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岭寿
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1 生态学杂志 Chinese Journal of Ecology 2016,35(8): DOI: / j 不同氮源对中肋骨条藻 ( Skeletonema costatum) 生长的影响乔倩王朝晖郭鑫 ( 暨南大学生态学系, 水体富营养化与赤潮防治广东普通高校重点实验室, 广州 ) 摘要中肋骨条藻 (Skeletonema costatum) 是近岸海洋环境中常见的优势硅藻为了解氮污染对硅藻生长及海洋初级生产力的影响, 本文研究了中肋骨条藻对 NO 3 尿素以及 5 种氨基酸的利用能力, 并研究了中肋骨条藻在 NO 3 和尿素不同比例混合下的生长状况, 同时还测定了中肋骨条藻在以 NO 3 为氮源下的最大生长速率 (μ max ) 和半饱和常数 (K s ) 结果表明 : 中肋骨条藻不仅可以有效利用无机的 NO 3, 还可以利用尿素以及丙氨酸甘氨酸苏氨酸丝氨酸和天门冬氨酸 6 种有机氮源, 其中 NO 3 培养组的藻细胞生长最佳, 尿素组其次 ; 氨基酸中最易被吸收利用的是丙氨酸, 而苏氨酸丝氨酸和天门冬氨酸的利用率相近, 甘氨酸较低在 NO 3 和尿素复合氮源条件下, 中肋骨条藻的生长状况比单一氮源时更好, 最佳生长出现在尿素含量在 75% 的实验组中在实验设置的 NO 3 浓度下 (0 ~ 1000 μmol L 1 ), 中肋骨条藻生长速率和环境容量随氮浓度的增加而增加, 对 NO 3 的 μ max 和 K s 分别为 d 1 和 25.0 μmol L 1 本研究结果表明, 中肋骨条藻可以有效利用多种有机氮源, 对无机氮具有较低的亲和能力, 适合在高氮环境下生长, 而近岸海域丰富的有机氮以及较高的氮浓度可能是其爆发性生长引发赤潮的重要原因关键词国家自然科学基金项目 ( , ) 资助收稿日期 : 接受日期 : 通讯作者 E mail: twzh@ jnu.edu.cn 有机氮 ; 无机氮 ; 尿素 ; 氨基酸 ; 生长速率 ; 半饱和常数 Effects of nitrogen sources on the growth of Skeletonema costatum. QIAO Qian, WANG Zhao hui, GUO xin ( Institution of Hydrobiology, Key Laboratory of Eutrophication and Red Tide Prevention of Guangdong Higher Education Institutes, Jinan University, Guangzhou , China). Abstract: Skeletonema costatum is a common dominant diatom species in the coastal environ ments. The capacity of S. costatum to utilize nitrate ( NO 3 ), urea, and five amino acids was studied, and the growth of S. costatum under different proportions of NO 3 and urea was exam ined. Furthermore, the maximum specific growth rate (μ max ) and half saturation constant (K s ) of S. costatum were determined using NO 3 as the sole nitrogen ( N) source. The purpose of this study is to understand the impact of nitrogen enrichment on the growth of diatoms and primary productivity of marine environments. The tesults showed that S. costatum was able to utilize both dissolved inorganic nitrogen (NO 3 ) and dissolved organic nitrogen (urea, almandine, glycine, threonine, serine and aspartic acid). The best growth was recorded in culture with NO 3, fol lowed in culture with urea. Alanine was one of the most easily utilized