中国渔业质量与标准 年 实验管理 材料与方法 用高锰酸钾消毒处理 1 B 方形塑料水族箱 自 来水洗净后加入 B 水 曝气 测得 4& 溶 实验材料中草药预混料 水产用新能量 由饶平东泽生物科技有限公司提供 主要为仙草 菊花 夏枯草 甘草 金银花 黄芪 板蓝根 银杏叶 穿心莲散剂与菠萝叶的提取物等

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1 年 月第 卷 第 期 中国渔业质量与标准!" # $"# # % & '!,-.&+)+ /0&&+1 &&& 中草药预混料对罗非鱼生长性能和免疫抗病力的影响 巩华 刘春花 赵长臣 孙承文 黄志斌 陆文雄 龚钜财 & 中国水产科学研究院珠江水产研究所 广东广州 1& 饶平东泽生物科技有限公司 广东潮州 11 摘要 为探究复方中草药预混料在罗非鱼养殖上的生物学功效和经济效益 分别按 &1 和 1& (/@( 的剂量添加配成实验饲料 在实验室内饲喂实验鱼 周 然后观察中草药预混料对罗非鱼 (!!& 的生长 代谢及抗病力的影响 按 &1 (/@( 投喂量在室外 ) 水泥池中进行两次 # 的养殖实验 每 天检查鱼体重 存活率等 并作成本效益分析 结果显示 与对照组相比 投喂中草药预混料的罗非鱼生长性能差异极显著 & 血液指标中 血清尿素氮 肌酐略有升高 谷草转氨酶 血清总蛋白 谷氨酰胺合成酶基本保持原有水平 谷丙转氨酶下降 各组罗非鱼血液指标变化差异均不显著 F&1 显示该组方的安全性较高 药物有效率实验显示 使用 &1 (/@( 中草药预混料对罗非鱼无乳链球菌 +!! 感染有极显著 & 的治疗作用 室外养殖全过程使用剂量为 &1 (/@( 两次实验的存活率分别提高 &)7 和 )&17 增产 &7 和 7) 实验塘产量比对照塘增产 用药费用减少 元 效益比率为 I 结果表明 本实验使用的中草药预混料能够有效促进罗非鱼生长 对代谢机能无明显影响 并能够有效地提高免疫保护率 产生良好生产效益 中国渔业质量与标准 + 关键词 罗非鱼 中草药 生长 免疫调节 成本 效益分析中图分类号 $+ 文献标志码 * 文章编号 +1 罗非鱼 (!!& 属鲈形目 隆头鱼亚目 鲡鱼科 罗非鱼属 主要在广东 海南 广西和福建等地养殖 近年来病害日益突出 尤其是 + 年暴发链球菌病 严重影响产业发展 目前主要采用磺胺类药物防治该病 虽磺胺类为国标药物 但易产生耐药 使用剂量越来越大 引起药物残留 增加了产品质量安全风险 因此 替代抗生素药物研究具有重要意义 中草药具有成本低 副作用小 使用安全 应用范围广的特点 含多种多糖 甙类 生物碱 有机酸 挥发油以及微量元素等 无抗药性 无药物残留 无环境污染 不引发药源性疾病 且抑菌杀菌效果明显 华南地区开始使用中草药防治罗非鱼链球菌病 张意敏等发现在饲料中添加鱼腥草为主要成分的复方中草药制剂后 尼罗罗非鱼 (!!!, 的白细胞吞噬百分比 吞噬指数和血细胞呼吸爆发活力 血清溶菌酶活力 超氧化物歧化酶活力 一氧化氮含量显著提高 血清丙二醛含量显著降低 增强 1 了鱼体非特异性免疫力 8 等利用血清溶菌 酶 超氧化物歧化酶 过氧化物酶等免疫指标 以及头肾 脾脏的细胞因子 和.B 6* 表达等作为指标 揭示了中草药影响尼罗罗非鱼对嗜水气单胞菌抵抗力的原理 中草药可作为饲料添加剂促 ) 进生长 提高抗病力 黄文庆等研究表明在基础饲料中添加黄芪 金银花 苦参 紫花地丁等 多种中草药可以有效提高罗非幼鱼的增重率 特定生长率 蛋白质含量 降低饵料系数和粗脂肪含量 张倩 倩等研究发现 以玉屏风散为中草药饲料添加剂能够有效促进罗非鱼生长 对其非特异性免疫指标以及免疫相关基因表达均有不同程度的促进作用 并能 够有效地提高草鱼的免疫保护率 汤菊芬等研究表明复方中草药具有降低罗非鱼死亡率 促进生长和提高免疫力等作用 本实验研究了罗非鱼饲料中添加中草药预混料 水产用新能量 评估罗非鱼的血液指标 生长性能和抗病等 核算使用成本 以期为中草药在罗非鱼养殖中应用提供理论依据 收稿日期 ) + + 接收日期 ) 资助项目 国家科技支撑计划课题 5*,15 广东省应用型科技研发专项资金项目 )5 作者简介 巩华 + 男 助理研究员 硕士 研究方向为鱼类病害免疫防控 (( )& 通信作者 黄志斌 研究员 研究方向为鱼类病害免疫防控 >=+)&

2 中国渔业质量与标准 年 实验管理 材料与方法 用高锰酸钾消毒处理 1 B 方形塑料水族箱 自 来水洗净后加入 B 水 曝气 测得 4& 溶 实验材料中草药预混料 水产用新能量 由饶平东泽生物科技有限公司提供 主要为仙草 菊花 夏枯草 甘草 金银花 黄芪 板蓝根 银杏叶 穿心莲散剂与菠萝叶的提取物等 健康罗非鱼 + A ( 购自广东省佛山市三水某养殖场 实验用无乳链球菌 +!! 取自中国水产科学研究院珠江水产研究所水产动物病害 解氧 &+ (/B 实验期间控制水温 每天吸污换水 次 投喂饲料 日投喂总量为体重的 7 驯养 投喂日常饲料 周后 选择规格整齐 健壮活跃 无病伤的实验鱼 随机分为 组 分别为对照组 低量组 &1 (/@( 高量组 1& (/@( 每组设 个平行 每个平行 尾 空白组投喂日常颗粒饲料 实验组按剂量在日常颗粒饲料基础上添加中草药 连续投喂 # 与免疫研究室 表 日常饲料组成 &!#$"!% % 7 日粮组成 " 含量 "( 营养成分 ""!" 含量 "( 花生麸 1 粗蛋白 &) 次粉 粗脂肪 &11 面粉 总糖类 & 豆粕 粗灰分 &) 菜籽粕 1 水分 &1 沸石粉微量元素预混鱼油氯化胆碱磷酸二氢钙 &1 &1 & & 合计 合计 血液指标检测实验正式开始前 # 和开始后 # 从各实验组随机取 1 尾罗非鱼 尾动脉取血 置于 1 B 无菌离心管中 过夜 / 离心 后 保存上清 采用试剂盒检测血清总蛋白 ""! " $ 尿素氮 =!# "( 5 和肌酐 " $ 含量 及谷氨酰胺合成酶 (!""" :$ 谷丙转氨酶 (!"" : 和谷草转氨酶 (!"?!"" :- 活力 上述检测试剂盒均购自南京建成生物技术研究所 严格按照其说明书进行操作 + 生长性能评价实验以 & 方法设置实验组 实验开始随机抽取 尾鱼测量初体重 实验结束后称量每组实验鱼 测定末体重 并计算生长性能 净增重 " (" -. 末体重! ("/. 初体重 "! (". 增重率 ("( 特定生长率 (" "$:6!/.!. / 天数 7, 药物有效率实验实验开始前 对实验罗非鱼肌肉注射无乳链球菌进行攻毒预实验 7 以上发生病症但不引起死亡的

