (SCI IF 2.234) 4. Wei-hua Zhang, Fang-hao Lu, Ya-jun Zhao, Li-na Wang, Ye Tian,Zhen-wei Pan, Yan-jie Lv, Yan-li Wang, Li-juan Du, Zhi-rui Sun,Bao-feng Yang, Rui Wang Chang-qing Xu. Post-conditioning protects rat cardiomyocytes via PKC-mediated calciumsensing receptors. Biochemiacal and Biophysical Research Communications 2007, 361: (SCI IF 2.855) 5. Liping Han, Changqing Xu Chunming Jiang, Hongzhu Li, Weihua Zhang,Yajun Zhao, Li Zhang, Yanqiao Zhang, Weiming Zhao, Baofeng Yan. Effects of polyamines on apoptosis induced by simulated ischemia/reperfusion injury in cultured neonatal rat cardiomyocytes. Cell Biology International 31 (2007) (SCI IF 1.363) 6 Ya-Jun Zhao, Chang-Qing Xu, Wei-Hua Zhang, Li Zhang, Shu-Ling Bian, Qi Huang, Hong-Li Sun, Quan-Feng Li, Yan-qiao Zhang, Yie Tian,Rui Wang, Bao-Feng Yang, Wei-Min Li.Role of polyamines in myocardial ischemia/reperfusion injury and their interactions with nitric oxide. European Journal of Pharmacology 562 (2007) (SCI IF 2.477) 7. Weihua Zhang, Songbin Fu, Fanghao Lu, Bo Wu, Dongmei Gong,Zhenwei Pan, Yanjie Lv, Yajun Zhao, Quanfeng Li, Rui Wang,Baofeng Yang,Changqing Xu. Involvement of calcium sensing receptor in ischemia/ reperfusion induced apoptosis in rat cardiomyocytes. Biochemiacal and Biophysical Research Communications 2006, 347: (SCI IF 3.0) 8.,,,,,,,, , 23(7): /. 2007, 23 (5) : ,,,,,. /. 2007, 23 (6) : L / 23

25 , 23 (12) ,42(2): ,,,,,, / ,,,,,,,,Rui Wang ,,, , 40 ( 2): , 2005,21(2) : Rui Wang , 21(10): ,,,,,Wang Rui ODC SSAT. 2005; 21 (5) : NiCl Changqing XU, Weihua ZHANG, Chunming JIANG, Yihua SUN, Rui WANG INVOLVEMENT OF CALCIUM SENSING RECEPTOR IN MYOCARDIAL ISCHEMIA/ REPERFUSION INJURY AND APOPTOSIS. JOURNAL OF MOLECULAR AND CELLULAR CARDIOLOGY (supplement 1): S80-S81) (SCI IF 4.954) 2 Li Ping Han, Chun Ming Jiang, Hong Zhu Li, Chang Qing XU. Effect of spermine on myocardial ischemia/reperfusion injury rats. Cell Biology International 2006; 30 (8): 40 (SCI IF 1.194) 3. Chun Ming Jiang, Li Ping Han, Hong Zhu Li, Chang Qing XU. expression_ of calcium sensing receptor during ischemia/reperfusion myocardial damage and relation of CaSR 24