amino forms, followed by threonine, serine and aspartic acid. However, the growth was relatively lower when using glycine as sole N source compared with the other amino acids. Algal cells grew better in culture with both NO 3 and urea as nitrogen sources compared with that with NO 3 or urea as sole N nutrient. Maxi mum cell density was found in the culture with 75% urea and 25% NO 3. The specific growth

2 乔倩等 : 不同氮源对中肋骨条藻 (Skeletonema costatum) 生长的影响 2111 rate and environmental capacity increased with the increasing NO 3 concentration ( μmol L 1 ), and the μ max and K s of S. costatum were d 1 and 25.0 μmol L 1, respective ly. The results suggested that S. costatum could use various organic N, and grew well under high N levels. Therefore, the sufficient organic N and high N concentration in the coastal waters might play important roles in the occurrence of algal blooms. Key words: organic nitrogen; inorganic nitrogen; urea; amino acid; growth rate; half saturation constant. 氮 (N) 是浮游植物生长繁殖最重要的必需营养元素之一, 是构成浮游植物细胞内蛋白质核酸磷脂和叶绿素等的基本元素, 是许多海域初级生产力的主要控制因子, 浮游植物对不同氮源的获得吸收和同化能力对其生长具有重要作用 (Vitousek et al., 1991; 陈园等, 2011) 自然海水中的无机氮和有机氮通过物理化学生物等作用处于不断转化和循环过程中, 过去通常认为浮游植物主要吸收利用无机氮并合成有机氮 ( Williams et al., 1987; Strom et al., 2009); 当它们排泄或死亡分解时, 有机氮被释放出来, 经过化学及细菌作用分解成无机氮直到 1980 年, 有研究提出有机氮在水体初级生产力中的重要性, 有机氮的吸收利用才逐渐受到学术界的重视 (Antia et al., 1980) 浮游植物对尿素的吸收率甚至高于无机氮, 占浮游植物对 N 吸收的 50% 以上 (Glibert et al., 2001; Egleston et al., 2008; Solomon et al., 2010) 在适宜的环境条件下, 有机氮成为浮游植物的直接营养源, 促进赤潮藻类的增殖并引发赤潮 (Anderson et al., 2002; Collos et al., 2007), 越来越多研究表明 : 有机氮与有害藻类爆发密切相关 (Lomas et al., 2001; Fan et al., 2003) 随着尿素等有机氮肥料使用量的不断增加, 大量尿素进入近岸水体, 成为溶解有机氮库的重要组成成分, 而溶解有机氮是大多数水域生态系统中最大的可溶性氮库 (Bronk, 2002) 中国近海海水中有机氮含量也显著提高, 而在养殖海域内, 有机氮含量往往更高 ( 姜聪聪等, 2014) 中肋骨条藻 (Skeletonema costatum) 是一种在全球近岸海域分布极广的浮游硅藻, 同时也是我国沿海常见赤潮藻类, 多次在胶州湾长江口等海域形成赤潮 ( 霍文毅等, 2001) 本文以中肋骨条藻为实验材料, 研究了该藻在不同氮源以及氮浓度下的生长情况, 以揭示中肋骨条藻对近岸海域富营养化及有机氮污染的响应, 并为中肋骨条藻赤潮机制及防治研究提供基础 1 材料与方法 1 1 实验藻种来源与培养中肋骨条藻采自南海大亚湾海域, 并在实验室进行分离纯化, 培养于暨南大学水生生物研究所的藻种室藻种培养在温度为 (24±1) 光照约为 100 μe 光暗比(L / D) 为 12 h 12 h 的恒温光照培养箱内根据大亚湾近岸海域的 N 磷(P) 水平 (Wang et al., 2011), 藻细胞驯化培养和扩大培养所用培养基中的 N P 营养元素浓度分别设置为 