3 第 期巩华 等 中草药预混料对罗非鱼生长性能和免疫抗病力的影响 1 浓度定为实验菌液浓度 使用该浓度的菌液肌肉注射实验组及阳性对照组罗非鱼 次 对照组注射等量的灭菌生理盐水 注射前后停止投喂 # 攻毒第 天起 实验组连续 # 投喂中草药预混料饵料 日投喂总量为体重的 7 对照组与阳性对照组投喂普通饵料 停药后观察 周 以体表特征 游泳活动恢复正常为标准 统计有效率 有效率 7 症状好转动物数 / 发病动物数 7 室外实验分别在 月 月进行 鱼塘规格 水深 A&1 设实验池和对照池各 个 各放 + A (/ 尾的罗非鱼 尾 饲养过程中 池水 4&1 A 水温 A 每池配备 增氧机 台 放鱼第 天随机称取 尾鱼 计算初始平均体重 以后每 天各组随机称取 尾罗非鱼 监测不同时期的鱼体质量 估算池塘鱼体总重 每日巡池 次 观察鱼体摄食 活动情况 将死亡鱼体及时捞出登记 统计存活率 将中草药预混料按 I 比例与常规饲料充分均匀混合 每天定点投喂 次 投喂量为每 天所估 算鱼体总重的 7 添加剂量为 &1 (/@( 对照池以常规饲料投喂 实验结束时统计鱼体总质量 测定饵料系数 6 生产结束后 按照参考文献 + 进行成本效益分析 数据处理实验数据以平均值 标准差 % $, 表示 用 -(& 软件进行方差分析 显著性及相关性检验 以 &1 为差异显著水平 以 & 为差异极显著水平 结果与分析 中草药预混料对罗非鱼血液指标的影响 如表 所示 饲喂正常日粮或含中草药预混料的日粮 # 后 虽然其中高剂量连续投喂 # : 下降幅度相对较大 但经统计分析各组罗非鱼血液指标变化差异均不显著 F&1 可见对肝脏等功能影响不大 显示该组方的安全性较高 表 中草药预混料对罗非鱼血液指标的影响!&$2 %%2"#"" 时间 /# 指标名称.#? 组别 : $/(B 对照组 & & & &11 &1 & 低量组 &+ & &1 & 1& & 高量组 & &) & & &1 & $/!B 对照组 )&+ & &1 &) &1 & 低量组 &) & & &++ &1 & 高量组 )& & 1&+1 &) & & 5/!B 对照组 &+ &+ & & & & 低量组 &) & &1 &) &1 & 高量组 & & &) & &1 & :$ /( 对照组 1&) &+ )& & 1& &) 低量组 1&+ & 1& & 1& & 高量组 1&1 &+ )& & 1& & :/B 对照组 & & & & & & 低量组 1&1 &1 +&1 &) 1& & 高量组 )&1 & &1 & +& &+ :-/B 对照组 +& &) &1 &1 +&1 & 低量组 +&1 & )&1 & +&1 & 高量组 & & & & & & 注 数据表示为平均值 标准差 同列数字上不标注表示无显著性差异 标表示与对照组差异显著 &1 标表示与对照组差异极显著 & 下同

4 ) 中国渔业质量与标准 年 生长性能评价整个实验期间 各组罗非鱼活力良好 未出现死亡 鱼体健康 反应灵敏 在摄食和游水等方面的活动无明显差别 实验开始时随机抽取 尾鱼测量初体重 实验结束后称量每组实验鱼测定末体重 计算生长性能指标如表 可见 实验结束时 与对照组相比 投喂中草药预混料实验组中罗非鱼体重增加 低量组的净增重为 & & ( 增重率为 1& & 7 特定生长率为 &) & 7 均分别与对照组的相应参数差异极显著 & 高量组的净增重为 & & ( 增重率为 +&1) & 7 特定生长率为 & & 