26 with injury of myocardium. Cell Biology International 2006; 30 (8): 40 (SCI IF 1.194) 4,, 27( ): 14 5 / ( ): 97 6 C ( ): 51 7, PI3K/Akt ( ): 43 8, ( ): 52 9 Changqing XU, Yajun ZHAO, Weihua ZHANG, Yihua SUN, Yanqiao Zhang, Li Zhang, Quanfeng Li, Hong Li, Sa Shi Hongxia Li, RuiWang, Baofeng Yang. Role and possible mechanism of calcium sensing receptor and polyamine in myocardial ischemia/reperfusion injury and apoptosis Weihua zhang, Bo Wu, Changqing Xu, Fanghao Lu, Yajun Zhao, Quanfeng Li, Li Zhang. Activation of MAPK by Ca-SR Inducing Cardiac Injury and Cell Death Following Hypoxia/Reoxygenation in Vitro Ya-jun ZHAO, Chang-qing XU, Qi HUANG, Rui WANG. Apoptosis induced by ischemia/reperfusion in rat heart is associated with disturbance of polyamine metabolism Li Hong, Xu Changqing, Sun Yihua, Shi Sa, Zhao Yajun, Zhang Li. Effects and mechanism of dopamine and receptor on the apoptosis of cardiac myocytes Weihua Zhang, Bo Wu, Dongmei Gong Yajun Zhao, Quanfeng Li, Li Zhang, Baofeng Yang Changqing Xu. Involvement of Calcium Sensing Receptor in Ischemia/ Reperfusion Induced Rat Cardiomyocyte Apoptosis Yihua Sun, Changqin Xu, Hong Li, Sa Shi, Weihua Zhang, Yajun Zhao,Rui WANG. Calcium-sensing receptor contribute to ischemia-reperfusion injury and myocyte apoptosis Li Hong, Xu Changqing, Sun Yihua, Shi Sa, Zhao Yajun, Zhang Li. Effects of dopamine receptor (DR1, DR2) on rat pathological cardiac hypertrophy Hongxia Li, Yajun Zhao, Liping Han, Li Zhang, Xiuxiang Gao, Changqing Xu. Study on the Mechanism of Neonatal Rat Cardiomyocyte Injury Induced by Exogenous Spermine. 25

27 1 (XIX World Congress of the International Society for Heart Research ISHR) Bologna June 2007 INVOLVEMENT OF CALCIUM SENSING RECEPTOR IN MYOCARDIAL ISCHEMIA/ REPERFUSION INJURY AND APOPTOSIS 2 ( ) 3 ( ) / 4 ( ) C 26

28 , Role and possible mechanism of calcium sensing receptor and polyamine in myocardial ischemia/ reperfusion injury and apoptosis , Activation of MAPK by Ca-SR Inducing Cardiac Injury and Cell Death Following Hypoxia/Reoxygenation in Vitro , Effects and mechanism of dopamine and receptor on the apoptosis of cardiac myocytes 27

29 8. (2006, )

30 1 1 Involvement of calcium-sensing receptor in myocardial hypertrophy-induced by 1 angiotensinii through calcineurin pathway in cultured neonatal rat cardiomyocytes L-Arginine Inhibits Isoproterenol-Induced Cardiac Hypertrophy through Nitric Oxide and Polyamine Pathways. Polyamine metabolism in rat myocardial ischemia-reperfusion injury. Role of polyamines in myocardial ischemia/reperfusion injury and their interactions with nitric oxide. Post-conditioning protects rat cardiomyocytes via PKC-mediated calcium-sensing receptors Effects of polyamines on apoptosis induced by simulated Li-na Wang, Chang-Qing Xu, et al Yan Lin, Chang-qing Xu, et al Han L, Xu C, et al Biochemiacal and Biophysical Research Communications 2008, 361: (SCI IF 2.855) Basic & Clinical Pharmacology & Toxicology 2008(accept) (SCI IF 1.788) Int J Cardiol Dec 10 [Epub ahead of print] (SCI IF 2.234) European Journal of Pharmacology 562 Ya-Jun Zhao, Chang-Qing (2007) Xu et al (SCI IF 2.477) Wei-hua Zhang,Chang-qing Xu et al. Liping Han, Changqing Xu et al. Biochemiacal and Biophysical Research Communications 2007, 361: (SCI IF 2.855) Cell Biology International 31 (2007) SCI SCI SCI SCI SCI 29

31 ischemia/reperfusion injury in cultured neonatal rat cardiomyocytes Involvement of calcium sensing receptor in ischemia/ reperfusion induced apoptosis in rat cardiomyocytes.. Wei-hua Zhang,Chang-qing Xu et al. (SCI 1.194) SCI Biochemiacal and Biophysical Research Communications 2006, 347: (SCI IF 3.0) / 2007, 23 (5) : / 2007, 23 (6) : , 2007, 23 (7) : SCI L / ,42(2):