100 和 7 μmol L 1, 其余元素与 f / 2 培养基相同培养基所用人工海水由 HEKA CORAL 牌无 N 无 P 海盐配制, 配制的人工海水经孔径为 0.22 μm 的混合纤维滤膜过滤灭菌,pH 值为 7.9±0.1, 盐度为 31 ~ 33 配制后的人工海水再通过 120 高压蒸汽灭菌 20 min 后, 在无菌操作台中按实验设置的浓度配制为实验用培养基, 所用容器等均经过高压灭菌后使用实验前, 将处于对数生长期中期的藻培养液用混合抗生素处理, 先向 100 ml 对数生长期的藻培养液中加入青霉素 (10 μg ml 1 ), 培养 3 d; 再取 10 ml 处理后的藻液加入 90 ml 新鲜无菌 f / 2 培养基, 加入硫酸链霉素 (10 μg ml 1 ), 培养 3 d; 最后取 10 ml 经两种抗生素处理后的藻液加入 90 ml 新鲜无菌 f / 2 培养基, 再加入硫酸卡那霉素 ( 10 μg ml 1 ), 培养 3 d 后转入无菌的 f / 2 培养基扩大培养, 获得无菌藻种将经过无菌处理的藻种扩大培养于新鲜的培养基中, 接种 3 ~ 4 次使细胞达到同步培养将处于指数生长期的中肋骨条藻接种于无 N 无 P 的人工海水配制的 f / 2 培养基中, 饥饿 48 h 实验中, 将经过饥饿处理的藻种接种于 1 L 三角瓶中, 内盛 800 ml 培养基, 如无特殊交代培养基中的 N P 营养元素浓度分别为 100 和 7 μmol L 1, 其余元素与 f / 2 培养基相同初始密度约为 cells ml 1 实验

3 2112 生态学杂志第 35 卷第 8 期时, 整个实验为一次性培养, 各实验组均设 3 个重复 1 2 实验设置中肋骨条藻对不同氮源的利用能力选取 7 种无机有机氮源 ( 表 1 ), 无机氮为硝态氮 (NO 3 ), 有机氮为尿素 ( urea) 丙氨酸 ( Ala) 甘氨酸 (Gly) 苏氨酸 (Thr) 丝氨酸 (Ser) 以及天门冬氨酸 (Asp), 同时设置了不含氮磷的 N0P0 组以及不含氮含无机磷的 N0Pi 组作为对照组, 研究中肋骨条藻对不同氮源的利用能力中肋骨条藻在混合氮源下的生长在总氮浓度为 100 μmol L 1 无机磷浓度为 7 μmol L 1 的条件下, 以 NO 3 和尿素作为混合氮源, 设置尿素氮百分含量分别为 0% 25% 50% 75% 100% 的 5 个实验组, 研究中肋骨条藻在不同无机氮和有机氮比例下的生长状况氮浓度对中肋骨条藻生长的影响在无机磷浓度为 7 μmol L 1 条件下, 以 NO 3 为氮源, 设置了 7 个不同氮浓度组, 分别为 μmol L 1, 了解中肋骨条藻在不同氮浓度下的生长状况, 并计算骨条藻对氮的亲和能力 1 3 测定与分析藻细胞数量的测定实验共进行了 8 d, 每天使用叶绿素荧光仪 ( 美国 Turner Designs 公司 Trilogy 实验室荧光仪 ) 测定叶绿素荧光值, 根据叶绿素荧光与藻细胞数量的关系计算藻细胞数量 : y = x+4.226,R 2 = 0.995, 其中 y 为叶绿素荧光值,x 为藻细胞密度 (cells ml 1 ) 营养盐的测定在的不同氮源下生长表 1 中肋骨条藻对不同氮源的利用能力各实验组中的氮源磷源以及氮磷浓度 Table 1 Sources and concentrations of N and P in test groups of experiment of capacity of Skeletonema costatum to utilize different nitrogen sources 实验组别氮源磷源氮浓度 (μmol L 1 ) NO 3 磷浓度 (μmol L 1 ) 硝态氮磷酸二氢钠 urea 尿素磷酸二氢钠 Ala 丙氨酸磷酸二氢钠 Gly 甘氨酸磷酸二氢钠 Thr 苏氨酸磷酸二氢钠 Ser 丝氨酸磷酸二氢钠 Asp 天门冬氨酸磷酸二氢钠 N0P0 0 0 N0Pi 磷酸二氢钠 0 7 实验中, 在实验的和 8 d 测定了培养液中的总氮 (TN) 溶解态总氮 ( DTN) 颗粒氮 ( PN) 硝氮 (NO 3 ) 亚硝氮 ( NO 2 ) 和氨氮 ( NH 4 + ) 的含量 DTN 为经过 Whatman GF / F 滤膜过滤后的滤液中的溶解性总氮, PN 为滤膜上颗粒氮, 溶解态无机氮 (DIN) 为 NO + 3 NO 2 和 NH 4 之和, 溶解态有机氮 (DON) 为 DTN 与 DIN 之差各营养盐指标的测定参照海洋监测规范 GB / T , 其中 TN DTN 和 PN 采用过硫酸钾氧化法,NO 3 采用锌镉还 + 原法,NO 2 采用重氮偶氮法,NH 4 采用次溴酸钠氧化法 1 4 计算与分析相对环境容纳量的计算在种群生态学中, 环境容纳量 (K) 是指特定环境所能容许的种群数量的最大值环境容纳量是环境制约作用的具体体现, 有限的环境只能为有限生物的生存提供所需的资源, 在本实验中的环境容纳量即最大细胞密度 (Wang et al., 2010) 在本研究中, 相对环境容纳量是环境制约条件下的环境容纳量与相应因子不受制约条件下环境容纳量的比值, 以百分数的形式表现了藻种受制约条件影响的程度, 便于多个实验组之间进行生长情况对比 K = K t / K c 100% 式中,K 为各实验组中肋骨条藻的相对环境容纳量, K t 为各实验组中肋骨条藻的最大细胞密度 ( 环境容纳量 ),K c 为以 NO 3 为氮源的环境容纳量, 对于不同浓度的 NO 3 实验中,K c 则为最高浓度组的环境容纳量如果最高细胞密度低于接种密度, 说明藻细胞无法进行细胞增殖, 则不计算 K 最大生长率和半饱和常数的计算比生长速率 (μ) 根据指数生长期的细胞密度通过最小二乘法拟合得到 (Guillard, 1973): μ = lnn 2 lnn 1 t 2 t 1 式中,N 2 和 N 1 分别是时刻 t 2 和 t 1 的细胞密度 (cells ml 1 ),μ 为比生长速率 ( d 1 ) 利用 Monod 方程 (Monod, 1942) 来计算中肋骨条藻的最大比生长速率和半饱和常数 : μ = μ max S K s +S 式中,μ 为比生长速率,μ max 是最大比生长速率,S 是氮浓度 (μmol L 1 ),K s 是半饱和常数 (μmol L 1 )

4 乔倩等 : 不同氮源对中肋骨条藻 (Skeletonema costatum) 生长的影响数据分析所有实验结果均为 3 个实验组数据的平均值, 数据误差线为 3 组数据间标准差所有数据均使用 Origin 9.0 和 SPSS 18.0 软件进行统计分析 2 结果与分析 2 1 中肋骨条藻对不同氮源的利用能力由图 1 可以看出, 在缺氮的 N0P0 和 N0Pi 两个对照组, 藻细胞无法继续生长, 藻细胞密度迅速降低以 NO 3 为氮源生长最佳, 并且在接种后的第 4 天就达到最大细胞密度 ; 以尿素和氨基酸为氮源的实验组, 均在培养后的 4 ~ 6 d 达到最大细胞密度, 但最大密度低于 NO 3 组, 相对环境容纳量为 35.3% ~ 75.1% 在 6 种有机氮源中, 中肋骨条藻对尿素的利用效率最高, 而对丙氨酸 ( Ala), 苏氨酸 (Thr) 丝氨酸(Ser) 和天门冬氨酸 ( Asp) 的利用效率相近, 但明显劣于以 NO 3 为氮源的实验组 ( P <0.05) 而在甘氨酸 ( Gly) 组, 最高细胞密度仅略高于接种密度不同氮源下, 中肋骨条藻培养液中 DIN DON DTN PN TN 的变化趋势如图 2 除了无机的 NO 3 组外, 其余各有机 N 组 DIN 含量均较低 ( 图 2A), 其中两个无氮的对照组 N0P0 和 N0Pi 的 DIN 浓度在 2 μmol L 1 以下, 而 6 个有机氮浓度组由于有机氮的水解, 培养液中尚残存少量的 DIN 随着藻细胞的生长,NO 3 组的 DIN 含量在第 2 天就开始急剧下降, 并一直维持在较低水平 DON 的初始浓度则是以 6 个有机氮组较高 ( 图 2B), 第 2 天略有上升, 第 4 天则急剧下降, 在第 8 天随着藻细胞的衰落, 又出现回升在 NO 3 组 N0P0 和 N0Pi 组,DON 含量均略有上升, 可能是藻细胞分泌的可溶性胞外物质增多所造成 DTN 为 DON 和 DIN 之和, 为藻细胞可利用 N, NO 3 组的 DTN 浓度随着细胞密度的增加而迅速下降, 至第 4 天跌至低谷, 随后有所回升 ( 图 2C); 6 个有机氮组的 DTN 变化趋势相近, 均在第 2 天具有上升趋势, 在第 4 天迅速下降, 随后有所上升 PN 是藻细胞自身的 N 含量,N0P0 和 N0Pi 两个对照组的 PN 含量随着藻细胞的死亡呈减少趋势 ( 图 2D), 其余各组随着细胞的生长 PN 含量在第 4 天达到峰值, 随后随着细胞的衰落逐渐减少而大部分有机氮源组的 PN 值在第 2 天均出现了下降, 可能与有机氮实验组藻细胞的迟滞期较长有关除了 2 个无 N 对照组外, 各实验组的初始 TN 含量相近, 而且第 4 天前 TN 含量基本维持稳定 ( 图 2E), 但在藻细胞衰亡的第 8 天,TN 含量迅速下降 ; 而 N0P0 和 N0Pi 两个对照组 TN 含量呈持续下降趋势这是因为在培养后期不断死去的藻细胞会沉积在三角瓶底, 而粘附在瓶底和瓶壁死细胞内的氮无法被检测, 从而导致了培养液中 TN 含量的下降 2 2 中肋骨条藻在混合氮源下的生长图 3 显示了在尿素与 NO 3 混合氮源下, 中肋骨条藻的生长状况除以尿素作为唯一氮源实验组 (100%) 外, 其余实验组均在经历了 1 d 的迟滞期后, 藻细胞密度迅速增长, 在接种后 4 ~ 5 d 达到最大藻细胞密度 ; 而 100% 尿素实验组则经历了 2 d 的迟滞期, 在第 6 天达到最大细胞密度在两种混合氮源下, 骨条藻的生长均优于以尿素为单一氮源实验组 (0% 和 100% 组 ), 在尿素比例 75% 时, 藻细胞生长状况最佳, 高达 %; 尿素比例为 25% 和 50% 的实验组生长情况次之 ; 而以 NO 3 和尿素为单一氮源的两个实验组生长状况相近由此可见, 中图 1 Fig.1 不同氮源下中肋骨条藻的生长曲线和相对环境容纳量 Growth curve and relative environmental capacity of Skeletonema costatum under different N sources