7 均分别与对照组的相应 参数差异显著 &1 抗病性能评估对照组的实验鱼活动未见任何异常 鱼体健康 反应灵敏 对实验罗非鱼肌肉注射无乳链球菌进行攻毒预实验 7 以上发生病症但不引起死亡的浓度为 )&1 1 /B 感染链球菌的第 天 阳性对照组和实验组 &+7 以上的罗非鱼体色发黑 精神萎靡 游动缓慢 严重者眼球突出 眼睛白浊 出血 连续给药 # 后 各药物剂量组实验鱼活力明显增强 摄食行为增加 中草药预混料对治疗罗非鱼细菌感染的有效率如表 所示 使用 &1 (/@( 对罗非鱼无乳链球菌感染有极显著 & 的治疗作用 表 中草药预混料对罗非鱼生长性能的影响!&$2!&#*!&$#"" 组别 : 初体重./( 末体重 /./( 净增重 -./( 增重率. /7 特定生长率 $:6/7 高量组 1&+ )&+ & & & & +&1) & & & 低量组 +& & & &1 & & 1& & &) & 对照组 & & & & )& &1 )&1 &1 & &) 项目." 表 + 中草药预混料对罗非鱼细菌感染有效率的影响 +!&$2!&!! #"" 7 对照组 "! 阳性对照组 "( 低量组 B#( 高量组 4( #( 发病率 & +& & +& & &+ & 有效率 & & & &) )& )&+ 注 示无 + 室外实验结果 室外实验过程中 中草药预混料饲喂罗非鱼的效果见图 图 及表 1 实验表明 经 # 饲养 月份的养殖实验中实验组存活率为 +&7 对照池存活率为 1&7 提高 &)7 实验池罗非鱼每尾平均体重 ( 比对照池每尾平均体重 )1 ( 增重 &7 每 ) 实验池产鱼 对照池产鱼 增产鱼 增产 &7 月份的养殖实验中实验组存活率 &7 对照池 &7 提高 )&17 实验池的平均体重 ++ 克 / 尾 对照池 克 / 尾 快长 &)7 成鱼产量 每 ) 实验池实收 对照池 增产鱼 增产 7 实验组饵料系数为 & 对照池饵料系数为 &, 成本核算 室外实验表明 ) 水面使用中草药预混料的实验塘的产量要比对照组增加 而使用的药费减少 元 则每公顷可以节约用药费用 元 1 年罗非鱼价格较低 两次实验养成鱼的批 发价均为 )& 元 / 千克 但使用本预混料依然能获得 I 的效益 表 ) 每公顷可以增加净收入 & 元 此外由于少发病 池塘消毒少 一般在池塘中混养的花白鲢产量相对较高 也能增加部分收益 由于本实验在水泥池中进行 未混养花白鲢 因此在大池塘中使用本预混料 效益可能更高 图, ## 中草药预混料投喂罗非鱼室外养殖实验的死亡率 -#&!%$!!!: %#" "*!&!&%", ## &"&$2

5 第 期巩华 等 中草药预混料对罗非鱼生长性能和免疫抗病力的影响 图, ## 中草药预混料投喂罗非鱼室外养殖实验的日增重量 -#&!%*#&!#"!"%#""*!&!&%", ## &"&$2 表,, ## 中草药预混料投喂罗非鱼对饵料系数 -6 的影响,!&"&$2!, ##!&%!#""! 组别 : 项目." 投喂时间 /## " ) 实验池 饵料系数 & & & & & & 投饲料量 /@( ) ) 1 ) +1 鱼积累体重 /@( & )) ++ ) )) +1 对照池 饵料系数 &1 &1 & & & & 投饲料量 /@( ) 1 + 鱼积累体重 /@( ) 项目." 