32 , 2006, 40 ( 2): ODC SSAT 2005; 21 (5) : ,21(2) : NiCl INVOLVEMENT OF CALCIUM SENSING 1 RECEPTOR IN MYOCARDIAL ISCHEMIA/ REPERFUSION INJURY AND APOPTOSIS 2 Effect of spermine on myocardial ischemia/reperfusion injury rats JOURNAL OF MOLECULAR AND CELLULAR Chang-qing Xu CARDIOLOGY (supplement 1): Wei-hua Zhang,et al. s80-81) (SCI IF 4.954) Li-Ping Han, Chang-Qing XU et al Cell Biology International 2006; 30 (8): 40 (SCI IF 1.194) SCI 31

33 Expression of calcium sensing receptor during ischemia/ reperfusion myocardial damage and relation of CaSR with injury of myocardium. Chun-Ming Jiang, Chang-Qing XU et al Cell Biology International 2006; 30 (8): 40 (SCI IF 1.194), 2007,27( ): 14 /, 2007,27( ): 97 C, 2007,27( ): 51, PI3K/Akt, Role and possible mechanism of calcium sensing receptor and polyamine in myocardial ischemia/reperfusion injury and apoptosis. Activation of MAPK by Ca-SR Inducing Cardiac Injury and Cell Death Following Hypoxia/Reoxygenation in Vitro. Apoptosis induced by ischemia/ reperfusion in rat heart is Chang-qing Xu Ya-jun Zhao,Wei-hua Zhang, et al Weihua zhang, Bo Wu, Changqing Xu,et al Ya-jun ZHAO, Chang-qing XU, et al 2007,27( ): ,27( ): , 22(13):

34 associated with disturbance of polyamine metabolism Effects and mechanism of dopamine and receptor on the apoptosis of cardiac myocytes. Involvement of Calcium Sensing Receptor in Ischemia/ Reperfusion Induced Rat Cardiomyocyte Apoptosis. Involvement of Calcium Sensing Receptor in Ischemia/ Reperfusion Induced Rat Cardiomyocyte Apoptosis. Effects of dopamine receptor (DR1, DR2) on rat pathological cardiac hypertrophy Li Hong, Xu Changqing, Sun Yihua, et al Weihua zhang, Bo Wu, Changqing Xu et al Yihua Sun, Changqin Xu, Hong Li, et al Li Hong, Xu Changqing, Sun Yihua, et al , (13): 2384 INVOLVEMENT OF CALCIUM SENSING RECEPTOR IN MYOCARDIAL ISCHEMIA/ REPERFUSION INJURY AND APOPTOSIS Chang-qing Xu Wei-hua Zhang,et al. ( ) XIX World Congress of the ISHR (International Society for Heart Research) Bologna (Italy), June 2007 ( ) ( , ) / ( ) ( , ) C ( ) ( , ) 33

35 Role and possible mechanism of calcium sensing receptor and polyamine in myocardial ischemia/ ( ) , reperfusion injury and apoptosis Activation of MAPK by Ca-SR Inducing Cardiac Injury and Cell Death Following Hypoxia/Reoxygenation in ( ) , Vitro Effects and mechanism of dopamine and receptor on the apoptosis of cardiac myocytes , - ( ) ( , ) - ( ) Involvement of Calcium Sensing Receptor in Ischemia/ Reperfusion Induced Rat Cardiomyocyte Apoptosis. Weihua zhang, Bo Wu, Changqing Xu et al 1 (NSFC-RFBR) C / / / / /

36 2 ( ) / SCI EI ISTP ISR / / /

37

38 / / / / / / / / kit U : 1

39 a) b) c) /

TGF-β AngⅡ B SD ~ 220g SPF. SCXK No SYXK ~ 25 40% ~ 70% OR37G-C

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