5 2114 生态学杂志第 35 卷第 8 期图 2 Fig.2 在不同氮源下, 中肋骨条藻培养液中各种氮浓度的变化 Concentrations of DIN, DON, DTN, PN and TN in cultures of Skeletonema costatum under different N sources 图 3 尿素和 NO 3 混合氮源下, 中肋骨条藻的生长曲线和相对环境容纳量 Fig.3 Growth curve and relative environmental capacity of Skeletonema costatum under different proportions of urea and ni trate 肋骨条藻可以同时利用无机氮和有机氮, 且在复合氮源下生长状况更佳 2 3 氮浓度对中肋骨条藻生长的影响在实验设置的氮浓度范围内 (0 ~ 1000 μmol L 1 ), 氮浓度越高, 中肋骨条藻的生长状况越优 ( 图 4) 在氮浓度小于 5 μmol L 1 两个实验组, 藻细胞无法生长, 逐渐趋于死亡, 最高细胞密度低于接种密度 ( 图 4A) 10 μmol L 1 浓度下, 藻细胞密度略有上升, 相对环境容纳量为 18.02% 其余 4 个实验组藻细胞密度在经历了 1 d 的迟滞期后进入对数生长

6 乔倩等 : 不同氮源对中肋骨条藻 (Skeletonema costatum) 生长的影响 2115 图 4 不同氮浓度下中肋骨条藻的生长曲线 (A) 相对环境容纳量(B) 和比生长速率 (C) Fig.4 Growth curve ( A), relative environmental capacity ( B) and specific growth rates ( C) of Skeletonema costatum un der different N concentrations 期, 细胞密度在第 5 天达到最大值, 相对环境容纳量和生长速率随氮浓度的增加随之增加通过计算以及拟合 Monod 得出, 中肋骨条藻最大生长速率 (μ max ) 为 d 1, 半饱和系数 (K s ) 为 25.0 μmol L 1 3 讨论一般认为硅藻类偏好 NO 3 丰富的水体, 其快速增殖与 NO 3 含量密切相关 (Goldman, 1993; Lomas et al., 2000), 本研究结果同样表明中肋骨条藻对 NO 3 的利用明显高于其他氮源相对其他研究仅通过测定藻细胞密度来判断其生长情况, 本文还研究了培养基中不同形态氮的变化过程, 无机氮含量的迅速下降进一步证明了中肋骨条藻能够直接利用无机氮, 而对有机氮的利用则需要 1 ~ 2 d 的迟滞期中肋骨条藻可以很好地利用尿素及大部分氨基酸, 尤其以尿素为氮源条件下, 具有较大竞争优势随着近岸水体有机氮浓度日益升高, 中肋骨条藻极易成为优势种并爆发赤潮, 这可能也是中肋骨条藻在全球范围近岸海域普遍分布并发生赤潮的重要原因不同浮游植物在吸收尿素利用尿素维持生长的能力上存在差异米氏凯伦藻中肋骨条藻赤潮异弯藻青绿藻和聚球藻都能有效利用尿素 ; 而球形棕囊藻和隐藻利用尿素维持生长的能力较弱, 当尿素浓度过高时反而会有抑制生长的作用 ( 张云, 2013) 在有机和无机氮源共存情况下, 藻细胞会同时吸收不同的氮源, 两套吸收系统同时发挥作用 ( 张云, 2013), 但对不同氮源的吸收速率存在差异一般情况下, 浮游植物更倾向于利用尿素等还原态 N(Fan et al., 2003) 从本实验结果来看, 复合氮源实验组的生气状况均优于单一氮源实验组, 而且在尿素比例达到 75% 时生长最佳, 说明中肋骨条藻对尿素和 NO 3 的吸收起相互促进的作用, 复合氮源比单一氮源要更利于藻细胞的生长中肋骨条藻的这一特性可使其在营养盐条件复杂尿素浓度逐年上升的近岸水体环境中占据优势营养盐浓度对赤潮藻生长速率的影响差异较大, 一般来说, 赤潮藻生长速率随着营养盐浓度的增加而增加, 但过高的营养盐浓度特别是 NO 3 浓度会对赤潮藻生长具有抑制作用 (Redfield et al.,1958) 在本实验中, 在实验设定的氮浓度下 ( 0 ~ 1000 μmol L 1 ), 中肋骨条藻的比生长速率随着氮浓度的升高而增加, 说明中肋骨条藻对 N 的需求较高, 1000 μmol L 1 尚未达到抑制中肋骨条藻生长的水平半饱和常数 ( 也称亲和力常数 ) 是浮游植物种群在一定条件下对某种营养盐环境长期适应的结果 ( 胡章喜等, 2010), 半饱和常数的值越小, 说明该种