表 罗非鱼室外养殖全过程添加使用的成本效益分析!&$2!&"!!""#""! 因使用预混剂增加的鱼的收益使用后减少的药物成本使用中草药预混剂的总成本因不使用而多死亡的鱼消耗的饲料成本因使用增产而多增加的饲料的成本使用预混剂后增加的净收入成本 效益比 注 示计算结果以 ) 池塘核算表述 成本效益分析结果 6!""="! ) 元 元 ) 元 ) 元 )) 元 )1 元 I 讨论 中草药不但能提高鱼类的特异性及非特异免疫 功能 1 防治鱼病 而且还能促进动物的机体代 ) 谢和蛋白质以及酶的合成 促进动物的生长 提高营养物质的利用率 降低饵料系数 在广东 海 南等地被应用于实际生产中 因此研究适用 有效 安全的中草药免疫增强剂及其最佳投喂剂量和模式是目前最重要的内容 对生长代谢的影响血液蛋白含量与营养和代谢都有关系 实验结果表明血清总蛋白 $ 含量在实验期间无明显变化 表明机体蛋白代谢受影响较小 蛋白代谢主要在肝脏中进行 血清谷氨酰胺合成酶 :$ 谷丙转氨酶 : 谷草转氨酶 : 是以酶原的形式存在肝细胞中 是重要的蛋白代谢酶 常因肝细胞破裂或细胞膜变化而引起大量释放 使血液中酶浓度升高 因此也是肝脏功能重要血液指标 蛋白在鱼体内代谢成尿素氮 经肾脏排出体外 罗非鱼的药物

6 中国渔业质量与标准 年 主要经肝 肾代谢 而 5 和 $ 是考察肾脏排泄功能指标 广泛应用于临床 从本实验结果来看 与对照组相应参数相比 低量组净增重差异极显著 & 高量组净增重差异显著 &1 可见该预混料的促生长效果明显 $:$:: 5 和 $ 水平都无显著变化 可见对肝 肾等实质性器官的功能无影响 在投喂过程中 饲料系数一直处于正常水平 显示该中草药预混料具有很好的安全性 对免疫与生长的影响 鱼体免疫力影响饲料中营养物质转化 目前有两 1 种意见,(!" 等报道相比于未免疫鱼 接种 ) 疫苗的鱼生长快 饲料转化系数低 而 D@! 等 则认为免疫力强的鱼种比免疫力弱的鱼种生长速度慢 饲料转化系数高 因免疫力强的鱼需将更多营养物质转化为抗体 这些差异可能与实验水温 投喂剂量 实验鱼品种 大小以及品系等不同有关系 1 在一定范围内 饲喂高剂量的免疫增强剂 可短时间内提高机体免疫能力 而低剂量的免疫增强剂则需要长时间使机体免疫力有所提高 但若饲喂的免疫增强剂的剂量过高 可使机体产生免疫抑制现象 从而导致免疫力降低 在罗非鱼养殖添加中草药 有的有显著提高 也有不明显 这可能与复方中草药配方 和养殖环境不同有关 在本实验中 罗非鱼在水泥池中饵料系数低的添加组 死亡率也低 显然整体的免疫力与饵料转化成正比 可能中草药激发机体免疫力的方式与疫苗不同 需进一步探讨 在本预混料中的中草药为免疫增强剂 同时又有清热 补益类的中草药 能显著促进罗非鱼生长 提高罗非鱼成活率 对链球菌也有很好的防治作用 而且对肝肾等代谢器官机能未产生明显影响 综合比较投喂不同剂量的罗非鱼的成活率可知 该种中草药在 &1 A1& (/@( 的范围内都有效 在罗非鱼生产中使用该种中草药治疗无乳链球菌感染肝损伤时 建议推荐剂量为 &1 (/@( 长期保健可减半使用 即 &1 (/@( 生态经济效益评价 本实验表明 在罗非鱼养殖过程中 以 &1 (/@( 的剂量全程使用该种中草药 可以降低饵料系数 明显改善罗非鱼对营养成分的吸收率 减少排泄物对水环境的污染 发挥中草药生态调节功能 