7 2116 生态学杂志第 35 卷第 8 期群对低营养盐环境的适应能力越强, 并有可能在低营养盐条件下演替为优势种本研究中, 中肋骨条藻对 N 的半饱和常数为 25.0 μmol L 1, 与其他浮游植物相比属于较高水平 ( 赵晓玮, 2010; 郑晓宇等, 2010, 2012) 在本研究中, 所有无氮实验组中肋骨条藻的细胞密度均低于接种密度, 说明骨条藻不能在缺氮条件下生长 4 结论中肋骨条藻能够利用 NO 3 尿素氨基酸等多种不同形态氮源, 在有机氮源丰富的近岸海域具有竞争优势中肋骨条藻可以同时利用无机 NO 3 和有机氮尿素, 且复合氮源条件比单一氮源要更利于藻细胞的生长通过计算以及拟合 Monod 得出, 中肋骨条藻最大生长速率为 d 1, 半饱和系数为 25.0 μmol L 1 中肋骨条藻对氮的亲和力较低, 在高氮环境下才能生长较好参考文献陈园, 徐宁, 段舜山, 等有机氮比例和光强对赤潮藻球形棕囊藻生长和光合作用的影响. 生态环境学报, 20(3): 胡章喜, 徐宁, 段舜山, 等尿素对中国近海 3 种典型赤潮藻生长的影响. 环境科学学报, 30(6): 霍文毅, 俞志明, 邹景忠, 等胶州湾中肋骨条藻赤潮与环境因子的关系. 海洋与湖沼, 32(3): 姜聪聪, 杨南南, 王伟, 等胶州湾不同季节尿素分张布特征和来源探讨. 环境化学, 33(12): 云不同类群代表性浮游植物对尿素的生理生态响应 ( 硕士学位论文 ). 广州 : 暨南大学. 赵晓玮环境中不同氮磷营养盐浓度及氮源形态对米氏凯伦藻生长的影响研究 ( 硕士学位论文 ). 青岛 : 中国海洋大学. 郑晓宇, 顾咏洁, 金妍, 等不同氮磷质量浓度下四尾栅藻的生长研究. 生态环境学报, 19(11): 郑晓宇, 金妍, 任翔宇, 等不同氮磷浓度对铜绿微囊藻生长特性的影响. 华东师范大学学报 : 自然科学版, (1): Anderson D, Glibert PM, Burkholder JM Harmful algal blooms and eutrophication: Nutrient sources, composition and consequences. Estuaries & Coasts, 25: Antia NJ, Berland BR, Bonin DJ Proposal for an abridged nitrogen turnover cycle in certain marine plankton ic systems involving hypoxanthine guanine excretion by cili ates and their reutilization by phytoplankton. Marine Ecolo gy Progress Series, 2: Bronk DA Dynamics of DON / / Hansell DA, Carlson CA, eds. Biogeochemistry of Marine Dissolved Organic Matter. San Diego: Academic Press. Collos Y, Vaquer A, Laabir M, et al Contribution of sev eral nitrogen sources to growth of Alexandrium catenella during blooms in Thau Lagoon, Southern France. Harmful Algae, 6: Egleston ES, Morel FMM Nickel limitation and zinc toxici ty in a urea grown diatom. Limnology & Oceanography, 53: Fan C, Glibert PM, Alexander J, et al Characterization of urease activity in three marine phytoplankton species, Aureococcus anophagefferens, Prorocentrum minimum, and Thalassiosira weissflogii. Marine Biology, 142: Fan C, Glibert PM, Burkholder JM Characterization of the affinity for nitrogen, uptake kinetics, and environmen tal relationships for Prorocentrum minimum in natural blooms and laboratory cultures. Harmful Algae, 2: Glibert PM, Magnien R, Lomas MW, et al Harmful