由于投喂的大量饲料转化成系统中的能量 还能提高水体中作为二级消费者的滤食性鱼类的产量 提高社会经济效益 达到增产增收的目的 此外 使用本品可以减 少抗生素的使用 降低药物残留 每公顷水面可减少用药 元 有积极的环保意义 本组方中使用了菠萝叶提取物 菠萝叶是果实收获后的废弃物 据 中华本草 记载菠萝叶有消食和胃 止泻舒缓的功能 其提取物含酚类 酰胺类 三萜类等化合物 具有较好的抗氧化 抗菌和驱虫活性 + 其中菠萝叶酚对家兔高血脂表现出降甘油三酯的作用 且有一定的量效关系 有治疗高脂血症作用 在本实验中菠萝叶提取物的添加 改善了组方效果 拓展了这类农业废弃物的使用渠道 参考文献 巩华 陈总会 & 海南罗非鱼养殖及疾病防控状况调查与建议 8& 广东饲料 11 1& 戈贤平 缪凌鸿 刘波 & 中草药增强水生动物免疫和抗病能力的研究进展 8& 中国渔业质量与标准 1 1) & BD B B! 84 "&% (" ""!#"# ="!(!!& # "!( 1! : (#( 8&*!")1+ ++& 张意敏 刘志刚 卢迈新 等 & 复方中草药对尼罗罗非鱼非特异性免疫功能的影响 8& 淡水渔业 11 ) & B "&."!"" "!#!"# " =!?< " (!!!("!!"! 8& $!.! + )& ) 黄文庆 黄燕华 李国立 等 & 复合中草药对罗非鱼生长性能 免疫指标和体组成的影响 8& 中国饲料 1+ & 张倩倩 刘天强 李彤彤 等 & 玉屏风散对鱼类非特异性免疫和免疫相关基因表达的影响 8& 水生生物学报 1+)) & 汤菊芬 吴灶和 简纪常 等 & 复方中草药对吉富罗非鱼生长及肠道菌群的影响 8& 广东海洋大学学报 ++)) +& + 米彦飞 李宁求 付小哲 等 & 草鱼疫苗接种成本 效益分析 8& 广东农业科学 )) +& ; : 8 8: 6> " &3"" = *"(!#? # $"! #? "! (!!! 8&*!")1 / / /+ & 尾崎久雄 & 鱼类血液循环生理 %& 上海 上海科学出版社 +&

7 第 期 巩华 等 中草药预混料对罗非鱼生长性能和免疫抗病力的影响 + 巩华 李华 于毅 等 & 恩诺沙星对鲤酯酶同工酶和血清生理生化指标的影响 8& 大连海洋大学学报 1 + & 戚仁铎 & 诊断学 %& 北京 人民卫生出版社 ++)& 罗理 王伟利 姜兰 等 & 常用剂量氟苯尼考在罗非鱼肝脏和肾脏中的消除规律及 8& 广东海洋大学学报 1& 1,(!"% D :0#5 J#(K# 8 "!&:"!"=" #" ## #" # "=#(" *"!"! +! 8&*!" ) 1 ) )& )D@!8 6@ 6 % "!&3" >" " "! # <!!B& 8&*!" / / / 1& 56 D63 ; "!&!! #!"! " #!#( # " > 8&8* * 4! + & 林文辉 黄志斌 林明辉 等 & 饲料 底泥 水质与水产病害防控关系研究 8& 广东饲料 1& + 黄筱娟 纪明慧 舒火明 等 & 菠萝叶乙醇提取物的抑菌活性及其稳定性研究 8& 食品工业科技 1 1 )) )+& 高翔 李天翥 潘五九 & 菠萝叶提取物对实验性高脂家兔模型的药效学研究 8& 中医药信息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