algal bloom in the Chesapeake and coastal bays of Maryland, USA: Comparison of 1997, 1998 and 1999 events. Estuar ies, 24: Goldman JC Potential role of large oceanic diatoms in new primary production. Deep Sea Research, 40: Guilard RRL Division Rates / / Stein JR, ed. Handbook of Phycological Methods: Culture Methods and Growth Measurements. Cambridge: Cambridge University Press: Lomas MW, Glibert PM, Clougherty DA, et al Elevated organic nutrient ratios associated with brown tide blooms of Aureococcus anophagefferens ( Pelagophyceae). Journal of Plankton Research, 23: Lomas MW, Glibert PM Comparisons of nitrate uptake, storage, and reduction in marine diatoms and flagellates. Journal of Phycology, 36: Monod J Recherches sur la Coissance des Cultures Bac triennes (2nd Edition). Hermann, Paris. Redfield AC The biological control of chemical factors in the environment. Science Progress, 46: Solomon CM, Collier JL, Berg GM, et al Role of urea in microbial metabolism in aquatic systems: A biochemical and molecular review. Aquatic Microbial Ecology, 59: Strom SL, Bright KJ Inter strain differences in nitrogen use by the coccolithophore Emiliania huxleyi, and conse quences for predation by a planktonic ciliate. Harmful Al gae, 8: Vitousek PM, Howarth RW Nitrogen limitation on land and in the sea: How can it occur. Biogeochemistry, 13: Wang ZH, Liang Y, Jiang S, et al Effects of nitrogen limitation on growth and interspecies competition of three harmful algal bloom species. Acta Scientiae Circumstantiae, 30: Wang ZH, Liang Y, Kang W Utilization of dissolved or ganic phosphorus by different groups of phytoplankton taxa. Harmful Algae, 12: Williams PM, Druffel ERM Radiocarbon in dissolved or ganic matter in the central North Pacific Ocean. Nature, 330: 作者简介乔倩, 女,1990 年生, 硕士, 主要从事近海岸生态修复研究 E mail: @ qq.com 责任编辑李凤芹

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Microsoft Word 叶然_new_.doc 46 2 Vol.46, No.2 2015 3 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA Mar., 2015 * 1 ( 315012) 2013 (120 128 E 25 33 N) 4, : (1) DIN( )P( ) Si( )DIN SiP, DINP,, SiDIN SiP, (2) N P, 126 E P, 126 E N ; (3) 2001 2010,